戊型肝炎病毒 PCR 产物直接测序法的建立及应用

以γ－３２Ｐ－ＡＴＰ标记的ＰＣＲ引物为测序引物，ＴａｑＤＮＡ聚合酶为测序酶，ＰＣＲ产物为测序模板，建立了戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）ｃＤＮＡ序列分析方法。应用本法测定１株新疆流行性ＨＥＶ和４株散发性ＨＥＶｃＤＮＡ序列，呈清晰的序列梯，其序列与用荧光法测定的另一株散发性ＨＥＶ序列有高度同源性。对同一样品两端测序，重叠部分序列完全一致。以上结果说明，ＰＣＲ产物直接测序法可用于ＨＥＶ核酸序列分析。     

庚型肝炎病毒PCR产物直接序列测定方法的建立及应用

以ＰＣＲ产物为测序模板，γ３２ＰＡＴＰ标记的ＰＣＲ扩增引物为测序引物，用ＴａｑＤＮＡ聚合酶为测序酶，建立了庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）ｃＤＮＡ序列分析方法。应用本法测定１份ＰＣＲ阳性产物的ＨＧＶｃＤＮＡ序列，图谱呈清晰的序列梯，其序列与ＧＢＶＣ（Ｕ３６３８０）和ＨＧＶ（Ｕ４４４０２）的相应片段序列比较，同源性分别为８５６５％（１９１／２２３）和８５２％（１９０／２２３）。与用荧光法测定的另一株ＨＧＶ序列有高度一致性。对同一样品两端测序，重叠部分序列完全一致。表明ＰＣＲ产物直接测序法可用于ＨＧＶ核酸序列分析。     

急性散发性戊型肝炎病毒（HEV）部分核苷酸序列分析

应用逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）检测杭州市散发性成型肝炎病人的急性或血清，３例ＨＥＶＲＮＡ阳性（３／１０），对其中一份扩增产物用荧光法测序，并与ＨＥＶ墨西哥株、缅甸流行株和散发株以及中国流行株ＣＨ１．１序列比较表明，该株散发性ＨＥＶ与墨西哥株核昔酸和氨基酸序列的同源性分别为７９．４％和９５．０％，与缅甸流行株和散发株的核苷酸同源性分别为ｇ３．５％和９５．１％，氨基酸同源性分别为９６．６％和９８．３％，与中国新疆流行株ＣＨ１．１核苷酸和氨基酸同源性分别为９５．９％和９５．８％。提示该ＨＥＶ散发株与新疆流行株一样，与ＨＥＶ缅甸株可能为同一亚型。     

柳州市急性散发性戊型肝炎病毒（HEV）部分核苷酸序列分析

应用逆转录套式聚合酶链反应（ＲＴ－ｎＰＣＲ）法检测柳州市７例散发性戊型肝炎病人急性期血清,６例ＨＥＶＲＮＡ阳性（８５．８％）。对其中２份阳性ＰＣＲ产物纯化后,直接测定其核苷酸序列,并与ＨＥＶ墨西哥株（Ｍ）、缅甸株（Ｂ）、中国流行株ＣＨ１．１进行比较。该２株ＨＥＶ散发株与ＨＥＶ（Ｍ）、ＨＥＶ（Ｂ）、ＨＥＶＣＨ１．１的核苷酸同源性分别为８０．８％、９２．４％～９２．７％、９７．５％～９７．７％。结论,该２株ＨＥＶ散发株与ＨＥＶ（Ｂ）和ＣＨ１．１为同一亚型。     

