雷公藤内酯醇对高糖时人肾小球系膜细胞MC P-1表达的影响

目的探讨高糖及雷公藤内酯醇（TP）对人肾小球系膜细胞单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）表达的影响。方法将培养的人肾小球系膜细胞分为6组：正常对照组（5 mmol/L 葡萄糖）、高糖组（30 mmol/L 葡萄糖）、甘露醇组（5 mmol/L 葡萄糖＋25 mmol/L甘露醇）、TP甲组（30 mmol/L 葡萄糖＋5μg/L TP）、TP 乙组（30 mmol/L 葡萄糖＋10μg/L TP）、TP丙组（30mmol/L 葡萄糖＋15μg/L TP）,分别在24 h、48 h、72 h采用 RT-PCR法检测TP对高糖条件下系膜细胞内 MCP-1 mRNA 及蛋白表达的影响。结果高糖组人肾小球系膜细胞 MCP-1 mRNA及蛋白较正常对照组增加,且差异有显著性（P＜ 0.01）;TP各组比高糖组有明显下降（P＜ 0.01）;不同浓度的TP对高糖诱导的系膜细胞 MCP-1的表达抑制程度不同（P ＜ 0.05）。结论 TP可抑制高糖诱导的人肾小球系膜细胞 MCP-1的表达,且呈时间、剂量依赖关系,其可能对延缓糖尿病肾病中肾小球硬化有一定作用。     

贝那鲁肽对高糖诱导的胰岛 β细胞功能障碍和凋亡的影响及机制研究

目的　探讨贝那鲁肽对高糖诱导的胰岛 β细胞功能障碍和凋亡的影响以及相关机制。方法　将 INS-1胰岛 β细胞随机分为对照组、高糖组、贝那鲁肽处理组、 MG-132预处理组和 ISO-1预处理组,对照组给予 5.5mmol/L葡萄糖处理,高糖组给予 30 mmol/L葡萄糖处理,贝那鲁肽处理组在高糖组的基础上给予 1 nmol/L贝那鲁肽处理, MG-132预处理组和 ISO-1预处理组分别在高糖的基础上给予 20 μmol/L MG-132和 50 μmol/L ISO-1预处理。培养 24h后噻唑蓝（ MTT）比色法评估细胞的活力,酶联免疫吸附法（ ELISA）检测 INS-1胰岛 β细胞胰岛素和巨噬细胞迁移抑制因子（ MIF）的分泌, Western blot检测凋亡相关蛋白（ Bax和 cleaved caspase 3）和 NF-κB通路相关蛋白（ p-IκB,IκB和 NF-κBp65）的表达。结果　与对照组相比,高糖组胰岛 β细胞的存活率（ t=4.949,P＜ 0.01）、胰岛素的分泌（ t=3.168, 4.273,均 P＜ 0.05）和 IκB的表达（ t=3.062,P＜ 0.05）明显降低,凋亡相关蛋白（ Bax和 cleaved caspase 3）的表达（ t=2.923, 3.141,均 P＜ 0.05）、p-IκB和 NF-κB p65表达（ t=3.544, 4.658,均 P＜ 0.01）以及 MIF分泌（ t=3.024,P＜ 0.05）明显增加 .与高糖组相比,贝那鲁肽处理组可逆转高糖组上述指标的变化（ t=2.415 ~ 4.290,均 P＜ 0.05）,差异均有统计学意义。进一步给予 NF-κB抑制剂 MG-132和 MIF抑制剂 ISO-1预处理后,与高糖组相比, MG-132预处理组和 ISO-1预处理组均可改善高糖诱导的 INS-1胰岛 β细胞胰岛素分泌功能（ t=2.515 ~ 6.867,均 P＜ 0.05）,还可降低凋亡相关蛋白 Bax（t=4.022,     

