黄芩汤调控TLR2/NF-κB/NLRP3通路对溃疡性结肠炎细胞焦亡的影响

目的 基于TLR2/NF-κB/NLRP3通路探讨黄芩汤对溃疡性结肠炎细胞焦亡的影响。方法 实验分为空白组、模型组、低中高中药血清组。LPS+ATP构建焦亡模型,cck-8法检测生长情况,流式细胞术检测凋亡,Elisa检测IL-18、IL-1β、TNF-α水平,qRT-PCR检测IL-1β、NLRP3、Caspase-1、IL-18、ASC、GSDMD mRNA表达情况,WB检测TLR2、p-NF-κB-p65、GSDMD蛋白水平。结果 与模型组相比,三组中药血清细胞活力均明显上升(P<0.05)、凋亡率均显著降低(P<0.01)。与模型组相比,三组中药血清IL-18、IL-1β、TNF-α水平均明显降低(P<0.05)。与模型组相比,中剂量组Caspase-1、NLRP3、ASC、IL-18的mRNA表达明显降低(P<0.05),高剂量组IL-1β、NLRP3、Caspase-1、IL-18、ASC、GSDMD的mRNA表达均显著降低(P<0.01)。与模型组相比,中、高剂量组TLR2、p-NF-κB-p65及高剂量组GSDMD蛋白表达显著降低(P<...     

基于NLRP3/caspase-1/GSDMD通路研究黄精改善糖尿病大血管焦亡损伤的作用机制北大核心CSCD

探讨黄精调节NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor thermal protein domain associated protein 3,NLRP3)/天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1,caspase-1)/消皮素D(gasdermin D,GSDMD)通路对糖尿病大血管焦亡损伤的影响。采用小剂量链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)腹腔注射联合高糖高脂饮食诱导糖尿病大鼠模型。利用血糖检测仪、全自动生化分析仪、苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色、酶联免疫吸附测定(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)、免疫荧光、免疫组织化学及Western blot等方法,检测大鼠血糖含量、血脂水平、血管厚度、炎症因子含量及焦亡相关蛋白的表达水平,评价糖尿病大血管焦亡损伤,及药物抗糖尿病大血管焦亡损伤的作用机制。结果表明,药物联合饮食诱导成功构建糖尿病模型。与对照组相比,模型组大鼠空腹血糖含量升高,血浆中总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-c)含量显著升高,高密度脂蛋白胆固醇(high-density lipoprotein cholesterol,HDL-c)含量显著降低,血管内膜增厚,血清与主动脉中炎症因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-18(interleukin-18,IL-18)含量增加,炎症小体NLRP3表达增加,主动脉血管细胞中caspase-1、GSDMD活化蛋白增加。与模型组相比,黄精干预可降低血糖、血脂含量,抑制血管增厚,减少糖尿病大鼠血清及主动脉炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-18表达,抑制炎症小体NLRP3表达以及焦亡相关蛋白caspase-1、GSDMD的活化。综上所述,黄精可通过抑制细胞焦亡,减轻血管局部炎症,延缓糖尿病大血管焦亡损伤进程。     

六味补气方对慢性阻塞性肺疾病细胞焦亡的 干预作用及机制研究

目的 研究六味补气方对慢性阻塞性肺疾病（COPD）细胞焦亡的影响。方法 按照随机数字表法将大鼠分为正常对照组、模型组、桂龙咳喘宁组和六味补气方低、中、高剂量组,每组10只。采用烟熏加脂多糖（LPS）气管滴入的方法建立COPD大鼠模型。药物干预后,检测大鼠肺功能;支气管肺组织形态学改变;同时检测肺组织NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3（NLRP3）和Gasdermin D-N端（GSDMD-N）的改变;肺泡灌洗液（BALF）中炎症因子白介素18（IL-18）、白介素1β（IL-1β）水平;肺组织活性氧（ROS）水平;肺组织NLRP3、半胱天冬酶-1（Caspase-1）、Gasdermin D（GSDMD）、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）蛋白表达以及mRNA水平。结果 与正常对照组比较,模型组大鼠肺功能降低（P<0.01）,肺组织损伤,细胞膜破裂,IL-18、IL-1β和ROS水平升高（P<0.01）,肺组织 NLRP3、Caspase-1、GSDMD、和ASC蛋白表达和mRNA水平显著升高（P<0.01,P<0.05）。与模型组比较,各用药组肺功能改善,肺组织损伤和细胞焦亡减轻,IL-18、IL-1β和ROS水平下降（P<0.01）,肺组织 NLRP3、Caspase-1、GSDMD和ASC蛋白表达和mRNA水平降低（P<0.01）,其中以六味补气方高剂量组改变最为显著。结论 六味补气方可降低COPD大鼠IL-18、IL-1β和ROS水平,减轻气道炎症和氧化应激,阻抑肺组织损伤和细胞的焦亡,增加肺功能,其机制可能是通过调控ROS/NLRP3/Caspase-1信号通路实现的。     

