DF-521巴曲酶对大鼠脑出血后脑水肿区补体表达的影响

目的 :观察降纤酶制剂对大鼠脑出血后脑水肿形成及血肿周边脑组织补体C3d和C9表达的影响。方法 :一侧基底节区注射自体血 10 0 μL制作大鼠脑出血 2 4、72h模型 ,一组给予腹腔注射降纤酶制剂DF 5 2 1巴曲酶处理 ,一组不给 ,另设一组空白对照脑内注射生理盐水 10 0 μL。用干湿重法 ,测定大鼠脑组织的含水量 ;免疫组化法检测C3d的表达 ,免疫Westernblot方法研究脑组织补体C9表达情况。结果 :大鼠脑出血后 ,血肿侧脑组织含水量上升 ,同时出血侧脑组织内C3d和C9的表达量增加 ;给予DF 5 2 1巴曲酶制剂处理后 ,血肿侧脑水肿减轻〔2 4h由 (81 8± 1 14 ) %降至 (79 46± 0 68% ) ,P <0 0 1;72h由 (83 14± 0 3 6) %降至 (81 0 9±0 3 4) % ,P <0 0 1〕 ;并且脑组织C3d和C9的表达较对照组有所下降。结论 :降纤酶制剂能下调脑出血后血肿周边脑组织补体C3d和C9的表达并减轻大鼠脑出血后脑水肿的程度。     

实验性大鼠脑出血后TNF-α、ICAM-1的表达和脑水肿的研究

目的:探讨TNF-α、ICAM-1在大鼠脑出血后脑水肿中的表达及意义。方法:利用立体定向技术建立中等 量大鼠自体尾动脉血脑出血模型(50μl),于脑出血后6h、24h、48h、72h处死大鼠,进行脑含水量测定,并于脑出血后3h、 6h、12h、24h、48h、72h、7d处死大鼠,进行TNF-α、IGAM-1的免疫组化染色,并对结果进行统计处理。结果:大鼠脑出血 后脑水肿于48h达到高峰;大鼠脑组织表达TNF-α也于48h达到高峰,高于假手术组,分别为58．4±6．19和2±1．12,P <0．01;ICAM-1表达72h达高峰,与假手术组比较存在显著性差异,分别为7．8±0．84和0．8±0．84,P<0．01。结论: TNF-α、ICAM-1在大鼠脑出血后血肿周围表达的高峰与脑水肿高峰存在时间上的相关性,提示高表达的TNF-α、ICAM- 1可能参与了脑水肿形成。     

大鼠脑出血后脑水肿形成特点的研究

目的 :研究脑出血后脑水肿形成的特点。方法 :建立大鼠尾状核出血模型 ,用干湿重法分别测定不同部位的脑组织在出血后1 ,2 ,3 ,5 ,7d的脑组织水分含量的变化 ,并与正常脑组织对比。结果 :脑出血后 2 4h内在血肿同侧基底节区及血肿同侧对应的皮质区形成明显的水肿 ,水肿的高峰在第 3天 ,持续 1周仍不消退 ,而血肿对侧对应的基底节区及皮质区脑组织水分含量则无明显变化。结论 :大鼠脑出血后脑水肿在 2 4h内形成 ,第 3天达到高峰 ,提示对临床脑出血病人脑水肿的防治要尽可能早     

亚低温对实验性脑出血后水通道蛋白4表达及脑水肿的影响

目的研究亚低温对脑出血后水通道蛋白4(AQP4)表达及脑水肿的影响,探讨亚低温对出血性脑水肿的作用机制。方法在大鼠苍白球注射胶原酶制作脑出血模型,用冰块降温及白炽灯照射加温的方法调节体温;应用免疫组化方法检测脑组织AQP4表达,采用干湿重法观察脑含水量的动态变化。结果脑出血模型大鼠病灶侧脑含水量、血肿周围AQP4的表达水平明显高于假手术组(均P<0.001);各个时间点亚低温组大鼠病灶侧脑含水量以及血肿周围AQP4的表达水平均明显低于对照组(P<0.05～0.01);AQP4表达水平与脑含水量呈正相关(r=0.977,P<0.001)。结论亚低温能明显减轻脑出血后脑水肿及AQP4的表达,亚低温可能通过抑制AQP4的表达而减轻脑水肿。     

