基因疫苗诱导小鼠抗HBV皮下移植瘤免疫研究

目的　观察 ＨＢＶ ＤＮＡ 疫苗（ｐＣＲ３－１Ｓ） 诱导Ｂａｌｂ／ ｃ 小鼠（ Ｈ２ｄ） 的特异性细胞免疫应答及其对稳定表达ＨＢｓＡｇ 的小鼠肥大细胞瘤Ｐ８１５ 细胞（Ｐ８１５ＨＢＶＳ） （ Ｈ２ｄ） 成瘤性的影响．方法　肌肉注射ＤＮＡ 疫苗,背部皮下接种Ｐ８１５ＨＢＶＳ 细胞,观察成瘤情况,４ ｈ ５１Ｃｒ 释放法检测小鼠脾细胞ＣＴＬ 活性．结果　接种 ＤＮＡ 疫苗后小鼠成瘤率为１２－５ ％ , 对照组为１００ ％ ． 小鼠平均存活期大于３８－２ ｄ ,对照组为２８－４ ｄ ,４０ ｄ 后小鼠存活率为８７－５ ％ ,对照组为０ ％ ． ＣＴＬ 细胞杀伤活性明显增加,ｐＣＲ３－１Ｓ 组５１ ％ ,对照组为２１ ％ （ Ｐ＜ ０－００１） ．结论　ＤＮＡ 疫苗可以诱导细胞免疫应答,对体内ＨＢＶ 感染具有预防及治疗作用．     

HBV DNA不同基因区功能及其变异

ＨＢＶＤＮＡ不同基因区功能及其变异庄林游晶马永良云南省昆明市第三人民医院６５００４１ＳｕｂｊｅｃｔｈｅａｄｉｎｇｓＨｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓＤＮＡ，ｖｉｒａｌＨＢｓＡｇＧｅｎｅｓ，ｖｉｒａｌＭｕｔａｔｉｏｎ主题词肝炎病毒，乙型ＤＮＡ，病毒乙型...     

IL-12及HBV基因疫苗共同免疫小鼠的效果

目的观察编码鼠IL-12的真核表达载体对HBV DNA疫苗诱导Balb/c小鼠免疫应答的影响.方法肌肉注射DNA疫苗,ELISA法检测小鼠血清抗HBs,4h51Cr释放法检测小鼠脾细胞CTL杀伤活性.结果免疫8wk后,注射pCR3.1组、注射pCR.1-S组及共注射IL-12真核表达载体的血清A(OD值)分别为0.04±0.01,0.87±0.1及1.67±0.15.CTL细胞杀伤活性分别为10.1%±6.4%,50.5%±6.4%及73.3%±8.8%,后两组与pCR3.1组比较均有显著差异(P＜0.01),后两组比较均有显著差异(P＜0.01).脾细胞悬液经抗CD4+单克隆抗体处理后分别为48.3%±5.9%,75.6%±9.1%,抗CD8+单克隆抗体处理后分别为10.6%±1.4%,16.9%±2.3%.结论 IL-12的真核表达载体能够提高小鼠对DNA疫苗的免疫应答,CTL细胞杀伤活性主要由CD8+执行.基因疫苗可能用于预防及治疗HBV感染.     

乙型肝炎病毒基因疫苗诱导小鼠产生免疫应答的效应

目的 :构建编码乙型肝炎病毒 (HBV)表面蛋白S的重组质粒pCR 3 .1 S,将之直接肌肉注射balb/c小鼠 ,观察小鼠HBV特异的免疫应答。方法 :以ELISA法检测小鼠血清 ,3H TdR掺入法测定淋巴细胞增殖 ,51 Cr 4h释放法检测淋巴细胞杀伤功能。结果 :与空载体对照组相比较 ,基因疫苗诱发小鼠产生良好的抗HBs反应及HBV特异的细胞免疫应答 (P <0 .0 5)。结论 :基因疫苗pCR 3 .1 S可诱导balb/c小鼠产生全面的免疫应答     