外感清热解毒方对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤的影响

目的：探讨外感清热解毒方对脂多糖（LPS）诱导急性肺损伤（ALI）大鼠的影响及作用机制。方法：20只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、外感清热解毒方组、miR-495抑制剂组。气管滴注LSP（5 mg/kg）成功复制ALI大鼠模型,给予相应干预。定量PCR检测大鼠肺组织miR-495水平;苏木精-伊红（HE）染色观察肺组织病理改变;酶联免疫吸附试验检测肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-1β、IL-18、IL-10炎症介质和髓过氧化物酶（MPO）活性;蛋白质免疫印迹法检测肺组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）、凋亡相关微粒蛋白（ASC）、胱天蛋白酶-1（Caspase-1）、GSDMD蛋白表达。结果：与对照组比较,模型组大鼠肺组织miR-495表达下调（P<0.05）,出现病理损伤,BALF中IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-18含量升高,IL-10含量下降,MPO活性增强;肺组织NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达增加（均P<0.05）。与模型组和miR-495抑制剂组比较,外感清热解毒方组大鼠肺组织miR-495表达上调（P<0.05）,病理损伤减轻,BALF中IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-18含量下降,IL-10含量升高,MPO活性减弱;NLRP3、ASC表达下调（均P<0.05）,Caspase-1表达差异无统计学意义（P>0.05）。除对照组外,均可见GSDMD蛋白切割,外感清热解毒方组蛋白切割表达水平明显低于模型组和miR-495抑制剂组。结论：外感清热解毒方对ALI大鼠具有保护作用,其机制可能与调控miR-495/NLRP3/GSDMD信号通路,减轻炎症反应,抑制细胞焦亡有关。     

张明昊，张童，郭申，赵绅，杜婧雯，俎兆轩，丁妍妍

目的基于NOD 样受体蛋白3（NLRP3）/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1（Caspase-1）/Gasdermin D （GSDMD）通路探讨左归降糖舒心方含药血浆对氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导J774A.1 巨噬细胞焦亡的调控 机制。方法将分化完全的J774A.1 巨噬细胞分为空白血浆组、模型组、左归降糖舒心方含药血浆组、 MCC950（NLRP3 特异性抑制剂）组,每组6 个复孔。除空白血浆组外,其余各组以100 mg·L-1 ox-LDL 诱导细 胞,构建细胞焦亡模型。空白血浆组、模型组、MCC950（50 μmol·L-1）组以含10%空白血浆进行培养,左归降 糖舒心方含药血浆组用10%含药血浆培养细胞24 h。采用CCK-8 法测定各组细胞增殖情况,计算细胞增殖抑 制率;采用LDH 释放实验检测细胞膜完整性及细胞焦亡水平;采用ELISA 法及免疫荧光法检测细胞白细胞介 素（IL）1β、IL-18 含量及蛋白表达情况;采用Western Blot 法检测NLRP3、Caspase-1 及GSDMD 蛋白表达。 结果与空白血浆组比较,模型组细胞的IL-18、IL-1β 含量及LDH 释放率明显增高（P＜0.01）,IL-1β、IL-18 及NLRP3、Caspase-1、GSDMD 蛋白表达明显上调（P＜0.01）。与模型组比较,左归降糖舒心方含药血浆组细 胞的IL-18、IL-1β 含量及LDH 释放率明显下降（P＜0.01）,IL-1β、IL-18 及NLRP3、Caspase-1、GSDMD 蛋 白表达明显下调（P＜0.01）。结论左归降糖舒心方含药血浆能够抑制ox-LDL 诱导的J774A.1 巨噬细胞焦亡状 态及炎性反应,其作用机制可能与调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD 通路,下调细胞炎性因子IL-18、IL-1β 表达 有关。     

