去甲斑蝥素诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡的机制研究

[目的]探讨去甲斑蝥素对人胃癌SGC-7901细胞抑制和诱导凋亡作用.[方法]采用不同浓度的去甲斑蝥素(noncantharidin,NCTD)作用于胃癌SGC-7901细胞,在扫描电镜下观察其形态特点,采用流式细胞术测定经NCTD作用后的细胞生长周期及凋亡率,Western-blot 检测Bcl-2、Mcl-1、Bax的表达.[结果]扫描电镜下可见,SGC-7901细胞出现凋亡形态学改变.经去甲斑蝥素处理SGC-7901细胞后,实验组G2/M细胞明显多于对照组(P＜0.05).10μg//m1和20μg/ml浓度去甲斑蝥素均能诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡(P＜0.05),其抑制率与NCTD浓度及作用时间相关.Western-blot检测Bcl-2、Mcl-1蛋白表达减少,Bax蛋白表达增加,呈明显的剂量关系.[结论]去甲斑蝥素对人胃癌SGC-7901细胞有抑制作用,可能与其阻滞细胞周期诱导细胞凋亡有关.     

舒林酸、尼美舒利对人胃癌SGC-7901 细胞增殖及COX-2 、NF-κB 表达的抑制作用

 目的 探讨舒林酸、尼美舒利对人胃癌SGC-7901细胞增殖及COX-2、NF-κB表达的影响. 方法 对人胃癌SGC-7901细胞采用细胞培养,MTT法检测不同浓度舒林酸、尼美舒利对人胃癌SGC-7901细胞增殖抑制作用,免疫组化、western blot方法检测药物对COX-2、NF-κB表达的影响. 结果 舒林酸、尼美舒利可以抑制人胃癌SGC-7901细胞生长并具有浓度、时间依赖性;与阴性对照组相比,药物作用48h后尼美舒利100、200μmol/L组,舒林酸0.6、1.2mmol/L组COX-2、NF-κB蛋白表达明显减弱并具有剂量依赖性（P＜0.05）,COX-2、NF-κB之间正相关（P＜0.05）. 结论 舒林酸、尼美舒利可以抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖,抑制NF-κB, COX-2的蛋白表达在二者抑制肿瘤机制中可能具有一定作用.     

核因子-κB中介的TNF-α与胃癌细胞侵袭力的相关性

目的 探讨肿瘤坏死闪子(TNF-α)诱导胃癌细胞侵袭力的相关机制.方法 体外培养人胃癌细胞株SGC-7901,采用免疫组化方法检测其在TNF-α不同浓度、时间诱导下的NF-κB活性、uPA蛋白表达强度;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测SGC-7901细胞在不同浓度的TNF-α、PDTC(吡咯烷二硫代氨基甲酸盐,NF-κB特异性抑制剂)孵育下的细胞增殖情况;构建侵袭小室,检测不同浓度TNF-α对SGC-7901细胞侵袭力影响,并用PDTC预先处理细胞后.检测其对细胞侵袭力的改变.结果 随着TNF-α浓度的增加和时间延长,SGC-7901细胞NF-κB活性明显增强,90 min为高峰;TNF-α明显上调SGC-7901细胞中的uPA蛋白表达水平;一定范围浓度的TNF-α、PDTC对SGC-7901细胞增殖无明显影响;随着TNF-α浓度增加SGC-7901细胞侵袭数也随之增加,具有明显浓度依赖性(TNF-α5、10、20 μg//L vs 0μg/L,84.33±3.786、108.33±6.110、121.330±4.163 vs 63.330±4.933,F=126.282,P＜0.001),PDTC明显抑制TNF-α诱导的SGC-7901细胞侵袭力(42.330±4.041 vs 63.330±4.933,F=126.282,P＜0.05).结论 TNF-α能够增强胃癌细胞的侵袭力,可能是通过NF-κB信号转导路径,激活uPA等蛋白水解酶而实现的.     

