异甘草酸镁对刀豆蛋白A诱导的小鼠免疫性肝损伤的保护作用

异甘草酸镁是第四代甘草酸制剂,其有效成分是一种高纯度单-18-α异构体甘草酸,临床主要用于治疗肝炎.通过抗炎、保护肝细胞膜及改善肝功能的药理作用,对四氯化碳、D-氨基半乳糖等引起的化学性肝损伤模型发挥保护效应[1-2].但目的鲜见对免疫性肝损伤作用的报道,因此,本实验通过建立刀豆蛋白A(ConA)诱导的小鼠免疫性肝损伤模型,进一步探讨异甘草酸镁的疗效及部分作用机制.     

刀豆蛋白（ConA）在诱导免疫性肝损伤中的性别差异

目的：探讨刀豆蛋白（ConA）诱导的免疫性肝损伤中存在的性别差异及其可能机制。方法 C57BL/6小鼠分为雌雄2组。雌雄2组各分为实验组和对照组：实验组经尾静脉注射ConA 20 mg/kg。观察24小时小鼠生存率、血清丙氨酸转氨酶（ALT）和天冬氨酸转氨酶（AST）水平以及肝组织病理损伤程度。结果实验组中雌性小鼠死亡率为60％,而雄性小鼠无死亡。雌性小鼠的ALT和AST水平明显比雄性鼠高,雌性小鼠肝细胞坏死及淋巴细胞浸润也明显比雄性小鼠严重（P＜0．05）。结论该研究说明刀豆蛋白在诱导免疫性肝损伤中存在性别差异,雌鼠损伤明显高于雄鼠。这为临床采取更合适的用药方案提供了良好的研究工具。     

EGCG对刀豆蛋白A诱导肝损伤小鼠CXCR3表达的影响

目的观察EGCG对刀豆蛋白A(Con A)诱导的肝损伤小鼠肝组织中CXCR3表达的影响。方法 C57BL/6小鼠分成4组:正常对照组、表没食子儿茶素酸酯(EGCG)对照组、Con A模型组,EGCG+Con A模型组。EGCG对照组及EGCG+Con A模型组小鼠造模前给予EGCG口服(5 mg/kg),10 d后两组模型组小鼠通过静脉注射Con A(15 mg/kg)建造肝损伤模型,采血及留取肝组织,HE法检测肝组织病理变化,ELISA法检测肿瘤坏死因子(TNF)α,干扰素(IFN)-γ及CXCR3的水平,免疫组化法检测肝组织中CXCR3的表达。结果 Con A模型组小鼠肝损伤明显,TNF-α、IFN-γ及CXCR3的表达明显增多,与其他组比较有差异显著(P0.05);EGCG干预的模型组肝损伤减轻伴TNF-α、IFN-γ及CXCR3的表达下降,与Con A模型组比较差异明显(P0.05)。免疫组化结果同样显示Con A模型组CXCR3的表达明显增多,EGCG治疗后表达减少。结论 EGCG对Con A诱导的免疫性肝损伤小鼠有保护作用,其机制可能与调节CXCR3的表达有关。     

黄芩苷对刀豆蛋白A致肝损伤小鼠肝组织NO含量的影响

目的：探讨黄芩苷可能的保肝降酶、抗氧化、防止肝损伤的作用和机制。方法：将小鼠随机分为7组：正常组、病理组、联苯双酯组、黄芩苷大、中、小剂量组、黄芩苷注射剂组。除正常组灌服及尾静脉注射生理盐水外，其余各组小鼠分别于首日上、下午和次日下午各灌胃给药1次，0．2ml／只／次[药物浓度：联苯双酯为150mg／ml，黄芩苷大、中、小剂量灌胃液及注射剂分别为200、100、50、50（mg／ml）]。末次给药后4～6小时各组动物一次性尾静脉注射刀豆蛋白A（ConA）20mg／ml，观察其血清ALT、AST和肝组织No含量的变化。结果：黄芩苷大、中、小剂量组以及注射剂组均能显著降低小鼠血清ALT、AST。黄芩苷大、中、小剂量及注射剂组和联苯双酯组小鼠肝组织匀浆的NO含量较正常组有所升高。病理组小鼠肝组织匀浆的NO含量较其他各组均明显降低，且差异有显著性意义。结论：黄芩苷可降低血清ALT、AST和增加肝组织NO含量，其作用优于联苯双酯，推测黄芩苷降低血清ALT和AST及抗脂质过氧化是其抗ConA肝损伤的重要机理。     