汉坦病毒核壳蛋白重组抗原的制备和基因分型研究

根据肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）抗原检测、分型和流行病学目前还存在许多待解决的问题,研制了ＨＦＲＳＶ的核衣壳基因工程抗原,建立了逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和逆转录－聚合酶链反应－限制性片段长度多态性分析（ＲＴ－ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）分型方法。根据ＨＦＲＳＶ汉滩型（ＨＴＮ）代表株７６－１１８Ｓ片段ｃＤＮＡ序列,用引物１（５’－ａｔｇｃａｔｇｃｇｇｃｃｇｃｔａｃｃａｔｇｇＮｃｏⅠｃａａｃｔａｔｇｇａｇｇ－３’）与引物２（５’－ｇａｔｃｇｔｃｇａｃＳａｌⅠｔｔａｇａｔｃｔａｇａｇｔｔｔｃａａ…     

用聚合酶链反应研究乙型肝炎病毒的灭活

建立测定乙肝病毒脱氧核糖核酸（ＨＢＶ ＤＮＡ）的聚合酶链反应－溴乙锭法（ＰＣＲ－ＥＢ），该方法特异性好，灵敏度为１ｐｇＨＢＶ ＤＮＡ，可能检出ＨＢＶ敏感动物黑猩猩的最小感染量。应用ＰＣＲ－ＥＢ法测定氯消毒剂对ＨＢＶ的灭活作用表明，有效氯１２５０ｍｇ／Ｌ作用６０分钟或２ ５００ｍｇ／Ｌ作用３０分钟可使１０倍ＰＣＲ灵敏度的纯化ＨＢＶ ＤＮＡ转阴；有效氯２ ５００ｍｇ／Ｌ作用３０分钟或１ ２５０ｍｇ／     

EB病毒转化的永生性人B淋巴母细胞中的MTHFR基因的表达

为检测用ＥＢ病毒转化建立的永生性人Ｂ淋巴细胞株中Ｎ＾５,Ｎ＾１０－亚甲基甲氢叶酸还原酶（ＭＴＨＦＲ）基因的表达及其ｃＤＮＡ序列,用ＥＢ病毒转化人外周血Ｂ淋巴细胞,建立永生性细胞株后,从培养细胞中提取总ＲＮＡ,用ＲＴ－ＰＣＲ法扩增ＭＴＨＦＲ基因ｃＤＮＡ的不同片段,进行ＰＡＧＥ电泳分析和ｃＤＮＡ序列测定。结果显示永生性人Ｂ淋巴母细胞中有ＭＴＨＦＲ基因表达,其ｃＤＮＡ序列与文献报道的人肝脏ＭＴＡＨＦＲ基     

肾综合征出血热病毒分型的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法对４株肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）病毒进行了分型。ＨＦＲＳ病毒的ＲＮＡ经逆转录为ＣＤＮＡ后用ＮＴＮ（野鼠型）、ＳＥＯ（家鼠型）两种引物进行体外扩增，经琼脂糖凝胶电泳，ＰＣＲ产物的ＮＤＡ片段与Ｍａｒｋ对照，证实扩增出的产物为ＨＦＲＳ病毒ＤＮＡ片段。ＰＣＲ分型与物异性单克隆抗体（ＭｃＡｂ）间接免疫荧光法分型作比较，结果相符合。     

山东地区HGV—RNA检测及部分核酸序列测定

目的 了解山东地区慢性丙型肝炎（ＣＨＣ）患者中庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）感染的状况，并测定其结构基因ＣＥ１区部分核苷酸序列。方法 用逆转录套式聚合酶链反应法（ＲＴ－ｎＰｃＲ）检测ＨＧＶＲＮＡ，并对部分阳性血清扩增的产物采用ＰＣＲ技术片段直接克隆法测定。结果 从１１６例慢性丙型肝炎患者血清中检出ＨＧＶＲＮＡ阳性３１例（２６．７％），其中１例患者ＨＧＶＣＥ１区部分核苷酸序列与中国第一株Ｕ７５３５６及另一例     

