DEMONSTRATION OF RENIN GENE EXPRESSION IN NEPHROBLASTOMA BY IN SITU HYBRIDIZATION

Most patients with nephroblastoma have high levels of plasma renin and some are hypertensive. Blood pressure falls after removal of the affected kidney, suggesting that nephroblastoma is associated with renin production either by the tumour or by the kidney. In this study, direct evidence was sought of renin gene expression in nephroblastoma using in situ hybridization. Digoxigenin-labelled riboprobes and an immunoperoxidase technique were used to detect cells containing renin mRNA: this showed renin gene expression in 9 out of 12 cases. There were positive cells within metanephric blastema and in occasional neoplastic glomeruloid structures, confirming that in seven cases nephroblastoma tumour cells expressed the renin gene. However, renin gene expression was also demonstrated in perivascular cells of uncertain lineage in seven cases; in five cases there was evidence of renin gene expression in both tumour cells and perivascular cells. The latter finding raises the possibility that some of the cells expressing the renin gene could be stromal cells. It is concluded that nephroblastomas contain cells that express the renin gene and that some are tumour cells, while other perivascular cells may be stromal cells.     

人胚胎气管上皮几种粘蛋白表达的研究

目的 研究人胚胎气管上皮细胞分化过程中，粘蛋白ＭＵＣ１、ＭＵＣ２和ＭＵＣ５ａｃ的表达，以及ＭＵＣ５ａｃ ｍＮＲＡ的表达。方法 免疫组织化学及原位杂交技术。结果 胚胎气管上皮细胞中ＭＵＣ１号呈阴性表达，不同胎龄的胚胎气管上皮细胞ＭＵＣ２和ＭＵＣ５ａｃ均呈阳性表达。胚胎气管上皮的细胞核及胞浆中ＭＵＣ５ａｃ ｍＲＮＡ呈阳性表达。结论 胚胎气管上皮均能发生ＭＵＣ２和ＭＵＣ５ａｃ粘蛋白，而且ＭＵＣ５ａｃ蛋白     

IMMUNOCYTOCHEMICAL EXPRESSION OF THE 70 kD HEAT SHOCK PROTEIN IN ISCHAEMIC BOWEL DISEASE

Heat shock proteins (HSPs) are a family of polypeptides which are induced in response to diverse forms of cell injury including hyperthermia, anoxia, ethanol, heavy metals, and others, with a presumably protective function. Among several species of HSPs, the 70 kD protein (HSP70) is the most abundant and consistently induced in mammalian cells. Anti-HSP70 monoclonal antibody and a standard immunocytochemical method were used to study the expression of HSP70 in 28 surgical specimens of small and large intestines from patients with ischaemic bowel disease. Strong immunoreactivity was observed in viable, regenerating cells of both the crypt and surface epithelium within or adjacent to the necrotic foci in 86 per cent of the ischaemic bowel specimens. Staining was mostly cytoplasmic, but focally both cytoplasmic and nuclear. Smooth muscle cells of the muscularis mucosae in the ischaemic areas of some cases also showed immunoreactivity. On the other hand, HSP70 was not expressed in control specimens of small and large intestine or in colonic specimens of Crohn's disease, ulcerative colitis, and adenocarcinoma. These findings suggest a possible role of HSP70 in intestinal epithelial and smooth muscle cell response to ischaemic injury, especially in the recovery phase.     

大鼠心脏Ⅰ型胶原的免疫组织化学和原位杂交表达

目的探讨Ⅰ型胶原在正常大鼠心脏的分布和分泌来源。方法利用免疫组织化学和原位杂交技术显示大鼠心肌组织的Ⅰ型胶原表达。结果Ⅰ型胶原分布广泛,包裹大鼠心每一个心肌细胞,根据部位的不同,胶原网络的密疏程度有差异。纤维细胞、平滑肌细胞和内皮细胞均表达Ⅰ型胶原。结论Ⅰ型胶原是构成心肌胶原纤维网络的主要成分,其分泌来源具有多源性。     

人胚胎海马发育的形态学研究 Ⅳ SS能神经元的原位杂交法观察

本研究用原位分子杂交技术对24例不同胎龄的人胚胎海马中生长抑素（SS）编码的mRNA进行了检测，现察了SS杂交阳性细胞的发生、发育规律．观察结果表明：SS的原位杂交阳性细胞于胚胎16周开始出现，主要位于Ammon’s角、齿状回的多形层，也有一部分出现于锥体细胞层．分子层则未发现有SS杂交阳性细胞存在．SS阳性细胞的数量随胎龄增加而不断增多．其形态特点、数量变化和分布规律，都显示SS能神经元在结构上的完善与海马功能的成熟之间存在着密切关系．     

