高氧诱导新生鼠急性肺损伤模型的制备及其机制探讨

目的 建立新生儿高氧急性肺损伤的动物模型，并探讨其发病机制。方法采用新生Sprague—Dawley（SD）大鼠持续暴露于90％-95％的常压氧气造成高氧急性肺损伤。实验3、7d时分别检测高氧模型组和对照组支气管肺泡灌洗液（BALF）中丙二醛（MDA）、超氧化物岐化酶（SOD）、肿瘤坏死因子-α（TNF—α），测定肺组织核因子-κB（NF—κB）染色强度，并观察肺组织病理表现。结果 与对照组比，高氧组3d时BALF中MDA、TNF-α含量升高（t分别=7．07、6．45，P均〈0．05），SOD活性下降（t=4．56，P〈0．05），肺组织NF—κB活性上升（t=50．08，P〈0．05），肺组织见小血管扩张、充血和肺泡内少量出血及以中性粒细胞、巨噬细胞为主的炎性细胞浸润；7d时，高氧组BALF中MDA、TNF-α含量进一步升高（t分别=9．70、7．20，P均〈0．05），SOD活性进一步下降（t=7．15，P〈0．05），NF—κB染色强度进一步升高（t=98．05，P〈0．05），肺组织充血、水肿，间质内浸润的中性粒细胞、巨噬细胞等增多，肺泡间隔轻度增宽，肺组织结构紊乱。结论新生鼠持续暴露于高浓度氧气可制备新生儿高氧急性肺损伤动物模型。高浓度氧致脂质过氧化，抗氧化酶系统活性降低，NF—κB过度活化，TNF-α过度释放，氧化／抗氧化系统失衡和过度炎症反应是肺损伤的重要发病机理。     

己酮可可碱对急性肺损伤鼠肺内磷脂酶A2的影响

目的研究己酮可可碱（PTX）对于内毒素性急性肺损伤（ALI）鼠肺磷脂酶A2（PLA2）和表面活性物质（主要成分为磷脂酰胆碱PC和磷脂酰乙醇胺PE）的影响。方法健康鼠分4组，静脉注射内毒素建立急性肺损伤的模型，应用FIX治疗后，检测支气管肺泡灌洗液（BALF）和肺组织内PLA2的活性和PC、PE含量。结果内毒素诱导的鼠ALI中，动物BALF和肺组织内PLA的活性均明显升高，PC下降，PE增加（P〈0．05）。而PTX的使用均抑制了上述各变化（P〈0．05），并明显改善肺组织病理变化。结论FIX通过抑制ALI鼠肺PLA2的活性，提升肺表面活性物质的含量，而抑制了ALI的发生与发展，对ALI有一定的治疗作用。     

肺复张手法对急性肺损伤大鼠肺泡上皮细胞屏障功能的影响

目的 观察肺复张手法对急性肺损伤（ALI）大鼠肺泡上皮细胞屏障功能的影响。方法雄性清洁级SD大鼠48只，静脉注射脂多糖（LPS）复制ALI模型，随机分为对照组、ALI模型组（ALI组）、小潮气量（VT）通气组（LV组）和肺复张联合小VT通气组（SI组）。采用控制性肺膨胀（SI）实施肺复张手法。机械通气4h后，观察肺组织病理学改变；采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）检测肺泡上皮细胞凋亡情况；用重力法测定血管外肺水（EVLW）含量；用单核素示踪技术测定肺泡上皮细胞通透性改变；用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测肺组织肺泡表面活性蛋白-C（SP—C）mRNA表达；用酶联免疫吸附法（ELISA）检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素-6（IL-6）和IL-10浓度。结果 光镜下，SI组肺组织损伤程度轻于ALI组和LV组。LV组凋亡肺泡上皮细胞散在分布，SI组凋亡上皮细胞明显减少。与对照组相比，ALI组、LV组及SI组肺损伤评分和EVLW均显著升高；与ALI组比较，LV组和SI组肺损伤评分显著降低，SI组肺损伤评分及EVLW显著低于LV组（P均〈0．05）。与对照组相比，ALI组、LV组及SI组肺组织SP—C mRNA表达均显著降低，而SI组肺组织SP—C mRNA表达显著高于LV组（P〈0．05），但与ALI组比较差异无显著性。ALI组、LV组和SI组BALF中IL-6和IL-10浓度均显著高于对照组（P均〈0．05），SI组IL-6浓度显著低于LV组（P〈0．05）。各组肺泡上皮细胞通透性间比较差异均无显著性。结论 肺复张手法可以减轻ALI肺组织病理损伤，增加肺泡上皮细胞SP—C mRNA的合成，下调肺部炎症反应，改善肺泡上皮细胞屏障功能。     