红花多糖抑制PI3K/Akt信号通路诱导人胃癌细胞凋亡的研究

目的 探讨红花多糖通过抑制PI3K/Akt信号通路调控胃癌细胞凋亡的机制。方法 MTT比色法观察SPS对人胃癌SGC-7901细胞体外增殖的抑制作用,流式细胞仪(FCM)分析细胞凋亡,实时荧光定量RT-PCR法和Western Blot法检测蛋白激酶B(Akt)基因及蛋白的表达情况。结果 红花多糖在一定范围内以剂量依赖方式和时间依赖方式抑制SGC-7901胃癌细胞生长。流式细胞仪检测,SGC-7901细胞经红花多糖处理24 h,其早期凋亡率、细胞坏死或晚期凋亡率显著增加,呈现明显的剂量依赖性。Real-time PCR和Western Blot检测发现,SPS处理的细胞Akt基因及蛋白表达量明显下降。结论 红花多糖对人胃癌SGC-7901细胞体外增殖具有明显的抑制作用,该抑制作用具有一定的时间依赖性和剂量依赖性;红花多糖能够下调Akt mRNA表达,降低Akt和p-Akt蛋白的表达量,抑制Akt通路发挥抗肿瘤作用。     

告达庭激活Caspase-3诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡

[目的]评价告达庭体外诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡的作用。[方法]MTT法检测细胞活性;吖啶橙染色观察核形态;流式细胞术检测细胞凋亡率：Western-blot及比色法检测Cas-pase-3表达及活性。[结果]告达庭抑制SGC-7901细胞的活性,具有浓度、时间依赖性;告达庭70μM能使SGC-7901细胞出现核染色体浓聚等典型的凋亡形态学改变,告达庭35、70μLM使细胞凋亡率升高,并使Caspase-3蛋白表达量和蛋白活性显著升高。[结论]告达庭可能通过激活Caspase-3诱导SGC-7901细胞凋亡。     

西黄浸提液抑制胃癌SGC-7901 细胞增殖的可能机制

[摘要] 目的：探讨西黄浸提液对胃癌SGC-7901 细胞增殖的影响及其可能机制。方法：常规培养胃癌细胞株SGC-7901,用CCK-8 法和细胞流式细胞术检测不同质量浓度（3.2、6.4、12.8 和25.6 mg/ml）的西黄浸提液在不同时间点（24、48 和72 h）对SGC-7901 细胞增殖和凋亡的影响,用qPCR法检测不同质量浓度西黄浸提液对SGC-7901 细胞凋亡相关基因Bax 和Bcl-2 mRNA表达的影响,用Western blotting 检测西黄浸提液对凋亡相关蛋白caspase 3、caspase 9、Bax和Bcl-2 表达的影响。结果：3.2~25.6 mg/ml的西黄浸提液均能有效地抑制胃癌SGC-7901 细胞的增殖（P<0.05 或P<0.01）,并且随浓度增加SGC-7901 细胞凋亡率增加（P<0.01）。西黄浸提液能够显著上调SGC-7901 细胞Bax mRNA和下调Bcl-2 mRNA表达水平（P<0.05 或P<0.01）,并可增加caspase3、caspase 9 和Bax 蛋白表达、降低Bcl-2 蛋白表达（P<0.05 或P<0.01）。结论：西黄浸提液通过触发细胞凋亡抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,此可成为一个潜在的胃癌辅助治疗的方法。     

复方苦参注射液诱导胃癌细胞株MGC803增殖抑制和细胞凋亡的实验研究

目的:观察复方苦参注射液在体外抑制人胃癌细胞株MGC803增殖和诱导其凋亡的生物学效应,并对其分子机制作初步探讨.方法:分别采用不同浓度梯度的复方苦参注射液干预胃癌细胞MGC803,通过MTT比色法检测复方苦参注射液对该细胞系生长增殖的影响.TUNEL法分析经1、2、4 mg/mL复方苦参注射液作用24 h后的MGC803细胞凋亡率.Western blot法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达情况.结果:复方苦参注射液在体外能明显抑制人胃癌细胞株MGC803的增殖,且呈浓度、时间依赖性(P<0.001).TUNEL法检测实验组细胞凋亡率均明显高于未加复方苦参注射液的空白对照组(P<0.05);West?ern blot分析表明复方苦参注射液能下调Bcl-2蛋白表达,降低蛋白Bcl-2/Bax比值,并且可以促使Caspase-3原蛋白发热活化(P<0.05).结论:复方苦参注射液具有体外抑制胃癌细胞增殖的作用,并能诱导其凋亡,其机制可能与Bcl-2/Bax比值降低导致Cas?pase-3活化相关.     

