过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对转化生长因子β1诱导皮肤成纤维细胞作用的影响

目的 观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂对转化生长因子(TGF)-β1诱导成纤维细胞(Fb)转分化及对胶原牛成作用的影响.方法 体外培养成人正常皮肤Fb,免疫荧光细胞化学法观察PPARγ配体15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)、曲格列酮对TGF-β1诱导的α平滑肌动蛋白(α-SMA)表达的影响,Western blot检测15d-PGJ2、曲格列酮对TGF-β1诱导的α-SMA及Ⅰ型胶原蛋白表达的影响,噻唑蓝(MTT)比色法观察对Fb增殖活性的影响.结果 与TGF-β1诱导组比较,10μmoL/L曲格列酮、10 μmol/L 15d-PGJ2预处理组的α-SMA表达量显著减少(P<0.01),抑制效应分别为31%、57%;预处理组的Ⅰ型胶原表达量也屁著减少(P<0.01),抑制效应分别为57%、38%.曲格列酮、15d-PGJ2对Fb的增殖活性影响分析,各实验组与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 PPARγ激动剂能抑制TGF-β1诱导的人正常皮肤Fb的转分化和Ⅰ型胶原合成增多的效应,具有抗瘢痕的潜在作用.     

过氧化物酶体增殖物活化的受体γ对肝星状细胞作用机制的研究

目的探讨过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)对肝星状细胞(HSC)生物学特性的影响及其作用机制。方法用MTT法和流式细胞仪检测对照组、罗格列酮组、GW9662+罗格列酮组、GW9662组大鼠肝星状细胞的增殖和凋亡情况;采用RT-PCR方法检测各组PPARγ及Ⅰ型前胶原mRNA表达;用免疫组织化学法和Western blot法检测PPARγ及Ⅰ型胶原蛋白表达;结果罗格列酮组的肝星状细胞增殖率MTY(0．49±0．06)较对照组(1．00±0．045)、GW9662组(0．89±0．043)和罗格列酮+GW9662组(0．78±0．049)明显减弱,凋亡率明显增高(P<0．05);罗格列酮组PPARγmRNA表达(1．63±0．179)显著高于对照组(0．46±0．021)、GW9662组(0．41±0．01)和罗格列酮+GW9662组(0．45±0．20)(P<0．05),罗格列酮组Ⅰ型前胶原mRNA表达(0．32±0．02)与对照组(1．61±0．09)、GW9662组(1．81±0．22)和罗格列酮+GW9662组(1．37±0．01)相比显著降低(t值分别为15．59,14．68,8．07,P<0．01);其他各组之间PPAR-γ和Ⅰ型前胶原mRNA的表达差异无统计学意义(P>0．05)。PPARγ及Ⅰ型胶原蛋白表达所得结果与RT-PCR结果相一致。结论PPARγ特异性激动剂罗格列酮可以增加PPARγ的表达。抑制HSC表达Ⅰ胶原,抑制HSC增殖,诱导HSC凋亡,PPARγ配体对于缓解肝脏纤维化具有一定的作用。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂拮抗人皮肤成纤维细胞转化生长因子β1机制研究

目的 了解过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂拈抗TGF-β1促皮肤瘢痕化的效应机制.方法 体外培养正常成人皮肤Fb,根据培养基中所加刺激物不同分为空白对照组(无血清DMEM培养基),TGF-β1组(DMEM培养基加入含终浓度10 ng/mL TGF-β1作用48 h),曲格列酮组(DMEM培养基加入含终浓度10μmol/L曲格列酮作用2 h,再加入10 ng/mL TGF-β1作用48h),15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)组(DMEM培养基加入含终浓度10 μmol/L 15d-PGJ2作用2 h,再加入10 ng/mL TGF-β1作用48 h).应用蛋白质印迹法检测结缔组织生长因子(CTGF)的表达,实时荧光RT-PCR检测CTGF、基质金属蛋白酶1(MMP-1)及血小板源性生长因子(PDGF)的mRNA水平变化.对数据进行单因素方差分析.结果 TGF-β1组的CTGF蛋白和mRNA表达水平均高于空白对照组,曲格列酮组和15d-PGJ2组的CTGF蛋白及mRNA表达水平低于TGF-β1组.空白对照组、TGF-β1组、曲格列酮组、15d-PGJ 2组MMP-1 mRNA表达水平分别为1.281±0.195、0.193±0.051、0.417±0.043、0.485±0.027,其中TGF-β1组低于空白对照组(F=12.811,P＜0.01),曲格列酮组、15d-PGJ2组高于TGF-β1组(F=12.811,P值均小于0.01).空白对照组、TGF-β1组、曲格列酮组、15d-PGJ2组PDGF mRNA表达水平分别为0.349±0.057、1.044±0.237、0.677±0.055、0.511±0.017,其中TGF-β1组高于空白对照组(F=16.848,P＜0.01),曲格列酮组、15d-PGJ2组低于TGF-β1组(F=16.848,P值均小于0.01).结论 激活后的PPARγ对TGF-β1下游反应因子CTGF的抑制作用,可能是其拮抗TGF-β1促皮肤瘢痕化的主要机制,而对细胞因子MMP-1、PDGF的影响可能也是其机制之一.     