地塞米松对高氧肺损伤大鼠肺组织基质金属蛋白酶及其组织抑制剂表达的影响

目的 观察地塞米松对高氧暴露大鼠肺组织中基质金属蛋白酶(MMPs)及其组织抑制剂(TIMPs)表达的影响,探讨地塞米松治疗高氧肺损伤的作用机制。方法 2周龄Wistar大鼠32只,随机分为空气组和高氧组(各16只)。高氧暴露7 d后,取两组大鼠各8只检测支气管肺泡灌洗液(BALF)蛋白含量和肺湿/干重比(W/D),并观察肺组织病理学改变。余16只大鼠行肺组织培养,空气组8只作为空气对照组,高氧组8只各设高氧对照组,高氧 地塞米松1×10-8、1×10-6和1×10-4mol/L组,培养24 h后用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织中MMP-2、MMP-9、TIMP-1、TIMP-2 mRNA的表达。结果①与空气组相比,高氧组肺组织出现水肿、出血、炎性细胞浸润;BALF中蛋白含量、W/D明显增高。②高氧对照组MMPs、TIMPs mRNA表达和MMP-2/TIMP-2、MMP-9/TIMP-1比值较空气对照组明显增高。③地塞米松能剂量依赖性下调MMP-2、MMP-9 mRNA表达;对TIMP-1、TIMP-2 mRNA表达有一定程度的抑制效应;随地塞米松浓度的增加,MMP-2/TIMP-2、MMP-9/TIMP-1比值亦逐渐降低。结论 地塞米松下调MMPs mRNA表达,调节MMPs/TIMPs之间的失衡,可能是其减轻高氧肺损伤的机制之一。     

β受体激动剂对急性肺损伤大鼠肺表面活性物质含量的影响

目的　探讨肺表面活性物质 (PS)系统在急性油酸 (OA)性肺损伤时变化的作用机制及 β受体激动剂的干预作用。方法　 5 4只SD大鼠随机分成 3组 (每组 18只 ) ,即油酸致急性肺损伤组 (OA组 )、异丙肾上腺素治疗组 (ISO组 )和生理盐水对照组 (NS组 )。观察 1、2和 4h(每个时间点均 6只 ) ,测定动脉血氧分压 (PaO2 )、二氧化碳分压 (PaCO2 )、pH值和血清肺表面活性蛋白A(SP -A)浓度。右肺灌洗后 ,测灌洗液 (BALF)中总蛋白 (TP)、总磷脂 (TPL)、饱和磷脂酰胆碱 (DSPC)和SP -A浓度 ;测左肺上叶湿 /干重比值 (W/D) ,左肺下叶行病理检查。结果　与NS组比较 ,OA组各时间点BALF中TPL、DSPC/TPL和SP-A明显减少 (P <0 0 1) ,而W/D、TP及血清SP -A显著升高 (P <0 0 5或P <0 0 1) ,且OA组各时间点血清SP -A与同组BALF中SP -A呈负相关 ;ISO组BALF中TPL、DSPC/TPL和SP -A较OA组相同时间点明显上升 ,而W /D、TP及血清SP -A显著降低 (P <0 0 5或P <0 0 1)。结论　PS失活是急性油酸性肺损伤过程中的重要内在因素 ,β受体激动剂在一定程度上能减轻肺损伤的发生与发展。     

