人转化生长因子β1基因转染人牙龈成纤维细胞及其稳定表达

目的 :探讨人转化生长因子 - β1(hTGF - β1)基因转染人牙龈成纤维细胞 (GF)的表达能力。 方法 :体外培养人GF ,传代培养后以阳离子脂质体 (Lipofectamine) :pcDNA3-hTGF - β1为 3μL∶1μg的比例转染。通过免疫组织化学染色的方法及图像分析检测hTGF - β1表达水平 ;利用水貂肺上皮细胞生长抑制法检测TGF - β1的生物学活性。结果 :转染后的GF呈强阳性表达 ,并持续 4周以上。图像分析显示转染细胞hTGF - β1表达显著增强 ,与对照组比较差异显著 (P <0 .0 1)。转染后细胞上清可有效的抑制水貂肺上皮细胞的生长。结论 :hTGF - β1基因转染可使牙龈成纤维细胞有效而稳定的表达活性hTGF - β1而产生生物效应     

人转化生长因子-β1基因转染对人牙龈成纤维细胞成骨特性的影响

目的观察并评价基因转染后牙龈成纤维细胞（GF）表达外源目的基因人转化生长因子-β1（hTGF-β1）对其分化、成骨特性的影响。方法采用碱性磷酸酶（ALP）活性检测方法检测转染对GF ALP活性的影响,免疫组化染色及图像分析评价基因转染后骨钙素（OC）、骨桥素（OPN）、骨涎蛋白（BSP）、骨结合素（ON）含量的变化,体外矿化结节形成实验检测转染后细胞成骨特性的变化。结果转染后GF的ALP活性较未转染组有显著的提高（P<0.05）,并且与牙周膜成纤维细胞（PDLCs）的ALP活性接近（P>0.05）。OC含量检测显示转染后GF的OC含量与未转染组和PDLCs组相比,其差异均无统计学意义（P>0.05）。免疫组化染色后,转染组GF所表达的OPN、ON、BSP含量均高于未转染组GF（P<0.05）,而与PDLCs间差异无统计学意义（P>0.05）。第21天和第24天时,在矿化液作用下PDLCs及转染GF在倒置显微镜下可见致密的结节形成,von Kossa染色可见紫色的矿化结节形成。未转染GF未见结节形成。而转染GF在未经矿化液诱导情况下,虽出现显著的细胞聚集,但von Kossa染色未见紫色矿化结节形成。结论转染pcDNA3-hTGF-β1后的GF可表达一定的成骨细胞特性,但这种成骨特性有限。     

转化生长因子-β1和碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的观察转化生长因子．晶和碱性成纤维细胞生长因子单独或联合应用对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响。方法采用组织块培养技术进行人牙周膜成纤维细胞的体外培养，对照组采用含小牛血清的DMEM培养液，实验组分别在培养液中加入不同浓度的转化生长因子-β1或碱性成纤维细胞生长因子或两者联合加入，通过四唑盐比色法观察细胞增殖情况。结果转化生长因子-β1或碱性成纤维细胞生长因子单独作用后，人牙周膜成纤维细胞较对照组有显著的增殖，而两者联合作用后的增殖较各自单独作用时明显（P〈0．05）。结论转化生长因子-β1和碱性成纤维细胞生长因子两者联合具有促进人牙周膜成纤维细胞增殖的作用。     

水蛭素对牙龈成纤维细胞碱性成纤维细胞生长因子和转化生长因子-β1表达的影响

目的 观察水蛭素对人牙龈成纤维细胞（HGFs）碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）及转化生长因子-β1（TGF-β1）表达变化的规律,探讨水蛭素影响牙龈改建的可能作用机制。方法 体外培养并鉴定HGFs,利用不同浓度的水蛭素分别作用于正常（对照组）和受长期机械外力作用后增生的HGFs（实验组）,通过实时定量聚合酶链反应法和免疫细胞化学法检测TGF-β1及bFGF的表达。结果 未加入水蛭素时,受长期机械外力作用后,实验组促进HGFs增殖胶原合成的TGF-β1表达升高,而抑制胶原合成的bFGF表达降低（P<0.05）。加入水蛭素干预增生的HGFs后,可正向调节bFGF表达,而负向调节TGF-β1的表达（P<0.05）。结论 外力作用干扰了HGFs胶原合成与降解之间的平衡,水蛭素可能通过调节这一平衡而促进牙龈改建过程。     