黄芩素调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路介导的焦亡减轻小鼠急性肺损伤作用

目的 探究黄芩素对急性肺损伤（acute lung injure,ALI）小鼠的治疗作用以及对NOD样受体热蛋白结构域3（NOD-like receptor family pyrin domain containing 3,NLRP3）/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1（cystein-asparate protease-1,Caspase-1）/消皮素D（gasdermin D,GSDMD）焦亡通路的调控作用。方法 60只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、Caspase-1抑制剂VX-765（30 mg/kg）组和黄芩素低、中、高剂量（10、20、40 mg/kg）组,每组10只。除对照组外,其余各组ip脂多糖（lipopolysaccharide,LPS,15 mg/kg）,分别于造模前24 h和造模0.5 h后给予黄芩素或VX-765（30 mg/kg）干预。造模24 h后,检测小鼠肺湿干质量比以评价肺肿胀;苏木素-伊红（HE）染色法检测肺组织病理变化;透射电子显微镜观察肺组织中巨噬细胞损伤情况;ELISA法检测小鼠血清和肺泡灌洗液中白细胞介素-1β（interleukin-1β,IL-1β）、IL-6、IL-18、IL-1α和肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）水平;采用Western blotting检测肺组织NLRP3、凋亡相关的斑点样蛋白（apoptosis-associated speck-like protein containing CARD,ASC）、cleaved Caspase-1、pro Caspase-1、GSDMD-N以及GSDMD蛋白表达。人源单核细胞白血病THP-1细胞加入100 nmol/L佛波酯诱导24 h,贴壁后随机分为对照组、模型组、VX-765（500 nmol/L）组和黄芩素低、中、高剂量（3、10、30 μmol/L）组,除对照组外,采用1 μg/mL LPS联合5 mmol/L三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）刺激THP-1细胞建立细胞炎症模型,给予黄芩素或VX-765干预,采用CCK-8法检测细胞活力;ELISA法检测上清液中IL-1β、IL-18和IL-1α水平;LDH试剂盒检测上清液中乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活力;免疫荧光评估NLRP3炎症小体组装情况;采用膜联蛋白-V-PE（Annexin-V-PE）/7-氨基放线菌素（7-aminoactinomycin,7-AAD）试剂盒评价细胞焦亡情况;Western blotting检测细胞NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路相关蛋白表达。结果 在ALI小鼠模型中,与模型组比较,VX-765组和黄芩素组小鼠肺肿胀程度明显减轻（P<0.01）,肺组织损伤评分显著降低（P<0.01）,肺组织中巨噬细胞炎性病变得到缓解,血清及肺泡灌洗液中IL-6、IL-1β、TNF-α、IL-18、IL-1α水平明显降低（P<0.05、0.01）,肺组织NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1、pro Caspase-1、GSDMD-N以及GSDMD蛋白表达水平均显著降低（P<0.05、0.01）。在细胞炎症模型中,与模型组比较,VX-765组和黄芩素组THP-1细胞IL-1β、IL-18、IL-1α分泌量显著降低（P<0.01）,NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路相关蛋白表达水平明显降低（P<0.05、0.01）,NLRP3炎症小体组装明显被抑制（P<0.05、0.01）,LDH释放量及细胞焦亡率显著降低（P<0.01）。结论 黄芩素通过抑制NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路介导的细胞焦亡,从而改善LPS诱导的小鼠ALI。     

基于TXNIP/NLRP3/GSDMD信号通路探讨当归补血汤对糖尿病肾病大鼠足细胞焦亡的影响

目的:观察当归补血汤对糖尿病肾病(DKD)大鼠足细胞焦亡的影响,探讨其防治DKD及足细胞焦亡的可能作用机制。方法:将50只雄性SD大鼠随机分为造模组42只和正常组8只,造模组大鼠高糖高脂饮食6周结合链脲佐菌素(STZ)35 mg·kg^-1一次性腹腔注射制备2型糖尿病模型。造模成功后随机分为模型组、当归补血汤低剂量(0.72 g·kg^-1)组、当归补血汤高剂量(1.44 g·kg^-1)组、厄贝沙坦(0.017 g·kg^-1)组进行灌胃,正常组及模型组给予等体积生理盐水灌胃,每日1次,连续干预20周。给药期间定期检测各组大鼠空腹血糖(FBG),24 h尿蛋白(24 h-UTP);给药结束后采用过碘酸六胺银(PASM)染色观察肾组织病理形态学变化;透射电镜(TEM)观察足细胞超微结构变化;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-18(IL-18)水平;原位末端标记法(TUNEL)检测大鼠肾组织细胞DNA损伤情况;免疫组化法(IHC)检测大鼠肾组织硫氧还蛋白相互作用蛋白(TXNIP),半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1),消皮素D(GSDMD)蛋白表达水平;免疫荧光(IF)三标法检测核苷酸结合域样受体蛋白3(NLRP3)及肿瘤蛋白-1(WT-1)在足细胞的表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肾组织TXNIP/NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路蛋白及足细胞突触足蛋白(Synaptopodin)表达水平。结果:与正常组比较,模型组大鼠FBG,24 h-UTP显著升高,肾小球肥大,系膜增生,系膜外基质增加,基底膜增厚,出现K-W结节,肾小管上皮细胞空泡变性,足突融合或丢失,血清中IL-1β,IL-18含量明显升高,肾组织TUNEL阳性细胞明显增多,NLRP3在足细胞表达增多且WT-1在足细胞表达减少,Synaptopodin蛋白表达水平显著降低,TXNIP/NLRP3/Caspase-1/GSDMD蛋白表达水平显著升高(P<0.01);与模型组比较,当归补血汤高剂量组明显降低FBG,24 h-UTP水平,明显改善肾组织病理学,改善足细胞的损伤和丢失,减少肾组织TUNEL阳性细胞数,NLRP3在足细胞表达减少且WT-1在足细胞表达增多,升高Synaptopodin蛋白表达水平,降低TXNIP/NLRP3/Caspase-1/GSDMD蛋白表达水平(P<0.05,P<0.01)。结论:当归补血汤可能通过调控TXNIP/NLRP3/GSDMD信号通路,抑制足细胞焦亡以减少蛋白尿,从而延缓DKD的发展进程。     