高氧致新生大鼠肺损伤中氧化应激与基质金属蛋白酶的关系

目的探讨氧化应激和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）／基质金属蛋白酶抑制物-1（TIMP-1）在高氧肺损伤新生大鼠的肺组织中动态变化以及两者的相互关系。方法将足月新生大鼠在出生后，分别持续吸人90％～95％高氧或空气，于1、3、7、14、21d取肺组织进行HE染色，应用分光光度计比色法检测肺组织丙二醛（MDA）含量、免疫组化技术检测MMP-9和TIMP-1动态表达。结果病理观察高氧3d时出现炎症反应，7d时出现肺泡发育阻滞，最终纤维化；高氧3、7、14d后MDA含量高于空气组（P〈0．05，P〈0．01，P〈0．05）；MMP-9表达主要在上皮细胞胞浆，高氧3d时较空气组增强（P〈0．05）；TIMP-1表达主要在上皮细胞、内皮细胞和肺泡巨噬细胞胞浆，3d后各时间点的表达均高于空气组（P〈0．05，P〈0．05，P〈0．01，P〈0．01）；MDA含量与MMP-9、TIMP-1蛋白表达呈正相关（P〈0．05，P〈0．01）。结论高氧暴露后可能通过氧化应激上调MMP-9和TIMP-1表达引起基膜的破坏，从而导致毛细血管通透性的增加和以后呼吸道重塑的发生。     

基质金属蛋白酶-9和肿瘤坏死因子α在大鼠光气吸入性肺损伤中的表达及意义

目的：探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）在大鼠光气吸入性肺损伤中的表达及意义。方法：SPF级SD大鼠（180~220g）50只,随机分为空气对照组和光气暴露组。建立大鼠光气吸入性肺损伤动物模型,并分别于光气染毒后2、46、、8h采用实时定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法测定MMP-9mRNA在肺组织中的表达含量,酶联免疫吸附试验（ELISA）法测定支气管肺泡灌洗液（BALF）中的TNF-α含量,同时对肺湿/干质量比,支气管肺泡灌洗液（BALF）中蛋白含量、中性粒细胞数以及肺组织病理学改变进行动态监测和对比分析。结果：与空气对照组相比,光气暴露组肺组织出现水肿、出血、炎性细胞浸润,随时间延长进一步加重。光气暴露组肺湿/干质量比值,BALF中蛋白含量、TNF-α含量、中性粒细胞计数均明显高于空气组（P〈0.05）;光气暴露各组MMP-9mRNA表达水平和BALF中MMP-9的表达明显高于空气对照组,随时间延长肺水肿加重（P〈0.01）。结论：基质金属蛋白酶的过度激活和表达及其与炎症因子相互影响在光气肺损伤过程中发挥重要的作用。     

红霉素在早产鼠高氧肺损伤中对白细胞介素6、8及γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶表达的影响

目的 探讨红霉素在早产鼠高氧肺损伤中对白细胞介素6 （IL-6）,IL-8及γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）的干预作用.方法 96只早产新生SD大鼠生后1d分为四组：Ⅰ组空气暴露＋生理盐水、Ⅱ组空气暴露＋红霉素、Ⅲ组高氧暴露＋生理盐水、Ⅳ组高氧暴露＋红霉素,每组各24只.四组分别于高氧或空气暴露后1、7、14d处死取肺组织做病理学检查.采取双抗体夹心酶联免疫吸附试验分析肺组织匀浆细胞因子IL-6、IL-8和γ-GCS的水平,并采取半定量逆转录聚合酶链反应测定γ-GCS mRNA的表达.结果 Ⅰ、Ⅱ组肺组织无明显病理改变,Ⅲ组肺泡炎性改变及水肿较Ⅳ组更为明显.Ⅳ组γ-GCS水平在7、14 d较Ⅲ组降低,但是γ-GCS mRNA表达较γ-GCS mRNA均明显增强（P均＜0.05）.Ⅲ组1、7、14 d IL-6及IL-8水平较Ⅰ组均显著增强（P均＜0.05）.Ⅳ组IL-6水平在1、7、14d与Ⅲ组比较,差异均有统计学意义（P均＜0.05）,而IL-8水平仅在7、14d较Ⅲ组明显下降（P均＜0.05）.结论 氧化爆发诱导的炎症介质IL-6及IL-8参与高氧肺损伤发病过程,红霉素可抑制其释放,影响γ-GCS活性从而提高谷胱甘肽抗氧化能力.     