高糖对人脐静脉内皮细胞c-Jun表达影响

目的:观察高糖对人脐静脉内皮细胞c-Jun表达的影响.方法:提取、分离人脐静脉内皮细胞,体外培养至第3代,分别用5.5,11.0,22.0,44.0 mmol/L葡萄糖培养液培养内皮细胞,并设22.0 mmol/L 甘露醇培养液培养者为对照组.以22.0 mmol/L葡萄糖分别作用0,0.5,1.0,2.0 h,应用RT-PCR和免疫细胞化学方法检测c-Jun mRNA和蛋白表达水平.结果:高搪以浓度依赖方式上调人脐静脉内皮细胞c-Jun mRNA的表达,22.0 mmol/L葡萄糖达到最强刺激效应,与5.5 mmol/L 葡萄糖组及对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01).22.0 mmol/L葡萄糖刺激0.5 h c-JunmRNA表达升高,刺激1.0 h达高峰,2.0 h开始下降.22.0 mmol/L葡萄糖刺激2 h后,人脐静脉内皮c-Jun蛋白表达增加.结论:高糖可上调人脐静脉内皮细胞c-Jun mRNA和蛋白表达.     

叉头框转录因子O亚族1对高糖环境下胰岛β细胞生长及细胞周期分布影响

目的研究叉头框转录因子O亚族1(FOXO1)对高糖诱导的胰岛β细胞生长和周期分布的影响。方法 INS-1细胞分成对照组、高糖组、阴性+高糖组、干扰+高糖组共4组,处理方法如下:对照组:INS-1细胞不做任何处理。高糖组:用含有25 mmol/L的葡萄糖的细胞培养液培养1 d。阴性+高糖组:用含有25 mmol/L的葡萄糖的细胞培养液培养1 d,细胞为稳定感染shRNA control慢病毒的INS-1细胞。干扰+高糖组:用含有25 mmol/L的葡萄糖的细胞培养液培养1 d,细胞为稳定感染FOXO1 shRNA慢病毒的INS-1细胞。用Western blot和qRT-PCR检测细胞中FOXO1的表达情况,CCK-8测定细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,Western blot方法测定细胞中细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、p27蛋白水平。结果高糖组胰岛β细胞中FOXO1表达水平高于对照组,干扰+高糖组胰岛β细胞中FOXO1的表达水平低于高糖组,阴性+高糖组细胞中FOXO1的表达水平与高糖组比较没有变化。高糖组胰岛β细胞增殖能力降低,细胞G0/G1期比率升高,细胞中cyclin D1蛋白水平降低,p27蛋白水平升高,与对照组比较,差异有统计学意义(P0.05)。干扰+高糖组胰岛β细胞增殖能力升高,细胞G0/G1期比率降低,细胞中cyclin D1蛋白水平升高,p27蛋白水平降低,与高糖组比较,差异有统计学意义(P0.05)。结论高糖诱导胰岛β细胞中FOXO1表达,敲低其表达能够逆转高糖对胰岛β细胞的增殖抑制和细胞周期阻滞作用。     

高糖对小鼠脑微血管内皮细胞释放高迁移率蛋白-1的影响

目的研究不同浓度高糖培养基对小鼠脑微血管内皮细胞(bEnd.3)的损伤作用。方法对照组:25 mmol/L糖浓度组;高糖诱导组:35、40、45、50、60 mmol/L糖浓度组;辛伐他汀干预组:高糖(40 mmol/L)+辛伐他汀(0.1μmol/L)、高糖(40 mmol/L)+辛伐他汀(1μmol/L)、高糖(40 mmol/L)+辛伐他汀(10μmol/L)。将各实验组分别培养10、18、24、36、48、72 h用于试验,辛伐他汀干预组培养24 h后用于实验。细胞酶联免疫吸附法(ELISA)测定各组细胞上清液中高迁移率蛋白-1(HMGB-1)值,光镜和电镜观察细胞形态和结构的改变。结果在同一时间点测得HMGB-1进行比较,可发现各实验组随葡萄糖浓度的升高HMGB-1释放量呈递增趋势,培养48 h后,高糖组(40、45 mmol/L)达到释放峰值;辛伐他汀干预组释放HMGB-1量明显下降。各高糖组可引起细胞线粒体明显肿胀,空泡样变,以60 mmol/L糖浓度组最为明显;辛伐他汀干预组细胞线粒体结构则无明显变化。结论高糖可引起内皮细胞损伤,其潜在的机制很有可能是通过晚期炎症因子HMGB-1的释放而起到炎症介导的的过程。     

