波动性高糖对INS-1细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响

目的探讨波动性高糖对INS-1细胞凋亡及凋亡相关基因表达的影响及其分子机制。方法将INS-1细胞随机分为三组。正常对照组(NG):含5.5 mmol/L葡萄糖;持续高糖组(SHG):含33.3 mmol/L葡萄糖;波动性高糖组(IHG):含5.5 mmol/L或33.3 mmol/L葡萄糖,每24 h交替换液1次,均培养3 d。3 d后检测各组INS-1细胞活性及凋亡百分率,胰岛素分泌量,Bcl-2相关X蛋白(Bax)、细胞色素C(CytC)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)蛋白表达水平以及胰岛素(insulin)和胰岛十二指肠同源盒-1(PDX-1)mRNA表达水平。结果与NG组相比,SHG组与IHG组凋亡率均明显升高,细胞活性明显降低,Bax、CytC及Caspase-3表达明显增强,胰岛素分泌量及insulin、PDX-1 mRNA表达水平均明显降低(P均<0.01);与SHG组相比,IHG组细胞活性及胰岛素分泌量明显降低,凋亡率及Caspase-3明显增加(P均<0.01),Bax、CytC表达水平与insulin及PDX-1 mRNA表达水平均未见统计学差异。结论波动性高糖能导致胰岛细胞凋亡增加和功能障碍,其机制可能与上调Bax、CytC、Caspase-3及降低insulin与PDX-1基因表达等相关。     

脂联素对高糖刺激下内皮祖细胞的作用及其可能的作用机制

目的:研究脂联素(adiponectin,APN)对高糖刺激下内皮祖细胞(Endothelial Progenitor Cells,EPCs)的作用,并探讨其可能的机制。方法: 密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,经含血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子和100 ml/L胎牛血清的M199培养基培养7 d,贴壁细胞进行形态学、流式细胞仪测细胞分子标志物(CD34、CD133和KDR)和激光共聚焦倒置显微镜下观察培养细胞摄取ac LDL和结合UEA I经何种方法鉴定为EPCs。细胞同步化后,将其随机分为7组:正常糖浓度对照组(55 mmol/L)、高渗对照组（55 mmol/L葡萄糖+245 mmol/L甘露醇及其浓度）、高糖(30mmol/L)组及高糖APN干预组(30 mmol/L葡萄糖合并APN,125、25、5、10 μg/ml)。干预48 h后,分别采用MTT比色法、Transwell小室检测EPCs的增殖、迁移;以Annexin V FITC凋亡检测试剂盒处理细胞,流式细胞仪检测EPCs的凋亡;用荧光探针(DCFH DA)检测法进行细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)检测。结果: ①经密度梯度离心法分离出的外周血单个核细胞培养7 d后,细胞集落增加明显,梭形细胞增多并呈交叉性生长;用激光共聚焦倒置显微镜观察,细胞摄取DiI acLDL呈红色荧光,摄取FITC UEA I呈绿色荧光,摄取DiI acLDL并结合FITC UEA I的细胞呈黄色荧光,流式细胞仪分析结果提示:细胞表达KDR(9232%)、CD133(107%)、CD34(233%),证实培养的细胞是正在分化的EPCs。②随着糖浓度的增高,EPCs的增殖能力下降,凋亡、ROS水平增加(P<001);当糖浓度为30 mmol/L与50 mmol/L时,两者相比对EPCs的影响无统计学差异。③与正常糖浓度对照组相比,高渗对照组EPCs的增殖、迁移、凋亡和ROS水平无统计学差异。在30 mmol/L葡萄糖条件下,EPCs的数量和迁移功能较正常对照组明显下降,细胞凋亡增多,不同浓度APN干预后能明显提高高糖损伤后EPCs的功能(P<005,P<001),并随着浓度的增加,EPCs的增殖与迁移能力增高,凋亡、ROS水平下降(P<001)。结论: ①与对照组相比,高糖干预可导致EPCs增殖能力下降,细胞凋亡增多;②高糖干预后加入APN,EPCs的增殖、迁移能力恢复,细胞凋亡减少,并在一定范围内,其作用随浓度的增加而增强;③高糖可以引起EPCs功能受损,其作用机制可能与ROS水平升高有关;而APN可以通过降低高糖引起的ROS水平,保护EPCs功能;渗透压对EPCs无影响。     