超声引导羊膜腔内和胎肺注射肺表面活性物质预防早产兔肺损伤的比较

目的 探讨超声引导羊膜腔内和胎肺注射肺表面活性物质（PS）预防早产兔肺损伤的效果比较。 方法 将15只新西兰孕兔随机分为胎肺注射PS组（L组）、羊膜腔内注射PS组（A组）及对照组，每组5只。妊娠第27天注药1h后行剖宫产术，观察各组早产兔存活时间，检测支气管肺泡灌洗液中二棕榈胆碱酯磷酸（DPPC）和白细胞介素-6（IL-6）含量，取肺组织行形态学和生化分析。 结果 与对照组相比，L组和A组早产兔存活时间明显延长，DPPC及SP-A含量增加，肺组织细胞凋亡指数和肺损伤病理评分及IL-6含量降低（P＜0.05），II型肺泡上皮细胞板层小体增多、内质网肿胀减少。与A组相比，L组早产兔DPPC、SP-A和IL-6含量增加（P＜0.05），余指标无明显差异。 结论 羊膜腔内和胎肺注射PS均可有效预防早产兔肺损伤，与羊膜腔注射PS相比，胎肺注射等量PS可获得更大效益，有望成为预防早产儿肺损伤的新疗法。     

控氧灌注对体外循环犬肺缺血-再灌注损伤的保护作用

目的：探讨控氧灌注对体外循环犬肺损伤的保护作用。方法：14只健康犬随机分为实验组和对照纽,每组7只,开胸建立体外循环,经过60min升主动脉阻断和90min再灌注。实验组在主动脉开放瞬间调整FiO2至0．40,随后每5min依次上调0．10,最后达0．80并保持至实验结束,对照组开放后再灌注全程FiO2维持0．80。分别留取开胸后、主动脉开放后25、90min的血液标本及肺标本,检测血清IL-15和TNF-α含量,肺组织NF-κB蛋白水平、髓过氧化物酶（MPO）活性、丙二醛含量,肺组织干／湿重比及光镜下病理变化。结果：再灌注后5、10、15、20min实验组的PaO2均低于对照组（P均〈0．05）。再灌注后25、90min实验组肺组织NF—κB蛋白表达水平明显低于对照组（P〈0．05）,其肺组织MPO活性、丙二醛,血IL-6和TNF-α水平也低于对照组（P〈0．05或0．01）。再灌注后25、90min实验组肺组织干／湿重比值高于对照组,肺损伤评分也较低（P〈0．05）。结论：控氧灌注可有效降低体外循环犬肺NF-κB等炎症因子表达,减轻肺损伤程度。     

肺表面活性物质在急性油酸性肺损伤时的变化

目的：探讨肺表面活性物质（ＰＳ）系统在急性油酸（ＯＡ）性肺损伤时变化的作用机制。方法：３６只新西兰白兔经麻醉、气管切开插管后给予机械通气。动物随机分成２组（每组１８只）,即油酸致急性肺损伤组（ＯＡ组）和生理盐水对照组（ＮＳ组）。观察１、２和４小时（各时间点动物均为６只）,监测静态胸肺总顺应性（ＴＲＣ）、肺功能残气量（ＦＲＣ）、动脉血氧分压（ＰａＯ２）和血清肺表面活性物质蛋白Ａ（ＳＰ－Ａ）浓度,测定     