芪地糖肾方调控NLRP3/Caspase-1/GSDMD通路介导高糖刺激肾小球内皮细胞焦亡的研究

目的 探究芪地糖肾方通过NOD样受体家族热蛋白结构域相关蛋白3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1/消皮素D蛋白(NLRP3/Caspase-1/GSDMD)通路介导高糖刺激的肾小球内皮细胞焦亡的作用。方法 将肾小球内皮细胞分为正常组、高糖组、芪地糖肾方组,分别予完全培养基、30 mmol/L高糖培养基、30 mmol/L高糖培养基+芪地糖肾方100μg/mL培养48 h,采用细胞免疫荧光染色法观察细胞中NLRP3表达情况及细胞骨架情况,采用Western blot法检测细胞中NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)、消皮素D蛋白(GSDMD)、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-18(IL-18)表达情况。结果 与正常组比较,高糖组细胞中NLRP3、Caspase-1、GSDMD、ASC、IL-18、IL-1β蛋白相对表达量均明显升高(P均<0.05),NLRP3荧光表达信号增强,细胞骨架损伤明显;与高糖组比较,芪地糖肾方组NLRP3、Caspase-1、GSDMD、ASC、IL-18、IL-...     

茯苓多糖调控NLRP3/细胞焦亡途径对HepG2肝癌细胞的抑制作用及机制

目的 通过观察茯苓多糖调控NLRP3介导细胞焦亡对HepG2肝癌细胞抑制作用,探讨茯苓多糖防治肝癌的作用机制。方法 将HepG2肝癌细胞分为对照组、茯苓多糖组(800μg/mL)、MCC950组(1μmol/L)、MCC950+茯苓多糖组(800μg/mL+1μg/mL)。CCK-8法检测茯苓多糖对肝癌HepG2细胞的抑制率并筛选药物浓度;划痕实验检测细胞迁移能力;荧光实时定量PCR法检测HepG2细胞NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1βmRNA转录水平;Western Blot检测HepG2细胞NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18蛋白表达情况;免疫荧光检测各组细胞Caspase-1的表达情况。结果 与对照组相比,茯苓多糖组对细胞有明显抑制作用,且800μg/mL茯苓多糖干预48 h后,细胞抑制效果最好;NLRP3、GSDMD、Caspase-1、IL-1βmRNA表达显著增高(P<0.05);NLRP3、GSDMD、Caspase-1、IL-1β、IL-18蛋白表达显著增高(P<0.05);且促进Caspase-1入核表达。...     

基于NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路探讨复方蛇龙胶囊对膜性肾病大鼠的作用

目的:观察复方蛇龙胶囊对膜性肾病大鼠核苷酸结合域样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)/白细胞介素(IL-1β)细胞焦亡信号通路的作用机制。方法:SD雄性大鼠分为正常组,模型组,复方蛇龙胶囊高、中、低剂量组,雷公藤多苷片组。给药结束后检测大鼠24 h尿蛋白(24 h-UTP)和血清总蛋白(TP)、血清白蛋白(ALB)、血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)、总胆固醇(TC)。马松(Masson)染色和电镜观察大鼠病理和足细胞超微结构;ELISA检测大鼠血清IL-1β、IL-18水平;荧光定量PCR和免疫组化法(IHC)检测肾脏组织中NLRP3、 Caspase-1、IL-1β、GSDMD的mRNA和蛋白表达水平。结果:病理显示肾脏纤维化明显;足突融合变宽,肾小球基底膜增厚;与模型组相比较,各给药组TP、ALB、Scr、BUN、TC、24 h-UTP及IL-1β、IL-18水平明显降低(P<0.05),NLRP3、 Caspase-1、IL-1β、GSDMD的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P<0.05)。结论:复方蛇龙胶囊可能通过抑制N...     