曲格列酮减轻西罗莫司对前脂肪3T3-L1细胞功能的抑制效应

目的 研究噻唑烷二酮类曲格列酮对西罗莫司作用下3T3-L1细胞的脂质蓄积及分泌功能的影响并探讨其机制.方法 体外培养前脂肪细胞3T3-L1细胞株,分成对照组、西罗莫司(100 nmol/L)组、西罗莫司(100 nmol/L)+曲格列酮(10 μmol/L)组和曲格列酮(10 μmol/L)组.高效液相色谱法(HPLC)检测3T3-L1细胞内胆固醇水平;酶联免疫吸附试验法(ELISA)分析瘦素的分泌量.实时荧光定量PCR法及Western印迹法检测3T3-L1细胞PPARγ mRNA和蛋白表达情况.结果 高效液相色谱法定量测定细胞内胆固醇结果显示,西罗莫司+曲格列酮组总胆固醇是西罗莫司组的1.08倍,游离胆固醇为其1.19倍(P＜0.05).曲格列酮能上调西罗莫司作用后3T3-L1细胞瘦素分泌水平,对照组、西罗莫司组、西罗莫司+曲格列酮组、曲格列酮组瘦素分泌量分别为(19.02±0.52) μg/L、(15.62±0.47) μg/L、(16.45±0.51) μg/L、(18.07±0.66) μg/L,西罗莫司+曲格列酮组瘦素分泌水平为西罗莫司组的1.05倍(P＜0.05).曲格列酮能减轻西罗莫司对PPARy表达的抑制效应,西罗莫司、西罗莫司+曲格列酮组、曲格列酮组PPARγ mRNA表达量分别为对照组的(0.60±0.14)倍、(1.12±0.27)倍、(1.30±0.14)倍,西罗莫司+曲格列酮组PPARγ mRNA表达量显著高于西罗莫司组(P＜0.05);各组相应的PPARγ蛋白表达量分别为对照组的(0.74±0.11)倍、(1.37±0.52)倍、(0.61±0.10)倍,其中西罗莫司+曲格列酮组PPARγ表达量显著高于西罗莫司组(P＜0.05).结论 曲格列酮能通过PPARγ减轻西罗莫司对脂肪细胞脂质蓄积和分泌功能的抑制,这为临床上西罗莫司引起的高脂血症提供一个可能的解决途径.     

过氧化物酶体增殖激活物受体γ配体诱导肾癌细胞的凋亡

目的 观察过氧化物酶体增殖激活物受体γ(PPARγ)配体对肾癌细胞凋亡的影响.方法 通过ELISA方法 观察0～100 μmol/L浓度的吡格列酮和曲格列酮(TZDs)对肾癌细胞786-0、A498及正常肾细胞HK-2、HMCC凋亡的影响,Heochst 33342荧光染色、DNA片段化分析检测70.00 μmol/L吡格列酮或80.00 μmol/L曲格列酮处理后肾癌细胞的凋亡,Western blot观察TZDs处理后肾癌细胞凋亡调控蛋白bcl-2/bax的表达变化及Caspase-3活性的改变.结果 超过50.00 μmol/L的TZDs可诱导肾癌细胞出现凋亡,LC_(50)值分别为65.11 μmol/L(曲格列酮/786-O)、67.73 μmol/L(吡格列酮J/786.0)、63.91 μmol/L(曲格列酮/A498)和78.12 μmol/L(吡格列酮/A498),但对正常肾细胞没有影响.荧光染色显示80.00 μmol/L的吡格列酮及70.00 μmol/L的曲格列酮处理后肾癌细胞明显凋亡,伴随bcl-2蛋白的表达水平降低和bax蛋白的增加,Caspase-3的活性明显增强,在48 h可达到基础值的3.5-4.5倍.结论 激活PPARγ可以诱导肾癌细胞的凋亡,PPARγ有可能成为肾细胞癌新的治疗靶点.     