阿加曲班对大鼠脑出血后脑水肿作用的研究

目的探讨阿加曲班对大鼠脑出血模型脑水肿的作用。方法取雄性SD大鼠32只,体重300~350g,随机分为A、B、C、D,4组,每组8只。大鼠经立体定向分别向右侧尾状核区注入生理盐水60ul、无肝素自体血50ul+生理盐水10ul、生理盐水50ul+阿加曲班生理盐水溶液10ul、无肝素自体血50ul+阿加曲班生理盐水溶液10ul。实验大鼠于术后48小时断头处死,测定脑含水量,HE染色,观察脑组织学变化。结果D组脑组织含水量降低,与B组比较有明显差别(P<0.05);C组脑组织含水量与A组比较无明显差别(P>0.05);HE染色观察:B组可见血肿周围脑组织水肿,炎症细胞渗出,脑组织疏松;D组上述改变减轻;A、C两组未见明显病理学改变。结论阿加曲班可减轻大鼠脑出血后血肿周围脑组织脑水肿。     

脑出血大鼠血肿周围脑组织细胞间黏附分子的表达与脑水肿的关系

目的探讨脑出血后血肿周围脑组织炎性损伤的病理发展过程。方法健康Wistar大鼠48只随机分成脑出血组、对照组。分别于制模后3h、24h、72h、7d取血肿周围脑组织检测细胞间黏附分子(ICAM-1)的表达,并对出血侧脑组织含水量进行测定。结果脑出血组各时相点出血周围组织均有ICAM-1阳性反应的血管和神经细胞,与对照组比差异有极显著性(P<0·01);与对照组比较,脑出血3h组血肿周围组织含水量即开始升高,24h明显增加(P<0·01),72h仍高于对照组,7d时接近对照组。结论ICAM-1在血肿周围的高表达可能是脑出血后血肿周围组织受损的主要原因之一,ICAM-1促进白细胞浸润,释放大量氧自由基,继而导致脂质过氧化加重脑组织损伤,并参与脑水肿的形成发展。     

β--七叶皂甙钠对实验性脑出血后AQP4表达及脑水肿的影响

目的研究β--七叶皂甙钠对大鼠脑出血后水通道蛋白4（AQP4）表达及脑水肿的影响,探讨β--七叶皂甙钠治疗出血性脑水肿的作用机制。方法在大鼠苍白球注射胶原酶制作脑出血模型,采用干湿重法观察脑水肿的变化;应用免疫组织化学方法检测脑组织AQP4表达。结果脑出血模型大鼠病灶侧脑含水量、血肿周围AQP4的表达水平均明显高于假手术组（均P〈0．01）;各个时间点β--七叶皂甙钠治疗组病灶侧脑含水量以及血肿周围AQP4的表达水平均明显低于对照组（均P〈0．05）;AQP4表达水平与脑含水量呈正相关（r=0.976,P〈0．01）。结论β--七叶皂甙钠能明显减轻脑出血后脑水肿及AQP4的表达,β--七叶皂甙钠可能抑制AQP4的表达而减轻脑水肿。     

脑出血大鼠脑组织ICAM-1的表达与脑含水量的变化及药物对其影响

目的探讨脑出血后血肿周围脑组织炎性损伤的病理发展过程。方法健康Wister大鼠72只随机分成脑出血模型组、假手术组、麝香组,分别于3h、24h、72h、7d取血肿周围脑组织检测细胞间黏附因子-1(ICAM-1)的表达及出血侧脑组织含水量的测定。结果与假手术组比较,脑出血组ICAM-1从3h起即有表达,72h达高峰,持续7d仍有表达(P<0.05)。脑含水量在24h后明显增加(P<0.01),7d时与假手术组无显著性差异。结论ICAM-1在血肿周围的高表达推测是脑出血后水肿形成和缺血性损伤的主要原因之一。减少ICAM-1的表达和脑含水量推测是复方麝香注射液的药理机制。     

脑出血灶周组织ICAM-1与MMP-9表达的实验研究

目的研究大鼠实验性脑出血后血肿周围脑组织细胞间粘附分子-1（ICAM-1），基质金属蛋白酶-9（MMP-9）的表达。方法采用立体定向技术将自体不凝血注入大鼠尾状核区制备脑出血模型，免疫组化染色法检测血肿周围脑组织ICAM-1，MMP-9的表达。结果脑出血后6h血肿旁有少量ICAM-1表达阳性细胞，12h开始增多，3d达高峰；脑出血后6h血肿周围就有较多MMP-9表达阳性细胞，2d时阳性细胞最多；脑出血后ICAM-1与MMP-9的表达呈正相关（y=0．768，P〈0．05）。结论血肿周围组织ICAM-1、MMP-9表达上调提示两者可能参与了脑出血后继发性脑损伤。     