乙型肝炎疫苗免疫

根据2000年世界卫生组织、联合国儿童基金会/艾滋病基金会和美国疾病控制中心报告,死亡率列世界前10位的传染病顺序为:(1)下呼吸道感染;(2)艾滋病;(3)腹泻病;(4)结核病;(5)疟疾;(6)麻疹;(7)乙型肝炎(简称乙肝);(8)百日咳;(9)新生儿破伤风;(10)肠道寄生虫病。全世界约20亿人有现症或既往乙肝病毒     

PCR技术检测HBV DNA评价HBsAg阴性消化科住院患者的HBV携带状态

目的为评价消化科HBsAg阴性住院患者是否携带HBV方法使用PCR技术检测了119例HBsAg阴性的消化科住院患者的HBVDNA，并与103例HBsAg阴性传染料住院肝炎患者相比较．结果89．3％的传染科住院患者HBsAg，抗-HBs，抗-HBc，HBeAg，抗-HBe（统称HBVM）阳性，59．2％HBVDNA阳性；52．1％的消化科住院患者HBVM阳性，30．3％HBVDNA阳性．传染料患者两指标都显著高于消化科住院患者（P均＜0．005）HBVM均阴性模式中传染科患者的HBVDNA阳性率显著地大于消化科患者（x~2＝28．92，P＜0.005），两组患者之间HBVDNA阳性率的差异仅存在于HBVM均阴性的HBV感染模式中．结论消化科住院患者中存在NBsAg阴性的HBV携带者，两组HBVM阳性患者实际上来自于同一群体．     

新生儿乙型肝炎疫苗普遍接种的长期免疫效果

目的 观察新生儿乙型肝炎(简称乙肝)疫苗普遍接种预防儿童期乙型肝炎病毒(HBV)感染的长期免疫效果和对儿童乙肝发病的影响。 方法 1986年起在乙肝高发区隆安县实施不筛检母亲HBsAg、新生儿普遍接种常规剂量乙肝疫苗的免疫方案。采用出生队列定群随访、横断面调查和监测乙肝发病情况的方法对血源乙肝疫苗和重组酵母乙肝疫苗的保护效果进行观察。 结果 血源乙肝疫苗免疫后1～1 3年HBsAg阳性率为0.7％～2.9％,平均1.7％,保护率为83.5％～96.6％,HBV感染率为1.1％～5.1％,平均2.4％,保护率为93.5％～98.4％。重组酵母乙肝疫苗免疫儿童的HBsAg阳性率为1.8％～2.4％,平均2.0％,保护率为78.4％-85.2％。免疫实施14年后, 1～14岁人群乙肝发病率为1.5/10万,比历史对照同龄者减少了91.8％;未免疫儿童发病率为14.4/1 0万,与历史对照差异无显著性,免疫儿童中无乙肝病例发生,保护率为100％。 结论 新生儿乙肝疫苗免疫后13年内不必加强免疫,重组酵母乙肝疫苗与血源性乙肝疫苗的保护效果相似,乙肝疫苗预防作用已初见成效。     

乙型肝炎病毒全S基因疫苗与HBSAg基因疫苗诱导小鼠的特异性免疫应答比较

乙型肝炎病毒 (ＨＢＶ)感染是我国常见病及多发病 ,ＨＢＶ难以清除的原因之一就是机体的免疫功能障碍。目前虽然基因重组ＨＢＶ表面抗原 (ＨＢｓＡｇ)疫苗预防ＨＢＶ感染取得了较好的效果 ,但基因重组ＨＢｓＡｇ疫苗主要诱导特异性体液免疫 ,不能刺激机体的细胞免疫应答。近年来发现基因疫苗可诱导机体产生细胞及体液免疫反应 ,特别是诱导细胞免疫反应的能力优于蛋白、多肽类疫苗 ,更适应于慢性病毒感染的预防与治疗[1,2 ] 。为了探讨应用ＨＢＶ基因疫苗预防ＨＢＶ感染的可能性 ,我们构建了ＨＢＶ全Ｓ基因和ＨＢｓＡｇ基因疫苗 ,观察和比较…     