清肠利肝方对刀豆蛋白A所致急性肝损伤小鼠的防护作用

目的：探讨中药复方清肠利肝方对刀豆蛋白A （ Con A）所致急性肝损伤小鼠的防护作用。方法：将野生型C57BL/6（B6）雄性小鼠随机分为正常组、染毒组和清肠利肝方干预组;染毒组通过尾静脉注射Con A （35 mg/kg）诱导肝损伤,干预组先给予清肠利肝方（50 ml/kg）灌胃后再进行染毒。正常组仅给予生理盐水。观察比较各组小鼠的生存率、肝功能水平、组织病理学变化以及相关炎症分子的变化情况。结果：给予小鼠Con A能诱导明显的肝损伤,表现为血浆ALT、 AST水平显著升高,大量肝细胞发生凋亡坏死。清肠利肝方干预组小鼠的ALT、 AST水平低于染毒组,差异有显著性意义（P＜0.05）,病理结果显示肝损伤亦得到明显减轻;此外,干预组各项炎症分子如细胞外组蛋白、 IL-6, MCP-1, TNF-α等水平显著低于染毒组,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：清肠利肝方对Con A所致的小鼠急性肝损伤有显著防护作用,其机制可能与减少细胞外组蛋白和相关的细胞因子的水平而达到抗炎的效应有关。     

长链非编码RNAs在小鼠免疫性肝损伤肝组织中表达谱的变化

[目的]研究长链非编码RNAs（lncRNAs）在刀豆蛋白A（ConA）诱导的小鼠免疫性肝损伤肝组织中表达谱的变化.[方法]利用lncRNAs芯片技术分别检测正常对照组小鼠及ConA诱导的免疫性肝损伤小鼠肝组织中lncRNAs表达谱,经对原始数据进行预处理达到均一化后,筛选出差异表达的lncRNAs并进行分析.[结果]与正常对照组小鼠相比较,ConA诱导的免疫性肝损伤在小鼠肝组织中表达1.5倍以上并有显著差异（P＜0.05）的ln-cRNAs,确定为差异表达的lncRNAs.1.5倍以上变化的共60条;1.5倍以上升高的共17条;1.5倍以上降低的共43条;2倍以上升高共4条;2倍以上降低的共8条;3倍以上升高共2条;3倍以上降低的共2条.[结论]与正常对照组小鼠肝组织比较,ConA诱导的免疫性肝损伤小鼠肝组织中lncRNAs表达谱发生显著变化,提示差异性表达的lncRNAs可能参与了ConA诱导的小鼠免疫性肝损伤发生.     

海珠益肝加味方对免疫性肝损伤小鼠细胞因子的影响

目的:观察海珠益肝加味方对刀豆球蛋白A(Con A)诱导建立的免疫性肝损伤小鼠细胞因子IL-4、IL-6、INF-γ、TNF-a的影响,探讨其作用机制。方法:将40只昆明小鼠随机分为正常组、模型组、醋酸强的松组、海珠益肝加味方组,采用尾静脉注射Con A建立免疫性肝损伤小鼠模型,眼球取血,检测小鼠血清IL-4、IL-6、IFN-γ、TNF-α的水平。结果:与正常组比较,模型组小鼠外周血IL-4、IL-6水平明显降低(P<0.01),IFN-γ、TNF-α水平显著升高(P<0.05);与模型组比较,醋酸强的松组、海珠益肝加味方组小鼠外周血IL-4、IL-6的水平明显升高(P<0.01),IFN-γ、TNF-α水平显著降低(P<0.05)。结论:海珠益肝加味方能升高免疫性肝损伤小鼠细胞因子IL-6、IL-4的分泌水平,降低IFN-γ、TNF-α的水平,恢复Th1/Th2细胞之间的平衡,具有保护肝细胞的作用,可能是其作用机制之一。     