厄贝沙坦通过核转录因子κB信号通路减轻高糖诱导的H9C2细胞炎症反应及凋亡的研究

目的探讨厄贝沙坦通过抑制核转录因子κB(NF-κB)的表达减轻高糖诱导的H9C2细胞炎症反应及凋亡。方法将H9C2细胞分为:对照(Con)组(5.5 mmol/L葡萄糖)、甘露醇(Man)组(5.5 mmol/L葡萄糖+27.5 mmol/L甘露醇)、二甲基亚砜(DMSO)组(5.5 mmol/L葡萄糖+1‰二甲基亚砜)、高糖(HG)组(33 mmol/L葡萄糖)、厄贝沙坦(Ir)组(33 mmol/L葡萄糖+1μmol/L厄贝沙坦),每组3个细胞。检测细胞增殖抑制率;IL-6、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、TNF-α、Bax、Bcl-2 mRNA;核转录因子κB(NF-κB)、caspase-3蛋白表达及细胞凋亡率。结果 Ir组低于高糖诱导的Bax[(50.31±2.18)vs(61.96±4.08)]、IL-6[(7.67±1.53)vs(25.33±4.16)]、MCP-1[(26.67±6.11)vs(43.33±3.06)]、TNF-α[(35.33±3.06)vs(44.67±4.16)]、NF-κB[(2.19±0.52)vs(3.58±0.53)]及caspase-3[(2.28±0.10)vs(2.86±0.12)]表达及细胞凋亡[(10.73±1.78)vs(16.46±2.24)],差异均有统计学意义(P0.05);上调高糖抑制的Bcl-2[(0.62±0.04)vs(0.45±0.06)]的表达(P0.05)。结论厄贝沙坦通过NF-κB信号通路,可减轻高糖诱导的H9C2细胞炎症反应及凋亡。     

氧化型低密度脂蛋白对骨髓内皮前体细胞增殖和细胞功能及凋亡的影响

目的研究氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对骨髓内皮前体细胞(EPCs)增殖抑制、细胞功能及促凋亡的影响,观察阿托伐他汀是否对其有保护作用。方法密度梯度离心法从猪的骨髓中分离出EPCs,将细胞分为3组,A组(培养液中不加ox-LDL),B组(ox-LDL 10 mg/L),C组(预先给予阿托伐他汀1μmol/L+ox-LDL 10 mg/L)。四甲基偶氮唑盐法检测细胞的增殖能力、流式细胞仪检测细胞凋亡,同时测定细胞培养液中一氧化氮及一氧化氮合酶含量,观察对细胞功能的影响。结果ox-LDL可引起骨髓EPCs增殖能力降低,促进细胞凋亡,使细胞功能受损,阿托伐他汀可以减弱ox-LDL对细胞的不良影响。结论阿托伐他汀可以减弱ox-LDL引起的EPCs增殖能力降低,对ox-LDL引起的EPC凋亡及细胞功能的损害有保护作用。     

不同浓度葡萄糖对小鼠胰岛β细胞株NIT-1增殖、分泌功能和凋亡的影响

目的探讨小鼠胰岛β细胞株NIT-1呈最佳增殖和分泌功能培养环境的葡萄糖浓度。方法将NIT-1细胞随机分为1、2、3、4、5、6组,分别用含5.6、7.8、11.1、16.7、22.5、27.6 mmol/L葡萄糖浓度的10%胎牛血清RP-MI1640培养基培养5 d。MTT法检测各组NIT-1细胞增殖情况;放射免疫分析法检测各组NIT-1细胞胰岛素分泌水平;免疫荧光染色法检测细胞凋亡率。结果 3组细胞呈最高增殖状态,之后4组～6组呈浓度依赖性抑制细胞增殖并促进细胞凋亡,且呈时间依赖性;3组胰岛素呈最高分泌状态,之后4组～6组呈浓度依赖性抑制细胞分泌,且呈时间依赖性。结论 11.1 mmol/L葡萄糖浓度是小鼠NIT-1细胞具有最佳增殖和分泌功能的培养环境;葡萄糖浓度〉11.1 mmol/L可抑制小鼠NIT-1细胞的增殖和分泌功能,并呈时间浓度依赖效应诱导细胞凋亡。     

曲古霉素A和5-氮杂胞苷对高糖诱导损伤的胰岛β细胞的保护作用

目的 探讨高糖诱导下曲古霉素A（TSA）和5-氮杂胞苷（5-AzaC）对胰岛β细胞增殖、凋亡及功能的影响. 方法 体外培养大鼠胰岛素瘤（RIN-m5f）细胞至指数增长期,根据干预方案分为空白对照（NC）组、高糖诱导（HG）组、0.05、0.10 μmol/L TSA干预组、0.63、1.25 μmol/L 5-AzaC干预组、0.10 μmol/L TSA＋1.25 μmol/L 5-AzaC联合干预组.检测RIN-m5f细胞增殖活性、细胞凋亡率、葡萄糖刺激胰岛素分泌能力. 结果 0.05、0.10 μmol/L TSA干预组、0.63、1.25 μmol/L 5-AzaC干预组及联合干预组的细胞增殖活性均高于HG组,而细胞凋亡率均低于HG组（P＜0.05）.在3.3 mmol/L及25 mmol/L葡萄糖刺激时,各组葡萄糖刺激胰岛素分泌量均高于HG组（P＜0.05）. 结论 TSA和5-AzaC可抑制高糖诱导的胰岛β细胞凋亡和恢复β细胞的胰岛素分泌功能.     