脑心通调控NLRP3/Caspase-1通路抑制脂多糖诱导的BV2细胞焦亡

目的:探索脑心通醇提物对脂多糖(LPS)诱导的小胶质细胞BV2焦亡的影响,并通过NOD样受体热蛋白结构域3(NLRP3)/半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)通路阐释其可能的作用机制。方法:LPS(1 mg·L^-1)体外诱导BV2细胞的同时,加入不同质量浓度脑心通醇提物(2,10,50 mg·L^-1)干预后,分别采用MTS法检测细胞活性,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和NLRP3的mRNA水平;免疫荧光法检测NLRP3蛋白表达的情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测NLRP3/Caspase-1通路关键蛋白表达。结果:与空白组比较,LPS(1 mg·L^-1)能明显降低BV2细胞活性,显著升高IL-1β,TNF-α及NLRP3 mRNA表达水平(P<0.01),且可提升NLRP3蛋白表达水平以及Caspase-1剪切体和前体蛋白的比值(Caspase-1 p20/Caspase-1)。与LPS组比较,脑心通醇提物(2,10,50 mg·L^-1)干预后,逆转了LPS导致的细胞活性降低(P<0.01),50 mg·L^-1脑心通醇提物可显著降低IL-1β,TNF-α及NLRP3 mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01),显著降低LPS诱导的NLRP3的高表达以及Caspase-1 p20/Caspase-1(P<0.01)。结论:脑心通能明显抑制LPS诱导的小胶质细胞焦亡,其作用机制与NLRP3/Caspase-1通路密切相关。     

柴胡加龙骨牡蛎汤对心肌梗死合并焦虑大鼠海马区NLRP3/GSDMD炎性信号通路的影响

目的探讨心肌梗死合并焦虑大鼠海马区NLRP3/GSDMD炎性信号通路变化及柴胡加龙骨牡蛎汤对大鼠海马区炎性损伤的作用效应。方法将60只SD大鼠随机分为假手术组9只、心梗并焦虑组17只、心梗组17只、心梗并焦虑+中药组17只。心梗组采用结扎冠状动脉左前降支方法进行造模;假手术组穿线不结扎;心梗并焦虑组和心梗并焦虑+中药组先采用空瓶刺激方法进行焦虑造模(周期21 d),于造模第15天采用结扎冠状动脉左前降支方法进行心肌梗死造模。心肌梗死造模后第2天,心梗合并焦虑+中药组给予柴胡加龙骨牡蛎汤10 mL/kg灌胃,其余组灌胃等量蒸馏水,均1次/d,连续7 d。灌胃结束后进行心脏超声检查,采用高架十字迷宫实验、旷场实验评价各组大鼠行为学,大脑海马区HE、尼氏染色观察脑神经元病理改变,免疫组化检测大鼠海马区NLRP3、Caspase-1、GSDMD表达情况,Western blot法检测大鼠海马组织中NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18蛋白表达水平。结果与心梗并焦虑组比较,心梗并焦虑+中药组左室射血分数(LVEF)、左室短轴缩短率(LVFS)均明显升高(P均<0.05),左心室舒张末期内径(LVIDd)和左心室收缩末期内径(LVIDs)均明显缩短(P均<0.05),大鼠进入开放臂次数所占比和开放臂停留时间所占比、大鼠水平运动得分和垂直运动得分均明显升高(P均<0.05)。心梗并焦虑组和心梗组大鼠海马区尼氏阳性面积均明显低于假手术组(P均<0.05),心梗并焦虑+中药组明显高于心梗并焦虑组和心梗组(P均<0.05)。心梗并焦虑组和心梗组大鼠海马区NLRP3、Caspase-1、GSDMD表达IOD值和海马组织中NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18蛋白表达水平均明显高于假手术组(P均<0.05),且心梗并焦虑组GSDMD表达IOD值和NLRP3、Caspase-1、IL-18蛋白表达水平均明显高于心梗组(P均<0.05),而心梗并焦虑+中药组NLRP3、Caspase-1、GSDMD表达IOD值和NLRP3、Caspase-1、GSDMD、IL-1β、IL-18蛋白表达水平均明显低于心梗并焦虑组(P均<0.05)。结论柴胡加龙骨牡蛎汤可能通过调控海马区NLRP3/GSDMD炎性信号通路,抑制心肌梗死合并焦虑大鼠海马区的炎性反应,缓解大鼠焦虑状态。     

