真核生物mRNA 3'非翻译区的调控功能

真核生物mRNA 3'非翻译区可以调节转录本的稳定性、亚细胞定位和翻译水平,决定某一特定mRNA的命运,是许多基因表达所必需的一个调节区.3'非翻译区介导的功能的修饰可影响一个或多个基因的表达,从而导致疾病的发生.对相关mRNA 3'非翻译区的调节序列和与这些序列特异结合的蛋白质等具体信息的认识,将成为药物设计的新的分子靶.     

真核生物mRNA3′非翻译区的调控功能

真核生物mRNA 3′非翻译区可以调节转录本的稳定性、亚细胞定位和翻译水平 ,决定某一特定mRNA的命运 ,是许多基因表达所必需的一个调节区。 3′非翻译区介导的功能的修饰可影响一个或多个基因的表达 ,从而导致疾病的发生。对相关mRNA 3′非翻译区的调节序列和与这些序列特异结合的蛋白质等具体信息的认识 ,将成为药物设计的新的分子靶。     

HSPA5基因3'UTR 区多态性与肝细胞癌的相关性

目的 调查70kDa热休克蛋白5(HSPA5)基因3'非翻译区(UTR)的多态性与HCC发病风险之间的关系.方法 从576例肝细胞癌患者和539例在性别和年龄上匹配的健康对照者外周血中提取DNA,采用TaqMan检测HSPA5基因3'UTR区的rsl6927997、rsll40763和rsl2009.结果 连锁不平衡的分析确定了3种单倍型和6种双倍型.等位基因、基因型、单体型和双体型在肝癌患者和正常对照组之间的分布没有显著差异.结论 本研究表明,HSPA5基因3'UTR的多态性不是有效预测肝细胞癌风险的诊断标志物.     

Exosome的功能及作用机制的研究进展

Exosome(外切酶体 )是一种包含了至少 10种必要组分的蛋白复合物 ,它在真核细胞 RNA加工和 m R-NA3′→ 5′方向降解过程中都起重要的作用。近两年来 ,exosom e还被发现在 m RNA的质量控制和 5′端去帽中起关键作用。随着对 m RNA的 AREs功能研究的进一步深入和 ski复合物的发现 ,人们对 exosom e作用机制的认识取得了突破性进展     

HSPA5基因3′UTR区多态性与肝细胞癌的相关性

目的调查70kDa热休克蛋白5（HSPA5）基因3′非翻译区（UTR）的多态性与HCC发病风险之间的关系。方法从576例肝细胞癌患者和539例在性别和年龄上匹配的健康对照者外周血中提取DNA,采用TaqMan检测HSPA5基因3′UTR区的rs16927997、rs1140763和rs12009。结果连锁不平衡的分析确定了3种单倍型和6种双倍型。等位基因、基因型、单体型和双体型在肝癌患者和正常对照组之间的分布没有显著差异。结论本研究表明,HSPA5基因3＇UTR的多态性不是有效预测肝细胞癌风险的诊断标志物。     

组蛋白mRNA浓度的多重调控

哺乳动物细胞中大部分组蛋白的合成与DNA的合成紧密相联。在细胞周期中组蛋白mRNA浓度变化随DNA合成的速率而异,并平行发生。最近一些实验室的研究已揭示哺乳动物细胞中组蛋白mRNA的代谢存在着多重步骤的调控,主要发生在转录后,近年来的研究已开始转向对这一控制机制的分子基础的了解。     

环氧合酶2 mRNA 3’UTR荧光素酶报告基因载体的构建

目的:通过构建环氧合酶2(COX2)mRNA 3’UTR的全长及其截短体荧光素酶报告基因载体,为研究COX2基因在炎症条件下的的转录后调控提供有效的工具。方法:通过从胃癌细胞SGC-7901提取RNA,反转录成cDNA后,以此为模板,PCR扩增COX2 3’非翻译区(3’-UTR)全长及截短的序列,并将该序列连接到荧光素酶报告基因载体pGL3-control,构建pGL3-COX2 3’UTR全长及pGL3-COX23’UTR不同截短体。测序后将上述载体分别与pRL-TK载体共转染293-T细胞,48 h后裂解细胞检测荧光素酶的活性。最后通过ELISA检测在IL-1β的刺激下COX2的下游产物PGE2的表达,并再次测定pGL3-COX2 3’UTR全长的荧光素酶活性。结果:成功构建了pGL3-COX2 3’UTR全长及pGL3-COX23’UTR不同截短体,荧光素酶报告系统表明COX2 3’UTR对基因表达具有较强的调控作用。而在炎症因子IL-1β的刺激下,pGL3-COX2 3’UTR全长荧光素酶的活性明显升高。结论:成功构建了COX2 mRNA 3’UTR荧光素酶报告基因载体并证明在IL-1β的刺激下COX2表达上调,参与转录后调控。     