人血小板源性生长因子-B基因转染犬牙龈成纤维细胞的瞬时表达检测

目的 检测携带人血小板源性生长因子-B(hPDGF-B)基因的真核表达质粒在Beagle犬牙龈成纤维细胞内的表达.方法 扩增和鉴定携带hPDGF-B基因的质粒EX-A0380-M03,脂质体介导的方法转染Bealge犬牙龈成纤维细胞,RT-PCR、免疫细胞化学、ELISA以及Western blot检测hPDGF-BB...     

转化生长因子-β_1和碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响

目的观察转化生长因子-β_1和碱性成纤维细胞生长因子单独或联合应用对人牙周膜成纤维细胞增殖的影响。方法采用组织块培养技术进行人牙周膜成纤维细胞的体外培养,对照组采用含小牛血清的DMEM培养液,实验组分别在培养液中加入不同浓度的转化生长因子-β_1或碱性成纤维细胞生长因子或两者联合加入,通过四唑盐比色法观察细胞增殖情况。结果转化生长因子-β_1或碱性成纤维细胞生长因子单独作用后,人牙周膜成纤维细胞较对照组有显著的增殖,而两者联合作用后的增殖较各自单独作用时明显(P<0.05)。结论转化生长因子-β_1和碱性成纤维细胞生长因子两者联合具有促进人牙周膜成纤维细胞增殖的作用。     

hBMP2基因转染对人牙龈成纤维细胞生物学特性的影响

目的分析hBMP2基因转染人牙龈成纤维细胞的生物学特性.方法用脂质体转染法将hBMP2基因转入人牙龈成纤维细胞内,经G418筛选后,获得阳性克隆.以原位杂交和免疫组化对转染细胞进行鉴定;进一步观察细胞形态、生长特性、碱性磷酸酶活性、骨钙素合成以及体外形成矿化结节的能力.结果hBMP2基因转染后,人牙龈成纤维细胞有hBMP2 mRNA的转录和蛋白表达;部分细胞由原来的长梭形转化为多角形,碱性磷酸酶活性和骨钙素合成均明显高于对照组(两组均P＜0.01);在矿化液作用下,能形成体外矿化结节.但细胞的增殖特性无明显变化.结论外源性hBMP2基因能够在人牙龈成纤维细胞表达,并促进其向成骨细胞方向转化,而对细胞的生长特性无明显影响.     

牙龈成纤维细胞的肝细胞生长因子分泌方式的实验观察

目的：观察牙龈成纤维细胞的肝细胞生长因子（ＨＧＦ／ＳＦ）的分泌方式。方法：培养牙龈成纤维细胞;制作该细胞胶原网架（ＦＰＣＬｓ）,将ＦＰＣＬｓ分组,从ＦＰＣＬ形成后的０～７ｄ,每天从３个不同角度测量ＦＰＣＬ的直径缩小值。结果：不含血清培养液（ＳＦＭ）组与ＳＦＭ＋ｒＨＧＦ组ＦＰＣＬ的收缩变化都很小,两组间无差异（Ｐ〉０．０５）;而含血清培养液（ＳＣＭ）组的收缩变化非常大,与其它两组间具有极显著差异（Ｐ     