用非同位素原位杂交组化在光镜和电镜水平观察前阿黑皮素mRNA在垂体的分布

用地高辛标记反意前阿黑皮素(pro-opiomelanocortin,POMC)cRNA探针原位杂交组化在光镜和电镜水平观察了POMC mRNA在大鼠垂体的分布,并比较了碱性磷酸酶(AKP)显色系统和辣根过氧化酶(HRP)显色系统在光镜水平上的敏感性.结果:POMC mRNA广泛地分布于垂体的中间叶和前叶.中间叶全部细胞均为POMC mRNA阳性.前叶中除前叶的腹侧缘和前叶与中间叶交界处阳性细胞较少外,都有较多的POMC mRNA阳性细胞分布.AKP显色系统比HRP显色系统敏感.在电镜水平,POMC mRNA主要分布于粗面内质网,少数分泌颗粒可能呈阳性反应,胞核未见阳性反应沉淀.文内还就阳性分泌颗粒在调节细胞合成功能方面可能起的作用进行了讨论.     

诱导型一氧化氮合酶与血红素氧合酶在人肠易激综合征结肠中的表达

目的　研究诱导型一氧化氮合酶(iNOS)与血红素氧合酶 l(HO 1)在肠易激综合征(IBS)患者结肠中 的表达,探讨气体信使分子一氧化氮(NO)和一氧化碳(CO)在IBS发病机制中的可能作用。　方法　采用免疫组织 化学EnVision和SABC染色法,对符合罗马Ⅱ诊断标准的34例IBS患者肠镜活检标本分别检测结肠黏膜组织中 iNOS和HO 1的阳性细胞,并以16名健康者做对照。　结果　iNOS和HO 1主要表达在结肠黏膜上皮细胞,IBS患 者表达强于对照组(P<0.001),且HO 1和iNOS表达呈正相关(r=0.5744,P=0.0004)。　结论　iNOS和HO 1在 IBS患者结肠中的表达异常,表明CO和NO在IBS等肠动力性疾病的发病机制中可能起重要作用。     

Mel-1a,Mel-1b褪黑素受体在大鼠海马分布的原位杂交研究

Mel-1a,Mel-1b为分别从人大脑和视网膜克隆的两种褪黑素膜受体。随着褪黑素的各种重要生理作用的不断发现 ,对其受体的研究也日益广泛和深入。本文采用原位杂交技术研究了 Mel-1a,Mel-1b两种褪黑素膜受体 m RNA在海马中的表达和分布 ,结果表明此两种受体 m RNA在成年大鼠海马各区神经元中均有表达。由于褪黑素是通过细胞膜上与 G蛋白耦联的 Mel-1a,Mel-1b受体而发挥作用的 ,而海马又是与老化密切相关的脑区 ,提示褪黑素对海马的老化有调节作用     

利用原位杂交分析几种cyclin和CDK基因在人乳腺癌中的异常表达

目的 探讨细胞周期调控基因ｃｙｃｌｉｎ和ＣＤＫ的异常与乳腺癌发生的相关性。方法 采集２０例乳腺癌外科手术样品,用原位杂交技术分析了ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１,Ｄ３,Ｅ,ＣＤＫ２和ＣＤＫ４ｍＲＮＡ的表达。结果 在大多数乳腺癌样品中,这些基因有一种或几种出现高表达。     

人甲状腺促性腺激素释放激素及其受体的表达

目的　探讨人甲状腺中是否存在促性腺激素释放激素 (GnRH)及促性腺激素释放激素受体 (GnRH R)并细胞定位 ,试图从转录及翻译水平讨论人甲状腺可否合成GnRH及GnRH R ,为探讨GnRH可能影响甲状腺的功能提供形态学依据。　方法　采用免疫组织化学法和原位杂交技术。　结果　所测人正常甲状腺组织均呈较强的GnRH和GnRH R免疫反应阳性 ,甲状腺滤泡上皮细胞、滤泡旁细胞均为阳性细胞。免疫反应阳性物质主要分布在阳性细胞胞质内 ,胞核呈阴性。原位杂交结果同免疫组织化学染色基本一致 :甲状腺滤泡上皮细胞胞质和滤泡旁细胞胞质可检测到较强的GnRHmRNA及GnRH RmRNA阳性杂交信号。胞核均呈阴性 ,未检测到杂交信号。　结论　人甲状腺不仅表达GnRH和GnRH R ,而且可以自身合成GnRH和GnRH R。GnRH可能以自分泌的方式影响甲状腺的生理功能     