Resistin基因3'非翻译区ATG序列多态性与2型糖尿病的相关性研究

目的：研究resistin基因3′-非翻译区ATG重复序列在2型糖尿病（T2DM）患者及正常血糖人群中的多态性分布，探讨此重复序列与T2DM的相关性。方法：选取东北地区汉族T2DM患者243例，正常对照110例，采用聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR-SSCP)方法初筛基因后，进行DNA直接测序。结果：在353例受试者中，检测到resistin基因3′-非翻译区ATG重复序列有3种基因型，表现为T2DM患者中a型ATG序列重复6次，共有220例，频率为90.5％，b型ATG序列重复8次，共有10例，频率为4.1％，c型ATG序列重复7次，共有13例，频率为5.4％，在110例正常人中均表现为ATG序列重复6次，不存在重复7次与重复8次的基因型。结论：resistin基因3′-非翻译区ATG序列在T2DM患者及正常人群中的多态性分布存在差异，其多态性分布与T2DM的易感性相关，可能是东北地区汉族人群发生T2DM的一个重要的相关因素。     

水通道蛋白8基因3’-非翻译区荧光素酶报告载体的构建及其活性鉴定

目的:构建水通道蛋白8(AQP8)基因3’-UTR荧光素酶报告载体,与microRNA(miRNA)共转染HT29细胞,分析miRNA对其调控作用。方法:以HT29细胞基因组DNA为模板PCR扩增AQP8基因3’-UTR序列,并将其克隆到荧光素酶报告载体pGL3M上;根据生物信息学软件Targetscan和miRanda预测可能与AQP8基因3’-UTR作用的miRNA,将pGL3-AQP8 3’-UTR和预测miRNA共转染,利用双荧光素酶报告系统检测荧光素酶活性。结果:成功构建AQP8基因3’-UTR序列荧光素酶报告载体;生物信息学软件预测miRNA靶点显示AQP8基因3’-UTR可能是miR-214、miR-15a、miR-330、miR-137、miR-32、miR-612、miR-200a/141、miR-16的作用靶点;与对照组相比,miR-15a、miR-330、miR-32、miR-612、miR-200a、miR-16可使荧光素酶活性降低10%～45%。结论:成功地构建AQP8基因3’UTR荧光素酶报告载体,miR-15a、miR-330、miR-32、miR-612、miR-200a和miR-16可抑制其荧光素酶活性。     

中国人丙型肝炎病毒基因组3′端非编码区的研究

目的分析中国丙型肝炎病人ＨＣＶ基因组３′端非编码区（３′ＮＣＲ）,以促进对ＨＣＶ基因组复制机制的研究。方法采用两种方法,从上海地区感染ＨＣＶ的病人血清中,扩增获得ＨＣＶ基因组３′端非编码区：一是用套式ＰＣＲ直接扩增,二是先分别获得ＨＣＶ３′ＮＣＲ的前半部分和后半部分,再将两片段进行融合ＰＣＲ。ＰＣＲ产物进行测序后作同源性分析。在此基础上,建立了针对３′端非编码区的ＲＴＰＣＲ方法,并与基于５′端非编码区的ＲＴＰＣＲ方法检测ＨＣＶＲＮＡ的特异性和灵敏度比较。结果序列分析表明,中国丙型肝炎病人ＨＣＶ基因组３′非编码区由４部分组成：高度变异区、Ｐｏｌｙ（Ｕ）区、Ｐｏｌｙ（Ｕ／Ｃ）区和９８碱基区。同源性分析显示,９８碱基区在不同分离株间高度保守并与国外报道株一致,而Ｐｏｌｙ（ＵＵＣ）区存在较大差异。３′端非编码区和５′非编码区ＲＴＰＣＲ检测血清ＨＣＶＲＮＡ有较高符合率（９５％）。结论ＨＣＶ基因组３′端非编码区的３′末端（９８碱基）,在不同分离株间的高度保守性提示,该区在ＨＣＶ基因复制中起重要作用。基于３′非编码区的ＲＴＰＣＲ方法,将有助于ＨＣＶ感染的诊断。     

Poly（A）信号及3‘非转译区对IL—2Rα表达调控的影响

将IL-2Ra cDNA3’端系列缺失克隆的重组质粒导入CHO细胞,经DNA、RNA及蛋白质印迹分析表明:缺3’非转译区(3’UTR)及Poly(A)信号序列的缺失子DNA,可以整合到受体细胞染色体上,但不能形成稳定的mRNA及表达rIL-2Ra;IL-2Ra cDNA上1297bp处的ATTAAA序列独立地显示出Poly(A)信号功能,相应的缺失子DNA能转录形成稳定的mRNA和表达rIL-2Ra。结果表明:poly(A)尾是位于3’端的转译调控因子,3’UTR与IL-2Ra cDNA的表达调控密切相关。     

突变和修饰IFN-α2b基因的5’和3’端对其在E.coli表达的调控作用

目的对人 IFN- α2 b基因进行突变和修饰 ,从翻译水平上调控 IFN- α2 b基因在大肠杆菌中的表达。方法采用PCR技术 ,人工合成寡核苷酸引物 ,对人 IFN- α2 b基因进行了改造 :在不改变氨基酸的前提下 ,将 5’端编码区的四个 G、C位点突变为 A、T;去除 3’端非编码区。将突变和修饰后的基因片段分别克隆入原核表达载体 p BV32 1,在大肠杆菌中进行表达。对表达产物进行活性效价测定。结果 3’端删除非编码区 ,表达水平比删除前提高 4倍 ;5’端四个位点突变 ,表达水平比突变前降低 2倍。结论 IFN-α2 b基因的 3’端非编码区抑制其在原核系统的表达 ,删除该区可提高表达水平     