三草降压汤对自发性高血压大鼠心脏NF-κB/NLRP3/IL-1β信号通路的影响

目的观察三草降压汤(Sancao Jianya decoction,SCD)对自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)心脏组织的NF-κB/NLRP3/IL-1β通路相关因子的表达。方法 50只雄性SHR大鼠,随机分为模型组、卡托普利组、SCD高剂量组、SCD中剂量组、SCD低剂量组,10只WKY大鼠作为对照组,分别灌胃给药8周后取材。检测各组大鼠动脉压、左心室重量指数(left ventricular mass index, LVMI)、心脏组织病理变化;酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)、白细胞介素1β(interleukin-1β, IL-1β)含量;Western blot法检测心脏组织中核因子κB(nuclear factorκB, NF-κB)、NOD样受体蛋白3(NOD-like receptor protein 3, NLRP3)、天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1, Caspase-1)、IL-1β蛋白表达;荧光定量PCR法检测NF-κB p65、NLRP3、Caspase-1、IL-1βmRNA的含量。结果与空白组相比较,模型组血压、LVMI、心肌病理损害、TNF-α、IL-1β含量、NF-κB/NLRP3/IL-1β通路相关因子的表达均显著增加(P0.05);与模型组相比,SCD高、中剂量组、卡托普利组均出现不同程度的血压下降、LVMI减低、心肌病理损害减轻(P0.05),各治疗组大鼠均出现不同程度TNF-α、IL-1β含量、NF-κB/NLRP3/IL-1β通路相关因子的表达下降。结论 SCD可调节NF-κB/NLRP3/IL-1β通路相关因子的表达、抑制炎症反应、保护高血压心脏损害,该通路可能是其发挥降压作用的分子学机制。     

温阳振衰颗粒对肾间质纤维化模型大鼠细胞焦亡及肾间质纤维化的影响

目的 观察温阳振衰颗粒对肾间质纤维化大鼠细胞焦亡及肾间质纤维化的影响,从NLRP3/Caspase-1通路探讨其干预机制。方法 50只SD大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、抑制剂组和温阳振衰颗粒组,每组10只。以结扎并剪断左侧输尿管建立肾间质纤维化大鼠模型,分别予相应药物干预,连续14 d。试剂盒检测血肌酐（SCr）、血尿素氮（BUN）含量,HE和Masson染色观察肾组织病理变化,免疫组化检测肾组织转化生子因子（TGF）-β1、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、Ⅰ型胶原蛋白（Col-Ⅰ）表达,Western blot和RT-PCR检测肾组织NOD样受体蛋白3(NLRP3)、半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)、白细胞介素（IL）-18、IL-1β蛋白和mRNA表达,免疫荧光双染法检测细胞焦亡。结果 与假手术组比较,模型组大鼠SCr、BUN含量显著增加（P<0.01）,肾小管扩张,炎性细胞浸润,间质纤维化明显,肾组织TGF-β1、α-SMA、Col-Ⅰ蛋白表达显著升高（P<0.01）,NLRP3、Caspase-1、IL-18、IL-1β蛋白和mRNA表达显著升高（...     

芍药苷对脑缺血再灌注损伤大鼠NLRP3炎症体信号通路相关因子表达的影响

目的观察芍药苷对脑缺血再灌注损伤大鼠NLRP3炎症体信号通路相关因子表达的影响,探讨其神经保护作用机制。方法 SPF级雄性SD大鼠48只,随机分为假手术组、模型组、芍药苷低剂量组、芍药苷高剂量组,每组12只。采用线栓阻断法制作大鼠脑缺血再灌注模型,缺血2 h后进行再灌注,再灌注后1 h腹腔注射芍药苷(2.5、5 mg/kg),每日1次,连续7 d。Zea Longa 5分评价方法对大鼠进行神经功能评分。ELISA检测大鼠血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α的含量。RT-PCR和Westernblot分别检测大鼠脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α、Caspase-1、NLRP1、NLRP3 mRNA和蛋白的表达。结果与模型组比较,芍药苷低、高剂量组大鼠神经功能评分各时点均降低,芍药苷低剂量组第7日和芍药苷高剂量组第3、5、7日神经功能评分差异有统计学意义(P0.05,P0.01);与假手术组比较,模型组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量均升高,大鼠脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α、Caspase-1、NLRP1和NLRP3m RNA和蛋白表达均上调;与模型组比较,芍药苷低、高剂量组大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α含量均降低,大鼠脑组织IL-1β、IL-6、TNF-α、Caspase-1、NLRP1、NLRP3 mRNA和蛋白表达显著下调(P0.01)。结论芍药苷对脑缺血再灌注损伤大鼠具有神经保护作用,其机制可能与抑制NLRP3炎症体信号通路分子的表达、减轻炎症反应相关。     