白细胞介素－1β、转化生长因子－β对人牙周膜成纤维细胞DNA合成的影响

目的：观察白细胞介素－１β（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１β，ＩＬ－１β）和转化生长因子－β（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ－β，ＴＧＦ－β）单独作用、组合后对人牙周膜成纤维细胞（ｈｕｍａｎｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌｌｉｇａｍｅｎｔｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ，ＨＰＬＦ）的ＤＮＡ合成量的影响。方法：用３Ｈ胸腺嘧啶脱氧核苷细胞内掺入法。结果：ＤＮＡ合成量显著增多。浓度为０．０１ｎｇ／ｍｌ的ＴＧＦ－β与浓度为１０ｕ／ｍｌ的ＩＬ－１β组合后对ＨＰＬＦ的ＤＮＡ合成量与单纯ＩＬ－１β组间无显著差异（Ｐ＞０．０５），而０．１ｎｇ／ｍｌ、１．０ｎｇ／ｍｌ的ＴＧＦ－β与三种浓度ＩＬ－１β组合后，ＨＰＬＦ的ＤＮＡ合成量显著高于单纯的ＩＬ－１β组。结论：ＩＬ－１β、ＴＧＦ－β对ＨＰＬＦ的ＤＮＡ合成有促进作用，这两种细胞因子组合并非各个细胞因子作用的简单相加     

白细胞介素—1β,转化生长因子—β对人牙周膜成纤维细胞D…

观察白细胞介素－１β和转化生长因子－β单儿作用、组合后对人牙周膜成纤维细胞的ＤＮＡ合成量的影响。用＾３Ｈ胸腺嘧啶脱氧核苷细胞内掺入法。结果ＤＮＡ合成量显著增多。     

牙本质基质蛋白1基因转染猪成纤维细胞的实验研究

目的评价牙本质基质蛋白1（dental matrix protein-1，DMP1）转基因修饰猪口腔黏膜成纤维细胞（porcine oral mucosa fibroblasts，POMF）后，对POMF生物学特性及DMP1表达的影响。方法构建pEGFP-DMP1绿色荧光融合蛋白真核表达载体，脂质体介导转染POMF，同时转染猪骨髓间质干细胞（mesenehymal stem cells，MSC）作为对照。检测转染后细胞的DMP1、釉鞘蛋白、牙本质涎蛋白（dentin sialoprotein，DSP）基因表达以及DMP1、DSP蛋白的表达情况，同时检测转染细胞矿化诱导后钙盐染色及转染细胞三维立体培养钙结节的形成情况。结果成功构建了DMP1真核表达载体pEGFP-DMP1，转基因后的POMF及MSC均可见有DMP1、釉鞘蛋白、DSP基因表达及DMP1、DSP蛋白表达阳性。DMP1转染POMF及MSC矿化诱导后钙盐染色，以及DMP1转染细胞三维立体培养石蜡切片HE染色，其矿化结节形成率均高于未转染细胞。结论POMF转基因表达DMP1能增强其矿化能力，诱导牙齿发育相关基因釉鞘蛋白及DSP的表达。     

压力作用时间对人牙周膜成纤维细胞合成TGF-β1的影响

目的:探讨压力作用不同时间对人牙周膜成纤维细胞表达TGF-β1的影响.方法:本实验采用细胞加载装置,对人牙周膜成纤维细胞施加1.0MPa的压力,分别持续1Omin、30min、50min、通过酶联免疫吸附实验,分别检测细胞受力后6h、12h、18h、24h时TGF-β1的含量.结果:加载1Omin组在细胞受力后的各个时段TGF-β1含量与对照组相比无显著性差异(P>0.05).加载30min组(0.51±0.06)和加载50min组(0.46±0.06)TGF-β1含量在细胞受力后的第12h同对照组(0.78±0.08)相比明显降低(P<0.05).结论:在一定加载时间内,人牙周膜成纤维细胞合成TGF-β1量随着压力作用时间的延长而有所降低.     

引导组织再生治疗术及碱性成纤维细胞生长因子促进牙周组织再生的实验研究

目的 了解引导组织再生治疗术(GTR)及碱性成纤维细胞生长因子(b-FGF)是否能够促进犬Ⅱ度根分叉病变牙周组织的再生。方法 将六只杂种犬的下颌双侧第二、三、四前磨牙制备慢性Ⅱ度根分叉病变模型后。随机分成两组，每组三只动物。每组中一只动物一侧进行GTR治疗，另一侧只进行翻瓣术治疗；另一只双侧都进行GTR b-FGF治疗；剩下的一只一侧进行GTR治疗，另一侧进行GTR b-FGF治疗。分别于术后第6、8周进行形态学和组织学观察。结果与翻瓣术组对比，GTR组和GTR b-FGF组都有明显的牙周组织再生；而GTR组和GTR b-FGF组之间牙周组织再生的量没有明显的差别。结论 GTR能够促进犬Ⅱ度根分叉病变牙周组织的再生，但单纯应用喷洒法使用b-FGF于牙周组织再生术中难以发挥其应有的疗效。     