汉滩病毒S片段基因cDNA 3′端非编码区对核蛋白在大肠杆菌中表达的影响

为了探讨汉滩病毒Ｓ片段ｃＤＮＡ３′端非编码区基因对核蛋白表达的影响，先后构建了两个核蛋白的表达质粒（ｐＢＶＳ２２和ｐＢＶＳＸ），其中ｐＢＶＳ２２不含非编码区基因，ｐＢＶＳＸ含有３′端非编码区基因。比较两者在大肠杆菌中表达核蛋白的水平后发现３′端非编码区对核蛋白的表达有明显的负调控作用，表达量下降近５０％。可能的原因是非编码区中含有非常丰富的ＡＴ碱基。该研究结果为进一步提高汉滩病毒核蛋白的表达量积累了经验，也为高效表达其它病毒结构蛋白提供了有益的资料。     

多发性硬化患者外周血单个核细胞SP3基因mRNA表达缺失研究

目的 研究我国多发性硬化(multiple sclerosis,Ms)患者外周血单个核细胞基因SP3(specificprotein 3)mRNA表达缺失的特点及其与临床表型的关系.方法 采集56例MS患者外周血单个核细胞,提取总RNA,设计SP3特异性引物,采用逆转录PCR方法观察SP3基因mRNA表达情况,并与其他疾病组、健康对照组进行比较.结果 56例MS患者中23例SP3为阴性结果,SP3表达缺失率为41.1%;健康对照组35例有5例为阴性结果,缺失率为8.6%;其它疾病对照组27例有4例为阴性结果,缺失率为14.3%.MS组与两对照组之间的差异有统计学意义(P＜0.01).SP3表达缺失组与表达组急性期的改良残废程度量表评分差异无统计学意义,稳定期则差异有统计学意义(P＜0.05).结论 通过对MS患者SP3基因mRNA表达的研究,观察到中国人MS存在该基因mRNA表达缺失.SP3与MS临床表现及其免疫学发病机制之间可能存在一定的相关性.     

抗菌肽hCAP-18/LL-375’非翻译区的分析

抗菌肽hCAP 18/LL 37在天然免疫中起重要作用,我们以前的工作发现,hCAP 18/LL 37mRNA在人白血病细胞系中广泛表达,但仅少数细胞系可检测到hCAP 18/LL 37蛋白表达。表明其表达调控主要在转录后水平[1] 。5’非翻译区(5’UTR )存在重要的翻译调控元件,如二级结构和上游开放阅读框对真核细胞翻译调控起重要作用[2 ] ,本文检测白血病细胞系中hCAP 18/LL 37基因5’UTR序列,探讨白血病细胞系是否因为5’UTR异常而引起其翻译阻滞。1　材料与方法1 1　细胞培养　人白血病细胞系Raji、NB4、HL 6 0、J6 1及U937均为我室液氮保存,按常…     

真核翻译起始因子3与肿瘤

真核翻译起始因子3是由多个亚基组成的,在真核翻译起始中发挥重要作用,近年来的研究表明其多个亚基在多种肿瘤细胞中存在异常表达的现象且与肿瘤的侵袭性、转移能力、分化程度及预后相关,使其有望成为肿瘤治疗的新靶点.     

长链非编码RNA MEG3对肿瘤细胞调控作用的研究进展

长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)是一类长度超过200 nt的不编码蛋白的RNA分子。lncRNA最初被认为是转录噪音,在近年的研究中发现越来越多功能性的lncRNA,其重要性才渐渐被阐述。母系表达基因3(materally expressed gene 3,MEG3)是一种由母系印记基因编码的lncRNA,在对其功能的研究中发现MEG3几乎参与了所有的生理和病理过程,其在多种肿瘤中表现出抑制作用。本文就lnc RNA MEG3对肿瘤细胞调控的作用机制作一综述。     

系统性红斑狼疮患者3'不翻译区长度多态性研究

目的 研究系统性红斑狼疮(SLE)患者3'不翻译区(3'UTR)长度多态性,分析其在发病机制中的作用.方法 利用mRNA3'端单端特异测序获得选择性多聚腺苷酸化位点使用频率,判断3'UTR长度变化情况,并检测SLE患者外周血单核细胞中基因表达差异,结合生物信息学分析3'UTR长度多态性与SLE临床病症间的联系.结果 与正常健康对照组相比,SLE组样品有904个基因倾向使用显著缩短或延长的3'UTR,基因明显富集于SLE发病相关的26条功能通路;1 597个基因呈现明显表达差异,富集在22条SLE发病相关的功能通路上.结论 SLE是一种复杂的多基因疾病,3'UTR长度多态性对SLE相关基因功能有重要影响,3'UTR可能通过表观遗传学调控方式参与SLE发病.