烟雾暴露对卵白蛋白致敏的急性支气管哮喘大鼠模型肺组织激活素A mRNA和蛋白表达的影响

目的分析烟雾暴露对卵白蛋白致敏的急性支气管哮喘大鼠模型肺组织激活素A mRNA和蛋白表达的影响。方法取28只健康成年雄性SD大鼠,按照随机分配原则,分为空白对照组(正常大鼠,不采取任何处理)、阴性对照组(正常大鼠+烟雾暴露)、模型组(制备卵白蛋白致敏的急性支气管哮喘大鼠模型)、实验组(急性支气管哮喘大鼠+烟雾暴露),每组各7只。行苏木精-伊红染色,观察各组大鼠肺组织病理学改变;采用免疫印迹法检测大鼠肺组织中激活素A蛋白表达水平;根据实时荧光定量聚合酶链反应检测大鼠肺组织中激活素A mRNA相对表达量。结果经病理学染色结果可知,空白对照组肺组织病理学未见异常,而阴性对照组、模型组及实验组肺组织出现不同程度的病理学改变,且实验组更加明显。经免疫印迹法检测可知,阴性对照组、模型组及实验组肺组织中激活素A蛋白表达水平较空白对照组均明显升高(P <0. 05);模型组肺组织中激活素A蛋白表达水平较阴性对照组明显升高(P <0. 05);实验组肺组织中激活素A蛋白表达水平较阴性对照组和模型组明显升高(P <0. 05)。经实时荧光定量聚合酶链反应检测可知,相比空白对照组,阴性对照组、模型组及实验组肺组织中激活素A mRNA相对表达量均明显上调(P <0. 05);相比阴性对照组,模型组肺组织中激活素A mRNA相对表达量明显上调(P <0. 05);相比阴性对照组和模型组,实验组肺组织中激活素A mRNA相对表达量明显上调(P <0. 05)。结论在卵白蛋白致敏的急性支气管哮喘大鼠模型中,经烟雾暴露可促进大鼠肺组织激活素A蛋白表达,提高激活素A mRNA表达量,并进一步导致气道炎症加重。     

急性肺损伤患者血清肺表面活性物质蛋白A的变化及其意义

目的；动态观测急性肺损伤虱血清肺表面活性物质蛋白Ａ（ＳＰ－Ａ）的变化，并探讨其临床意义。方法：选择符合ＡＬＩ诊断标准并已给予机械通气治疗的患者２０例，于入组时和出组时抽取静脉血，多数患者在观察期间病情有明显变化时重复抽血，共收集静脉血标本７１例次；并同时记录动脉血气测值和呼吸机参数，计算动脉血氧分压与吸入气氧浓度比值和静态总呼吸顺应性。     

急性肺损伤大鼠肺组织肝脏X受体α表达的研究

目的 观察内毒素性急性肺损伤(ALI)大鼠肝脏X受体α(LXRα)的改变,探讨LXRα在ALI发病中的作用机制.方法 将48只Wistar大鼠随机均分为两组.采用尾静脉注射脂多糖(LPS)5 mg/kg复制大鼠ALI模型,对照组静脉注射生理盐水2.5 ml/kg.于致伤后1、2、4和8 h取大鼠动脉血进行血气分析及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平检测;取肺测定肺湿/干重(W/D)比值、髓过氧化物酶(MPO)活性及肺组织病理学改变;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测肺组织LXRα mRNA、TNF-α mRNA表达;用酶联免疫吸附法(ELISA)检测TNF-α含量变化;用免疫组化法观察肺组织LXRα蛋白表达情况.结果 与对照组比较,ALI组致伤后各时间点动脉血氧分压(PaO2)均显著降低,肺W/D比值、MPO活性均显著升高(P均<0.05);病理观察显示肺组织受损;肺组织LXRα mRNA表达下降,TNF-α mRNA表达升高(p均<0.05),肺组织匀浆和动脉血清中TNF-α亦显著升高,4 h达高峰.免疫组化显示对照组肺组织表达较高水平LXRα蛋白,ALI组在LPS致伤后可见LXRα蛋白表达较对照组显著下降(P均<0.05).结论 正常大鼠肺组织可表达LXRα,LPS可引起ALI大鼠肺组织LXRα的基因和蛋白表达下降,这可能与ALI发病有关.     

针刺对过敏性哮喘大鼠肺肠组织SP-AmRNA表达的影响

目的探讨针刺对过敏性哮喘(哮喘)大鼠肺肠组织表面蛋白A(SP-A)mRNA表达的影响。方法将40只SD大鼠随机分为空白组、哮喘模型组、针刺肺组、针刺肠组、针刺肺肠组,每组各8只。除空白组外,余4组采用腹腔注射卵蛋白致敏,2周后尾静脉注射卵蛋白激发哮喘发作进行造模。空白组、哮喘模型组不针刺,针刺肺组针刺尺泽、孔最、列缺、肺俞穴,针刺肠组针刺曲池、合谷、天枢、上巨虚穴,针刺肺肠组针刺孔最、列缺、曲池、天枢穴。检测并比较各组大鼠针刺后肺肠等组织中SP-A mRNA的表达。结果哮喘模型组肺、大肠及小肠组织中SP-A mRNA的表达均较空白组高(P0.01);针刺肺组、针刺肠组、针刺肺肠组的肺、大肠及针刺肺肠组小肠组织中SP-A mRNA的表达均较哮喘模型组高(P0.05);针刺肺组、针刺肠组的小肠组织中SP-A mRNA的表达与哮喘模型组比较无明显差异(P均0.05)。结论哮喘大鼠肺肠组织SP-A mRNA表达均发生异常,其中肺与大肠生物学相关性最为密切。     