高糖对心肌微血管内皮细胞表达神经调节蛋白1的影响

背景:糖尿病心肌病的发病机制尚不清楚,神经调节蛋白1具有促进血管再生等作用,糖尿病心肌病的发病是否和心肌微血管内皮细胞表达神经调节蛋白1下降有关值得进一步研究.目的:观察高糖对心肌微血管内皮细胞表达神经调节蛋白1的影响.方法:取生长良好的第2代心肌微血管内皮细胞,高糖组加入10 mmol/L的葡萄糖,高糖+胰岛素组加入10 mmol/L的葡萄糖及10-5U/L的胰岛素,对照组正常培养.培养24 h后收集细胞,RT-PCR及Western blot方法检测神经调节蛋白1 mRNA和蛋白的表达.结果与结论:与对照组比较,高糖组心肌微血管内皮细胞神经调节蛋白1 mRNA和蛋白的表达明显下降(P<0.05);与高糖组比较,高糖+胰岛素组心肌微血管内皮细胞神经调节蛋白1 mRNA和蛋白的表达明显升高(P<0.05),与对照组间差异无显著性意义(P>0.05).说明高糖可抑制心肌微血管内皮细胞表达神经调节蛋白1 mRNA和蛋白,而胰岛素可拮抗此作用.     

高糖对HSkMCs细胞株AT1R、mfn2mRNA表达的影响

目的探讨骨骼肌局部肾素血管紧张素系统（RAS）在高糖状态的变化及对线粒体融合蛋白2（mfn2）基因表达的影响。方法体外培养人骨骼肌细胞（HSkMC）,分为不同浓度葡萄糖组进行培养：5.55mmol/L组,11.1mmol/L组,22.2mmol/L组,分别培养48h,应用RT-PCR检测各组的血管紧张素Ⅱ-1型受体（AT1R）、mfn2基因表达。结果以5.55mmol/L组作为基础对照组,11.1mmol/L组、22.2mmol/L组AT1R mRNA表达均较对照组增加（P〈0.05）,而mfn2基因表达则下降（P〈0.05）。结论高糖能诱导骨骼肌细胞AT1RmRNA表达上调,mfn2mRNA表达下调,且呈剂量依耐性。     

足细胞损伤的诱导途径：血管紧张素Ⅱ-足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6信号通路

背景：瞬时受体电位阳离子通道蛋白6是足细胞上一种新发现的阳离子通道蛋白,是组成裂隙隔膜重要蛋白之一,其表达变化与糖尿病肾病蛋白尿密切相关。目的：观察高糖刺激对足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6表达的影响,探讨糖尿病肾病发生发展的可能机制。方法：以永生化小鼠足细胞（MPC5）作为实验对象,将其设为：正常糖组（D-葡萄糖5.6 mmol/L）;渗透压对照组（D-葡萄糖5.6 mmol/L＋甘露醇25 mmol/L）;高糖组（D-葡萄糖30 mmol/L）;缬沙坦组（D-葡萄糖30 mmol/L＋10-5结果与结论：与正常糖组相比,高糖组足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6、血管紧张素Ⅱ蛋白及 mRNA水平明显升高（P〈0.01）,nephrin mRNA及蛋白水平明显降低（P〈0.01）;与高糖组相比,缬沙坦组瞬时受体电位阳离子通道蛋白6、血管紧张素Ⅱ的表达显著降低（P〈0.05,P〈0.01）;高糖＋U73122组瞬时受体电位阳离子通道蛋白6、血管紧张素Ⅱ表达较高糖组明显下降（P〈0.05,P〈0.01）;渗透压对照组与正常糖组之间各因子差异无显著性意义（P〉0.05）。结果说明高糖可能通过血管紧张素Ⅱ-瞬时受体电位阳离子通道蛋白6反馈信号通路损伤足细胞,同时也为血管紧张素受体拮抗剂通过此通路保护足细胞而治疗糖尿病肾病的提供了一新的理论基础。 mol/L缬沙坦）;高糖＋U73122组（D-葡萄糖30 mmol/L＋10μmol/L磷脂酶抑制剂U73122）。各组细胞干预时间为48 h。采用荧光定量PCR和western-blot方法检测各组足细胞瞬时受体电位阳离子通道蛋白6、nephrin、血管紧张素ⅡmRNA和蛋白的表达。     