MK-801通过抑制RhoA在出血性脑损伤机制的研究

目的观察大鼠脑出血后血肿周围Rho GTP酶(RhoA)的表达变化及地佐环平(dizo-cilpine,MK-801)对其表达的影响,探讨在脑出血后脑损伤中N-甲基-D-门冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)与RhoA的相关性。方法 SD雄性大鼠随机分为生理盐水组、出血组和治疗组,采用鼠尾自体血注入尾状核法建立大鼠脑出血3d模型,治疗组用MK-801在脑出血模型前1h腹腔注射,分别用伊文思蓝(Evans blue,EB)测血脑屏障(blood brain barrier,BBB)通透性,干-湿重法测血肿周围脑组织含水量,Western blot法测定患侧RhoA在各组的表达量。结果 MK-801治疗组较脑出血BBB通透性明显降低(P<0.05),血肿周围脑水肿明显减轻(P<0.05),RhoA表达量明显较少(P<0.05)。结论 MK-801能减轻脑出血后脑水肿、血脑屏障的开放,揭示MK-801通过抑制RhoA的表达可能参与出血性脑损伤。     

实验性脑出血后水通道蛋白-4的表达变化

目的　研究出血性脑水肿病理过程中水通道蛋白 4 (aquaporin 4 ,AQP4 )的表达与脑水肿形成之间的关系。方法　采用胶原酶制作大鼠脑出血模型 ,原位杂交和免疫组化法检测AQP4mRNA和蛋白质的表达变化 ,并用电镜技术和微血管灌注法观察脑水肿区的超微结构和微血管的变化。结果　与对照组相比 ,脑出血后 6h ,AQP4mRNA和蛋白质在脑水肿区表达增强 ,AQP4mRNA(吸光度值 ,A)由 0 2 9上升到 0 5 7(P <0 0 1) ,AQP4蛋白A值由 0 0 6上升到 0 15 (P <0 0 1) ,电镜下可见脑组织轻度水肿 ;至 72h ,AQP4mRNA和蛋白质的表达达到高峰 ,AQP4mRNA的A值为 0 88,AQP4蛋白A值为 0 2 5 ,此时脑组织严重水肿 ,神经元、胶质细胞和内皮细胞明显肿胀 ,毛细血管造影可见毛细血管开始增生 ;第 7天 ,AQP4的表达已减少 (尤以mRNA明显 ) ,但仍显著高于对照组 ,此时脑水肿已减轻。在整个脑水肿的形成过程中 ,AQP4mRNA和蛋白的表达呈高度正相关 (rs>0 82 ,Ps<0 0 1)。结论　脑出血后AQP4表达明显增强 ,提示AQP4参与了出血性脑水肿的发生发展过程 ,在出血性脑水肿的形成过程中起重要作用。     

水通道蛋白-4在脑出血大鼠脑组织的分布

目的 观察脑出血大鼠水通道蛋白-4(AQP4)在脑组织的分布变化及其在出血性脑水肿中的作用。方法 采用定量胶原酶注人大鼠尾状核建立脑出血模型，应用免疫组化法观察脑出血后不同时间大鼠脑组织AQP4的表达。结果 AQP4阳性细胞主要分布在脑出血血肿周围区和大脑皮质的星形胶质细胞、脑室周围、视上核和室旁核。脑出血后6h起，AQP4表达增强，出血后72h达高峰，出血1周后仍高于正常水平。结论 脑出血后，AQP4在与水代谢密切相关的部位表达明显增强，提示AQP4在出血性脑水肿的形成过程中起重要作用。     