高氧对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的影响及降钙素基因相关肽的保护作用

目的 观察高氧对早产鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(AECⅡ)的影响以及降钙素基因相关肽(CGRP)对AECⅡ的保护作用.方法 将原代分离培养的孕19 d早产鼠AECⅡ接种至6孔培养板,实验随机分为空气组、高氧组、高氧CGRP组、高氧CGRP受体拮抗剂组.空气组和高氧组分别置于体积分数为21%的空气和60%的氧气中暴露24 h;高氧CGRP组在暴露前加入CGRP;高氧CGRP受体拮抗剂组在高氧CGRP组基础上加入CGRP受体拮抗剂(CGRP 8-37).培养24 h后,用分光光度计测定各组丙二醛(MDA)、总抗氧化能力(TAOC)、超氧化物歧化酶(SOD)水平;用流式细胞仪检测活性氧(ROS)和细胞凋亡率;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定表面活性蛋白C(SPC)的mRNA表达.结果 与空气组比较,高氧组ROS、MDA水平及细胞凋亡率均显著增高,TAOC、SOD水平及SPC mRNA表达均显著降低(P均<0.01).与高氧组比较,高氧CGRP组细胞MDA、ROS水平及细胞凋亡率均显著下降;而TAOC、SOD水平及SPC mRNA表达均明显增高(P均<0.01).高氧CGRP受体拮抗剂组与高氧组各指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05).结论 暴露于60%氧24 h可导致早产鼠AECⅡ发生氧化损伤,诱导细胞凋亡及SPC mRNA表达下降;而CGRP可部分减轻AECⅡ的氧化损伤,减少凋亡,促进SPC mRNA表达,对高氧损伤的AECⅡ起保护作用.     

内毒素休克大鼠组织生物喋呤与高迁移率族蛋白B1表达的关系

目的　探讨生物喋呤 (BH4)对内毒素休克大鼠肝、肺、肾等多器官高迁移率族蛋白B1(HMGB1 )基因表达的影响及其可能机制。方法　采用内毒素休克模型 ,1 0 4只大鼠随机分为正常对照组(n =8)、内毒素休克组 (n =4 8)和BH4合成抑制剂— 2 ,4 二胺 6 羟基嘧啶 (DAHP)拮抗组 (n =4 8)。分别测定血浆BH4含量和肝、肺、肾组织HMGB1mRNA的表达水平。结果　与正常对照组比较 ,内毒素攻击后 2～ 2 4h大鼠血浆BH4含量显著升高 (P <0 0 1 )。同时 ,内毒素攻击后 2～ 6h大鼠肝、肺、肾组织HMGB1mRNA表达显著增强 ,并于 1 2～ 2 4h达峰值 (P <0 0 1 ) ,4 8h仍持续于较高水平。给予DAHP处理后 ,血浆BH4含量在 2、 6、 1 2h显著低于内毒素休克组 (P <0 0 5 ) ;动物肝、肾组织中HMGB1mRNA表达亦明显下调 (P <0 0 5 ) ,各时间点其水平均接近正常对照范围 :与内毒素休克组相比 ,DAHP组肺组织HMGB1mRNA表达峰值显著下降 (P <0 0 5 )。结论　生物喋呤对机体HMGBl的基因表达具有显著影响 ,它参与了内毒素休克时多种组织“晚期”炎性介质———HMGB1的诱生过程     