白细胞介素-18及其抗体对刀豆蛋白A所致肝纤维化的影响

IL-18可上调IFNγ、TNFα，介导细胞凋亡，下调IL-10；与IL-4协同作用提高IL-12等Th2细胞因子的表达，这些均提示IL-18参与了肝纤维化过程。Zhang等用IL-18转染血吸虫肝纤维化的脾细胞，使脾细胞持续表达IL-18，结果显示可阻止血吸虫肝纤维化的发展。为此，我们用IL-18及其抗体对刀豆蛋白A诱导构建的肝纤维化模型鼠进行干扰，并探讨其作用机制。     

血府逐瘀汤对刀豆蛋白A诱导小鼠肝纤维化的干预作用

目的：观察血府逐瘀汤对刀豆蛋白A （ Con A）诱导小鼠肝纤维化的干预作用。方法： Balb/c雄性小鼠40只,随机分为正常组（8只）,模型组（16只）和治疗组（16只）。模型组和治疗组按照1.25mg/100g小鼠体重予以尾静脉注射Con A,正常组予注射相应剂量生理盐水,1次/周,共10周。治疗组于造模同时,予血府逐瘀汤药液1ml/100g小鼠体重灌胃,正常组及模型组则予以等量饮用水,1次/d。10周后,处理各组小鼠,留取血清、肝脾标本。全自动生化仪检测血清血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、门冬氨酸氨基转移酶（AST）和白蛋白（Alb）; HE和天狼星红染色观察肝组织炎症和胶原沉积; RT-PCR和Western Blot法检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和转化生长因子β1（TGF-β1）表达。结果：模型组小鼠ALT和AST活性均较正常组明显升高（P＜0.05）;肝组织HE染色可见肝细胞坏死和大量炎性细胞浸润;天狼猩红染色可见大量胶原沉积和假小叶形成;肝组织α-SMA和TGF-β1较正常组显著升高（P＜0.01）。与模型组相比,治疗组ALT、 AST水平明显降低（P＜0.05）;肝脏炎症和胶原沉积明显改善;α-SMA和TGF-β1表达显著下调（P＜0.01）。结论：血府逐瘀汤可通过减轻肝脏炎症和抑制肝星状细胞活化而改善Con A诱导的小鼠肝纤维化。     

槲皮素对刀豆蛋白A诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

目的探讨槲皮素对刀豆蛋白A(Concanavalin A,Con A)诱导小鼠急性肝损伤的保护作用及其可能的分子机制。方法通过检测Con A注射后8 h血清转氨酶水平及肝组织病理学评估肝损伤;应用酶联免疫法(ELISA)检测TNF-α、IFN-γ、IL-4水平;定量PCR和Western blotting或免疫组织化学检测肝组织mRNA与蛋白的表达。结果与模型组相比,槲皮素预防组显著降低了血清转氨酶水平(P0.05),且组织病理学分析表明肝脏炎症坏死程度明显减轻;与模型组相比,槲皮素预防组显著降低了血清促炎症细胞因子TNF-α、IFN-γ和IL-4的水平(P0.01);槲皮素预防组肝组织NOX4、COX-2和i NOS基因与蛋白的表达均明显低于模型组(P0.05)。结论槲皮素对Con A诱导小鼠急性肝损伤具有保护作用,其发挥有益作用的机制可能与抑制肝脏的炎症反应有关。     

