肺鳞癌患者癌组织和血液中微卫星DNA变异的检测

目的：检测肺鳞癌患者癌组织和外周血中微卫星DNA的变异。方法：选择30例原发性肺鳞癌患者的癌组织、外周血液标本及30例肺部良性疾病患者的外周血液标本,用PCR—银染法,对其中的20个微卫星位点进行检测。结果：癌组织微卫星DNA变异的检出率较高(26％),肺鳞癌患者外周血20个位点微卫星DNA变异的检出率(20．2％)与癌组织相比差异均无统计学意义,检测出的敏感位点有D3S1067、D3S1447、D3S1611、D3S1284、D3S1110、D3S1007、D5S346、D9S1748。30例肺部良性疾病患者外周血在全部20个微卫星DNA位点上没有检测到变异。结论：肺鳞癌患者存在微卫星DNA的变异,进行外周血中敏感位点微卫星DNA变异的检测对肺鳞癌的早期诊断有重大意义。     

乳腺癌微卫星不稳定性研究

目的　探讨微卫星不稳定性（MSI）在乳腺癌发生中的作用及其意义。方法　收集40例乳腺癌新鲜标本,分离基因组DNA,通过PCR法扩增12个微卫星位点;银染方法显色,采用JEDA801E专业数码凝胶成像分析软件进行片段分析,观察12个位点重复序列长度的变化,确定乳腺癌MSI状态。结果　乳腺癌MSI发生率为35％,良性增生均表现微卫星稳定;乳腺癌MSI发生率与分化程度有关,低分化乳腺癌MSI发生率明显高于高中分化组;乳腺癌中微卫星异常主要分布于D3S1766、D2S2739和TP533个位点。结论　MSI是乳腺癌多步骤发展过程的早期事件;D3S1766、D2S2739和TP533个位点可能是检测乳腺癌MSI较敏感的位点。     

胃癌组织p16基因微卫星DNA的不稳定性

目的：检测胃癌组织中p16基因D9s171、D9s1604微卫星位点杂合性缺失（LOH）,探讨p16基因微卫星不稳定性（MI）与胃癌发生发展的关系。方法：采用PCR－变性聚丙烯酰胺凝胶电泳－银染技术对20例胃癌和癌旁组织LOH进行分析。结果：癌组织D9s171和D9s1604的LOH分别为3例和10例,癌旁组织分别为2例和4例。两位点LOH发生率差异无显著性（P＞0．05）。胃癌组织较癌旁组织LOH发生率明显增高（P＜0．05）;早期胃癌与进展期胃癌两个微卫星位点LOH的发生率分别为50％（4／8）和58．3％（7／12）（P＞0．05）;两位点LOH发生存在相关性（P＜0．05）。结论：D9s171,D9s1604微卫星位点的LOH与胃癌的发生发展有关,而与癌细胞的分化程度或胃癌的临床分期无显著相关性。     

人肝癌p57^kip2基因表达缺失与杂合性缺失的关系研究

目的通过对p57^kip2 mRNA表达水平下降的人体肝癌进行杂合性缺失研究,探讨肝癌发生有关基因调控的分子机制．方法对人肝细胞肝癌及癌周肝组织各30例,正常肝组织对照20例,共80例标本,采用原位杂交检测p57^kip2 mRNA的表达,并运用PCR-聚丙烯酰胺凝胶电泳-银染法和基因分型对30例肝癌组织及其癌周肝硬化组织p57^kip2基因所在染色体区域的10个微卫星位点（D11S1397,D11S1318,D11S4046,D11S922,TH01,D11S2359,D11S1760,D11S1338,D11S569和D11S1397）进行杂合性缺失检测,同时分析了p57^kip2 mRNA表达与杂合性缺失之间的关系．结果原位分子杂交检测正常肝组织未见p57^kip2 mRNA表达,癌周肝硬化组与肝癌组阳性表达率均为26．7％（8/30）．杂合性缺失检测结果显示在10个微卫星位点中,仅有TH01（7／30,23．3％）、D11S2359（5／30,16．6％）和D11S569（1／30,3．3％）3个位点有杂合性缺失;p57^kip2 mRNA和蛋白表达缺失主要与TH01位点相关．结论p57^kip2 mRNA和蛋白表达异常提示其可能在原发性肝癌的发生发展中起重要作用．与p57^kip2基因同一区域的10个微卫星位点不是p57^kip2基因LOH和MSI的频发位点,但p57^kip2 mRNA表达缺失与TH01位点的杂合性缺失相关．     