米力农对糖尿病性心肌损伤大鼠心肌收缩力和氧供平衡的影响及其机制

目的探究米力农对糖尿病性心肌损伤大鼠心肌收缩力和氧供平衡的影响及其机制。方法将健康雄性Sprague-Dawley大鼠分为对照组(腹膜注射等量生理盐水)、心肌损伤模型组(注射STZ诱导大鼠糖尿病模型造成心肌损伤)和米力农给药组(模型组基础上腹膜注射0. 5μg/kg米力农治疗,共10周)。生理记录仪监测大鼠左室收缩压(LVSP),左室舒张末压(LVEDP)、最大左室升/降率(±dp/dtmax)及氧动力指标;RT-q PCR检测促炎因子Caspase-3、细胞色素C(Cyt C)、白细胞介素1β(1L-1β)的mRNA表达情况;蛋白印迹分析心肌损伤指标脑钠肽(BNP)、心钠肽(ANP)的蛋白表达;酶联免疫吸附(ELISA)实验检测三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)和一磷酸腺苷(AMP)。结果心肌损伤组较对照组LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax降低、LVEDP升高(P <0. 05),米力农给药组较心肌损伤组LVSP、+dp/dtmax、-dp/dtmax升高、LVEDP降低(P <0. 05);心肌损伤组较对照组氧供给、氧消耗降低,氧摄取率升高(P <0. 05),米力农给药组较心肌损伤组氧供给、氧消耗升高,氧摄取率降低(P <0. 05);心肌损伤组较对照组Caspase-3、Cyt C、1L-1β的mRNA以及BNP、ANP蛋白表达均显著升高(P <0. 05),米力农给药组较心肌损伤组以上指标均显著降低(P <0. 05);心肌损伤组较对照组ATP/ADP和ATP/AMP降低,米力农给药组较心肌损伤组以上指标军显著升高(P <0. 05)。结论米力农可以改善大鼠糖尿病引起的心肌线粒体能量代谢异常及心肌收缩能力,增加组织氧供给,对缓解心肌损伤具有重要价值。     

P物质对体外培养大鼠心肌细胞β1-肾上腺素能受体表达下调作用的研究

目的 观察P物质(SP)对体外培养新生大鼠心肌细胞β1-肾上腺素能受体(β1-AR)表达的影响.方法 选择出生1～3 d的SD大鼠.分离、培养心肌细胞,将细胞培养至72 h待用.用6孔培养板将细胞随机分为对照组与10-7mol/L SP组,每组3孔;采用免疫细胞化学技术测定心肌细胞中β1-AR的表达.另取15孔培养板将细胞随机分为对照组(不加药物干预)与SP组(分别给予10-9、10-8、10-7、10-6mol/L SP干预),每组3孔;采用流式细胞术测定心肌细胞膜表面β1-AR的表达.结果 免疫细胞化学结果显示,SP组心肌细胞β1-AR阳性单位和平均吸光度(A)值均低于对照组(阳性单位:179.61±48.18比205.79±117.42,A值:128.26±22.72比157.35±33.11,P均<0.05).流式细胞术结果显示,不同浓度SP组β1-AR表达均低于对照组.除10-9mol/L SP组(158.87±3.12)外,10-8、10-7、10-6mol/L SP组与对照组比较差异有统计学意义(151.85士4.63,135.00±6.84,121.41±5.22比161.35±3.09,P均<0.05),且呈剂量依赖性.结论 SP可以抑制体外培养大鼠心肌细胞β1-R的表达.     