一氧化氮在ConA诱发小鼠急性肝损害中的作用

目的：观察一氧化氮（NO）在刀豆素（ConA）诱发急性小鼠肝损害中的作用。方法：25只昆明小鼠随机分为5组，ConA(40mg/kg)自小鼠尾静脉注入复制急性肝损害，为ConA组；应用ConA前半小时，给予NO合成的抑制剂（L-NAME，5mg/只），为LN组；应用ConA前半小时，给予NO合成底物（L-精氮酸），为L-精氮酸组；单独给予L-NAME(5mg/只)者为L-NAME组；对照组只给予尾静脉注射生理盐水。各组8小时后取血分别测定丙氮酸转氮酶（ALT），取肝组织测定亚硝酸盐（NO2^-）和丙二醛（MDA）含量。结果：ConA造成肝损害后，肝组织中亚硝酸盐（NO2^-）较对照组显著升高；以L-NAME抑制NO合成，肝组织中NO2^-含量下降，肝细胞损害反而加重，且肝组织MDA增加，肝窦内血细胞淤集加重；L-精氮酸组未见明显的肝脏保护作用。结论：在ConA性肝损害中，NO通过消除氧自由基和抑制血细胞在肝窦内淤而发挥一定的保护作用。     

甘草酸铵通过抑制HMGB1的表达减轻ConA诱导的免疫性肝损伤

目的探讨甘草酸铵对刀豆蛋白A(Concanavalin A,ConA)诱导的免疫性肝损伤的保护作用及其可能的分子机制。方法在小鼠尾静脉注射ConA(20 mg/kg)前30 min,腹腔注射甘草酸铵(100 mg/kg)。ConA注射后8 h,检测血清转氨酶水平及肝组织学以评估肝损伤程度,应用酶联免疫法(ELISA)检测肝组织肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、白介素-10(IL-10)水平。同时,分别采用实时荧光定量PCR和免疫组化检测肝组织高迁移率族蛋白-1(HMGB1)mRNA与蛋白的表达。结果预防性应用甘草酸铵有效地保护ConA诱导的小鼠免疫性肝损伤,表现为血清转氨酶水平与肝脏组织炎症坏死程度明显减轻;与ConA模型组相比,甘草酸铵对肝脏内的促炎症细胞因子TNF-α和IFN-γ并无影响,但增加了抗炎症因子IL-10水平(P<0.01);同时,甘草酸铵预防组肝组织HMBG1基因与蛋白的表达均明显低于模型组(P均<0.01)。结论甘草酸铵有效改善ConA诱导的小鼠免疫性肝损伤,其发挥作用的分子机制与抑制HMBG1表达有关。     

Rapamycin prevents Concanavalin A-induced liver injury by inhibiting lymphocyte activation

Background and Aims:  Liver injury induced by Concanavalin A (Con A) is often used as a model to study the pathophysiology of immune mediated liver injury. Rapamycin (Rapa) is an effective immunosuppressant widely used for preventing immune activation and transplant rejection. However, the effect of Rapa on liver injury caused by Con A has not been carefully examined. In the present study, we examined the effect of Rapa on liver injury caused by Con A.
Methods:  Mice received intraperitoneal Rapa injection before Con A intravenous administration. The liver injury was examined by measuring serum transaminase and pathology, and the level of cytokines was detected by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA).
Results:  In the present study, we examined the effect of Rapa on liver injury after Con A injection in mice. We found that the treatment of mice with Rapa protected the liver from Con A-induced injury. Pretreatment with Rapa dramatically ameliorated Con A-induced mortality. This protection was associated with reduced transaminase levels in the blood and further confirmed by liver histology. ELISA showed that Rapa suppressed pro-inflammatory cytokines IFN-γ and TNF-α production as compared with the untreated controls. Furthermore, intrahepatic lymphocyte proliferation was significantly inhibited.
Conclusion:  These findings suggested that Rapa has the therapeutic potential for treatment of immune-mediated liver injury in the clinic.     