宫颈上皮内瘤样病变3p14杂合性丢失和微卫星不稳定性研究

目的探讨宫颈上皮内瘤样病变染色体3p14区域D3S1300、D3S1600LOH及MSI与宫颈上皮内瘤样病变病理分级的相关性。方法选择3p14区域两个微卫星多态性位点，显微分离提取42例宫颈上皮内瘤样病变石蜡切片中的正常组织和病变组织。经PCR扩增及聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染色，进行LOH及MSI研究。结果42例样本中有21例至少存在一个位点的LOH，D3S1300位点LOH的频率为29％，D3S1600位点LOH的频率为26％，MSI发生频率相对较低，D3S1300的MSI频率为5．3％，D3S1600的MSI频率为7．7％。D3S1300、D3S1600位点LOH的发生率与病理分级呈正相关（CMNX2=7．773，P〈0．05）。而MSI与之无相关性（CMNX2=1．432，P〉0.05）．结论3p14区域内D3S1300、D3S1600位点具有较高的LOH，提示这两个微卫星位点附近可能存在尚未克隆的与宫颈上皮内瘤样病变发生、发展相关的肿瘤抑制基因。宫颈上皮内瘤样病变染色体3p14区域LOH与病理分级成正相关，提示检测该区域的LOH可作为病变进展及预后的重要参考指标。     

肺癌组织微卫星不稳定性及p16基因甲基化与肺癌发生、发展关系的研究

目的 :探讨微卫星标志物D3S12 5 5 ,C13 1169,IFNA ,D9S171改变及p16的异常甲基化与肺癌发生发展的关系 ,以及其在肺癌早期诊断和转移判断方面的价值。方法 :应用聚合酶链反应 (PCR)结合微卫星银染分析方法检测肺癌组织微卫星标志物的改变。结果 :5 6例肺癌组织标本中 3p上微卫星改变 2 6例 (4 6% ) ,9p上有微卫星改变的2 3例 (4 1% ) ,17p上有微卫星改变 15例 (2 6 8% )。 3p、9p和 17p上微卫星改变的总检出率 69.6% (3 9/ 5 6)。 44 .6%(2 5 / 5 6)的肺癌组织标本检出p16基因异常甲基化。 5 6例肺癌标本中 ,43 (76.8% )例至少检出一个以上的微卫星改变或p16基因异常甲基化。 2 3例肺部良性疾病的组织标本中 3p、9p和 17p上均没有发现微卫星标志物的改变及p16基因异常甲基化。结论 :3p ,9p和 17p上微卫星改变和p16基因异常甲基化是肺癌发生、发展过程中较早出现的遗传性改变之一 ,且与肺癌转移密切相关 ,有望应用于肺癌的早期诊断和转移判断。     

肝细胞癌患者血浆循环DNA微卫星变异的研究

目的 探讨肝细胞癌（HCC）患者血浆循环DNA微卫星变异的特点及其与肿瘤组织的一致性。方法 选择位于染色体8p上3个具有高度多态性的微卫星标记,对62例肝细胞癌血浆、组织标本的DNA进行了杂合性缺失（LOH）和微卫星不稳定（MSI）检测。结果 在联合检测的3个微卫星位点上,39例发生了LOH的组织标本其对应的血浆标本中有33例在相应位点检测到了相同的改变,一致性为84．6％;在19例MSI阳性的组织标本中,其对应的血浆中有14例检测到了相同的MSI,一致性为73．7％;62例HCC血浆DNA在至少一个位点的LOH阳性率（58．1％,36／62）明显高于MSI（29．0％,18／62）（P〈0．01）;HCC组织、血浆DNA在D8S277位点的MSI阳性率皆明显高于其他两个位点（P均〈0．05）。结论 HCC血浆循环DNA与肿瘤组织微卫星变异有较高的一致性变化,血浆循环DNA可以用来反映肿瘤组织的微卫星变异;LOH方式在HCC的发生发展过程中起着重要作用,MSI的作用次之;D8S277是HCC中对MSI敏感的一个检测位点。     

