睫状神经营养因子促进大鼠周围神经再生的实验研究

探讨局部应用睫状神经营养因子（ｃｉｌｉａｒｙｎｅｕｒｏｔｒｏｐｈｉｃｆａｃｔｏｒ,ＣＮＴＦ）对大鼠周围神经损伤后再生的影响。方法３４只大鼠分为４组,１～３组每组各１０只,切除两侧坐骨神经各１０ｍｍ并用硅胶管套接,左侧套管内注入ＣＮＴＦ５０μｇ,右侧注入生理盐水对照。术后１、３、４个月分别进行电生理和组织学检查。另４只鼠于术后３个月行ＨＲＰ逆行示踪检查。结果ＣＮＴＦ治疗组术后１、３、４个月时的电生理和组织学检查结果均明显优于对照组。相应节段脊髓前角标记辣根过氧化物酶的神经元明显多于对照组。结论ＣＮＴＦ可促进周围神经特别是运动神经损伤后的再生。     

神经营养因子与周围神经再生研究现状

神经营养因子是神经再生微环境中的重要成分 ,具有维持神经元存活和促轴索再生作用。应用外源性神经营养因子可产生类似靶源性神经营养因子的损伤神经元保护作用。虽然不同的神经营养因子对神经元的保护具有一定的选择性 ,但在多数情况下 ,不同的神经营养因子可作用于同一神经元受体 ,起协同和补充作用 ;也有同一神经营养因子激活多个受体 ,产生复合生物学效应。本文综述了几种神经营养因子对运动神经元的影响以及治疗运动神经病和神经损伤的研究进展。1　周围神经损伤与神经再生Ｈｏｕｓｅ和Ｂｒａｃｋ将面神经损伤分为 5级 :神经生理阻断…     

神经营养因子在周围神经损伤再生中作用的研究进展

随着当今社会的飞速发展，周围神经损伤再生已成为学者们研究的焦点，人们对影响周围神经损伤再生的各个环节进行了大量的科研探索，在应用束膜和外膜缝合技术的基础上，已将现代分子生物学的先进成果应用到周围神经损伤再生的研究中来，并在理论和技术上取得了巨大成果。一致认为受损伤的周围神经再生需要合适的微环境，其中神经营养因子（Neurotrophic factors，NTFs）是一个极其重要的影响因素。     

大鼠面神经损伤后面运动神经元存活情况和脑源性神经营养因子代谢改变

目的：研究面神经损伤后，大鼠面运动神经元（facial motoneuron,FNM）存活情况和脑源性神经营养因子（brain derived neurotrophic factor,BDNF)代谢改变。方法：制造大鼠右面神经损伤模型，应用Cresyl Violet染色、原位杂交和免疫组化方法，观察计数FMN细胞，检测BDNF mRNA及其蛋白在FMN的表达，并结合计算机图像分析技术测定双侧FMN数目之比及其反应产物的阳性细胞数比和灰度值百分比。结果：BDNF mRNA及其蛋白阳性细胞分布于正常面神经核各亚核，除神经元细胞外其周围胶质细胞也染色，面神经损伤后1d，损伤侧面神经核BDNF mRNA及其蛋白阳性神经元细胞和胶质细胞数量及染色强度均快速增高；面神经损伤后不同时间组FMN细胞存活率与正常组比较差异均无显著性（P＞0.05）。结论：正常FMN可能存在BDNF的自分泌和旁分泌作用，面神经损伤后这种作用迅速增强；面神经外周损伤后，未发现损伤导致的面运动神经元数目发生改变。     

脑源性神经营养因子缓释微球对周围神经损伤大鼠的神经保护作用

目的 观察脑源性营养因子缓释微球(BDNF-PLGA缓释微球)对大鼠周围神经损伤的保护作用。方法 采用复乳化溶剂挥发法制备BDNF-PLGA缓释微球。40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、BDNF组和BDNF-PLGA缓释微球组;除假手术外,其它30只SD大鼠,制备坐骨神经钳夹损伤模型。术后神经损伤局部注射BDNF-PLGA缓释微球,观察大鼠的大体形态、步态、关节活动等情况;术后4周进行神经行为学评分,检查神经传导速度(NCV)、波幅、潜伏期和复合肌肉动作电位(CMAP)的幅度,以及组织病理学观察。结果 BDNF-PLGA缓释微球组明显改善坐骨神经损伤大鼠的步态、关节活动等一般状况。BDNF-PLGA缓释微球可有效地改善大鼠损伤神经功能,到第4周时已基本恢复正常,对神经功能恢复明显快于BDNF组。与模型组比较,BDNF-PLGA缓释微球组显著提高大鼠NCV,增大电位波幅,缩短潜伏期(P<0.01)。术后4周,BDNF-PLGA缓释微球组的大鼠坐骨神经NCV、波幅和潜伏期,CMAP波幅及恢复率均显著优于BDNF组。BDNF-PLGA缓释微球明显改善坐骨神经髓鞘和轴突结构破坏,髓神经纤维的髓鞘肿胀、碎裂,神经纤维中的空泡及空泡变性等组织病理学改变。结论 BDNF-PLGA缓释微球对周围神经损伤具有显著的保护作用。     

