PCR技术检测患者血清HBV DNA定量分析

本文采用荧光信号能量转移方法对109例乙肝患者血清进行了PCR定量的HBV-DNA检测，现将结果报告如下。     

应用PCR技术对献血员HBV感染状况的观察分析

输血后乙型肝炎的发生与检查献血员HBV标志方法的灵敏性有很大关系。本文应用RPHA、RIA、FLISA、HBV-DNA探针及聚合酶链反应(PCR)技术对150例献血员血清中HBV标志进行了     

PCR检测Rh血型C/c基因型

目的：建立Rh血型系统C/c基因分型的方法，检测人群中C/c基因频率。方法：用快速盐析法抽提样本DNA，用PCR检测C/c基因型。结果：本组RhD阳性人群中，C基因型频率为0．674，c基因型频率为0．326。RhD阴性人群中，C基因频率为0．234，c基因频率为0．766。结论：RhD阳性与阴性人群C和c基因频率存在明显的差异。RhD阳性人群以C为主，RhD阴性人群中以c为主。     

癌症的PCR诊断

1985年Mullis首创的多聚酶链反应(PolymeraseChain Reaction,PCR)是一划时代的发明。该技术通过DNA合成、变性和退火反复循环,体外选择性扩增DNA片段。扩增产物呈指数级增多,理论上靶DNA片段浓度每一周期反应后增加一倍。例如,经过20次周期扩增后,靶DNA浓度可扩增100万倍(2~(20))。因此它可以用以检测和分析极少量的核酸成分。最初用于PCR的DNA多聚酶是Klenow酶,操作十分复杂。近年,Gelfand分离纯化了热稳定的DNA多聚酶Tagpolymerase,使PCR简化,进而自动化。     

定量PCR法检测人巨细胞病毒感染的研究进展

人巨细胞病毒(HCMV)在人群中感染相当普遍,可引起免疫力低下者复发感染,造成严重的HCMV病。建立快速、灵敏且特异的检测方法,以便及时给予抗病毒治疗,可降低疾病的发生率及严重性。定量PCR具有灵敏、特异、快速、简便、可定量等优点,现已广泛应用于临床HCMV感染性疾病的检测中。该文就不同定量PCR法在检测HCMV感染中的应用及其优缺点作一综述。     

随机引物PCR法基因分型肺炎克雷伯菌

目的：对肺炎克雷伯菌进行随机引物PCR(AP-PCR)法基因分型。方法：以单一随机引物及优化的反应体系对临床分离的199株肺炎克雷伯菌(K．pneumoniae)进行AP-PCR分析并按指纹图上DNA条带数及片段大小绘制基因分型图谱。结果：199株临床分离K．pneumoniae共得158种AP-PCR型。结论：AP-PCR法可将K.pneumoniae分型158种。     

定量PCR技术

聚合酶链反应（ＰＣＲ）是模拟ＤＮＡ体内复制过程,在体外将ＤＮＡ片段加人工扩增的技术,有许多因素都可以影响ＰＣＲ的扩增效率,导致常规ＰＣＲ的特异性不强,准确性不高,为此,大量学者设计了定量ＰＣＲ技术,从克服各种因素对ＰＣＲ扩增的干扰,从而提高ＰＣＲ的特异性及准确性,本文对定量ＰＣＲ技术进行了简要的综述。     

PCR检测淋球菌的探讨

聚合酶链反应具有灵敏度高特异性强、快速高效的特点，在病原微生物检测领域有广阔的前景。本文作了ＰＣＲ检测淋球菌的探索。受试５１株淋球菌全部呈阳性反应，被测的２０４例泌尿生殖道分泌物中９５例阳性，占４６．６％，明显高于培养阳性。１７株非淋球菌均为阴性，无交叉反应。从而提示ＰＣＲ检测淋球菌在某些有条件的实验室是可取的，满意的方法。     

梯度PCR在基因扩增研究中的应用

探讨和尝试一种较为迅速确定最佳退火温度的方法来扩增目的基因。方法：采用梯度PCR对醛固酮合酶基因（CYP11B2）进行扩增,通过凝胶呈像技术判断CYP11B2基因最佳退火温度。结果：与普通PCR相比,梯度PCR能够迅速地确定CYP11B2基因的最佳退火温度。结论：梯度PCR简单、直观、快速,适用于各种核酸分子的扩增,具有高效率、高通量的优点,有着广阔的应用前景。     