头颈部鳞癌微卫生多态标记的分析

目的 探讨中国人头颈部鳞状细胞癌（SCCHN）多染色体上等位基因的杂合性丢失（LOH）和微卫星不稳定（MI）的频率。方法 采用聚合酶链反应结合二核苷酸酸的重复序列多态性方法,选取6对染色体（3p,4q,7q,9p,17p和18q）上18个微卫星位点对30例SCCHN手术配对组织进行分析。结果 30例SCCHN组织中有12例（40％）组织至少有一个微卫生位点发生LOH,多数位点LOH的频率谱普遍比已报道的文献低。有7个位点（D7S480、D7S522、D9S162、D9S168、D9S304、D9S171和D17S520）具有统计学意义（P＜0．05）,然而这些位点的LOH与肿瘤病理学类型、肿瘤大小及转移性无显著相关性。此外,MI仅在4例患者中发现,没有1例患者符合MI的判定标准,即需两个或两个以上的微卫星多态位点的异常。结论 主要发生在D7S480、D7S522、D9S162、D9S168、D9S304、D9S171和D17S520位点的LOH可能存在与部分SCCHN有关的潜在的肿瘤抑制基因,而微卫星不稳定性与SCCHN发生的关系不大。     

人胃癌组织DNA微卫星不稳定性分析

目的 探讨微卫星不稳定性（MSI）与胃癌的关系。方法 采用PCR聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染技术，检测30例胃癌肿瘤组织DNA D2S123位点及D3S1067位点的MSI。结果 30例胃癌2个位点MSI检出率分别为：D2S123位点26．7％（8／30），D3S1067位点33．3％（10／30）。结论 MSI是胃癌发生过程中的分子标志，在胃癌的发生中起着重要作用。     

急性淋巴细胞白血病患者微卫星DNA杂合性缺失检测

目的：探讨微卫星DNA杂合性缺失与急性淋细胞白血病（ALL）的相关性。方法：ALL患者72例，其中T－ALL9例，B－ALL55例，慢性粒细胞性白血病（慢粒）急淋为8例，应用PCR－变性聚丙烯酰胺凝胶电泳－银染技术，检测ATM基因D11S2179位点、BRCA2基因D13S269点位点和D13S25在B－ALL、T－ALL和慢粒急淋变患者的微卫星杂合性缺失（LOH）。结果：72例ALL患者中，3位点总LOH频率为26．4％。D11S2179、D13S260和D13S53位点LOH的发生频率分别为15．3％、12．5％和5．5％。B－ALL患者3个位点平均LOH发生率为12．7％。在D11S2179和D11S2602位点同时发生LOH频率为9．1％。9例T－ALL患者未发现LOH。8例慢性急淋变患者只在D11S2179位点检测到3例（37．1％），其他2位点未异常。结论：ATM基因、BRCA2基因帮D13S25位点微卫星的LOH与B－ALL的发病存在相关性；而ATM基因遗传不稳定性可能参与慢粒急淋变过程。     

非霍奇金淋巴瘤中p16基因突变与MSI的关系

目的 研究p16基因突变与微卫星不稳定性（Microsatellite instability MSI）在非霍奇金淋巴瘤（Non-Hodgkin＇s lymphoma NHL）发生发展中的作用,探讨p16基因内外显子1、2（exon1、exon2）的分子遗传学改变与非霍奇金淋巴瘤的关系.方法 采用PCR-SSCP法对40例已确诊NHL进行p16基因外显子1、2的突变研究;选取p16基因内部微卫星位点D9S265,D9S259,D9S161,D9S169对MSI进行检测.结果 40例NHL中,P16基因总突变率为35.0％ （14/40）,位点D9S161、D9S259的MSI组的P16的突变率明显高于MSI阴性组,而D9S265和D9S169则与之相反（P＞0.05）,D9S259、D9S161、D9S265外显子2的突变和缺失率均高于外显子1.结论 ①NHL中存在较高p16基因突变率和MSI,提示其突变和MSI可能参与NHL的发生、发展;②通过统计分析,微卫星位点的MSI主要影响p16基因外显子2的突变和缺失;③微卫星位点D9S161和D9S169与p16基因的关系较紧密.     