脑源性神经营养因子与脊髓损伤修复作用的研究

脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)是神经营养因子家族中的一员,其生物学效应十分广泛,可促进中枢及周围神经元的生长、存活及分化.至今,对BDNF的研究已较为深入,尤其是其对脊髓损伤修复的作用.因此,本文就BDNF的生物学特性及其在脊髓损伤修复作用的研究作一介绍.     

应用显微外科技术及经皮神经肌电刺激仪修复周围神经损伤

目的 探讨应用显微外科技术治疗周围神经损伤的临床效果.方法 将58例患者分成对照组28例,治疗组30例.对照组在显微镜下行外膜加束膜松解及外膜缝合或束间固定加外膜缝合,神经缺失＞2.5 cm行自体腓肠神经移植;治疗组显微外科技术治疗的基础上应用便携式经皮神经肌电刺激仪电刺激治疗.结果 治疗组优良率为87％,对照组为61％,治疗组治疗效果明显优于对照组(P＜0.05).结论 在显微外科修复的基础上应用经皮神经肌电刺激治疗有利于受损神经的功能恢复.     

经皮神经肌电刺激治疗周围神经损伤的探讨

目的 探讨经皮神经肌电刺激促进周围神经再生的临床价值。方法 采用丹迪Qmtata型肌电图仪对78例周围神经损伤患者，进行经皮神经肌电刺激治疗，观察受损神经功能恢复情况并做治疗前后肌电图对比分析。结果 本组78例臂丛神经、坐骨神经不全损伤者，经1—10个疗程的治疗，受损神经功能恢复治愈率达67．9％，有效率达91％。结论 经皮神经肌电刺激治疗，可促进周围神经的再生，改善受损神经局部血液循环，缓解或消除疼痛，提高神经肌的兴奋性，恢复神经功能。     

胶质源性神经营养因子在成年大鼠中枢神经系统中的表达

为探讨胶质源性神经营养因子（ＧＤＮＦ）在中枢神经系统中的表达，采用免疫组化法检测该因子在成年大鼠中枢神经系统部分区域的分布。结果发现大脑皮质各层有极弱阳性的神经元；小脑皮质分子层及蒲肯野细胞呈强阳性反应；脊髓灰质中阳性神经元广为分布，尤以前角、后角Ⅰ、Ⅱ板层及Ｃｌａｒｋ核明显。此外，脊髓胶质细胞和中央管室管膜上皮均有ＧＤＮＦ阳性信号表达，表明ＧＤＮＦ对成年大鼠中枢神经系统内的多种神经元群均有功能作用。     

脊髓脑源性神经营养因子表达水平评估大鼠坐骨神经缺损修复程度

目的研究应用脊髓脑源性神经营养因子(BDNF)表达程度评价大鼠坐骨神经缺损修复情况。方法取大鼠30只,随机分成正常组、自体神经组和硅胶管组,每组10只。自体神经组将剪断的10 mm神经缝合于原处,硅胶管组用10 mm医用硅胶管桥接神经缺损,正常组不手术。饲养4个月,于脊髓腰膨大处取材,切片,免疫荧光染色,荧光显微镜下观察。结果各组脊髓前角内均有BDNF表达,表现为点状红色荧光,均匀弥漫分布,胶质细胞内及周围均有分布,未染出神经元。光密度正常组>自体神经组>硅胶管组。结论应用脊髓脑源性神经营养因子表达程度可以评价周围神经损伤的修复情况。     

神经生长因子修复动眼神经损伤的实验研究

目的 探讨外源性神经生长因子(nerve growth factor,NGF)对大鼠动眼神经损伤后功能修复的影响.方法 健康S-D大鼠30只均分3组,正常对照组(10只),动眼神经不损伤,其余20只分为两组,均在海绵窦区将动眼神经切断后给予缝合,第一组大鼠每天大剂量靶器官注射外源性神经生长因子,第二组不给NGF作为损伤对照,术后评估神经功能恢复情况并行动眼神经解剖、组织学研究.结果 注射NGF的大鼠动眼神经新生神经纤维数量明显增加(P＜0.01),对上直肌特异性支配作用优异,眼外肌功能恢复满意,但中脑运动神经元数量无明显差别(P＞0.05).结论 神经生长因子对动眼神经损伤后的功能修复有较好的促进作用.     