脓毒症大鼠肺基质金属蛋白酶-2/9表达与血必净干预

目的 观察创伤弧菌脓毒症大鼠肺基质金属蛋白酶(MMP)-2/9和组织型金属蛋白酶抑制剂(TIMP)-1/2的动态表达及血必净干预.方法 温州医学院生命科学院实验室,清洁级SD大鼠110只,随机(随机数字法)分为正常对照组(A组,n=10)、创伤弧菌脓毒症组(B组,n=50,采用大鼠左下肢皮下注射创伤弧菌悬液制作创伤弧菌脓毒症大鼠模型)及血必净干预组(C组,n=50,感染后0.5 h腹腔注射血必净4 mL/kg).B、C组大鼠于染菌后1,6,12,24,48 h麻醉后活杀,留取右肺标本.观察大鼠行为学变化,采用考马斯亮蓝法测肺通透性,采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)法测肺MMP-2/9,TIMP-1/2 mRNA的表达,免疫组化法和双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)测肺MMP-2/9和TIMP-1/2的表达.数据采用单因素方差分析,并用LSD-t法进行组间两两比较,以P＜0.05为差异有统计学意义.结果 B组和C组肺通透性显著高于A组,C组显著低于B组.B组和C组MMP-2/9,TIMP-1/2mRNA显著升高,B组分别于6 h(0.344±0.108),6 h(1.230±0.377),12 h(0.523±0.098),12 h(0.280±0.070)达高峰(P＜0.05),C组分别于12 h(0.256±0.074),6 h(0.968±0.225),12 h(0.746±0.316),12 h(0.356±0.035)达高峰(P＜0.05),C组MMP-2/9mRNA升高趋势显著低于B组(P＜0.05),TIMP-1/2mRNA显著高于B组(P＜0.05).B组和C组MMP-2/9,TIMP-1/2蛋白也升高,B组分别于12 h(0.692±0.191),12 h(0.061±0.017),24 h(1384.42±91),24 h(41.04±3.60)达高峰(P＜0.05);C组分别于24 h(0.217±0.065),12 h(0.045±0.013),24 h(1617.22±103),24 h(47.66±3.58)达高峰(P＜0.05);C组MMP-2/9蛋白升高趋势低于B组(P＜0.05),TIMP-1/2蛋白早期与B组差别不大,后期显著高于B组(P＜0.05).结论 MMP/TIMP比例失衡是创伤弧菌脓毒症大鼠肺损伤机制之一,血必净可促进MMP/TIMP比例恢复平衡,对创伤弧菌脓毒症大鼠肺损伤具有保护作用.

Abstract：

Objective To detect the expression of MMP-2/9 and TIMP-1/2 in the lung of Vibrio vulnificus sepsis rats and observe the intervention of Xuebijing injection. Method One hundred and ten SD rats of clean grade were randomly(random number) divided into normal control group (group A, n = 10),Vibrio vulnificus sepsis group (group B, n = 50. Sepsis was reproduced in rats with subcutaneous injection in left lower limb with Vibrio vulnificus) and Xuebijin intervention group ( group C, n = 50. Rats were intraperitoneal(ip) with the dose of Xuebijing 4mL/kg at the time of 30 min later after infection). The rats in group B and C were sacrificed at 1 h, 6 h, 12 h, 24 h, 48 h after infection, the expression of MMP-2/9 and TIMP-1/2 were examined by PCR, Immunohistochemistry or ELISA methods, the lung permeability were measured by Coomassie Brilliant Blue method. Experimental data used single factor analysis of variance, and between groups by LSD method for pairwise comparison,P ＜0.05 statistically significant difference. Results The lung permeability increased both in group B and C compared with group A,and in group B were relatively higher. The lung MMP-2/9, TIMP-1/2mRNA expression in groups B and C compared with in group A was markedly higher, and reached the peak at 6 h(0. 344 ± 0. 108 ),6 h ( 1. 230 ± 0.377 ), 12 h (0.523 ±0.098),12 h(0.280±0.070) (P＜0.05) in group B while at 12 h(0.256 ±0.074),6 h(0.968±0.225) ,12 h(0.746 ±0. 316) ,12 h(0.356 ±0.035) (P ＜0. 05) in group C; the MMP-2/9mRNA expression in group C decreased(P＜0. 05) compared with the group B while the TIMP-1/2mRNA expression increased(P＜0. 05). The lung MMP-2/9, TIMP-1/2 protein expression in groups B and C compared with the group A(0.345±0.109) also increased, and the peak was at 12 h (0. 692 ± 0. 191 ), 12 h (0. 061 ±0.017) ,24 h(1384.42 ±91) ,24 h(41.04 ±3.60)in group B while at 24 h(0. 217 ±0.065) ,12 h(0. 045± 0. 013 ) ,24 h ( 1617.22 ± 103 ) ,24 h (47.66 ± 3.58 )in group C, the MMP-2/9 protein expression in group C was lower than in group B(P＜0.05), the TIMP-1/2 protein expression in group C was similar to in group B early while marked increased(P＜0.05)later. Conclusions MMP/TIMP imbalance was one of the mechanisms of the lung injury in the rats with Vibrio vulnificus sepsis, Xuebijing could restore the balance of MMP/TIMP ratio.