高糖诱导人脐静脉内皮细胞衰老过程中活性氧和一氧化氮合酶／一氧化氮系统的变化

目的 观察高糖加速内皮细胞衰老过程中细胞内活性氧(ROS)水平和一氧化氮合酶/一氧化氮(NOS/NO)系统的变化.方法 将正常浓度糖(5.5 mmol/L)和高浓度糖(分别为11、22、33 mmol/L)培养液作用于人脐静脉内皮细胞48 h后,用β-半乳糖苷酶(β-gal)染色鉴定衰老细胞,用聚合酶链反应-酶联免疫吸附法(PCR-ELISA)检测端粒酶活性,用硝酸盐还原酶法检测细胞上清液总NO水平,用蛋白质免疫印迹法(Western blotting)分析内皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达,用荧光酶标仪检测细胞内NOS活性,用流式细胞仪检测细胞内ROS水平.结果 高糖培养液作用于内皮细胞48 h后,与对照组比较,随糖浓度升高内皮细胞β-gal染色阳性细胞数明显增多,端粒酶活性下降,细胞NO合成减少,NOS活性被抑制,细胞内ROS水平明显升高(P<0.05或P<0.01),但eNOS蛋白表达变化不明显.结论 高糖加速内皮细胞衰老进程,其作用机制可能与增强氧化应激,抑制NOS/NO系统有关.     

肾胺酶减轻高糖诱导的足细胞损伤

目的:探讨肾胺酶对高糖诱导的足细胞损伤的减轻作用及可能机制。方法:利用体外培养的小鼠足细胞,分为对照组(5 mmol/L D-葡萄糖)、甘露醇组(5 mmol/L D-葡萄糖+25 mmol/L甘露醇)、高糖组(30 mmol/L D-葡萄糖)与肾胺酶处理组(重组肾胺酶蛋白60μg/mL预处理6 h+30 mmol/L D-葡萄糖)。48 h后收集细胞,实时定量PCR法测定Ⅳ型胶原α、转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)及单核细胞趋化因子1(monocyte chemoattractant protein 1,MCP-1)的mRNA表达水平;酶联免疫吸附试验测定Ⅳ型胶原α、TGF-β1、MCP-1蛋白表达水平、凋亡相关蛋白caspase-3活性和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1(cyclin-dependent kinase inhibitor 1,p21)活性。结果:与对照组相比,高糖组足细胞Ⅳ型胶原α、TGF-β1、及MCP-1表达水平显著增高,caspase-3活性增加并伴有p21活性增加(P0.05);与高糖组相比,肾胺酶处理组足细胞Ⅳ型胶原α、TGF-β1、和MCP-1表达水平下调,caspase-3活性和p21活性下调(P0.05)。结论:肾胺酶可减轻高糖诱导的足细胞损伤,可能与其抗炎、抗纤维化、抗凋亡和降低p21的活性有关。     