α-synuclein-pEGFP真核表达载体的构建及其在SH-SY5Y细胞中的表达

为了构建 α-synuclein-p EGFP真核表达载体 ,检测其在 SH-SY5 Y细胞内的表达 ,本研究应用下述方法 :PCR扩增 α-synuclein基因并消除终止密码子 ;PCR产物连入 p GEM T-easy载体 ,经测序确认无误后 ,亚克隆入 p EGFP-N1,构建α-synucle-in-p EGF P真核表达载体 ;Lipofect AMINE法转染 SH-SY5 Y细胞 ;荧光显微镜检测报告基因表达产物 EGFP,原位杂交和免疫荧光细胞化学法检测α-synuclein m RNA及其蛋白表达。结果显示 ,该载体转染 SH-SY5 Y细胞后 ,可在细胞内观察到报告基因和目的基因的表达产物。结论 :α-synuclein-p EGFP真核表达载体构建成功 ,并可在细胞内表达。本工作为今后动态观察研究α-synu-clein致 Parkinson病多巴胺能神经细胞损伤机制奠定基础     

原位杂交组织化学与免疫组织化学结合法的研究

介绍一种用原位杂交组织化学与免疫组织化学结合法在同一切片中显示生长抑素ｍＲＮＡ和相对应的生长抑素。同时还比较了六种不同固定液对原位杂交组织化学和原位杂交组织化学与免疫组织化学结合法的影响。结果表明Ｚａｍｂｏｎｉ氏固定液用于原位杂交组织化学与免疫组织化学结合法最佳，而４％多聚甲醛磷酸缓冲液用单纯原位杂交最佳。原位杂交组织化学与免疫组织化学结合法显示的下丘脑室周核生长抑素免疫反应阳性神经元均含有相应生     

HCMV感染标本24小时培养物的原位杂交检测方法

本文探讨了一项检测短期(24 h)培养标本的HCMV感染的原位杂交方法。HCMV核酸探针用HRP直接标记,经原位杂交后与DAB-H_2O_2反应显示紫褐色阳性信号,背景为NFR负染成浅粉红色。经探索,蛋白酶K 50～100μg/ml、NFR负染15 s可取得理想结果。临床上采集22份有异常妊娠史妇女及5份无自然流产史的健康妇女的尿液标本,平行作1天及7天培养,然后同时原位杂交的结果表明,仅1例标本7天检出可疑阳性而1天检出阴性,余检测结果全部吻合,检出阳性率无显著性差异。因此,24h培养标本原位杂交结果可靠,可作为检测HCMV感染的早期快速诊断新方法。     

大鼠坐骨神经损伤后背根节感觉神经元神经丝蛋白基因表达的变化

目的 探讨神经损伤再生过程中细胞骨架蛋白基因表达的调控机制。方法 用原位杂交组织化学技术观察了大刀坐骨神经夹伤后神经再生过程中,L4－6背根节感觉神经元内轻分子量（light,L）、中分子量（medium,M）和重分子量（heavy,H）神经丝蛋白亚基mRNA的表达变化。结果 光镜下,轴突损伤后背根节神经元内各神经丝亚基mRNA的杂交信号明显减弱,神经丝－L和神经丝－M mRNA的杂交信号位于神经元胞浆内,而在神经元胞浆和胞核内均可见神经丝－H mRNA的表达信号。结论 神经丝3个亚基基因表达的调控机制不同,神经丝基因表达的下调可能是神经元对轴突损伤的基本应答,而且在有效神经再生过程中发挥重要作用。     

肝胆管癌中bcl-2、bax基因表达和细胞凋亡的研究

目的　探索细胞凋亡及相关基因在体内肝胆管癌发生中所起的作用。　方法　用mRNA原位杂交技术和免疫组织化学方法 ,检测了肝胆管癌中bcl 2和bax基因表达 ;利用TUNEL法检测其细胞凋亡 ;　结果　肿瘤中bcl 2表达增强 ,癌旁组织中bax表达增强 ,癌旁组织中凋亡细胞增加 ;　结论　bcl 2基因激活后 ,抑制bax的作用及基因表达 ,可能使细胞的增殖加快 ,肿瘤发生 ;而bax的表达可能引起癌旁组织的细胞凋亡加剧     