乙型肝炎病毒核心区基因免疫小鼠细胞免疫应答研究

目的观察小鼠对ＨＢＶ核心区基因疫苗的免疫应答。方法将经过基因修饰的乙型肝炎病毒核心区基因定向克隆于真核表达载体（ｐｃＤＮＡ３），构建成ＨＢＶ核心区基因疫苗（ｐｃＤＮＡ－ＨＢＶ），给Ｂａｌｂ／ｃ小鼠多点肌肉注射，２周后追加免疫一次，用竞争抑制酶联法及ＭＴＴ法检测小鼠血清抗－ＨＢｃ及脾细胞对ＨＢｃＡｇ的特异性增殖反应。结果免疫接种２周后小鼠血清抗－ＨＢｃ均阳性，持续１２周以上，脾细胞对ＨＢｃＡｇ的刺激指数明显高于对照组（Ｐ＜０．０５）。结论ｐｃＤＮＡ－ＨＢＶ在Ｂａｌｂ／ｃ小鼠体内既可诱导体液免疫应答，又可诱导特异性的细胞免疫应答     

HBV感染者肝细胞凋亡与乙型肝炎表面抗原双染色研究

目的探讨乙型肝炎肝细胞凋亡与病毒感染的关系。方法应用原位末端标记技术和免疫组化方法对一组乙肝患者肝细胞凋亡和乙肝表面抗原（ＨＢｓＡｇ）表达状况同时进行了检测。结果受检的８例乙型肝炎患者肝组织中均可检出凋亡细胞，阳性信号位于细胞核以及肝窦内之凋亡小体中；阳性细胞在肝细胞索多散在分布，在肝细胞坏死灶中亦可检出凋亡细胞；凋亡多发生于病毒抗原弱表达细胞，而大多数抗原阳性细胞未检测到凋亡信号，此外，少数凋亡细胞ＨＢｓＡｇ呈阴性。结论乙型肝炎患者感染和未感染病毒的肝细胞均可发生凋亡，但凋亡只在少数细胞发生。     

唐山地区乙肝患者HBsAg滴度、HBV DNA水平与乙肝基因突变位点的关系研究

目的:研究唐山地区乙型肝炎(乙肝)患者乙肝表面抗原(HBsAg)滴度、乙肝病毒基因(HBV DNA)水平与乙肝基因突变位点的关系。方法:选择2018年1月—2020年12月唐山地区150例乙肝患者作为研究对象,测定HBsAg滴度和血清HBV DNA水平,通过基因测序分析突变情况,并据此分为突变组与未突变组,比较不同基因突变位点患者的HBsAg滴度、HBV DNA水平,使用线性回归分析唐山地区乙肝患者HBsAg滴度、HBV DNA水平与乙肝基因突变位点的关系。结果:本研究150例乙肝患者中,有62例患者发生了基因突变,基因突变发生率为41.33%(62/150)。其中,rtM204I/V位点基因突变占比最高,为27.42%(17/62),rtL180M次之,为22.58%(14/62);rtL180M+rtM204I/V、rtA181T+rtN236T基因突变患者HBsAg滴度、HBV DNA水平高于rtM204I/V、rtL180M、rtN236T基因突变患者,差异有统计学意义(P<0.05);经Pearson相关性分析结果显示,基因突变乙肝患者HBsAg滴度、HBV DNA水平...     

HBsAg和HBsAb同时阳性慢性HBV感染者血清病毒PreS/S区基因序列分析及临床意义探讨

目的：分析HBsAg和HBsAb同时阳性慢性HBV感染者的血清病毒PreS/S区基因序列,探讨其临床意义。方法：收集HBsAg和HBsAb同时阳性慢性HBV感染者32例,其中HBV DNA阳性者12例（实验组）,其余20例为HBV DNA阴性。另外选取HBsAg阳性、HBsAb阴性和HBV DNA阳性的慢性HBV感染者12例（对照组）。采用聚合酶链反应（PCR）法体外扩增两组患者HBV PreS/S基因序列并测序分析,比较两组间PreS/S基因变异情况,结合临床资料探讨其临床意义。结果：实验组与对照组在性别、年龄、HBeAg阳性率、HBsAg滴度及HBV DNA水平上差异均无显著性意义（P〉0.05）。两组基因型分布亦相似（P〉0.05）。实验组与对照组在PreS1区、PreS2区、S区、MHR（主要亲水）区及＂a＂表位区各区域的核苷酸替换率相当（P〉0.05）。实验组中1例患者的PreS区有一长约144bp的片段缺失,位于PreS/S区nt285~428位（PreS1区末端及PreS2区起始部）。结论：HBsAg和HBsAb同时阳性的现象与PreS/S区基因突变无明显的相关性,HBsAb的出现对HBsAg和HBsAb同时阳性且HBV DNA亦阳性的患者不具有保护作用。     