恩格列净改善高糖诱导HK-2细胞凋亡的机制探讨

目的 探讨恩格列净改善人肾皮质近曲小管上皮细胞（HK-2细胞）凋亡的机制。方法 将HK-2细胞置于正常葡萄糖、高葡萄糖、高葡萄糖+不同浓度的恩格列净共干预环境下培养48 h。采用蛋白免疫印迹法检测肾脏沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）、硫氧还蛋白互作蛋白（TXNIP）以及裂解的半胱天冬酶-3（cleaved Caspase-3）的表达水平。采用TUNEL染色评估HK-2细胞凋亡情况。结果 蛋白免疫印迹结果显示,高葡萄糖培养48 h后HK-2细胞的TXNIP和cleaved Caspase-3表达水平均高于正常葡萄糖组,而SIRT1表达水平低于正常葡萄糖组（P均< 0.05）。1000 nmol/L恩格列净和30 mmol/L葡萄糖共干预48 h后,HK-2细胞的TXNIP和cleaved Caspase-3的蛋白表达水平降低,SIRT1表达水平升高（P均< 0.001）。TUNEL染色结果显示恩格列净和30 mmol/L葡萄糖共干预组较30 mmol/L葡萄糖组TUNEL阳性细胞数少,且1000 nmol/L恩格列净和30 mmol/L葡萄糖共干预组凋亡改善更明显。结论 恩格列净可能通过上调SIRT1的表达、抑制TXNIP表达,改善高糖诱导HK-2细胞凋亡。     

藏红花素对缺氧环境下Wistar大鼠视网膜Muller细胞活性和胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的观察不同浓度藏红花素对缺氧条件下RMC活性和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的影响。方法改良Reichenbach等方法原代培养Muller细胞,并采用GFAP和Vimentin染色鉴定RMC。RMC培养基中加人终浓度10μmoL／L、50μmoL／L和100μmoL／L藏红花素,于1—7d计数细胞,于24h和48h台盼蓝染色测定细胞活性,对照组RMC培养基中未加入藏红花素。培养液中加入终浓度为200μmol/L的CoCl2建立化学缺氧模型。实验分4组：缺氧组（H组）、藏红花素处理组（C组）、缺氧＋藏红花素处理组（HC组）和正常对照组（NC组）,其中C和HC组培养液中加入10μmol／L藏红花素。处理24h,台盼蓝染色检测细胞活性,采用Westernblot法半定量检测GFAP的表达。结果含10μmoL／L和50μmol／L藏红花素的培养液中,细胞生长无抑制;100μmol/L藏红花素的培养液中细胞增生受到抑制,培养24h和48hRMC活性分别为（68±7）％、（59±9）％,与对照组相比,明显降低（t24h=3．723,P〈0．05;t48h=4．103,P〈0．05）。在缺氧条件下,正常细胞和10μmoL／L藏红花素的培养液中细胞活性受到明显抑制,藏红花素可减轻缺氧环境对细胞活性的抑制作用。在缺氧条件下,GFAP表达明显升高（t=2．945,P〈0．05）;藏红花素可部分抑制GFAP高表达（t=3．362,P〈0．05）。结论缺氧能诱导体外培养视网膜Muller细胞死亡,适合浓度藏红花素可抑制缺氧诱导的视网膜Muller细胞死亡。     

骨形态发生蛋白-7通过 TGFβ／smad 信号通路抑制高糖诱导下足细胞的转分化

目的：通过观察骨形态发生蛋白-7（BMP-7）对高糖环境培养下足细胞 p-smad2/3、nephrin、desmin 表达的影响探讨 BMP-7抑制足细胞转分化机制。方法以体外培养的小鼠永生化足细胞为研究对象,将其分为以下4组：正常糖组（NG 组,含 D-葡萄糖5．5 mmol/L）、高糖刺激组（HG 组,含 D-葡萄糖30 mmol/L）、高糖＋BMP-7干预组（BMP-7组,含 D-葡萄糖30 mmol/L＋400 ng/ml rhBMP-7）、甘露醇对照组（MN 组,含 D-葡萄糖5．5 mmol/L ＋甘露醇24．5 mmol/L）,各组干预时间为48 h,应用荧光定量 PCR 法检测足细胞 nephrin、desmin mRNA 表达量,Western blot 检测足细胞 p-smad2/3、nephrin、desmin 蛋白表达量。结果正常状态下足细胞高表达 nephrin,少量表达 p-smad2/3、desmin;高糖刺激可以上调足细胞 p-smad2/3、desmin 的表达、下调 nephrin 的表达（P ＜0．05）;BMP-7与高糖共同培养在一定程度上可以抑制高糖引起的足细胞 p-smad2/3表达上调,减少 desmin 表达,恢复 nephrin 表达（P＜0．05）;NG 组与 MN 组之间比较 p-smad2/3、nephrin、desmin 表达水平无显著差异（P ＞0．05）。结论BMP-7可能通过调节 TGFβ/smad 信号通路抑制高糖诱导足细胞转分化。     