吸氧对慢性缺氧高二氧化碳大鼠肺血管L-精氨酸转运的影响

目的　探讨慢性缺氧 (O2 )高二氧化碳 (CO2 )对大鼠肺动脉L 精氨酸 (L Arg)转运的影响与吸氧的作用。方法　将 4 0只大鼠以随机区组设计法分成 4组 ,用 0 2mmol/L和 5 0mmol/L [3 H] Arg将肺动脉孵育 ,测定其对 [3 H] L Arg的摄取率、一氧化氮合酶 (NOS)活性与一氧化氮 (NO2 /NO3)含量。每组 1 0只。正常对照组 (A组 )、慢性缺O2 4周后伴高CO2 4周组 (B组 )、慢性缺O2 4周伴高CO24周后吸空气 4周组 (C组 )及慢性缺O2 4周伴高CO2 4周后吸O2 4周组 (D组 )。结果　 (1 )肺动脉平均压 (mPAP)、右心室 (RV)和左心室 +室间隔 (LV +S)重量比值 (RV/LV +S) :B组 (33% )与A组(35 % )比较差异有显著性 (P均 <0 0 1 ) ;D组 (2 4 % )与C组 (2 4 % )比较 ,差异也有显著性 (P均 <0 0 5 )。 (2 )离体孵育的肺动脉摄取低浓度 (0 2mmol/L)和高浓度 (5 0mmol/L) [3 H] L Arg比较 :B组分别为 [(3 0 4± 0 1 6 ) μmol·g-1 min-1 ]、[(8 1 2± 0 1 4 ) μmol·g-1 ·min-1 ],A组分别为 [(4 6 2± 0 5 5 )μmol·g-1 ·min-1 ]、[(1 1 2 4± 1 0 2 ) μmol·g-1 ·min-1 ],A、B两组比较差异有显著性 (P均 <0 0 1 ) ;而D组分别为 [(4 30± 0 1 8) μmol·g-1 ·min-1 ]、[(1 2 31± 0 6 5 ) μmol·g-1 ·m     

长期高脂饲养对大鼠葡萄糖刺激的胰岛素分泌的影响

目的　观察膳食总热量正常、脂肪含量长期增高饲养对正常大鼠葡萄糖刺激的胰岛素分泌的影响。方法　 8周龄雄性SD大鼠 1 9只 ,分为正常饲养组 (NC ,n =1 0 )和高脂饲养组 (HF ,n =9)。两组大鼠每日摄食总热量相等 ,但饲料中脂肪占总热量 (31 0kJ/d)的百分比不同 (NC组脂肪占 1 3 % ,HF组脂肪占 59% )。观察大鼠每月体重、空腹血糖 (FBG)、空腹胰岛素 (FINS)、空腹游离脂肪酸 (FFFA)的变化。饲养至 36周龄 ,作静脉葡萄糖耐量试验 (IVGTT) ,观察两组大鼠葡萄糖刺激的胰岛素分泌 ,尤其是胰岛素分泌的第一时相的差异。结果　高脂饲养后大鼠出现明显的腹型肥胖 (内脏脂肪占体重百分比分别为 :HF组 1 0 .7% ,NC组 5 .3 % ,P <0 .0 0 1 ) ,血FFFA升高〔HF组 (1 .60± 0 .36)mmol/L ,NC组 (0 .59± 0 .1 2 )mmol/L ,P <0 .0 0 1〕。 36周龄时 ,IVGTT中 5、 1 0、 30min血糖 (BG)HF组显著高于NC组〔5min :(1 7.3± 0 .7)mmol/Lvs(1 6 .0± 0 .7)mmol/L ,P <0 .0 5 ;1 0min :(1 4 .6± 0 .8)mmol/Lvs (1 2 .7± 1 .0 )mmol/L ,P <0 .0 0 1 ;30min :(9.4± 1 .6)mmol/Lvs (6 .6± 1 .4)mmol/L ,P <0 .0 1〕。 5、1 0min血胰岛素HF组显著低于NC组〔5min :(734 .7± 1 .5) pmol/Lvs (1 938.4± 1 .4)pmol/L ,P <0 .0     