叶下珠对小鼠酒精性肝损伤的保护作用

目的研究叶下珠对小鼠酒精性肝损伤的保护作用。方法将30只小鼠随机分为3组:空白对照组小鼠每日以常规饲料和自来水喂养;酒精损伤组小鼠每日以白酒连续灌胃,常规饲料中拌有白酒;叶下珠保护组小鼠将白酒加浓度70%的叶下珠提取液按酒精损伤组动物灌胃。4周后,处死小鼠,取小鼠血清和肝脏测定ALT、AST、MDA、SOD等指标。结果叶下珠处理能够抑制血清谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)和肝脏的丙二醛(MDA)上升,其AST、ALT和MDA值比酒精损伤组分别下降了52.5%、41.4%和29.3%。同时叶下珠也能提高超氧化物歧化酶(SOD)的活性,处理后SOD值上升了16.3%。结论叶下珠对小鼠酒精性肝损伤有明显的保护作用。     

Protective effects of cyclosporine A on T-cell dependent ConA-induced liver injury in Kunming mice

INTRODUCTIONThe T-cell dependent specific liver injury in mice induced by concanavalin A(ConA) is a newly cstablished experimental liver injury model,which is considered more eligible for the study on pathophysiology of several human liver discascs,such as viral hepatitis and autommune hepatitis[1-9].T cell activation and several cytokines release had been proven to play a critical role in ConA -induced liver injury[10-19].Cyclosprine A(CsA),an effective inhibitor of activation of T lymphocytc,hes been used widely in clinical treatment,especially in autoimmune diseases and organ transplantation[20-25].In this study,we investigated the possible effect of CsA on ConA-induced liver injury in Kunning mice.     

Mechanism of protective action of bicyclol against CCl-induced liver injury in mice.

Bicyclol is a novel synthetic drug for the treatment of chronic viral hepatitis in China. This paper reports the protective action of bicyclol against experimental liver injury in mice and its mechanism of action. Oral administration of bicyclol markedly reduced the elevated serum transaminases (alanine aminotransferase (ALT) and aspartate aminotransferase (AST)) and the hepatic morphologic changes induced by CCl(4) in mice. Mechanistic studies demonstrated that bicyclol significantly inhibited CCl(4)-induced lipid peroxidation of liver microsomes and (14)CCl(4) covalent binding to microsomal lipids and proteins in vitro, and decreased the level of the trichloromethyl free radical (*CCl(3)) generated from CCl(4) metabolism by NADPH-reduced liver microsomes. On the other hand, bicyclol neither directly inhibited the activity of ALT or AST in vitro nor affected hepatic ALT protein content in mice. These results suggest that bicyclol has remarkable hepatoprotective effects and its mechanism of action may be related to a decrease in free radical-induced damage to hepatocytes.     

丹酚酸A抗过氧化鼠肝损伤的作用

目的观察丹酚酸Ａ（ＳＡＡ）抗过氧化肝损伤的作用．方法采用ＣＣｌ４诱导大鼠肝损伤模型,观察ＳＡＡ对肝脏病理、血清Ａｌｂ含量与ＡＬＴ,ＡＳＴ活性,肝组织ＭＤＡ含量的影响．另以ＣＣｌ４熏蒸诱导肝细胞损伤,观察ＳＡＡ对ＡＬＴ,ＡＳＴ,ＧＳＨＰＸ的活性以及对ＭＤＡ,ＧＳＨ含量的变化．结果ＳＡＡ能减轻模型鼠肝脏病理变化,降低ＡＬＴ,ＡＳＴ活性与ＭＤＡ含量;降低损伤肝细胞ＡＬＴ,ＡＳＴ,ＳＯＤ,ＧＳＨＰＸ活性与ＭＤＡ含量,增高ＧＳＨ含量．结论ＳＡＡ具有良好的抗过氧化肝损伤作用．