单独或联合应用酸性成纤维细胞生长因子与转化生长因子对猪牙乳头细胞增殖的影响

目的研究酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)和转化生长因子(TGF)β1单独或联合应用后对猪牙乳头细胞(pDPCs)增殖的影响。方法通过体外细胞培养技术,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测aFGF、TGFβ1不同浓度、不同时间单独及联合应用后对pDPCs增殖的影响,所得数据用单因素方差进行分析。结果aFGF在5~100ng/ml和8d范围内能促进pDPCs增殖,最强效应浓度为10ng/ml和25ng/ml,最强效应时间为8d;TGFβ1在5~50ng/ml和8d范围内能抑制pDPCs增殖,其中以5ng/ml和10ng/ml抑制作用较弱;以aFGF最强效应浓度与TGFβ1较弱抑制浓度交互联合后对pDPCs有显著的促进增殖作用,其中以aFGF25ng/ml+TGFβ110ng/ml的效果最明显。结论在一定的浓度范围内,aFGF促进pDPCs增殖,TGFβ1抑制pDPCs增殖,两者联合可以促进pDPCs增殖。     

热休克蛋白在白细胞介素-1β诱导人牙龈成纤维细胞损伤中的表达

目的：观察热休克蛋白（HSP）27、70和90在白细胞介素（IL）-1β诱导的人牙龈成纤维细胞（HGF）损伤过程中的表达。方法???原代培养人HGF,以蛋白质印迹技术检测不同质量浓度的IL-1β诱导后HSP27、HSP70、HSP90在HGF中的表达,运用细胞划痕实验观察HGF的体外迁移能力变化。结果???经IL-1β诱导后,HGF中HSP70和HSP90的表达量无明显变化,HSP27的表达量明显上调并随IL-1β诱导质量浓度的增加而增加。同时细胞划痕实验显示,随着HSP27表达量的增加,HGF的迁移能力明显降低。结论HSP在经IL-1β诱导的人HGF损伤过程中的表达情况各不相同,其中HSP27在IL-1β诱导的HGF炎症损伤中的表达升高,其表达量与HGF体外愈合能力呈负相关关系。HSP27在上皮炎症损伤中起着关键性的作用,但具体作用机制还有待进一步的研究。     

转化生长因子β对人牙周膜成纤维细胞的生物学作用

目的 研究转化生长因子β（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ－β,ＴＧＦ－β）对人牙周膜成纤维细胞（ｈｕｍａｎ ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ ｌｉｇａｍｅｎｔ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ,ＨＰＤＬＦｓ）的生物学作用。方法 原代培养ＨＰＤＬＦｓ,并观察ＴＧＦ－β对ＨＰＤＬＦｓ的增殖、碱性磷酸酶（ａｌｋａｌｉｎｅ ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ,ＡＬＰ）活性、骨钙素（ｏｓｔｅｏｃａｌｃｉｎ,ＯＣ）合成及矿化结节形成的作用。结果 ０．００５０～０．１０００ｍｇ／ＬＴＧＦ－β可明显刺激ＨＰＤＬＦｓ的增殖,０．００５０ｍｇ／ＬＴＧＦ－β可显著提高ＨＰＤＬＦｓ的ＡＬＰ活性,０．０００５～０．１０００ｍｇ／ＬＴＧＦ－β对ＨＰＤＬＦｓ合成ＯＣ和矿化结节的形成无明显影响。结论 ＴＧＦ－β对ＨＰＤＬＦｓ的作用呈剂量依赖性。ＴＧＦ－     