Twf1基因对心肌细胞凋亡及NF-κB信号通路的影响研究

目的探讨抑制Twf1基因表达对高糖诱导的心肌细胞增殖、凋亡及NF-κB信号的影响。方法高糖刺激H9c2细胞,将H9c2细胞分为对照组(5.5 mmol/L的葡萄糖处理细胞)、NC组(瞬时转染无干扰作用的si RNA后用5.5 mmol/L的葡萄糖刺激细胞)、高糖组(瞬时转染无干扰作用的siRNA后用25 mmol/L的葡萄糖刺激细胞)和Twf1-siRNA组(瞬时转染干扰Twf1表达的siRNA后用25 mmol/L的葡萄糖刺激细胞)。Western blotting检测蛋白表达,CCK8检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率及ROS含量。结果高糖可引起H9c2细胞Twf1表达升高,转染Twf1-siRNA后H9c2细胞Twf1的表达明显降低;高糖组细胞活力低于NC组,细胞凋亡率、ROS含量及p-IκBα、Bax和TNF-α的表达均高于NC组,差异均有统计学意义(P0.05);Twf1-siRNA组的细胞活力高于高糖组,细胞凋亡率、ROS含量及p-IκBα、Bax和TNF-α的表达均低于高糖组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论抑制H9c2细胞Twf1基因表达可逆转高糖诱导的细胞活力降低及凋亡的增加,其机制可能与细胞内ROS含量降低及NF-κB信号下调有关。     

罗格列酮对高糖诱导RIN-m细胞凋亡的作用及其机制探讨

目的探讨罗格列酮对高糖诱导的RIN-m细胞凋亡作用及其机制。方法采用分别含5.5 mmol/L葡萄糖、33.3 mmol/L葡萄糖、5.5 mmol/L葡萄糖＋10μmol/L罗格列酮及33.3 mmol/L葡萄糖＋50μmol/L罗格列酮的培养液培养RIN-m细胞。以放射免疫法检测胰岛素分泌水平。以流式细胞仪及TUNEL法检测RIN-m细胞凋亡情况。同时行免疫细胞化学染色,半定量分析Bcl-2和Bax的表达。RT-PCR检测胰腺十二指肠同源盒-1（PDX-1）mRNA表达。结果长期高糖可导致RIN-m细胞胰岛素分泌功能下降、凋亡率增加2.7倍（P〈0.05）。罗格列酮可以增加高糖环境下RIN-m细胞胰岛素的分泌、降低RIN-m细胞凋亡率（P〈0.05）。长期高糖可以降低RIN-m细胞Bcl-2/Bax的比例,并下调PDX-1 mRNA表达（P〈0.05）。10μmol/L罗格列酮即可增加高糖环境下RIN-m细胞Bcl-2/Bax表达的比例及上调PDX-1 mRNA表达（P均〈0.05）。结论罗格列酮对RIN-m细胞有直接的保护作用,这种保护作用可能与罗格列酮增加了Bcl-2/Bax表达比例和上调PDX-1 mRNA表达,进而抑制RIN-m细胞凋亡有关。     

血糖升高水平对大鼠低血糖性脑损伤的影响

目的探讨胰岛素诱导大鼠低血糖后,血糖升高水平对大鼠低血糖性脑损害的影响。方法30只Wistar4月龄雄性大鼠,体重（300±50）g,用简单随机抽样方法分为实验组（20只）、正常血糖对照组（A组,5只）和空白对照组（B组,5只）。实验组根据血糖再灌注水平分为1〈血糖≤3mmol／L组（C组）、3〈血糖≤6mmo]／L组（D组）、6〈血糖49mmol／L组（E组）、血糖〉9mmol／L组（F组）,每组5只。采用TUNEL染色观察大鼠海马神经元凋亡,Fluoro—JadeB（FJB）染色观察神经元轴突和胞体的退变。染色组问计量资料采用单因素方差分析。结果（1）TUNEL染色：与A组及B组相比（海马CAl区：3．2±1．9、2．8±0．8;海马DG区：4．1±2．4、3．4±1．2）,C组、D组、E组、F组海马凋亡细胞数（海马CAl区：40．2±3．1、38．7±2．4、36．8±2．6和76．4±6．3;海马DG区：62．4±4．2、59．8±3．7、68．1±2．8和125．4±5．8）凋亡细胞数增多,差异有统计学意义（海马CAl区：F=13．52,P〈0．05;海马DG区：F=14．29,P〈0．05）;F组（海马CAl区：76．4±6．3;海马DG区：125．4±5．8）大鼠海马凋亡神经元数目比C组、D组、E组（分别为海马CAl区：40．2±3．1、38．7±2．4、36．8±2．6;海马DG区：62．4±4．2、59．8±3．7、68．1±2．8）显著增多,差异有统计学意义（海马CAl区：F：5．08,P〈0．05;海马DG区：F=6．52,P〈0．05）;（2）FJB染色：与A组及B组相比,C组、D组、E组、F组海马退变神经元数目显著增多,差异有统计学意义（海马CAl区：F=18．49,P〈0．05;海马DG区：F=11．37,P〈0．05）;F组大鼠海马轴突退变神经元数目比C组、D组、E组显著增多,差异有统计学意义（海马CAl区：F=7．83,P〈0．05;海马DG区：F=14．29,P〈0．05）。结论在同一低血糖水平且持续时间相同的情况下,大鼠脑损害程度与低血糖后血糖升高水平有关：血糖升高水平过高,脑损害明显。     