Effect of glial cell line-derived neurotrophic factor on peripheral nerve regeneration in adult rat

Objective: To study the effect of glial cell line-derived neurotrophic (GDNF) on adult peripheral nerve regeneration. Methods: Transectioned sciatic nerve in adult rats was sutured into silicone channel. GDNF or SAL solution was injected into the silicone channels during operation. Four weeks later, the effect of GDNF on axonal regeneration was evaluated by degenerative neurofiber staining and HRP retrograde tracing. Results: Compared with SAL group, the percentage of degenerative neurofiber areas decreased from 17.3% to 1.9% ( P＜0.01 ) and the ratio of labeled spinal somas number was significantly increased from 43.5% to 68.3% ( P＜0.01 ) in GDNF group. Conclusion: The results suggest that exogenous GDNF can obviously enhance adult peripheral nerve regeneration.     

CNTF在周围神经损伤及再生中的表达和分布

目的：探讨周围神经损伤及修复后神经干睫状神经营养因子（CNTF）的表达及分布，方法：以犬喉返神经损伤及修复再生为实验模型，采用原位杂交及免疫组织化学技术，结合图像分析技术检测CNTFmRNA及其蛋白反应产物的灰度及面积。结果：正常神经CNTF位于神经膜细胞中，神经切断后远段神经CNTF表达迅速下降，6周后消失，随着神经的再生CNTF表达逐渐增加，表达产物分布于包绕再生轴突及髓鞘的神经膜细胞质中，CNTF蛋白还出现于再生的轴突中，神经再生完成后，表达仍明显低于正常状态，近段神经干也出现类似远段的改变。结论：再生神经CNTF的表达呈下调型并与轴突再生有关，CNTF的重分布为神经再生提供合适的微环境。     

外源性睫状神经营养因子对离断面神经修复的实验研究

OBJECTIVE: To study the role of extrinsic (CNTF) in the regeneration of severed facial nerve in cats. METHOD: The facial nerve in temporal bone of adult cats were severed and the severed ends were connected with CNTF or saline applied at the connection. Electrophysiological examination and immunocytochemistry were performed with immunoelectron microscope for morphological analysis at 2, 4 and 8 weeks after the operation. RESULTS: Two weeks after operation, both CNTF and saline groups failed to exhibit muscular excitement by facial nerve stimulation, but the amount of myelinated nerve fibers had statistical difference between the two groups (P<0.05). At 4 weeks, the latency of the facial muscle excitement was 7.832+/-2.695 ms in CNTF group and 16.120+/-3.516 ms in saline group, and the average number of myelinated axons was significantly different between the two groups (1,435+/-318 vs 957+/-269, P<0.05). At the 8th weeks, the latency of facial muscle excitement was reduced to 3.125+/-0.165 ms in CNTF group and to a comparable level of 3.095+/-0.178 ms in saline group (P>0.05), and the average number of myelinated axons increased to 1,695+/-283 and 1,543+/-320 respectively in the two groups (P>0.05). Significant increase of Schwann cells was noted in both groups at this stage. CONCLUSION: Local application of CNTF may enhance facial early-stage nerve regeneration in adult cats, but its long-term effects remain unclear.     