PPAR γ激动剂对TGF-β1诱导皮肤成纤维细胞细胞外基质表达的影响

目的:研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人正常皮肤成纤维细胞细胞外基质(extracellular matrix,ECM)表达效应作用的影响,探讨其抗瘢痕的潜在作用。方法:体外培养人正常皮肤成纤维细胞,羟脯氨酸比色法观察PPARγ配体15-脱氧前列腺素J2(15-deoxy-Δ12,14-prostaglandin J2,15d-PGJ2)及其激动剂曲格列酮对TGF-β1诱导的胶原表达的影响,免疫细胞化学法及图像分析技术观察、分析PPARγ激动剂对TGF-β1诱导的纤维连接蛋白(fibronectin,FN)表达的影响,MTT法观察不同浓度的PPARγ激动剂对成纤维细胞增殖活性的影响。结果:TGF-β1能显著增加人正常皮肤成纤维细胞胶原和FN表达,并呈剂量依赖效应;与TGF-β1刺激组相比,10μM15d-PGJ2、曲格列酮预处理组胶原和FN表达减少,有显著性差异(P<0.01);PPARγ激动剂对成纤维细胞的增殖活性影响分析,各实验组与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。结论:PPARγ激动剂可抑制TGF-β1诱导的人正常皮肤成纤维细胞ECM合成增多的效应,具有体外抗瘢痕纤维化的作用。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对前列腺上皮细胞作用的研究

目的 研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在人类前列腺上皮细胞株RWPE-1的表达和对前列腺细胞凋亡过程的影响.方法 用免疫细胞化学和免疫荧光法检测PPARγ在RWPE-1细胞的表达.细胞分对照组和实验组,实验组细胞采用PPARγ激动剂罗格列酮处理,分别检测2组细胞中凋亡执行酶Caspase 3/7的活性,采用免疫细胞化学方法检测Bax表达,采用阳离子染料JC-1观察线粒体膜电位变化.采用SPSS 13.0软件对实验数据进行统计分析,组间均数比较采用独立样本t检验,α=0.05.结果 PPARγ在人类前列腺上皮细胞株RWPE-1表达,主要定位于细胞核和核周.实验组Caspase 3/7活性[(10 636±1032)RLU]明显高于对照组[(5936±620)RLU],差异有统计学意义(P＜0.01).实验组Bax表达显著增加,对照组累计吸光度(A)值为6017±563,实验组为8250±694,2组比较差异有统计学意义(P＜0.01).线粒体膜电位检查发现,对照组呈黄绿色荧光,实验组呈绿色荧光,表明实验组线粒体膜电位发生去极化改变.结论 PPARγ激动剂能够诱导前列腺上皮细胞凋亡,这一过程涉及Bax和线粒体膜电位改变,提示PPARγ可能通过调控前列腺细胞的凋亡过程参与BPH发病.     

过氧化物酶体增殖活化受体γ激动剂罗格列酮对MG63细胞抑制生长及促进凋亡的作用

目的 观察过氧化物酶体增殖活化受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮对骨肉瘤细胞株MG63的生长抑制及诱导凋亡作用.方法 取人骨肉瘤MG63细胞,用终质量浓度为0.5、5.0、50.0、100.0 μmol/L罗格列酮分别处理细胞,对照组不给予药物,噻唑蓝(MTT)比色法测定药物作用24、48、72 h对细胞生长的抑制率;流式细胞术(FCM)检测终质量浓度0、0.5、5.0、50.0 μmol/L罗格列酮处理24、48 h细胞周期分布;TUNEL法检测终质量浓度0.5μmol/L罗格列酮处理48 h的细胞凋亡,并计算凋亡指数(AJ).结果 细胞生长抑制率:(1)罗格列酮各浓度作用24、48、72 h,2个时间点抑制率两两比较的差异均有统计学意义(P＜0.01),有随时间增长而增加的趋势,其中0.5μmol/L对细胞的抑制率(％)分别为30.10±0.01、46.70±0.01和48.80±0.02;(2)在各时间点,各浓度组间比较差异均有统计学意义(P＜0.01),在0.5～50.0 μmol/L浓度组区间,相同时间点的抑制率有随浓度升高而降低的趋势.细胞周期:(1)不同浓度的各细胞周期分布差异有统计学意义(P＜0.01).在24、48h时间点均表现为用药组G0/G1期细胞比例高于对照组,0.5mol/L组细胞比例最高,但随用药浓度增加,G0/G1期比例有下降趋势;用药组S期细胞比例均低于对照组,随用药浓度增加,S期比例有增高趋势;即用药可将细胞周期阻滞在G0/G1期的作用;(2)不同时间点间细胞周期分布变化的差异无统计学意义(F=0.36,P＞0.05).细胞凋亡:0.5 μmol/L组凋亡率(14.33±3.35)％明显高于对照组(2.82±0.63)％(P＜0.01),光镜下可见药物组细胞核固缩及散在的凋亡小体.结论 PPARγ激动剂罗格列酮能明显抑制人骨肉瘤MG63细胞的增殖,诱导该细胞G1期阻滞和细胞凋亡.     