妊娠期糖尿病胰岛素抵抗与铁蛋白和游离脂肪酸的相关性研究

目的探讨妊娠期糖尿病(GDM)孕妇胰岛素抵抗(IR)与铁蛋白(SF)和游离脂肪酸(FFA)的关系。方法 2011—2013年,按照随机原则选择在我院就诊的GDM孕妇71例为GDM组,正常孕妇50例为正常孕妇组,体检健康且未孕女性50例为正常非孕组。检测3组受试者血清SF、FFA、空腹血糖(FBG)及空腹胰岛素(Fins)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。结果正常非孕组、正常孕妇组及GDM组血清SF水平分别为(119.57±22.04)μg/L、(197.81±46.32)μg/L、(388.79±91.67)μg/L,差异有统计学意义(F=57.543,P0.01);GDM组血清SF水平高于正常孕妇组和正常非孕组,正常孕妇组高于正常非孕组(P0.01)。正常非孕组、正常孕妇组及GDM组血清FFA水平分别为(0.43±0.18)mmol/L、(0.67±0.14)mmol/L、(1.03±0.21)mmol/L,差异有统计学意义(F=37.619,P0.01);GDM组血清FFA水平高于正常孕妇组和正常非孕组,正常孕妇组高于正常非孕组(P0.01)。正常非孕组、正常孕妇组及GDM组HOMA-IR分别为(1.83±0.45)、(2.92±0.87)、(3.94±1.02),差异有统计学意义(F=45.071,P0.01);GDM组HOMA-IR高于正常孕妇组和正常非孕组,正常孕妇组高于正常非孕组(P0.01)。Pearson相关分析结果显示,血清SF水平(r=0.832)、血清FFA水平(r=0.759)均与HOMA-IR呈正相关(P0.01);血清SF水平与血清FFA水平呈正相关(r=0.893,P0.01)。结论 GDM孕妇存在IR及高铁蛋白血症、高游离脂肪酸血症,IR程度与血清SF、FFA水平相关,在GDM的早期干预中应重视SF和FFA的调控。     

不同年龄重症冠心病患者高敏C反应蛋白、应激性血糖及糖化血红蛋白的比较

目的探讨不同年龄重症冠状动脉粥样硬化性心脏病(冠心病)患者高敏C反应蛋白(hsCRP)、应激性血糖和糖化血红蛋白的变化。方法入选2012年1月到2013年1月在唐山市工人医院ICU及CCU住院的重症冠心病患者514例,其中男性284例,女性230例,年龄24~91岁,平均年龄(67.65±12.68)岁。根据患者年龄分为4组:A组(60岁,n=134);B组(60~69岁,n=132);C组(70~80岁,n=154);D组(≥80岁,n=94)。检测各组患者血清hs-CRP、全血血糖和全血糖化血红蛋白水平。结果与A组[(7.10±22.67)mg/L]比较,B组[(15.56±35.23)mg/L]、C组[(19.57±37.97)mg/L]、D组[(29.29±44.43)mg/L]hs-CRP呈逐渐增高趋势,差异具有统计学意义(P0.05)。与A组[(8.67±4.13)mmol/L]比较,B组[(9.26±5.93)mmol/L]、C组[(10.84±6.05)mmol/L]血糖呈逐渐增高趋势,差异具有统计学意义(P0.05)。C组与D组血糖比较无统计学差异(P0.05)。各组间糖化血红蛋白比较均无统计学差异(P0.05)。结论不同年龄重症冠心病患者入院时hs-CRP和应激性血糖随着年龄的增长而增加,而糖化血红蛋白无明显变化。     

TNF—α诱导的胰岛素抵抗小鼠胰岛素敏感性及糖脂代谢的变化

目的探讨TNF-α诱导的胰岛素抵抗（IR）小鼠胰岛素敏感性及糖脂代谢的变化。方法23只健康雄性C57BL／6J小鼠随机分为4组：高剂量（H）组、中剂量（M）组、低剂量（L）组分别给予腹腔注射6、3、1μg·kg^-1·d^-1的TNF-α，正常对照（NC）组注射等体积的生理盐水，共7天。采用静脉葡萄糖耐量试验（IVGTT）和3-[^3H]葡萄糖为示踪剂的扩展胰岛素钳夹技术，评价小鼠胰岛素敏感性和糖脂代谢的变化。结果TNF-α处理后，小鼠FBG、血浆胰岛素（Ins）和FFA水平均增高，且H组明显高于NC、M和L组。IVGTT结果显示H组糖耐量减低，Ins释放水平明显高于其他组。在胰岛素钳夹术中，H组基础葡萄糖清除率（GDR）和肝糖输出率（HGP）明显高于NC组（P＜50.01）。在钳夹稳态时，H组血浆Ins水平明显高于NC组（P＜0.01），Ins对FFA的抑制作用较NC组明显降低（P＜0.01），H组葡萄糖输注率（GIR）明显低于NC组（P＜0.01）；钳夹稳态时小鼠GDR明显增加，但H组GDR的增加仍明显低于NC组（P＜0.01）；钳夹结束时，NC组HGP被完全抑制，而H组仅被抑制59％。结论高剂量TNF-α（6μg·kg^-1·d^-1）处理可导致小鼠糖脂代谢紊乱以及肝和外周组织的球。     