HBsAb阳性隐匿性HBV感染者血清、肝组织HBV全基因序列分析

目的 了解HBsAb阳性隐匿性HBV感染者血清和肝组织中的HBV基因序列,并比较其差异性.方法 以1例长期随访HBsAb阳性隐匿性HBV感染者作为研究对象,用多种试剂盒检测其血清HBsAg、HBsAb,提取外周血血清和肝组织HBV DNA进行全基因组分段扩增,行序列测定及同源性比较.结果 多种试剂盒检测均提示该例患者HBsAg阴性、HBsAb阳性;血清HBV DNA为103～ 105拷贝/mL;血清和肝组织来源的HBV DNA全基因测序完全相同,均为3 215个碱基、B基因型,与参照序列核苷酸同源性为98.82％,各编码区均没有缺失或移码突变,不同编码区的核苷酸序列同源性为98.37％～ 100％,氨基酸序列同源性为98.18％～ 100％,在S区存在几种变异如PreS1的Q80H、S的C64Y、E164G、L175S,但前S区、“a”决定簇、1 762/1 764、1 896位点均未见变异.结论 HBsAb阳性隐匿性HBV感染者血清和肝组织来源的HBV基因序列无明显差异.     

Efficacy of Hepatitis B vaccine in those who lost Hepatitis B surface antigen during follow-up: Efficacy of HBV vaccine in those who lost HBsAg

Background

The level of HBsAg in some chronic hepatitis B virus (HBV)-infected individuals may decline over time so that it is not detectable in serum.

Objective

To assess the efficacy of HBV vaccine in those who lost their HBsAg without seroconverssion to anti-HBs antibody.

Patients and Methods

From April 1993 to December 2008, of 1603 chronic HBV-infected individuals, 34 (22 men and 12 women) became HBsAg-negative in follow-up visits, with no detectable anti-HBs antibody and HBV DNA in their sera. They received HBV vaccination at 0, 1 and 6 months (case group). Fifty-two subjects (30 men and 22 women) who were negative for HBsAg, anti-HBs and anti-HBc antibody, received HBV vaccination according to the said schedule (control group). Anti-HBs antibody was assessed one month after the last dose of vaccination in the both groups.

Results

The mean±SD age of the case and control groups was 38±12.7 and 33.4 ± 8.6 years, respectively (p = 0.07). The sex distribution between these two groups were similar (p = 0.652). The mean ± SD years of follow-up for the case group was 7.6 ± 4.5 years. Anti-HBs antibody level ≥ 10 IU/L was found in 8 (24%) subjects in the case group and in 45 (87%) in the control group (p < 0.001). The mean±SD anti-HBs antibody level in the case group was 68 ± 32.66 and in the control group 344.6 ± 38.9 IU/L (p < 0.001).

Conclusions

We found that nearly 24% of chronic HBsAg-positive subjects who lost their HBsAg responded to HBV and the remaining cases need to be followed for occult HBV infection.     