机械压力对人牙周膜成纤维细胞TGF-β1蛋白表达的影响

目的：探明机械压力与人牙周膜成纤维细胞转化生长因子β1（transforming growth factor beta-1,TGF-β1）蛋白表达的关系。方法：本实验采用细胞加载装置,对人牙周膜成纤维细胞施加0kPa、250kPa、500kPa、1000kPa的压力,通过酶联免疫吸附实验,分别检测细胞受力后6h、12h、18h、24h时TGF-β1的含量。结果：加载250kPa组、500kPa组在细胞受力后各个时段TGF-β1含量没有变化;1000kPa组在细胞受力后的第12h,TGF-β1含量显著降低。结论：人牙周膜成纤维细胞合成TGF-β1受到机械压力的调控;在一定载荷作用下,TGF-β1的含量随着压力的增大而有所降低。     

IL-1β对人牙龈成纤维细胞在不同钛板表面表达炎性因子的影响

目的 :探讨白介素1β对不同钛板表面牙龈成纤维细胞分泌炎性因子的影响。方法 :将牙龈成纤维细胞接种在3种不同表面结构组分的钛板上,在白介素1β的刺激下,在3、6、24 h分别用聚合酶链反应(PCR)检测炎性因子白介素6及白介素8的表达量。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:在白介素1β的诱导下,牙龈成纤维细胞对炎性因子(IL-6、IL-8)的表达量明显增加;纯钛与钛合金的钛板比表面氮化处理的钛板产生炎性因子(IL-6、IL-8)的表达量较少。结论 :白介素1β能刺激炎性因子的高表达;纯钛和钛合金IL-6、IL-8表达量较少。采用纯钛和钛合金种植体,可减少种植体周围炎的发生率,提高种植成功率。     

碱性成纤维细胞生长因子对牙周膜成纤维细胞整合素β1亚单位mRNA表达的影响

目的 研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对人牙周膜成纤维细胞整合素β1亚单位mRNA表达的影响,探讨bFGF在牙周组织再生中的意义.方法 体外培养人牙周膜成纤维细胞,分别用质量浓度0.1、1.0、10.0ng·mL-1的bFGF刺激细胞,培养24、48、72 h,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测牙周膜成纤维细胞内整合素β1亚单位mRNA表达的变化.结果 bFGF可促进入牙周膜成纤维细胞内整合素β1亚单位mRNA的合成,在培养24、48、72 h时,1.0 ng·mL-1组整合素β1亚单位表达均明显高于对照组;培养72 h时各实验组整合素β1亚单位表达均明显高于培养24、48 h时..结论 bFGF通过提高整合素β1亚单位mRNA的表达,促进牙周膜成纤维细胞的黏附,在牙周组织修复再生中起作用.     

转化生长因子-β1对口腔癌相关成纤维细胞α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的研究外源性转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)对口腔癌相关成纤维细胞(carcinoma-associated fibroblasts,CAFs)中α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle-actin,α-SMA)表达的影响,探讨TGF-β1对CAFs生物学性能的影响。方法以口腔正常成纤维细胞(normal fibroblasts,NFs)和未经处理的CAFs为对照组,采用蛋白印迹法观察10 ng/mL的TGF-β1溶液在作用12、24 h后对CAFs细胞中α-SMA表达的影响。结果未经处理的NFs组中未见明显α-SMA的表达,蛋白相对表达量为0.005;未经处理的CAFs组中可见明显α-SMA表达,蛋白相对表达量为0.355;10 ng/mL TGF-β1溶液刺激CAFs细胞12 h后,α-SMA表达较未刺激CAFs明显升高,蛋白相对表达量为0.900(P<0.001);10 ng/mL TGF-β1溶液刺激CAFs细胞24 h后,α-SMA表达持续升高,蛋白相对表达量为1.905(P<0.001)。与NFs组和CAFs组相比,10 ng/mL的TGF-β1溶液在作用12 h和24 h时能够明显上调CAFs细胞中α-SMA的表达(P<0.05),且作用24 h时更明显。结论 TGF-β1能够明显上调CAFs中α-SMA的表达,对CAFs的生物学性能具有重要影响。