化瘀祛痰方对动脉粥样硬化家兔肝脏脂质沉积的影响

目的探讨化瘀祛痰方治疗动脉粥样硬化的可能作用机制。方法将60只雄性新西兰白兔随机分为空白组、模型组、化瘀祛痰方组、辛伐他汀组,每组15只。空白组普通饲料喂养,其他组高脂饲料喂养同时结合免疫损伤法建立动脉粥样硬化模型。造模8周后,化瘀祛痰方组给药剂量16 g/(kg·d),辛伐他汀组给药剂量1. 4 mg/(kg·d),空白组和模型组给予8 ml/(kg·d)生理盐水。4周后苏木素-伊红(HE)和油红O染色观察肝组织形态学改变; Elisa法检测家兔肝脏及血清中白细胞介素18 (IL-18)和白细胞介素1β(IL-1β)含量; Western blot法检测家兔肝脏含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶1 (Caspase-1)、含NLR家族Pyrin域蛋白3 (NLRP3)、黑素瘤缺乏因子2 (AIM2)、gasdermin D蛋白(GSDMD)蛋白表达。结果与空白组相比,模型组家兔肝组织肿胀明显、脂肪空泡清晰可见,胞浆内有大量脂滴蓄积;血清及肝脏组织内IL-18、IL-1β含量升高,细胞焦亡相关Caspase-1、GSDMD、NLRP3、AIM2蛋白表达水平上升(P 0. 05或P 0. 01)。与模型组相比,化瘀祛痰方组及辛伐他汀组脂肪空泡明显减少或消失,肝组织形态恢复或部分恢复正常;血清及肝脏组织内IL-18、IL-1β含量下降,细胞焦亡相关蛋白Caspase-1、GSDMD、NLRP3表达水平下降(P 0. 05或P 0. 01),AIM2蛋白表达水平无明显改变(P 0. 05)。结论化瘀祛痰方可能通过调控NLRP3/Caspase-1通路影响细胞焦亡,从而改善动脉粥样硬化家兔肝脏脂质沉积。     

淫羊藿苷通过抑制NLRP3炎性小体和Caspase-1通路减轻骨关节炎

目的:考察淫羊藿苷在治疗骨关节炎中的潜在价值,以及淫羊藿苷对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎性小体和半胱天冬酶-1(Caspase-1)的调控作用。方法:本研究通过脂多糖(LPS)诱导大鼠膝关节软骨细胞建立体外骨关节炎模型,通过碘乙酸单钠处理SD大鼠建立体内骨关节炎模型。通过乳酸脱氢酶漏出实验检测细胞毒性,通过MTT实验检测细胞活力。通过qRT-PCR检测NLRP3 mRNA的表达,通过Western Blotting检测NLRP3、IL-1β、IL-18、MMP-1、MMP-13、Collagen Ⅱ、Caspase-1、ASC和GSDMD的蛋白表达。用免疫荧光法和免疫组化法检测软骨细胞和大鼠软骨中的NLRP3表达;番红O/固绿染色评价大鼠软骨病变。结果:与LPS组比较,LPS+ICA组LDH的漏出率、IL-1β、IL-18、MMP-1、MMP-13、NLRP3、Caspase-1、ASC和GSDMD的表达水平明显降低,而Collagen Ⅱ明显升高(P<0.05)。与LPS+ICA+pcDNA3.1-NC组比较,LPS+ICA+pcDNA3.1-NLRP3组的乳酸脱氢酶漏出率及NLRP3炎性小体相关蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。与对照组比较,OA组大鼠软骨组织中NLRP3阳性细胞数量显著增加,而OA+ICA组的NLRP3阳性细胞数量明显降低(P<0.05)。与OA组比较,OA+ICA组的NRLP3、IL-1β、IL-18、MMP-1、MMP-13、Caspase-1、ASC和GSDMD的蛋白表达水平明显降低,而Collagen的蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:淫羊藿苷通过抑制NLRP3和Caspase-1信号转导来抑制脂多糖诱导的软骨细胞损伤和细胞焦亡,从而减轻大鼠骨关节炎。     