PPARγ激动剂对成人正常皮肤成纤维细胞转分化的作用

目的：观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂对转化生长因子β1（TGF-β1）诱导成纤维细胞转分化的影响,探讨其抗瘢痕纤维化的潜在作用。方法：体外培养成人正常皮肤成纤维细胞,利用免疫荧光细胞化学法观察、分析PPARγ配体15-脱氧前列腺素J2（15d-PGJ2）及其激动剂曲格列酮对TGF-β1诱导的α平滑肌动蛋白（α-SMA）表达的影响,利用Western blot、实时荧光RT-PCR技术检测PPARγ激动剂对TGF-β1诱导的α-SMA蛋白及mRNA水平的影响。结果：TGF-β1能显著增加成纤维细胞转分化为肌成纤维细胞;与TGF-β1诱导组相比,10μM曲格列酮、15d-PGJ2预处理组的α-SMA表达量显著减少（P〈0.01）,抑制效应分别为31%、57%;预处理组的α-SMA mRNA水平显著下降（P〈0.01）。结论：PPARγ激动剂能抑制TGF-β1诱导的成人正常皮肤成纤维细胞的转分化的效应,具有抗皮肤瘢痕化、挛缩的潜在作用。     

PPARγ参与调节胃癌MKN45细胞株VEGF mRNA的表达及临床意义

目的研究过氧化物酶体增殖激活受体(PPARγ)是否体外参与调节胃癌MKN45细胞VEGF mRNA的表达及临床意义。方法体外培养人胃癌细胞系MKN45,不同浓度的PPARγ激动剂(曲格列酮),PPARγ特异性抑制物体外作用细胞,EMSA测定细胞PPARγ的活性,RT-PCR检测细胞VEGF mRNA的表达。结果相对于对照组,随曲格列酮浓度的增加,胃癌MKN45细胞株PPARγ活性显著性升高(P<0.01),VEGF mRNA的表达显著性降低(P<0.01),且呈剂量依赖关系;PPARγ特异性抑制物能显著性抑制曲格列酮诱导的胃癌MKN45细胞株PPARγ的活化和VEGF mRNA的表达的下调(P<0.01)。结论PPARγ可能参与调节胃癌MKN45细胞株VEGF mRNA的表达,曲格列酮通过激活PPARγ,抑制胃癌MKN45细胞株VEGF mRNA的表达,可能为胃癌的治疗提供新的靶点。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂对肝星状细胞增殖的影响

目的 观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂对肝星状细胞增殖的影响，探讨其抗肝纤维化的可能作用机制。方法 利用胶原酶原位灌注梯密度离心方法分离大鼠肝星状细胞（HSC），利用噻唑蓝（MTT）比色法、流式细胞技术检测曲格列酮、15-脱氧-前列腺素J2（15-d-PGJ2）对HSC增殖及细胞周期的作用。结果 MTT检测表明曲格列酮、15-d—PGJ2在5～100μmoL／L浓度范围内可显著抑制HSC的增殖，与对照组比较P〈0．01；流式细胞检测表明25、50μmoL／L的曲格列酮可显著降低HSCS期细胞数量，降低细胞增殖指数，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论 PPARy激动剂通过影响HSC的增殖而发挥其抗肝纤维化作用。     