姜黄素阻断NF-κB信号通路抑制人卵巢癌细胞株3AO增殖

目的：探讨姜黄素（curcumin）对体外培养人卵巢癌细胞株3AO细胞增殖抑制及其作用机制.方法：选用人卵巢癌细胞株3AO进行体外培养,以20μg/L、40μg/L、80μg/L姜黄素分别处理3AO细胞24-48h,MTT比色法检测细胞生长活性,流式细胞仪检测细胞周期时相变化,Western blot法检测NF-κB、P-NF-κB、IκB、P-IκB蛋白的变化.结果：姜黄素对人卵巢癌细胞株3AO生长的抑制作用,呈剂量、时间依赖性.流式细胞仪分析证实姜黄素能使3AO细胞周期阻滞于G0/G1期,Western blot结果显示随姜黄素作用浓度的增加,NF-κB、P-NF-κB蛋白表达水平明显下降,IκB、P-IκB蛋白表达没有明显改变.结论：姜黄素对3AO细胞有明显的增殖抑制作用,此作用可以通过下调NF-κB蛋白表达及磷酸化实现,这是姜黄素抑制卵巢癌细胞生长的分子机制之一.     

EGCG通过下调Bcl-2、NF-κB(p65)表达,活化Caspase-3诱导人胃癌细胞凋亡的实验研究

目的:观察表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin-3-gallate, EGCG)对人胃癌SGC7901细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用,探讨EGCG诱导移植瘤细胞凋亡作用的分子机制. 方法:建立人胃腺癌(SGC7901)细胞裸鼠异种移植瘤模型,用不同剂量的EGCG进行治疗,并设对照;采用TUNEL法检测肿瘤组织中细胞凋亡情况,Western blot法检测肿瘤组织凋亡相关基因NF-κB(p65)、Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白表达情况. 结果:EGCG对移植瘤生长有明显抑制作用;TUNEL法发现EGCG导致移植瘤内细胞发生凋亡;Western blot分析表明EGCG能下调NF-κB(p65)蛋白的表达,促使Bax/Bcl-2蛋白表达的比值增高,并且可以促进Caspase-3的活化. 结论:EGCG对人胃癌细胞裸鼠移植瘤有明显的抑制作用,并能诱导移植瘤细胞凋亡.其机制可能与通过NF-κB(p65)的下调,促使Bax/Bcl-2比值增高,进而导致Caspase-3的活化而诱导细胞发生凋亡相关.     

姜黄素阻断NF-κB信号通路抑制人卵巢癌细胞株3AO增殖

目的:探讨姜黄素(curcumin)对体外培养人卵巢癌细胞株3AO细胞增殖抑制及其作用机制.方法:选用人卵巢癌细胞株3AO进行体外培养,以20μg/L、40μg/L、80μg/L姜黄素分别处理3AO细胞24-48h,MTT比色法检测细胞生长活性,流式细胞仪检测细胞周期时相变化,Western blot法检测NF-κB、P-NF-κB、IκB、P-IκB蛋白的变化.结果:姜黄素对人卵巢癌细胞株3AO生长的抑制作用,呈剂量、时间依赖性.流式细胞仪分析证实姜黄素能使3AO细胞周期阻滞于G0/G1期,Western blot结果显示随姜黄素作用浓度的增加,NF-κB、P-NF-κB蛋白表达水平明显下降,IκB、P-IκB蛋白表达没有明显改变.结论:姜黄素对3AO细胞有明显的增殖抑制作用,此作用可以通过下调NF-κB蛋白表达及磷酸化实现,这是姜黄素抑制卵巢癌细胞生长的分子机制之一.     