定量PCR

随着分子生物学在医学领域的广泛应用，对检测标本的核酸定量已显得十分必要，ＰＣＲ技术是一种较为理想的方法，本文介绍了近几年国外在这方面的研究进展。     

PCR技术及其进展

DNA重组技术的出现，能用分子克隆研究单个基因，但必须依赖于细胞分裂时质位或其它载体携带的DNA的复制。R．K．SaiKi和K．B．MSllis分别于1985年和1987年发展了多聚酶链反应（polyIDeraseChainreaction，PCR）技术，可在体外用简单酶促反应以一个DNA模板大量扩增特异DNA片段。从复杂基因组得到纯的特异DNA片段，用传统的克隆技术需几周甚至几个月，用PCR则只需几小时。克隆开始常需百万分子DNA，PCR却少到仅需1分子，甚至不需要纯的、未受损伤的模板DNA。PCR是受DNA聚合酶催化，以某段目标DNA为模板，以寡核着酸链为…     

PCR污染的来源及预防

聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)能高效扩增目的DNA片段,在数h内完成20～50个循环,就可以使目的DNA扩增效百万倍。现已广泛用于基因的结构与功能的研究,并大大地推动了分子生物学及有关学科的飞速发展。 PCR不仅可用于基因的分离、克隆和核酸序列     

检测HIV-1准种的终点有限稀释PCR技术的建立

R共获得65条c2-v3-c3准种序列、101条p17准种序列;HIV-1前病毒水平介于1.34～53.76拷贝/106个PBMC之间.c2-v3-c3及p17核苷酸序列系统进化树分析表明,不同患者的序列分开、同一患者的序列特异聚集在一起.氨基酸序列比对分析表明,HIV-1感染早期患者体内HIV-1准种序列比较单一,随着感染时间的增加,HIV-1准种趋于复杂化.结论 本研究建立的独特终点有限稀释PCR技术检测HIV-1准种灵敏度高、特异性好、高通量,可用于低水平病毒载量HIV-1感染者HIV-1准种研究.     

1型HIV感染多重PCR检测方法的建立

重复性,能覆盖我国最主要的流行病毒株.     

PCR方法在血液病研究中的应用

ＰＣＲ方法在血液病研究中的应用朱平聚合酶链反应（ＰＣＲ）是一种利用酶在体外大量合成ＤＮＡ特异性片段的方法。１９８３年Ｍｕｌｌｉｓ首先利用ＤＮＡ多聚酶，建立了体外大量扩增ＤＮＡ片段的方法，１９８５年Ｓａｉｋｉ用以检验血液系统有名的分子病──镰状细胞贫血...     

多种一步法快速提取DNA对肺炎支原体PCR检测的影响

目的 对比不同一步法提取DNA在肺炎支原体PCR检测中的效果及应用范围,为临床标本中肺炎支原体的检测提供依据。方法 以两种经典的DNA提取一步法（ROSE和Chelex-100法）及其优化方案和商品化DNA提取试剂盒,提取肺炎支原体纯培养菌株及30份肺炎支原体阳性临床咽拭子标本DNA,分别进行普通PCR和荧光PCR检测,对比不同方法提取的DNA对PCR检测结果的影响。结果 ROSE法和Chelex-100一步法中的SDS严重影响Taq酶活性,提取物稀释100倍方可进行荧光PCR扩增,稀释10倍可用于普通PCR扩增。改良的Chelex-100一步法提取肺炎支原体纯菌DNA产量最高,且PCR扩增效果最好。对于30份临床标本来说,试剂盒法、改良Chelex-100法和水煮法的阳性率分别为100.00%（30/30）、80.00%（24/30）和43.33%（13/30）,且对相同肺炎支原体阳性标本提取的DNA,试剂盒法检测的循环阈值（Ct值）比上述两种方法分别小1.95和2.38。结论 经典一步法提取的DNA必须经稀释后方可作为扩增模板。改良的Chelex-100法操作简便,可用于纯菌培养的DNA提取。临床标本中肺炎支原体DNA提取以试剂盒法最优,改良的Chelex-100法提取的DNA也可用于临床标本中肺炎支原体的检测,但不可用于定量分析。     

PCR技术及其在实验诊断中的应用

基因扩增聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction简称PCR)，这项技术自1988年Kary Mullis首次报道以来，由于耐热DNA聚合酶和热循环自动仪器的研制成功。仅几年之间就以惊人的速度广泛应用于分子生物学各个领域。     

PCR技术在临床诊断学中的应用

聚合酶链反应（ＰＣＲ）是近年发展起来的生物高技术，它模拟天然ＤＮＡ的复制过程，在体外迅速大量地扩增人工选定的一定长度的核酸序列，使微量生物样品中ＤＮＡ的分析更加简洁、快速、敏感。广泛应用于医学及分子生物学等许多领域。本文扼要综述了ＰＣＲ技术在遗传病ＤＮＡ诊断、感染性疾病原体检测以及肿瘤研究中的应用。