黄连温胆汤对IGT大鼠骨骼肌细胞焦亡经典通路的影响

目的 基于NOD样受体蛋白3（NLRP3）/半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1（Caspase-1）/消皮素D（GSDMD）/白细胞介素-1β（IL-1β）/白细胞介素-18（IL-18）经典通路,探讨黄连温胆汤对糖耐量低减（IGT）大鼠骨骼肌细胞焦亡的影响,并阐释其可能作用机制。方法 健康雄性SD大鼠予45%脂肪热能的高脂饲料长期喂养20周诱导IGT大鼠模型。造模成功后将实验分为4组,分别为正常组、模型组、阳性药组（盐酸二甲双胍,0.05 g·kg^-1·d^-1）和黄连温胆汤组（7.8 g·kg^-1d^-1）,正常组和模型组则给予相应体积蒸馏水,各组给药体积均为10 mL·kg^-1d^-1,连续灌胃给药4周。实验结束后取血分离血清并取大鼠骨骼肌进行液氮保存。采用酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清IL-1β和IL-18含量;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测骨骼肌组织NLRP3,Caspase-1,GSDMD mRNA及蛋白表达水平;免疫荧光法观测骨骼肌组织GSDMD,IL-1β和IL-18蛋白表达;苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠骨骼肌组织病理学变化。结果 与正常组比较,模型组大鼠血清中IL-1β,IL-18含量和骨骼肌组织中NLRP3,Caspase-1,GSDMD mRNA及蛋白表达水平均显著升高（P<0.01）;免疫荧光检测显示IGT大鼠骨骼肌组织GSDMD,IL-18和IL-1β蛋白含量显著上升（P<0.01）;HE染色可见骨骼肌组织具有明显病理形态变化。与模型组比较,黄连温胆汤和盐酸二甲双胍组均可有效降低IGT大鼠血清IL-18和IL-1β含量和骨骼肌组织NLRP3,Caspase-1,GSDMD mRNA和蛋白表达（P<0.01）;免疫荧光技术结果表明黄连温胆汤能有效降低IGT大鼠骨骼肌组织GSDMD,IL-1β和IL-18蛋白含量（P<0.01）;HE染色结果表明黄连温胆汤能改善大鼠骨骼肌组织形态变化。结论 黄连温胆汤对IGT大鼠骨骼肌细胞焦亡具有抑制作用,其作用机制与调节细胞焦亡经典途径中NLRP3/Caspase-1/GSDMD/IL-1β/IL-18通路具有重要关系。     

针灸预处理对急性胃黏膜损伤大鼠GRP78/Caspase-12/CHOP信号通路的影响

目的:探讨针灸预处理对急性胃黏膜损伤大鼠葡萄糖调节蛋白78(GRP78)/半胱氨酸蛋白水解酶-12(Caspase-12)/CCAAT增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)信号通路的影响。方法:将52只大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸预处理组、针刺预处理组,每组13只。正常组、模型组仅固定不作处理;对针刺预处理组大鼠行针刺处理;对艾灸预处理组大鼠行足三里穴、中脘穴艾灸,20 min/次,1次/d,连续灸7 d。对模型组、针刺预处理组、艾灸预处理组大鼠进行无水乙醇结合阿司匹林混悬液灌胃建立急性胃黏膜损伤模型。观察大鼠一般情况及胃黏膜损伤组织病理学变化;酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测大鼠血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、环氧化酶-2(COX-2)浓度;免疫组织化学法检测大鼠GRP78、Caspase-12、CHOP水平。结果:模型组大鼠可见上皮细胞结构破坏不完整,胃黏膜组织损伤明显,胃黏膜损伤指数(UI)评分显著高于正常组(P<0.05);与模型组比较,针刺预处理组、艾灸预处理组大鼠UI指数评分显著降低(均P<0.05)。与正常组比较,模型组大鼠血清...     

电针调控NLRP3/Caspase-1/IL-1β信号通路对急性结肠炎症大鼠的腧穴特异性研究

目的 探究电针不同腧穴对急性结肠炎症模型大鼠细胞焦亡通路NOD样受体蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸酶-1(Caspase-1)/白细胞介素-1β(IL-1β)信号通路的影响及不同腧穴对急性结肠炎症是否具有特异性。方法 将36只SD大鼠随机分为空白组、模型组、各电针干预组（分别为天枢组、上巨虚组、足三里组、大肠俞组），每组6只。除空白组外，其余各组均采用冰乙酸灌肠法造模。给予各电针干预组电针治疗3 d，每天1次，留针20 min。苏木精-伊红（HE）染色法观察各组大鼠结肠组织病理改变；免疫组织化学（IHC）法检测NLRP3在各组大鼠结肠组织的阳性表达；ELISA测定大鼠血清中IL-1β的含量；Wsetern blotting测定大鼠结肠中NLRP3、Caspase-1的蛋白表达。结果 与空白组相比，模型组大鼠血清中IL-1β含量显著升高（P <0.05）；与模型组相比，各电针干预组大鼠血清中IL-1β含量均下降（P <0.05）；足三里组与天枢组、大肠俞组、上巨虚组相比，IL-1β明显降低（P <0.05）。与空白组相比，模型组大鼠结肠组织中NLRP3蛋白表达显...