HBsAg Loss as a Treatment Endpoint for Chronic HBV Infection: HBV Cure

Despite the availability of effective vaccines and antiviral therapy over the past two to three decades, chronic hepatitis B virus (HBV) infection remains a major global health threat as a leading cause of cirrhosis and liver cancer. Functional HBV cure defined as hepatitis B surface antigen (HBsAg) loss and undetectable serum HBV DNA is associated with improved clinical outcomes in patients with chronic HBV infection. However, spontaneous loss of HBsAg is rare and occurs in only 1% of all HBsAg-positive individuals annually. Furthermore, the rate of functional cure with currently available antiviral therapy is even lower, <1% patients on treatment per year. Nonetheless, HBsAg loss has become the new target or therapeutic endpoint for antiviral treatment. Recently, there has been much excitement surrounding the development of novel antiviral agents such as small interfering RNA (siRNA), core assembly modulators (CAMs), nucleic acid polymers (NAPs) among others, which may be used in combination with nucleos(t)ide analogs and possibly immunomodulatory therapies to achieve functional cure in a significant proportion of patients with chronic hepatitis B. Novel assays with improved sensitivity for detection of very low levels of HBsAg and to determine the source of HBsAg production will also be required to measure efficacy of newer antiviral treatments for HBV cure. In this narrative review, we will define HBV cure, discuss various sources of HBsAg production, evaluate rates of HBsAg loss with current and future antiviral agents, review clinical factors associated with spontaneous HBsAg loss, and explore clinical implications of functional cure.     

丁型肝炎患者肝组织HDAg与HBsAg/HBcAg和HBV DNA相关性研究

目的探讨丁型肝炎患者肝组织中HDAg与HBsAg,HBcAg和HBV DNA表达及相关性.方法应用免疫组化双重染色及连续切片技术和原位杂交,检测了79例丁型肝炎患者肝组织HDAg,HBsAg,HBcAg和HBVDNA表达,以52例乙型肝炎作对照.结果丁型肝炎HBsAg,HBcAg检出率为81%,71%,乙型肝炎为94%,92%,两组比较有显著性差异(P＜0.05或0.01).HDAg以肝细胞核表达为主,其次是胞质表达,HBsAg以肝细胞浆表达为主,HDAg和HBsAg表达强度及阳性细胞分布呈一致性,两种抗原的表达程度与肝组织的炎症活动和病理损害相关(P＜0.01).HBcAg以以肝细胞核表达为主,阳性细胞主要呈单个细胞或点状分布,且HBcAg阳性细胞明显少于HDAg阳性细胞.HDAg表达强度与HBV DNA表达呈负相关(P＜0.05).结论HDV感染会抑制HBV DNA复制或病毒抗原表达;在HDV致病机制中HDV的直接细胞毒性可能起主要作用,也有HBV的协同作用.     

Immune response against HBsAg vaccine

ＨｅｐａｔｉｔｉｓＢｖｉｒｕｓ（ＨＢＶ）ｉｓａｈｅｐａｄｎａｖｉｒｕｓｗｈｉｃｈｃａｎｃａｕｓｅｓｙｓｔｅｍｉｃｉｎｆｅｃｔｉｏｎａｎｄｈｅｐａｔｏｃｅｌｕｌａｒｄａｍａｇｅｉｎｈｕｍａｎｓ．Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎｉｓａｃｑｕｉｒｅｄｔｈｒｏｕｇｈｃｏｎ...     

不同HBV标志物模式的乙型肝炎患者HBV表面大蛋白的检测及与HBVDNA水平的相关性

目的通过检测乙型肝炎病毒标志物（HBVM：HBsAg／抗-HBs、HBeAg／抗一HBe、抗一HBc）不同模式的乙型肝炎患者血清中乙型肝炎病毒外膜大蛋白（HBV—LP）、乙型肝炎病毒前s1抗原（HBVpreSl）、HBVDNA,探讨HBV—LP与HBVDNA及HBVM模式间的关系,研究HBV—LP用于乙型肝炎患者临床诊治的意义。方法采用酶联免疫吸附试验（ELISA）对HBV—LP、HBVpreS1和HBVM进行检测;采用荧光定量PCR方法对HBVDNA进行检测。结果乙型肝炎患者大蛋白检测结果与HBVDNA检测结果差异无统计学意义（X^2=1．97,P〉0．05）。HBV—LPA值随HBVDNA拷贝数的增加呈上升趋势,二者之间存在良好的相关性（r=0．565,P〈0．01）,在不同HBVDNA拷贝数组别间,HBV—LPA值差异有统计学意义（F=9．23,P〈0．01）。结论HBV—LP是反应HBV感染者体内病毒复制程度的良好的血清免疫学指标,血清中的HBV—LP与HBVDNA具有较好的相关性,特别是可作为HBeAg阴性患者体内监测病毒复制及预后判断的良好的血清学指标。     