人视网膜色素上皮细胞诱导型一氧化氮合酶和活性氧在高糖状态下的表达

背景：高血糖导致的自由基损伤是糖尿病视网膜病变发病机制的中心环节。目的：观察高糖对体外培养的人视网膜色素上皮细胞的氧化损伤作用以及高糖对人视网膜色素上皮细胞诱导型一氧化氮合酶和活性氧表达的影响。方法：将培养人视网膜色素上皮细胞,分为对照组、高糖组和甘露醇组,分别用含5.5mmol/L葡萄糖,33mmol/L葡萄糖及5.5mmol/L葡萄糖和27.5mmol/L甘露醇的DMEM培养液培养。采用相差倒置显微镜观察细胞生长形态,采用免疫荧光染色研究诱导型一氧化氮合酶和3-硝基酪氨酸蛋白表达的变化,用氯甲基二氯二氢荧光素二乙酯荧光染色检测视网膜色素上皮细胞中活性氧的产生量。结果与结论：与对照组相比,应用含33mmol/L葡萄糖的DMEM培养基处理视网膜色素上皮细胞48h可见细胞胞体变薄,形态表现多样,不规则细胞增多;高糖培养的视网膜色素上皮细胞诱导型一氧化氮合酶和3-硝基酪氨酸蛋白表达增加,活性氧产生明显增多。说明高浓度葡萄糖培养可造成人视网膜色素上皮细胞氧化损伤,使细胞形态发生变化,并导致细胞中3-硝基酪氨酸产生增多。     

人视网膜色素上皮细胞诱导型一氧化氮合酶和活性氧在高糖状态下的表达

背景:高血糖导致的自由基损伤是糖尿病视网膜病变发病机制的中心环节.目的:观察高糖对体外培养的人视网膜色素上皮细胞的氧化损伤作用以及高糖对人视网膜色素上皮细胞诱导型一氧化氮合酶和活性氧表达的影响.方法:将培养人视网膜色素上皮细胞,分为对照组、高糖组和甘露醇组,分别用含5.5 mmol/L葡萄糖,33 mmol/L葡萄糖及5.5 mmol/L葡萄糖和27.5 mmol/L甘露醇的DMEM培养液培养.采用相差倒置显微镜观察细胞生长形态,采用免疫荧光染色研究诱导型一氧化氮合酶和3-硝基酪氨酸蛋白表达的变化,用氯甲基二氯二氢荧光素二乙酯荧光染色检测视网膜色素上皮细胞中活性氧的产生量.结果与结论:与对照组相比,应用含33 mmol/L葡萄糖的DMEM培养基处理视网膜色素上皮细胞48 h可见细胞胞体变薄,形态表现多样,不规则细胞增多;高糖培养的视网膜色素上皮细胞诱导型一氧化氮合酶和3-硝基酪氨酸蛋白表达增加,活性氧产生明显增多.说明高浓度葡萄糖培养可造成人视网膜色素上皮细胞氧化损伤,使细胞形态发生变化,并导致细胞中3-硝基酪氨酸产生增多.     