外源性睫状神经营养因子对离断面神经修复的实验研究

目的 探讨应用外源性睫状神经营养因子(CNTF)对成年猫面神经损伤后的再生修复作用。方法 猫颞骨内面神经横断损伤后端端对合,局部应用CNTF作实验组,对照组用同等量生理盐水(SAL);于术后2、4和8周各组进行电生理、免疫组织化学细胞化学技术结合免疫电镜观察及形态学分析。结果 术后2周两组电刺激面神经均未诱发面肌兴奋,有髓纤维计数实验组(834±326)、对照组(235±152)t检验(P<0.05),有显著意义。术后4周CNTF组,面神经复合肌动作电位潜伏期实验组(7.832±2.695)、对照组(16.120±3.516);有髓神经纤维数实验组(1435±318)、对照组(957±269),有显著性差异。术后8周CNTF组,面神经复合肌动作电位潜伏期实验组(3.125±0.156)、对照组(3.095±0.178),有髓神经纤维数实验组(1695±283)、对照组(1543±320),t检验(P>0.05),两组差异均无明显意义。但髓鞘厚度较均匀、结构尚完整,轴突再生明显,雪旺细胞增多。结论 局部应用CNTF在正常猫神经损伤的较早期(4周左右)有促进再生修复作用,但远期作用尚不明确。     

重组人胶质细胞源性神经营养因子对大鼠周围神经再生的作用

目的：研究胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)对周围神经再生的作用,方法：硅胶管套接大鼠切断了的坐骨神经,术中一次性将GDNF、生理盐水（SAL）分别加入硅胶管中,术后4周,应用溃疡神经纤维染色法、辣根过氧化物酶（horseradish peroxidase,HRP)逆行追踪技术观察GDNF对轴突再生的影响。结果：与SAL组相比,GDNF组溃变神经纤维面积明显减少,SAL组溃变纤维面积百分率为17．3％,GDNF组为1．9％（P＜0．01）;GDNFXEG组脊髓HRP标记胞体显著增加,SAL组标记胞体数的百分率为43．5％,GDNF组为68．3％（P＜0．01）。结论：外源性GDNF能明显促进周围神经再生。     

Experimental studies on peripheral nerve regeneration enhanced by nerve growth factor

Summary The effect of exogenous nerve growth factor(NGF) examined on the neural repair of adult rabbit sciatic nerve was evaluated in the present study. A nerve regeneration chamber was created by suturing the proximal and distal ends of a transected sciatic nerve into a silicone chamber, A gap of 6 mm in chamber was left after removal of a 3mm piece of nerve in the distal ends and insertion of the proximal andl distal stumps into the chamber. Animals were operated on bilaterally, one side of the chamber was filled with a 1 mg/ml NGF/normal saline(NS) (experimental)and the contralateral side with NS(control). The regenerated nerves from within the silicone chamber were dissected and fixed 1 to 5 weeks following surgery for histological studies at both the light microscopic and ultrastructural levels. The NGF chamber showed a more mature regenerated nerve based on a larger diameter of the regenerated nerve trunk, a great number of axons, and thicker myelin sheaths. The project was supported by National Natural Science Foundation of China.     

神经再生素促进大鼠坐骨神经损伤后再生

目的:探讨神经再生素(NRF)对大鼠坐骨神经损伤后再生的影响.方法:SD大鼠30只,雌雄各半,随机分为3组:NRF低、高剂量组和空白对照组.分别于坐骨神经夹伤术后10、15、20 d测定大鼠坐骨神经功能指数(SFI),分离出大鼠双侧坐骨神经行电生理学检测,计算神经干动作电位恢复率;各组随机选取2只大鼠,应用透射电镜观察再生坐骨神经超微结构;其余大鼠行光镜下观察脊髓腰膨大(L4～L6)、夹伤远端处坐骨神经、损伤侧腓肠肌组织,并测定脊髓前角运动神经元数、再生有髓神经纤维数、腓肠肌肌细胞截面积等指标.结果:术后10 d各组SFI无显著差异,术后15 d仅仅高剂量组SFI明显优于对照组(P＜0.01),术后20 d高、低剂量组SFI均优于对照组(P＜0.01,P＜0.05);术后20 d高、低剂量组及对照组大鼠坐骨神经干动作电位的恢复率分别为(57±26)%、(44±15)%、(31±9)%,其中高剂量组与对照组相比有显著差异(P＜0.05);高剂量NRF组的有髓神经纤维成熟度优于对照组,而变性纤维少于对照组;光镜下NRF高剂量组再生神经纤维排列致密整齐、结构均匀,腓肠肌肌细胞饱满、排列整齐,双侧脊髓前角运动神经元更接近;NRF高剂量组脊髓前角运动神经元计数、有髓神经纤维计数均显著高于对照组(P＜0.05,P＜0.01),NRF高、低剂量组腓肠肌肌细胞截面积显著高于对照组(P＜0.01,P＜0.05).结论:NRF能促进坐骨神经再生及其功能恢复.     