白细胞介素1β和干扰素γ对小鼠胰岛素瘤βTC-6细胞胰岛素分泌功能的影响

目的探讨炎性细胞因子白细胞介素1β（IL-1β）、干扰素γ（IFN-γ）对小鼠胰岛β细胞株βTC-6胰岛素分泌功能的影响。方法将βTC-6细胞培养于高糖DMEM培养基,48h后换用无糖KRBH缓冲液培养30min,分别于含0、1．38、5．50和11．10mmol／L葡萄糖的KRBH缓冲液中孵育60min,放射免疫法检测细胞上清液中胰岛素水平（GSIS）。在BTC-6细胞中分别加入不同浓度的IL-1β（0．15、1．50μg／L）和（或）IFN-γ（10、100U／m1）,24h后换用无糖KRBH缓冲液培养30min,在含1．38mmol／L葡萄糖的KRBH缓冲液中孵育60min,放射免疫法检测细胞上清液中胰岛素水平。多组间数据比较采用单因素方差分析,两组间数据比较采用t检验。结果βTC-6细胞在1．38mmol／L葡萄糖刺激时胰岛素分泌达高峰,与无葡萄糖刺激时相比差异有统计学意义[（151±14）对（120±4）mU／L,t=-4．215,P=0．006];5．50、11．10mmol／L葡萄糖刺激时胰岛素分泌较1．38mmol／L葡萄糖刺激时明显下降（均P〈0．05）。与单纯1．38mmol／L葡萄糖刺激组相比,IL-1β（0．15μg／L）组[（85．53±5．06）mU／L对（103．11±0．27）mU／L,t=4．897,P=0．039]、IL-1β（1．50μg／L）组[（62．62±0．64）mU／L对（103．11±0．27）mU／L,t=212．66,P〈0．001]葡萄糖刺激下胰岛素分泌水平显著下降,下降程度与IL-1β的剂量呈正相关;与单纯葡萄糖刺激组相比,IFN-γ（100U／m1）组葡萄糖刺激下胰岛素分泌显著下降[（73．2±1．6）对（105．2±1．8）mU／L,t=19．52,P：0．003];与IL-1β（0．15μg／L）组及IFN-γ（100U／m1）组相比,IL-1β联合IFN-γ组葡萄糖刺激下胰岛素分泌显著下降（F=77．38,P〈0．001）。结论IL-1β和IFN-γ对13TC-6细胞的胰岛素分泌功能有抑制作用,且两者间具有协同效应。     

运动对胰岛素抵抗小鼠PPAR-y、Glut-4表达的影响

目的：观察运动对高脂饮食诱导的,产生胰岛素抵抗的小鼠骨骼肌组织过氧化物酶体增殖物激活受体-y（PPAR-y）、葡萄糖转运体-4（Glut-4）表达的影响,初步探讨游泳训练改善胰岛素抵抗的作用机制。方法：将30只8周龄健康雄性C57BL／6J小鼠随机分为三组：正常饮食组（10例）、高脂饮食组（10例）和高脂饮食＋运动组（运动组,10例,进行为期12周的游泳训练）。每周测小鼠体重和空腹血糖（FBG）。游泳训练12周后,以放射免疫法测空腹血胰岛素（FINS）,并计算胰岛素抵抗指数（IRI）;逆转录聚合酶链式反应法检测骨骼肌组织PPAR．7、Glut-4mRNA的表达。结果：与正常饮食组比较,高脂饮食组体重明显增加;运动组较高脂饮食组体重明显减轻（P〈0．05）。高脂饮食组和运动组FINS、FPG、IRI水平均较正常饮食组明显升高（P〈0．01）。与高脂饮食组相比,运动组FINS[（14．00±7．12）mmol／L比（10．17±3．88）mmol／L]、FPG[（9．49±1．28）mmol／L比（8．03±1．67）mmol／L]、IRI[（1．47±0．38）比（1．06±0．27）]水平明显降低（P〈0．05）,PPAR—y[（0．95±0．17）比（2．37±0．41）]、Glut-4 mRNA[（0．68±0．24）比（1.54±0.28）]表达明显增加（P〈0．01）。结论：运动可明显改善胰岛素抵抗,其机制可能与上调骨骼肌PPAR吖及Glut-4mRNA的表达,调节糖代谢,促进胰岛素信号转导有关。     