NS-398对人胃癌细胞系SGC-7901增殖、凋亡和COX-2表达的影响

目的 探讨环氧合酶-2(COX-2)抑制剂NS-398对人胃癌细胞系SGC-7901增殖、凋亡及COX-2表达的影响,并进一步探讨其作用的可能机制.方法 采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测NS-398对SGC -7901细胞的杀伤抑制作用;免疫细胞化学法检测SGC-7901细胞内COX-2的蛋白表达情况;ELISA法检测NS-398作用于SGC-7901细胞后PGE2释放水平;流式细胞仪检测SGC-7901细胞的凋亡情况.结果 NS-398对胃癌SGC-7901细胞具有较强的抑制作用,且这种抑制作用随浓度和时间的增加而增强,呈剂量-时间双效应关系(P＜0.05);不同浓度NS-398作用下的SGC-7901细胞中,COX-2的表达明显减弱,且呈剂量梯度下降(P＜ 0.05);NS-398可抑制PGE2释放,并且这种抑制作用呈剂量效应关系,与对照组相比差异有统计学意义(P＜ 0.05);NS-398作用于SGC-7901细胞48 h后,细胞凋亡率升高,且呈剂量效应(P＜0.05).结论 NS-398通过COX-2依赖途径抑制SGC-7901细胞增殖并促进其凋亡.     

HMGA2在胃癌细胞SGC-7901上皮间质转化中的作用

目的 探讨TGF-β1调控人胃癌细胞SGC-7901由上皮向间质细胞转化过程中,HMGA2的表达及其作用。方法 用TGF-β1处理人胃癌细胞SGC-7901(0,3,6,24,48,72h),在显微镜下观察SGC-7901细胞形态的变化,蛋白质印记法检测HMGA2、E-cadherin和Vimentin蛋白的表达,Transwell小室实验检测细胞侵袭能力。结果 (1)随着TGF-β1作用时间的延长,SGC-7901细胞逐渐变长,变大,细胞融合;(2)在TGF-β1作用下,SGC-7901均不同程度地表达HMGA2、E-cadherin和Vimentin。HMGA2蛋白从0h开始表达,到6h表达最强,24h以后表达稍有下降。E-cad蛋白从0h开始表达,到3h表达最高,随后开始降低。Vimentin蛋白48h表达最高,72h有降低的趋势;(3)Transwell小室实验显示SGC-7901在TGF-β1处理后,3h时细胞穿膜最多,从6h起穿过的细胞开始降低,到72h最低。结论 在TGF-β1诱导人胃癌细胞SGC-7901细胞上皮间质转化的过程中,HMGA2蛋白起到重要作用,HMGA2可作为Snail的启动子,结合Smads,促进上皮间质转化HMGA2还可能通过调控Wnt/β-Catenin信号通路对肿瘤细胞的生长和凋亡发挥作用。     

PI3K/mTOR双重抑制剂Bez235抑制SGC-7901胃癌细胞增殖的作用

目的探讨PI3K/ mTOR双重抑制剂Bez235对SGC-7901胃癌细胞增殖和凋亡的影响。方法采用MTT法检测Bez235对SGC-7901细胞增殖的影响;流式细胞术分析细胞周期变化;AnnexinⅤ-FITC试剂盒检测细胞凋亡;免疫印迹法检测蛋白表达水平。结果MTT结果显示Bez235抑制了SGC-7901细胞的增殖,Bez235作用后使细胞阻滞于G1期,但对SGC-7901细胞凋亡的诱导作用不明显;免疫印迹结果表明,Bez235抑制了SGC-7901细胞中β-catenin的表达,同时抑制了其下游因子cyclinD1的蛋白水平。结论PI3K/ mTOR 抑制剂Bez235对SGC-7901胃癌细胞的增殖具有明显的抑制作用,其机制可能与其调节β-catenin通路相关。     

红毛五加多糖对胃癌细胞的诱导凋亡作用

目的：研究红毛五加多糖对胃癌的诱导凋亡作用及其作用机制。方法：采用流式细胞术检测凋亡细胞百分比及基因和细胞因子蛋白含量。结果：该多糖使癌基因bcl-2蛋白表达降低,而使抑癌基因p53、bax、Fas、Fas-L及细胞因子TGFβ1蛋白表达增高。结论：该多糖通过降低原癌基因蛋白表达,增高抑癌基因和细胞因子蛋白表达,从而诱导胃癌细胞SGC-7901凋亡。     