一氧化氮在大鼠短暂性局灶性脑缺血损伤中对神经生长因子和脑源性神经营养因子表达的影响

目的 采用大脑中动脉梗死(middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型,研究大鼠脑缺血再灌注后不同时间点脑缺血半暗带区神经生长因子(nerve growth factor,NGF)和脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)表达的变化,以及一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS)抑制剂 N-硝基-L-精氨酸甲酯(Nω-nitro-L-argininic methyl ester, L-NAME)对脑缺血大鼠再灌注后NGF和BDNF表达的影响,探讨脑缺血损伤的深层机制。方法 将42只健康雄性Sprague-Dawley大鼠采用数字表法随机分为7组:假手术(Sham)组;MCAO再灌注0 h(MCAO 0 h)组;MCAO再灌注6 h(MCAO 6 h)组;MCAO再灌注12 h(MCAO 12 h)组;MCAO再灌注24 h(MCAO 24 h)组;MCAO再灌注72 h(MCAO 72 h)组以及MCAO 24 h+L-NAME 组(于MCAO前30 min腹腔注射L-NAME,剂量为1 mg/kg)。每组6只大鼠。采用改良线栓法制备大鼠MCAO再灌注模型,于缺血90 min 后拔出线栓进行再灌注。免疫荧光染色法检测再灌注大鼠脑组织缺血半暗带区NGF和BDNF的表达。免疫荧光双标染色法将NO所致的组织损伤标志物3-硝基酪氨酸(3-nitrotyrosine, 3-NT)分别与BDNF和NGF共定位。结果 MCAO组大鼠再灌注后0、6 h,脑缺血半暗带区域几乎未见NGF和BDNF阳性细胞。再灌注12 h,可见NGF和BDNF阳性细胞。再灌注24 h,半暗带区NGF和BDNF阳性细胞数较再灌注12 h组进一步增多(P<0.05)。至再灌注72 h,半暗带区NGF和BDNF阳性染细胞数较再灌注24 h组减少(P<0.05)。MCAO再灌注24 h组大鼠缺血半暗带区,3-NT分别与NGF和BDNF免疫荧光染色共定位。Sham组大鼠未见3-NT和NGF双标阳性细胞,MCAO再灌注24 h组大鼠半暗带区可见大量3-NT和NGF双标阳性细胞。给予L-NAME后,半暗带区3-NT和NGF双标阳性细胞数目比MCAO 24 h组明显减少(P<0.05)。Sham组大鼠未见 3-NT和BDNF双标阳性细胞,MCAO再灌注24 h组大鼠半暗带区可见大量3-NT和BDNF双标阳性细胞。给予L-NAME后,缺血大鼠半暗带区3-NT和BDNF双标阳性细胞数目比MCAO 24 h组明显减少(P<0.05)。结论 脑缺血再灌注可引起大鼠脑组织缺血半暗带区NGF和BDNF表达上调,最初的上调出现在再灌注12 h左右,随再灌注时间延长,NGF和BDNF表达进一步增加,至再灌注24 h达到高峰,随后在再灌注72 h下降。L-NAME通过抑制NOS活性,减少NO的产生,减少3-NT形成,进而引起NGF和BDNF表达下降,说明脑缺血再灌注过程中,NO促进NGF和BDNF的表达。     

缝线粘附重组pcDNA3-GDNF-GFP质粒对周围神经损伤后神经元保护的实验

目的 研究周围神经损伤后新的修复方法和胶质细胞源性神经营养因子（GDNF）对坐骨神经损伤大鼠脊髓神经元的保护作用.方法 50只雌性Wistar大鼠制成右侧坐骨神经缺损动物模型,随机分为实验组和对照组.实验组使用粘附pcDNA3-GDNF-GFP的缝线,对照组使用粘附pcDNA3的缝线进行坐骨神经的缝合修复.术后1周、8周使用激光共聚焦显微镜检测GDNF在脊髓神经元的表达;术后12周行脊髓神经元尼氏染色和右侧坐骨神经电生理检查.结果 实验组神经元有绿色荧光表达,证明转染成功;尼氏染色发现神经元数目多于对照组,实验组神经的传导速度、动作电位的峰值及潜伏期分别是19.82±1.90 m/s、3.47±0.32 mV、0.36±0.03 ms,明显高于对照组.结论 使用携pcDNA3-GDNF-GFP重组质粒的缝线修复损伤的周围神经,可以对脊髓神经元产生营养保护作用并促进周围神经的再生.