胚胎不同器官的细胞连接蛋白基因表达研究

目的 探索胚胎不同分化阶段、不同器官中细胞连接蛋白基因的表达规律及其与细胞分化的关系。方法 采用Ｃｏｎｎｅｘｉｎ系列基因探针,通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法,对不同胎龄的不同胚胎器官中Ｃｘ基因表达状态进行了研究。结果 （１）胚肿期肝、胃、肺、肾等器官中Ｃｘ３１、Ｃｘ４６、Ｃｘ３１．１不表达。（２）胚胎不同发育阶段连接蛋白基因呈不同表达状态。如Ｃｘ２６、Ｃｘ４３在３个月胎龄的肝脏中高度表达、Ｃｘ３２从第     

THE ROLE OF ENDOTHELIAL CELL DYSFUNCTION IN THE CARDIOVASCULAR MORTALITY OF RA

Rheumatoid patients present clinically with chronic inflammatory immune arthritis but die of the same cardiovascular (CVS) disease as the normal population. Recent studies emphasize the increased frequency and earlier development of CVS involvement in RA. The mechanisms of this accelerated atherosclerosis are the subject of active research. The hypothesis that rheumatoid vasculitis is a major factor has been pursued through studies in primary systemic vasculitis. These reveal diffuse endothelial dysfunction occurring across a spectrum of vasculitis and involving more than one vascular bed. This may relate to cytokines such as TNFα that are both prominent in rheumatoid inflammation and important in the upregulation of endothelium in innate immune responses. Endothelial injury or dysfunction is widely accepted as the initial factor in atheroma. Its occurrence in vasculitis leads us to propose a model for RA where this dysfunction is the essential first step on which other factors, ranging from adverse lipid profiles to specific T-cell subsets, may build accelerated atherogenesis related to the rheumatoid inflammation.     

ENPP1基因在人卵巢的定位表达及其与多囊卵巢综合征的关系

目的胰岛素抵抗及其伴随的高胰岛素血症是多囊卵巢综合征(PCOS)重要的病理生理改变,核苷酸内焦磷酸酶/磷酸二酯酶1(ENPP1)表达异常与胰岛素抵抗有关,本研究拟了解ENPP1基因在卵巢颗粒细胞中的表达及其与PCOS的关系,为进一步研究ENPP1在卵巢中的生理功能及PCOS的发病机制打下基础。方法收集PCOS患者(PCOS组)12例,以及排卵功能正常的单纯输卵管因素不育及男性不育的正常体重妇女(非PCOS组)22例患者的卵巢颗粒细胞。利用mRNA RT-PCR、原位杂交和实时荧光定量PCR的方法检测ENPP1在育龄期妇女及PCOS妇女颗粒细胞中的表达。结果RT-PCR的方法及原位杂交结果均显示,ENPP1在颗粒细胞胞浆中表达。ENPP1在PCOS组的2-ΔCt值为1.67±0.89,高于非PCOS组的2-ΔCt值0.94±0.76,两组间差异有统计学意义(P=0.017)。结论ENPP1在卵巢颗粒细胞中的表达差异提示,ENPP1参与了颗粒细胞的生理功能及卵巢中PCOS发病的病理机制。     

8-Br-cAMP对人视网膜母细胞瘤HXO-Rb44细胞抑癌基因表达的效应

目的 探讨８－Ｂr－CＡＭＰ对人视网膜母细胞瘤之ＨＸＯ－Ｒb４４细胞抑癌基因表达的 效庆及其对细胞生长的影响。方法 应用原位杂交、ＲＮＡ斑点印迹检测Ｐ１６＾ＩＮＫ４mＲＮＡ、p２１＾ＷＡＦ１mＲＮＡ、wp５３mＲＮＡ、mp５３mＲＮＡ和ＲｂｍＲＮＡ,应用免疫组织和化学和蛋白质斑点印迹技术检测ＰＣＮＡ－ＩＲ、p２１＾ＷＡＦ１－ＩＲ、 ｐ１６－ＩＲ、ｐＲｂ－ＩＲ、ｃｄｋ２、ＩＲ和ｃｄｋ４－ＩＲ。结果 在人ＨＸＯ－Ｒ