PCR检测HBVDNA与ELISA检测HBVM对比研究

我院于１９９５年２月－８月对乙型肝炎及表面抗原携带者１６８例同时采用ＰＣＲ技术检测ＨＶＤＮＡ和ＥＬＩＳＡ法检测ＨＢＶＶＭ，结果发现；大三阳２１例中ＨＢＶＤＮＡ阳性率９５．２％，小三阳９９例中ＨＢＶＤＮＡ阳性性率４７．５％，抗－ＨＢｅ，抗－ＨＢｃ阳性ＨＢＶＤＮＡ阳性率３３．３％，ＨＢＶＭ全部转阴者中ＨＢＶＤＮＡ阳性率亦占３０％。     

保定地区肾综合征出血热病人血清PCR分型及核苷酸序？…

为明确保定肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）疫区的型别采用ＲＴ－ＰＣＲ方法,检测急性期ＨＦＲＳ病人血清的汉坦病毒（ＨＶ）ＲＮＡ,并进行分型及部分核苷酸序列的测定,并与国内外ＨＶ的代表株进行比较。结果３１份急性期病人血清经ＲＴ－ＰＣＲ分型,２４份为汉城型（ＳＥＯ型）,２份为汉滩型（ＨＴＮ型）,并测得ＳＥＯ型Ｃ３株Ｍ基因（位于１９８５－２３１４位）,ＨＴＮ型ＬＢＹ株Ｍ基因（位于１９９６－２３１４位）核苷酸序列     

我国献浆血员中庚型肝炎病毒HGV RNA的检测及部分序列分析

采用５′非编码区的引物，用逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）检测１００名献浆血员中庚型肝炎病毒ＨＧＶＲＮＡ，其中１９名（１９％）ＨＧＶＲＮＡ阳性；对其中４份ＰＣＲ产物进行了直接测序，结果表明４株病毒在此区的核苷酸序列相对保守，其同源性在９５％以上，与美国报道的ＨＧＶ和ＧＢＶＣ的同源性分别为８８％和８５％不同。提示该４株ＨＧＶ与美国报道的ＨＧＶ和ＧＢＶＣ不属于同一基因型。     

加热与洗涤法对HBV,HCV血清标志的影响

采用ＥＬＩＳＡ和聚合酶链反应（ＰＣＲ），对经６０℃１０ｈ加热的ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、抗－ＨＢＣ及抗－ＨＣＶ阳性血清和洗涤４次的ＲＢＣ洗涤及放散液的血清标志及ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ进行了检测。结果，６０℃加热１０ｈ用ＥＬＩＳＡ检测血清标志均由强阳性转为阳性，ＰＣＲ检测ＨＢＶＤＮＡ及ＨＣＶＲＮＡ均为阴性；洗涤液用ＥＬＩＳＡ和ＰＣＲ检测血清标志及ＨＢＶＤＮＡ、ＨＣＶＲＮＡ均呈阴性反应，放散液用ＥＬＩＳＡ检测阴性，用ＰＣＲ检测ＨＣＶＲＮＡ１０份标本９份阴性，１份阳性。提示６０℃加热１０ｈ和洗涤ＲＢＣ可灭活或去除血清中大部分ＨＢＶ、ＨＣＶ及其血清标志。     

应用聚合酶链反应（PCR）检测血清HBV—DNA

用ＰＣＲ技术检测２１３分血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ，ＥＬＩＳＡ法检测其血清五项标志（ＨＢＶＭ）。结果表明，在不同类型的ＨＢＶ感染标志物中其血清ＰＣＲ结果有所不同。１０例健康正常人血清无１例检出ＨＢＶ－ＤＮＡ，２０３例免疫标志各异的血清共检出５４例存在ＨＢＶ－ＤＮＡ。     