金银花提取物对小鼠肝脏和人肝细胞PGC—1α表达及胰岛素抵抗的影响

目的检测金银花提取物对小鼠肝脏和L02细胞中过氧化物酶体增殖物激活受体7（PPARy）共激活因子1α（PGC--1α）表达及对胰岛素抵抗（IR）的影响。方法分别将ob／ob小鼠、C57／B6J小鼠和L02细胞随机分为对照组和实验组,实验组给予金银花提取物,对照组给予生理盐水。给药后检测小鼠肝脏和L02细胞PGC-1α表达。结果与对照组相比,实验组ob／ob小鼠给予金银花提取物后肝脏PGC-1α mRNA和蛋白表达下调（P〈0．05或P〈0．01）;而实验组C57／B6J小鼠给药后肝脏PGC-1α mRNA表达与对照组比较无统计学差异。给药5d后实验组ob／ob小鼠FPG降低,但实验组与对照组组间胰岛素水平无统计学差异,实验组FPG／FIns比值显著降低。胰岛素耐量实验显示金银花提取物改善了ob／ob小鼠的IR。脂肪酸培养L02细胞,给予金银花提取物后PGC-1α mRNA表达下调（P〈0．05）,而正常培养I．02细胞PGC-1α mRNA表达无变化。结论金银花提取物可以下调PGC-1α在肝脏中的病理性高表达,降低血糖,改善IR。     

氟伐他汀动员内皮祖细胞促进大鼠梗死心肌血管新生的作用

目的观察氟伐他汀动员急性心肌梗死（AMI）大鼠内皮祖细胞（EPCs）,促进梗死心肌血管新生,减小梗死面积的效果。方法①成年Wistar大鼠左前降支结扎造模,随机分为空白组（A组）、假手术组（B组）、AMI组（C组）和氟伐他汀治疗AMI组（D组）。②流式细胞技术检测不同时段大鼠外周静脉血EPC动态变化。③4周末处死大鼠,心肌切片Masson染色,左室心肌正中线弧长方法计算梗死面积。④CD31单克隆抗体免疫组化法标记心肌新生血管内皮细胞并计算各组梗死、梗死周边及非梗死区新生血管数。结果①造模后第7天D组EPCs（37．13±3．44／2×10^5MNCs）显著高于A组（19．88±4．91／2×10^5MNCs）、B组（22．33±5．43／2×10^5MNCs）和C组（26．56±3．17／2×10^5MNCs）,差异具有统计学意义（P〈0．05）;C组较A组有少量增加（P〈0．05）,B组较A组无明显升高（P〉0．05）,B组和c组差异无统计学意义（P〉0．05）。造模后第14天D组EPCs（45．5-±4．99／2×10^5MNCs）同样显著高于A组（17．25±7．17／2×10^5MNCs）、B组（22．78±2．91／2×10^5MNCs）和C组（26．88±3．76／2×10^5MNCs）（P〈0．05）;B组和C组较A组有少量增加（P〈0．05）,B组和C组差异无统计学意义（P〉0．05）。第7天和第14天各组变化比较,A、B、C三组EPCs变化无统计学意义（P〉0．05）,D组则明显增加（P〈0．05）。②D组梗死区新生血管计数（10．75±1．61／mm。）明显多于C组（5．09±2．33／mm。）（P〈0．01）,梗死周边区新生血管计数D组（17．53±2．35／mm^2）同样明显多于C组（8．55±2．40／mm^2）（P〈0．01）。③D组梗死面积[（31．41±2．59）％]小于C组[（35．67±5．22）％]（P〈0．01）。结论①氟伐他汀能动员急性心肌梗死大鼠内皮祖细胞进入外周血循环,使其数量增加并促进梗死周边区血管新生。②心肌梗死后大鼠应用氟伐他汀可以限制梗死面积。     