高糖介导入牙周膜细胞凋亡中bcl-2、bax的作用及机制（英文）

背景：高糖环境下人牙周膜细胞会发生凋亡,其中bcl-2,bax是否启动？如何发挥作用？此方面尚未见有文献报道。目的：应用不同浓度葡萄糖影响人牙周膜细胞,观察细胞凋亡及bcl-2、bax基因表达的变化。方法：原代培养并鉴定人牙周膜细胞,取5-8代细胞用于实验。采用5.5 mmol/L葡萄糖（生理对照组）和25 mmol/L葡萄糖（高糖组）作用细胞24 h和48 h;以Hoechst 33258免疫荧光染色观察人牙周膜细胞凋亡;以Real-time PCR检测bcl-2、bax表达。结果与结论：25 mmol/L葡萄糖促进人牙周膜细胞凋亡,bcl-2、bax表达显著高于对照组（P〈0.05）;bcl-2/bax比值显著低于对照组（P〈0.05）。结果说明高糖可增加人牙周膜细胞凋亡,Bcl-2家族发挥了重要作用。     

干预糖尿病患者血管病变：二氯醋酸二异丙胺对内皮细胞的功能效应

目的：了解丙酮酸脱氢酶激活剂二氯醋酸二异丙胺对内皮细胞功能指标的影响.方法：将传代培养的人脐静脉内皮细胞接种至6孔板,培养48～72 h至90%融合.将每孔分别分组：对照组：葡萄糖浓度为5.5 mmol/L;高糖组：葡萄糖浓度为30 mmol/L;二氯醋酸二异丙胺＋高糖组：浓度为1&;#215;10^-5,1&;#215;10^-4,1&;#215;10^-3 mol/L的二氯醋酸二异丙胺,加高糖处理48 h.用2.5 g/L胰酶消化收集细胞;固定后充分混匀制成1&;#215;10^9 L-1细胞悬液;加RNA酶A37℃水浴45 min;加入碘化丙啶50g/L混匀,4℃避光放置60 min,尼龙网滤过,上流式细胞仪分析细胞DNA含量,计数10 000个细胞,以亚G1峰细胞为凋亡细胞,计算细胞凋亡率.以体外原代培养的人脐静脉内皮细胞为靶细胞观察二氯醋酸二异丙胺对高糖诱导的血管内皮细胞功能指标一氧化氮和可溶性细胞间黏附分子1及细胞凋亡的影响;用改进的DPN诱导分析法检测二氯醋酸二异丙胺对人脐静脉内皮细胞中丙酮酸脱氢酶活性的影响.结果：①高糖组细胞一氧化氮浓度[（590.77&;#177;56.00）μmol/L]明显低于对照组[（799.47&;#177;51.77）μmol/L,P＜0.01],可溶性细胞间黏附分子1水平明显高于对照组（P＜0.001）.二氯醋酸二异丙胺＋高糖组细胞一氧化氮浓度明显高于高糖组（P＜0.05～0.01）,可溶性细胞间黏附分子1水平明显低于高糖组（P＜0.01）.②不同浓度的二氯醋酸二异丙胺可呈浓度依赖性激活丙酮酸脱氢酶活性,高浓度组与中、低浓度二氯醋酸二异丙胺组相比,差异有显著性意义（P＜0.05）.结论：二氯醋酸二异丙胺可以通过对丙酮酸脱氢酶的激活来纠正内皮细胞功能紊乱.     

胰高糖素样肽1在血管再生中的作用及其机制研究

目的：探讨胰高糖素样肽1（GLP-1）对高糖培养的人脐静脉内皮细胞增殖的影响及其可能机制。方法人脐静脉内皮细胞分组培养,正常葡萄糖组（NG,葡萄糖浓度5.5 mmol/L）,高葡萄糖组（HG,葡萄糖浓度33 mmol/L）,高糖加GLP-1干预组（分为低剂量组,中剂量和高剂量组,浓度分别为1、10、20 nmol/L,分别记为C1、C2、C3组）,于培养24 h,48 h和72 h用MTT法检测细胞增殖情况,并用ELISA法检测培养基上清液中血管内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）的浓度。结果48 h后高糖组细胞增殖明显低于正常对照组,GLP-1干预后能明显促进细胞增殖,以中剂量最为明显（0.6±0.11 vs.0.47±0.09,P＜0.05）,72 h这种情况更为明显;高糖培养48 h细胞分泌VEGF明显减少[（101.72±6.82） ng/ml vs.（184.66±14.06 ng/ml）,P＜0.05],GLP-1干预后VEGF水平明显增加（P＜0.05）,尤其是中剂量组,72 h结果相似。结论 GLP-1能促进细胞分泌VEGF从而改善高糖导致的内皮细胞增殖能力下降。     