经腹腔应用阿加曲班对脑出血后凝血酶神经毒性的抑制作用

目的:探讨经腹腔应用阿加曲班治疗脑出血（ICH）后凝血酶神经毒性损伤的可能性。方法:①研究阿加曲班对ICH及凝血酶注入后脑水肿、细胞损伤的影响。Wistar大鼠60只,随机分为假手术对照组（只进针不注血）;ICH组（50μL自体尾血注入右尾状核）;ICH+阿加曲班干预组(50μL自体尾血注入大鼠右侧尾状核,分别于术后3和12h经腹腔给予阿加曲班0.9mg·kg^-1,总量0.6mL);凝血酶组(10U·2μL^-1凝血酶注入大鼠右侧尾状核);凝血酶+阿加曲班干预组(10U·2μL^-1凝血酶注入大鼠右侧尾状核,分别于术后3和12h经腹腔给予阿加曲班0.9mg·kg^-1,总量为0.6mL)。各组均n=12,术后24h处死各组大鼠,每组中6只用于检测脑组织水含量,6只检测caspase-3免疫反应细胞及TUNEL阳性细胞数。②经腹腔注射阿加曲班对血肿容积的影响:建立胶原酶ICH大鼠模型组:注入Ⅰ型胶原酶+肝素;阿加曲班组:胶原酶ICH模型成功后3及12h分别经腹腔注入阿加曲班溶液0.9mg·kg^-1,每次注入液体量为0.6mL,测定两组大鼠脑组织血肿血红蛋白的含量(测定血红蛋白A₅₅₀值)以评价阿加曲班对血肿容量的影响。结果:自体血ICH及凝血酶模型大鼠在阿加曲班干预后,ICH组及凝血酶组的TUNEL阳性细胞数、caspase-3阳性细胞数明显下降（P<0.01或P<0.05）,脑组织水肿含量百分比明显降低（P<0.05）。胶原酶ICH血红蛋白A值为（0.45±0.12）,阿加曲班干预组为（0.46±0.09）,差异无统计学意义（P>0.05）。结论:ICH后3～12h经腹腔注入阿加曲班可减轻ICH后的脑水肿及细胞凋亡性损伤,且没有血肿增大的不良反应。     

Celecoxib induces functional recovery after intracerebral hemorrhage with reduction of brain edema and perihematomal cell death.

The selective cyclooxygenase-2 (COX-2) inhibitor has been reported to have antiinflammatory, neuroprotective, and antioxidant effects in ischemia models. In this study, the authors examined whether a selective COX-2 inhibitor (celecoxib) reduces cerebral inflammation and edema after intracerebral hemorrhage (ICH), and whether functional recovery is sustained with longer treatment. ICH was induced using collagenase in adult rats. Celecoxib (10 or 20 mg/kg) was administered intraperitoneally 20 minutes, 6 hours, and 24 hours after ICH and then daily thereafter. Seventy-two hours after ICH induction, the rats were killed for histologic assessment and measurement of brain edema and prostaglandin E2. Behavioral tests were performed before and 1, 7, 14, 21, and 28 days after ICH. The brain water content of celecoxib-treated rats decreased both in lesioned and nonlesioned hemispheres in a dose-dependent manner. Compared with the ICH-only group, the number of TUNEL-positive, myeloperoxidase-positive, or OX42-positive cells was decreased in the periphery of hematoma and brain prostaglandin E2 level was reduced in the celecoxib-treated group. Celecoxib-treated rats recovered better by the behavioral tests at 7 days after ICH throughout the 28-day period, and the earlier the drug was administered, the better the functional recovery. Evidence of similar effects in an autologous blood-injected model showed that direct collagenase toxicity was not the major cause of inflammation or cell death. These data suggest that celecoxib treatment after ICH reduces prostaglandin E2 production, brain edema, inflammation, and perihematomal cell death in the perihematomal zone and induces better functional recovery.     