双时相门冬胰岛素50与双时相人胰岛素50治疗2型糖尿病的临床对比研究

目的 比较双时相门冬胰岛素和双时相人胰岛素治疗2型糖尿病（T2DM）的有效性和安全性.方法 选取2012年2月至2013年2月于江苏省盐城市亭湖区人民医院住院的T2DM患者50例为研究对象,按分层随机化分为2组,分别应用门冬胰岛素50（A组,25例）和人胰岛素50R（B组,25例）治疗.观察两组不同治疗方案患者2周和12周后空腹血糖（FPG）、餐后2h血糖（2 hPG）、糖化血红蛋白（HbA1c）、每日胰岛素（INS）用量、低血糖发生及体质指数（BMI）变化的情况.计量资料的比较采用成组t检验,计数资料比较用χ^2检验.结果 治疗2周后,两组患者血糖都明显下降,其中A组在早餐后、中餐后、晚餐后下降更明显,差异有统计学意义（t=3.342、3.393、2.504,均P＜0.05）;而B组在晚餐前、睡前下降更明显,差异亦有统计学意义（t=2.532、3.066,均P＜0.05）.治疗12周后,A组在HbA1c及2 hPG方面较B组下降更明显,A组HbA1c由治疗前的（10.6±1.9）％降至治疗后的（6.7±0.5）％,B组HbA1c由治疗前的（10.5±1.5）％降至治疗后的（7.1±0.6）％,组间比较差异有统计学意义（t=3.808,P＜0.05）,A组2 hPG由治疗前的（21±5）mmol/L降至治疗后的（7.1 ±0.9） mmol/L,B组2 hPG由治疗前的（21±5）mmol/L降至治疗后的（8.4±1.6） mmol/L,组间比较差异有统计学意义（t=3.331,P＜0.05）,而在空腹血糖方面差异无统计学意义（均P＞0.05）;在胰岛素用量方面,12周后两组胰岛素用量都明显减少,部分患者胰岛素停用,其中A组较B组减少更明显,A组胰岛素用量由治疗2周时的（50±13） U/d降至治疗12周时的（32±12） U/d,B组胰岛素用量由治疗2周时的（59±10） U/d降至治疗12周时的（39±6） U/d,组间比较差异有统计学意义（t =3.399,P＜0.05）;治疗前两组患者体重差异无统计学意义,治疗12周后两组患者体重与治疗前比较差异亦无统计学意义（均P ＞0.05）,但组间比较差异有统计学意义（t=2.319,均P＜0.05）;在低血糖发生方面,两组均无严重低血糖发生,A组低血糖发生率明显低于B组（χ^2=4.500,P＜0.05）.结论 双时相门冬胰岛素能更平稳地降低T2DM患者的血糖水平,特别是控制餐后血糖而不增加低血糖的风险及日胰岛素的用量,体重增加亦不明显.     

姜黄素调控炎症对内皮细胞增殖凋亡的影响

目的明确姜黄素对炎症诱导的血管内皮细胞损伤的保护机制。方法将人单核／巨噬细胞系（THP-1）分为空白对照组、高脂高糖组、高脂高糖＋姜黄素预处理组（高脂高糖浓度为25mmol／L葡萄糖＋500μmol／L棕榈酸）,分别给予相应处理24h,更换培养基继续培养24h,利用酶联免疫吸附法（ELISA）检测上清及实时定量聚合酶链反应（RT-PCR）分析THP-1细胞内肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）的表达,同时将上清作用脐静脉血管内皮细胞（HUVECs）,HUVECs分为空白对照组、空对照条件培养基组、高脂高糖条件培养基组、姜黄素处理条件培养基组,并行噻唑蓝法（MTT）检测HUVECs增殖、流式细胞仪检测凋亡,Westernblotting分析磷酸化细胞外调节蛋白激酶（p-ERK）及B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）蛋白表达。组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果高脂高糖组THP-1细胞内受体相互作用蛋白140（RIPl40）、TNF-α和IL-6mRNA表达及上清中炎症因子TNF-α和IL-6浓度明显高于空白对照组（t=8．55、9．44、9．73、16．01、19．22,均P〈0．05）。相对于高脂高糖组,姜黄素预处理组THP-1细胞内RIPl40、TNF-α和IL-6mRNA表达及上清中TNF-α和IL-6浓度明显下降（t=3．59、5．96、5．59、6．95、23．91,均P〈0．05）;高脂高糖条件培养基组HUVECs细胞活力明显低于空对照条件培养基组（24h,1．22±0．07比1．85±0．14,t=6．58,P〈0．05;48h,1．72±0．02比2．49±0．09,t=10．08,P〈0．05）,而姜黄素处理条件培养基组能够改善高脂高糖条件培养基对HUVECs增殖的抑制作用（24h,1．22±0．07比1．72±0．11,t=2．13,P〈0．05;48h,1．72±0．02比2．33±0．11,t=6．92,P〈0．05）;与空对照条件培养基组比较,高脂高糖条件培养基组能够明显增加HUVECs凋亡率、p-ERK表达及降低Bcl-2表达（t=9．82、9．69、4．61,均P〈0．05）,姜黄素处理条件培养基组与高脂高糖条件培养基组比较,下调RIPl40表达后能明显降低HUVECs凋亡率、p-ERK表达及增加Bcl-2表达（t=6．35、7．17、3．26,均P〈0．05）。结论姜黄素能够通过抑制高脂高糖诱导的炎症来调控HUVECs的增殖凋亡。