二甲双胍对糖脂中毒的大鼠胰岛β细胞胰岛素分泌功能的保护作用

目的：观察二甲双胍对慢性暴露于高糖和高游离脂肪酸的大鼠离体胰岛细胞胰岛素分泌功能的影响。方法：将大鼠离体胰岛细胞培养于5.5-16.7 mmol/L葡萄糖或5.5 mmol/L软脂酸中48 h,再加入不同浓度二甲双胍（0-5 mg/L）培养24 h。收集各组胰岛细胞,加入5.5-16.7 mmol/L葡萄糖刺激培养1 h。收集培养液,用放免法测定其基础及葡萄糖刺激的胰岛素分泌（GSIS）水平。结果：低糖组（5.5 mmol/L葡萄糖）用不同浓度二甲双胍（0-5 mg/L）处理后的β细胞基础及葡萄糖刺激的胰岛素分泌无显著性差异（P〉0.05）;高糖（16.7 mmol/L葡萄糖）及高脂（0.5 mmol/L棕榈酸）组β细胞基础胰岛素分泌较对照组明显增高（P〈0.01）,GSIS较对照组明显降低（P〈0.01）;用2.5-5 mg/L二甲双胍干预后,高糖及高脂组β细胞基础胰岛素分泌较未治疗组明显降低（P〈0.01）,GSIS较未治疗组明显增高（P〈0.01）。结论：低糖环境下,二甲双胍对β细胞胰岛素分泌功能无明显影响;慢性高糖及高脂可致β细胞胰岛素分泌功能受损;而2.5-5 mg/L二甲双胍能改善糖脂毒性所致β细胞胰岛素分泌功能异常。提示二甲双胍降糖效果除了其外周作用外,可能对糖脂中毒的β细胞具有直接保护作用。     

藏红花素对缺氧环境下Wistar大鼠视网膜Müller细胞活性和胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的 观察不同浓度藏红花素对缺氧条件下RMC活性和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响.方法 改良Reichenbach等方法原代培养Müller细胞,并采用GFAP和Vimentin染色鉴定RMC.RMC培养基中加入终浓度10 μmol/L、50 μmol/L和100 μmol/L藏红花素,于1~7 d计数细胞,于24 h和48 h台盼蓝染色测定细胞活性,对照组RMC培养基中未加入藏红花素.培养液中加入终浓度为200 μmol/L的CoCl2建立化学缺氧模型.实验分4组:缺氧组(H组)、藏红花素处理组(C组)、缺氧+藏红花素处理组(HC组)和正常对照组(NC组),其中C和HC组培养液中加入10 μmol/L藏红花素.处理24 h,台盼蓝染色检测细胞活性,采用Western blot法半定量检测GFAP的表达.结果 含10 μmol/L和50 μmol/L藏红花素的培养液中,细胞生长无抑制;100 μmol/L 藏红花素的培养液中细胞增生受到抑制,培养24 h和48 h RMC活性分别为(68±7)%、(59±9)%,与对照组相比,明显降低(t24h=3.723,P<0.05;t48h=4.103,P<0.05).在缺氧条件下,正常细胞和10 μmol/L 藏红花素的培养液中细胞活性受到明显抑制,藏红花素可减轻缺氧环境对细胞活性的抑制作用.在缺氧条件下,GFAP表达明显升高(t=2.945,P<0.05);藏红花素可部分抑制GFAP高表达(t=3.362,P<0.05).结论 缺氧能诱导体外培养视网膜Müller细胞死亡,适合浓度藏红花素可抑制缺氧诱导的视网膜Müller细胞死亡.