沉默ERK5对胃癌SGC-7901、BGC-823细胞生物学功能的影响

目的 探讨沉默细胞外信号调节激酶5（extracellular signal regulated kinase 5,ERK5）对胃癌细胞SGC-7901、BGC-823生物学功能的影响。方法 实时荧光定量PCR法（qRT-PCR）检测人胃癌细胞株和人胃黏膜上皮细胞株ERK5 mRNA的表达水平。应用短发荚RNA（shRNA）干扰技术沉默胃癌细胞SGC-7901、BGC-823中ERK5的表达。CCK-8法检测ERK5沉默后胃癌细胞的生长能力,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,Transwell 实验检测细胞侵袭和迁移能力,流式细胞仪检测细胞凋亡和周期分布。结果 与胃黏膜上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞SGC-7901、BGC-823、AGS、HGC-27中ERK5 mRNA均呈高表达,相对表达量分别为2.696±0.501、1.865±0.185、1.793±0.137和1.530±0.093（P<0.05）。ERK5-shRNA有效沉默胃癌细胞SGC-7901、BGC-823中ERK5的表达水平,沉默效率分别为（74.4±1.5）%和（69.1±3.9）%,差异有统计学意义（P<0.05）。沉默 ERK5的表达能有效抑制胃癌细胞增殖、克隆形成、迁移和侵袭能力（P<0.05）,而促进胃癌细胞凋亡（P<0.05）,并诱导细胞周期阻滞于G0/G1期。结论 沉默ERK5可显著抑制胃癌细胞SGC-7901、BGC-823的生长侵袭,促进细胞凋亡,ERK5可能是胃癌治疗的潜在靶点。     

Allicin induces apoptosis in gastric cancer cells through activation of both extrinsic and intrinsic pathways

Allicin is an active compound derived from garlic that has been shown to have antitumor properties in vitro. The current study was designed to explore the effects and the underlying mechanism of allicin on gastric cancer cells. The MTT assay was used to detect cell viability. Transmission electron microscopy, Rh123 and propidium iodide staining, annexin V/FITC assay and the mitochondrial membrane potential were used to assess for the presence of apoptosis. Immunocytochemistry, western blot analysis, and Q-RT-PCR were used to detect gene expression. We found that allicin reduced cell viability in a dose- and time-dependent manner, partly through induction of apoptosis in gastric cancer cells. At the molecular level, allicin induced cytochrome c release from the mitochondria and increased caspase-3, -8, and -9 activation, with concomitant upregulation of bax and fas expression in the tumor cells. Allicin treatment inhibited proliferation and induced apoptosis in SGC-7901 cancer cells. Both intrinsic mitochondrial and extrinsic Fas/FasL-mediated pathways of apoptosis occur simultaneously in SGC-7901 cells following allicin treatment. Data from the current study demonstrated that allicin should be further investigated as a novel cancer preventive or therapeutic agent in control of gastric cancer, with potential uses in other tumor types.     

livin在人胃癌组织中的表达及其沉默后对胃癌细胞凋亡的影响

目的探讨凋亡抑制蛋白livin在人胃癌组织中的表达及其与临床病理的关系,研究小分子干扰RNA(siRNA)对胃癌细胞系(SGC-7901)livin基因表达的抑制作用,以及livin基因沉默后对胃癌细胞凋亡的影响。方法采用RT-PCR方法和Western blot法检测胃不同组织中livin基因mRNA和蛋白的表达,分析livin表达与临床病理的关系;设计两条针对人源livin基因的siRNA,分别转染SGC-7901细胞;RT-PCR法检测转染前后livin基因的表达情况,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测转染前后细胞增殖能力的变化以及细胞对5-氟尿嘧啶(5-Fu)、顺铂的半数抑制浓度(IC_(50))的改变,流式细胞术检测转染前后细胞凋亡变化。结果40例胃癌组织中,livin表达阳性率为47.5%(19/40);在癌旁组织和良性病变胃黏膜组织中,livin表达呈阴性。组织分化程度差、淋巴结转移者的livin表达率高(P<0.05)。livin特异性siRNA转染48h后,SGC-7901细胞中的livin mRNA表达受到抑制,细胞增殖能力减弱,对5-Fu和顺铂凋亡敏感性增加,同时IC_(50)降低(P<0.05)。结论livin在胃癌组织中表达增高,且与组织分化程度和淋巴结转移有关,可作为辅助胃癌预后判断的分子标志之一;RNA干扰可明显抑制livin基因表达,并使胃癌细胞的凋亡敏感性增加;livin有可能成为通过诱导细胞凋亡增强胃癌治疗效果的一个分子靶点。