1995～1997年辽宁,河南,河北省麻疹病毒流行株基因型分析

以反转录二步多聚酶链反应方法（ＲＴ－ＰＣＲ）直接测定麻疹病人唾液、尿液标本中的麻疹病毒（ＭＶ）血凝基因（Ｈ）、核衣壳基因（Ｎ）。以ＲＴ－ＰＣＲ产物纯化后进行ＭＶ４５０ｎｔＨ、２８２ｎｔＮ基因核苷酸片段测序分析,测序结果一致表明１９９５～１９９７年期间中国部分地区ＭＶ流行株存在２种基因型。其中一种基因型只发现１株,与ＥＤｗ５４株相同,另一种基因型占流行株的绝大多数（称新基因型）,与其它国家以前报道的ＭＶ流行株基因型的Ｎ基因最大差异为１５．４％,与ＥＤｗ５４、疫苗株相差８．８％;Ｈ基因最大差异是１０．８％     

聚合酶链反应结合斑点杂交测定乙型肝炎病毒DNA的评价

分别以Ｄｏｔｂｌｏｔ，ＰＣＲ－ＥＢ，ＰＣＲ－Ｄｏｔｂｌｏｔ法测定了１４６例慢性乙型肝炎患者血清ＨＢＶＤＮＡ。结果显示在ＨＢｅＡｇ组，ＰＣＲ－Ｄｏｔｂｌｏｔ阳性率（１００％）显著高于ＰＣＲ－ＥＢ（９４．８％），在ＨＢｅＡｂ组，ＰＣＲ－Ｄｏｔｂｌｏｔ的检出率为５４％，ＰＣＲ－ＥＢ为３８％。两者总检出率分别为８４．２％和７５．３％，统计学处理差异显著。有３例ＰＣＲ－ＥＢ再现生信号，但ＰＣＲ－Ｄｏｔｂｌｏ     

用PCR技术检测健康体检者HBV-DNA携带情况

ＨＢＶ－ＤＮＡ是ＨＢＶ的遗传物质,也是ＨＢＶ传染性指标。应用ＰＣＲ体外基因扩增技术检测ＨＢＶ－ＤＮＡ,能直接反映ＨＢＶ的复制,更新对ＨＢＶ感染的认识。１９９７～１９９８年,我们应用ＰＣＲ检测了３７０份健康体检血清的ＨＢＶ－ＤＮＡ,同时用ＥＬＩＳＡ法检...     

聚合酶链反应限制酶切分析及病毒分离检测巨细胞病毒感染

在人类巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）直接早期蛋白Ｅｃｏ ＲＩＪ ＤＮＡ片段内,自行设计两对引物,建立套式ＰＣＲ检测ＨＣＭＶ ＤＮＡ,同时结合病毒分离检测临床标本。结果发现２３例新生儿肝炎综合征患儿中,１０例病毒分离及套式ＰＣＲ均阳性;１例病毒分离阴性,但套式ＰＣＲ阳性。对５８例妊娠早期孕妇血标本进行检测,套式ＰＣＲ阳性率９％,病毒分离阳性率则为７％。     

262例HBV感染者PCR与ELISA检测结果分析

对２６２例确诊的乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染者用聚合酶链反应检测血清ＨＢＶ－ＤＮＡ,用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测血清ＨＢＶ的五项标志。结果显示,ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ、抗－ＨＢＣ同时阳性者,ＨＢＶ－ＤＮＡ的阳性率为９７．０６％,ＨＢｓＡｇ、抗－ＨＢｅ、抗－ＨＢｃ同时阳性者,ＨＢＶ－ＤＮＡ的阳性率为８９．４７％,ＨＢｓＡｇ、抗－ＨＢｃ同时阳性者,ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性率为８１．８２％。提示：ＰＣＲ对ＨＢＶ及其传染者的检测更敏感、直接。     

用Logistic回归模型预测血清中HBV—DNA的活动性

多聚酶链反应（简称ＰＣＲ）技术检测血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ的活动性具有很高的敏感性，但因自身的特点，应用受到限制。结合乙肝三系检测结果，用Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归模型配合ＰＣＲ检测结果具有较好的配合适度，在没有条件开展ＰＣＲ检测项目的情况下根据乙肝三系检测结果用Ｌｏｇｉｓｔｉｃ回归模型预测血清中ＨＢＶ－ＤＮＡ的活动性。