Brain edema after intracerebral hemorrhage in rats: the role of inflammation

BACKGROUND: Intracerebral hemorrhage (ICH) results in secondary brain edema and injury that may lead to death and disability. ICH also causes inflammation. It is unclear whether inflammation contributes to brain edema and neuron injury or functions in repairing the brain tissue. AIMS: To understand the effect of inflammation in ICH, we have carried out an investigation on the various aspects and the dynamic changes of inflammation. SETTINGS AND DESIGN: An ICH model was generated by injecting 50 microl autologous tail artery blood stereotactically into the right caudate nucleus of 30 rats, which were randomly divided into five ICH groups. Similarly, five Sham control groups were generated by inserting the needle to the right caudate nucleus of rats. MATERIALS AND METHODS: Rat behavior was evaluated over the time course (6 h, 24 h, 48 h, 72 h and 7 d) in each group. The rats were then killed by administering an overdose of pentobarbital. Following the euthanasia, the brain water content, neuronal loss, glia proliferation, inflammatory infiltration and brain morphology of the rats were measured. Additionally, the expression of TNF-alpha, IL-6, ICAM-1, VEGF, NF-kappaB, C3 and CR2 was analyzed by immunohistochemistry. STATISTICAL ANALYSIS: The data were analyzed by student's t test. RESULTS: Rat brain water content increased progressively over the time course and reached its peak at 48 h followed ICH. The maximum of inflammatory infiltrate (especially neutrophils) and immunopositive cells of TNF-alpha, IL-6 and NF-kappaB, were at 48 h. The expression of C3 and CR2 reached their peaks at 48-72 h, while the expression ICAM-1 and VEGF were at maximum at 72 h followed ICH. CONCLUSIONS: The results suggested that the inflammatory cytokines, complement system and VEGF may have a function in the development of the brain edema and neuron injury followed ICH.     

凝血酶对大鼠脑出血血肿周围组织的毒性损伤研究

目的 :研究脑出血血液凝固过程中产生凝血酶的神经毒性作用。方法 :90只大鼠分成 :对照组、脑出血组、脑出血水蛭素干预组、凝血酶组和凝血酶 +水蛭素干预组。术后 48h观察大鼠神经功能缺损评分 (NDS) ,检测血肿周边组织髓过氧化物酶 (MPO)的活性、脑水肿含量及TUNEL阳性细胞数量。结果 :局部注入重组水蛭素显著减轻了脑出血大鼠神经功能缺损 ,降低局部MPO活性、减少脑水分含量及TUNEL阳性细胞数量 ;脑内直接注入凝血酶后局部脑水分含量升高 ,MPO活性升高 ,并可检测到大量TUNEL阳性细胞。结论 :凝血酶与脑出血后的脑水肿、白细胞浸润和神经细胞DNA损伤有关     

依达拉奉对脑出血大鼠脑代谢的改善作用及其机制研究

目的探讨自由基清除剂依达拉奉对脑出血大鼠脑组织葡萄糖代谢率及神经行为学的影响,并通过检测血肿周围脑含水量及细胞凋亡水平变化,探索依达拉奉改善脑出血后脑代谢水平的作用机制。方法采用自体血立体定向注射建立大鼠脑出血模型,治疗组于建模后皮下注射依达拉奉10 mg/(kg·3 d),对照组注射同体积生理盐水。各组分别于造模后3 d行神经行为学评分及脑含水量测定,并采用小动物正电子发射断层显像/X线计算机体层成像(PET/CT)检测血肿周围葡萄糖代谢率变化,脑组织切片行原位末端脱氧核苷酸转移酶介导的生物素脱氧尿嘧啶核苷酸缺口末端标记法(TUNEL)染色,判定血肿周围细胞凋亡水平变化。结果依达拉奉干预脑出血大鼠后3 d,前肢抬起及转角实验较对照组均明显改善,脑含水量亦明显降低。依达拉奉组血肿周围脑组织葡萄糖代谢率较对照组明显改善,脑代谢降低区域体积较对照组明显减少。血肿周围脑组织TUNEL染色显示,依达拉奉组凋亡细胞明显少于对照组。结论依达拉奉可明显改善脑出血大鼠脑代谢水平及神经功能障碍,减轻脑出血后继发性损伤,其机制可能与减轻血肿周围脑水肿、抑制神经细胞凋亡有关。     

ICAM-1在大鼠弥漫性脑损伤后的脑组织水肿中的表达及其意义

目的探讨ICAM-1在大鼠弥漫性脑损伤后脑水肿中的作用。方法采用Marmarou等人的方法建立大鼠弥漫性脑损伤模型,S-P免疫组化法测定ICAM-1蛋白在外伤后不同时间脑组织中的表达,干湿重法测脑组织含水量,组织切片HE染色观测炎性细胞浸润情况。结果伤后6h,脑组织中ICAM-1蛋白表达明显升高,72h达到高峰,其后下降,7d时仍明显高于假手术对照组(P<0.05)。伤后6h、12h、24h、48h、72h和7d时,脑组织含水量亦明显高于假手术组(P<0.05),同时伤后脑组织中炎性细胞大量聚集。结论大鼠脑外伤诱导了ICAM-1蛋白的表达,ICAM-1通过介导炎性细胞的浸润可能参与了伤后脑水肿的形成过程。