错配修复、微卫星不稳定性与散发性结直肠癌

目的：探讨DNA错配修复基因、微卫星不稳定性与散发性结直肠癌发生发展的关系。方法：采用放射性同位素为基础的聚合酶链式反应（PCR）技术，对48例散发性结直肠癌中错配修复基因和四个位点微卫星不稳定性进行了检测。结果：48例散发性结直肠癌中hmsh3、hmsh6基因突变率分别为10．4％和25％，四个位点微卫星不稳定性阳性率分别为D2S123（12．5％）、BAT－26（18．8％）、D17S261（10．4％）、D17S799（8．3％），hmsh3、hmsh6 基因突变和微卫星不稳定性多为分化不良的吕，多位于右半结肠，而与患者的性别、淋巴结转移、Ducks分期无关。结论：错配修复基因突变与微卫星不稳定性是散发性结直肠癌发生的早期分子事件，是除LOH致癌途径以外的又一新的致癌途径。     

3p微卫星不稳定性检测在肺癌早期诊断中的意义

目的研究3p微卫星不稳定性（MSI）检测在肺癌早期诊断中的意义。方法采用PCR单链长度分析法检测肺癌、癌前病变和正常肺组织的MSI。结果癌前病变组MSI的发生率显著高于肺癌组（P〈0．05）和正常肺组织组（P〈0．01）,肺癌组M$I的发生率显著高于正常肺组织组（P〈0．01）。结论3p上MSI阳性对于肺癌具有特异性,可以作为早期肺癌的诊断指标。     

胃癌组织中琥珀酸脱氢酶基因周围微卫星杂合性丢失的研究

①目的研究胃癌组织中由核DNA编码的琥珀酸脱氢酶（SDHD）基因位点的改变情况。②方法选取与SDHD基因紧密连锁的3个微卫星D11S5017、D11S1347和D11S1328,通过PCR—SSLP的方法检测了35例新鲜胃癌组织中3个微卫星位点的杂合性丢失（LOH）情况。③结果胃癌组织中,D11S5017位点LOH检出率为12．0％,D11S1347位点LOH检出率为10.0％,D11S1328位点LOH检出率为14．3％。3个位点LOH总检出率为19．4％。④结论在胃癌组织中存在着在SDHD基因LOH的现象,说明了它可能是胃癌中的一种特殊类型的肿瘤抑制因子。     

纤维支气管镜联合p16基因甲基化检测对肺癌的诊断价值

对42例肺癌患者和25例肺部良性病变患者行纤维支气管镜检查,并利用甲基化特异性PCR方法检测外周血血浆、痰液、支气管肺泡灌洗液中p16基因甲基化状态。42例确诊肺癌患者p16基因异常,甲基化阳性数在血浆、痰液和支气管肺泡灌洗液中分别为22例（52．4％）、20例（47．6％）和25例（59．5％）,各标本的阳性率差异无统计学意义（P〉0．05）;25例良性病变者中除1例在血液中检测到异常甲基化外,均未检测到p16基因的异常甲基化。经纤维支气管镜确诊25例,敏感度、特异性和准确性分别为59．5％、100．0％和74．6％;纤维支气管镜联合p16基因甲基化检测后敏感度、特异性和准确性分别为92．9％、96．2％和94．0％。     

肺癌组织3号染色体短臂上抑癌基因异常改变的初步分析

目的 探讨3号染色体短臂上的抑制基因Fhit,hMLH1及VHL在肺癌发展中的可能作用。方法 选取上述基因内含子或附近的微卫星多态位点对45例肺癌组织进行杂合性缺失（LOH）分析,并对其中17例进行了Fhit蛋白的免疫组化染色。结果 Fhit基因内含子3个位点D3S1234、D3S1300及D3S4103的杂合率分别为77．8％（35／45）、73．3％（33／45）和82．2％（37／45）,LOH阳性率分别为62．9％（22／35）、63．6％（21／33）和59．5％（22／37）。与hMLH1基因连锁的两个位点D3S1561、D3S1612杂合率分别为48．9％（22／45）、42．2％（19／45）,LOH阳性率分别为54．5％（12／22）和63．2％（12／19）。与VHL基因连锁的两个位点D3S1038、D3S1283的杂合率分别为62．2％（28／45）和80．0％（36／45）,LOH阳性率分别为64．3％（18／28）和41．7％（15／36）。17例肺癌组织有64．7％（11／17）Fhit蛋白表达缺失。在Fhit蛋白缺失的11个病例中,有10例存在一个或多个Fhit基因位点的LOH。结论 上述3个抑癌基因存在的高频率LOH可为肺癌的早期诊断提供新的途径和依据。Fhit基因的杂合性缺失可能是Fhit蛋白表达下调的机理之一。     