不同基因型乙型肝炎病毒的HBx蛋白氨基酸序列的差异及意义

目的研究不同基因型HBV的HBx蛋白氨基酸序列差异及差异的意义。方法从美国生物信息中心（NCBI）搜索不同基因型HBV的全HBx蛋白氨基酸序列（154aa）,使用生物信息软件Clustalw2.0对搜索到的氨基酸序列进行比对,找出不同基因型HBV的HBx蛋白氨基酸序列差异及可能的差异规律,并分析差异的意义。结果 1.不同基因型HBV的HBx蛋白的氨基酸序列之间的同源性为73%～100%;2.HBV的各基因型（B、C、D、F、A、H）同型间的HBx蛋白氨基酸序列之间的同源性分别为87%～99%、88%～96%、87%～99%、86%～96%、96%～98%、99%～100%;3.在HBx蛋白A区（1～20aa）第5位和第12位的氨基酸在各基因型变异较大,其余位置的氨基酸很保守,很少发生变异。在HBx蛋白的B区（21～57aa）的氨基酸变异较大,即使在同一基因型别内部也出现了较大的变异,变异没有规律,呈现出了随机突变的特点。在C区（58～84aa）的氨基酸比较保守,除3个H型HBx的第60位氨基酸为A（丙氨酸）外,其余HBx蛋白的第60位氨基酸均为V（颉氨酸）,第60位以外的氨基酸很少突变。HBx蛋白D区的氨基酸（85～119aa）变异较大,并且变异呈现随机突变的特点。在HBx蛋白的E区（120～140aa）的氨基酸变异比较大的位置是130/131位置的氨基酸,其余位置的氨基酸较少发生变异,不同基因型130/131位置的氨基酸变异率是不一致的。在HBx蛋白F区（141～154aa）中,150～154aa区域的氨基酸比较保守,各基因型之间无变异,其余位点变异较大,没有一定的规律性。结论不同基因型的HBV的HBx蛋白氨基酸序列之间的同源性低于同种基因型HBV的HBx蛋白氨基酸序列之间的同源性;即使在比较保守的HBx蛋白区域也存在变异较大的氨基酸位点。     

Correlation between HBsAg quantitative assay results and HBV DNA levels in chronic HBV

Background

Viral load has been used to diagnose and monitor patients who are being treated for chronic hepatitis B (CHB). The Diagnosis methods are molecular-based and expensive. Quantitation of hepatitis B surface antigen (HBsAg) by automated chemiluminescent micro-particle immunoassay has been proposed to be a surrogate marker. Quantitating HBV DNA levels molecularly is expensive; thus, a cheaper laboratory test as a surrogate diagnostic marker might simplify our management.

Objectives

We determined whether quantitative HBsAg levels correlate with HBV DNA levels in CHB.

Patients and Methods

In this cross-sectional study, all CHB patients who were referred by a gastroenterologist to undergo quantitative HBV DNA assay in a qualified laboratory in Mashhad, Iran in 2009 were enrolled, and blood samples was obtained. Patients who were positive for antibodies to HCV and HDV were excluded. HBV DNA was measured by real-time polymerase chain reaction, and serum HBsAg was quantified byelectrochemiluminescence assay (Roche Diagnostic).

Results

Of 97 patients, 70 were male (72%) and 27 were female (28%); the mean age was 39 ± 11 years. Eighty-seven percent wasHBeAg-negative. By Mann-Whitney test,HBSAg titer differed significantly between HBeAg-positive and -negative patients (P = 0.001), as did HBV DNA levels (P = 0.009). By Spearman test, there was no significant correlation between HBsAg and HBV DNA levels (P= 0.606 and r = 0.53).

Conclusions

HBeAg-negative patients have higher levels of HBsAg and lower levels of HBV DNA. By electrochemiluminescence assay,HBsAg has no significant correlation with HBV DNA levels in CHB with predominant genotype D and HBeAg negativity in Iran.