慢性粒细胞白血病微卫星不稳定性的检测及其意义

目的 探讨不同位点微卫星不稳定性（MSI）和杂合性缺失（LOH）与慢性粒细胞白血病（CML）各期的关系。方法 应用多重PCR技术检测CML病人不同时期8、9、17号染色体上5个微卫星位点的MSI和LOH。结果 在D8S555位点,CML加速、急变期（AP＋BC）病人的MSI发生率明显高于慢性期（CP）病人,差异有显著意义（P=0．009）;8号染色体上D8S555、D8S559位点MSI发生率明显高于9、17号染色体上D9S67、TP53A1／A2、AFMal27xg9位点,AFMa127xg9位点LOH发生率明显高于其他4个位点,差异有显著性（x^2=1．858～9．946,P〈0．05、0．01）。结论 微卫星遗传不稳定性是CML发生和转化过程中的常见事件;不同位点微卫星不稳定性在CML病情演变中所起作用不同;AFMa127xg9位点附近可能存在与CML发生、发展密切相关的新抑癌基因。     

肺癌患者血浆游离性DNA的研究

目的：研究（1）肺癌患者血浆游离DNA的肿瘤特异性；（2）肺癌患者血浆游离DNA3p部位微卫星不稳定（microsat-ellite instability,MSI）和杂合性缺失（loss of heteroxygosity,LOH）在肺癌诊断、监测中的意义。方法：本研究以37例肺癌术后新鲜标本、94例肺癌患者的全血标本作为研究对象；15例健康正常人和15例结核病人的全血标本作为对照。通过PCR－银染法检测血浆游离DNA3p部位3个微卫星位点的LOH、MSI情况；并和组织标本结果进行对比。结果：（1）大多数肺癌患者的血浆游离DNA的浓度在微克水平以上，而15例正常对照和15例结核病人多在微克水平以下；（2）联合3个位点进行LOH、MSI检测时，组织和血浆的阳性率均在70％以上，一致性在80％以上；而对照组未检测到有LOH、MSI；（3）不同分期、不同病理类型的LOH、MSI之间差异无显著性意义；（4）有淋巴结转移与无淋巴结转移之间差异有显著性意义。结论：血浆游离DNA的未可微克含量水平具有一定的诊断意义，其3p部位的微卫星检测在肺癌的诊断中具有较高的敏感性和特异性，并和组织标本有较高的一致性变化。肺癌患者血浆游离DNA可以作为基因检测的新途径，具有广阔的应用前景。     

食管癌患者3p25等位基因杂合缺失的初步研究

目的：检测35例食管癌患者3p25D3S1038染色体位点的杂合缺失，为寻找此位点附近潜在的抑癌基因奠定基础。方法：微卫星DNA-PCR-银染法检测3p25D3S1038位点杂合缺失。结果：3p25D3S1038位点有ll例存在杂合缺失(LOH)，LOH率为31．4％，此位点杂合缺失在各民族中均存在。结论：3p25D3S1038存在杂合缺失且有一定发生频率，可能与食管癌的发生有关，值得继续研究。     

p27、Survivin在乳腺癌中的表达及相关性

目的：探讨p27、Survivin在乳腺癌中表达的意义及相关性。方法：用免疫组化S-P法检测48例乳腺癌中p27、Survivin的表达情况，并与29例乳腺良性病变检测结果进行对照分析。结果：（1）乳腺良性病变p27、Sur-vivin的阳性率分别是79．3％（23／29）、24．1％（7／29）；乳腺癌p27、Survivin的阳性率分别是42％（20／48）、72．9％（35／48）。p27、Survivin的阳性表达率在乳腺良、恶性病变中差异具有统计学意义（P〈0．01）。（2）乳腺癌p27与Survivin的表达呈负相关（P〈0．05）。（3）乳腺癌p27的表达与患者的年龄、族别无关（P〉0．05）．与乳腺癌组织学分级相关（P〈0．01）；Survivin的表达与患者的年龄、族别、乳腺癌的组织学分级均无关（P〉0．05）。结论：p27、Survivin表达异常可能在乳腺癌的发生、发展中具有重要的作用，二者在乳腺癌的发生、发展中可能具有相互作用。p27、Survivin表达异常可用于良、恶性乳腺疾病的鉴别．对乳腺良性病变的恶性转化有一定的预兆性。