过氧化物酶增殖物活化受体γ对肝肿瘤细胞生物学行为影响的实验研究

目的探讨过氧化物酶增殖物活化受体γ在肝肿瘤细胞株中的表达,结合配体对其生长的影响,并初步探讨其机制。方法RT-PCR及Westen blot检测肝肿瘤细胞株中PPARγ的表达;MTT法检测PPARγ活化对肝肿瘤细胞生长的影响,Annexin V-FITC、DAPI染色、流式细胞仪、RT- PCR分别研究PPARγ对肝肿瘤细胞凋亡、细胞周期、周期调节因子影响。结果人类肝肿瘤细胞株SMMC-7721、Hep G2、Hep 3B在mRNA及蛋白水平均表达PPARγ;PPARγ/活化配体曲格列酮、吡格列酮作用肝肿瘤细胞株48 h后在25、50μmol/L浓度时显示明显的生长抑制作用,流式细胞仪显示细胞周期中G_0/G_1期显著延长,S期明显减少,曲格列酮10、25、50μmol/L作用SMMC-7721 48 h后,Cyclin D1的表达明显下调,P21~(WAF1/CIP1)的表达则明显上调,P27~(KIP1)未见明显变化。PPARγ配体在25、50μmol/L浓度时可诱导SMMC一7721凋亡。结论PPARγ在SMMC-7721、Hep G2、Hep 3B中存在表达;PPARγ配体对于肝肿瘤细胞株有明显的生长抑制作用,其生长抑制作用可能是通过下调Cyclin D1,上调P21~(WAF1/CIP1)表达,产生细胞周期阻滞及促进细胞凋亡而实现。     

曲格列酮对肝癌HepG2细胞生长和分化的影响

目的 探讨过氧化物酶体增殖物活化受体(peroxisome proliferator-activated receptor, PPAR)γ激动剂曲格列酮对肝癌HepG2细胞生长和分化的影响.方法 以曲格列酮处理体外培养的肝癌HepG2细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,分化标记物E-钙黏蛋白和清蛋白分别用免疫细胞化学和溴甲酚绿法检测,化学发光法检测肿瘤标记物AFP.Western blot检测细胞周期蛋白Dl、c-myc蛋白的表达.结果 曲格列酮以浓度依赖性方式抑制肝癌细胞生长,使细胞周期明显阻滞于G0/G1,并诱导E-钙黏蛋白表达.经曲格列酮处理后,清蛋白分泌量显著增加,AFP明显下降,细胞周期蛋白Dl、c-myc蛋白表达水平下降.结论 曲格列酮可诱导肝癌细胞分化,抑制其生长,其机制可能涉及下调细胞周期蛋白D1和c-myc蛋白表达.     

罗格列酮抑制环孢素诱导的大鼠肾脏成纤维细胞基质金属蛋白酶9和金属蛋白酶1组织抑制剂表达

目的 观察罗格列酮(RGZ)对环孢素A(CsA)作用下大鼠肾脏成纤维细胞(NRK)过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPARγ)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响,探讨罗格列酮对环孢素A肾毒性保护作用的分子机制.方法 构建、筛选和扩增PPARγ基因的siRNA载体,并将载体转染至体外培养的NRK细胞.体外培养NRK细胞,随机分组.(1)对照组:不加处理;(2)RGZ组:加RGZ( 10 μmol/L);(3)CsA组:加CsA( 1.0 mg/L);(4)CsA+RGZ 组:同时加CsA( 1.0 mg/L)及RGZ(10 μmol/L);(5)CsA+RGZ+siRNA组:质粒pRNAT- U6.2/LentiPPARγ-236转染NRK细胞,然后同时加入CsA( 1.0 mg/L)及RGZ(10 μmol/L).培养24 h后,用实时荧光定量和RT-PCR法检测各组细胞中PPARγ、MMP-9、金属蛋白酶1组织抑制剂(TIMP-1) mRNA表达,用Western印迹法检测纤连蛋白(FN)的蛋白表达.结果 CsA明显上调PPARγ、MMP-9和TIMP-1 mRNA的表达(均P＜0.05);RGZ与CsA合用后,PPARγ、MMP-9和TIMP-1 mRNA表达下降(均P＜0.05);应用PPARγ siRNA后,与RGZ+ CsA组相比,PPARγ mRNA表达显著下降(P＜0.05),MMP-9 mRNA和TIMP-1 mRNA表达有所增加(均P＜ 0.05).CsA明显上调FN蛋白表达(P＜0.05);RGZ与CsA合用后,FN蛋白表达下降(P＜0.05);应用含PPARγ siRNA后,FN蛋白表达有所增加(P＜0.05).结论 罗格列酮可以显著减轻CsA诱导NRK细胞分泌的FN蛋白及MMP-9、TIMP-1 mRNA的表达,构建的siRNA质粒转染NRK细胞,能够有效地阻断NRK中PPARγ mRNA的表达,部分阻断罗格列酮对CsA毒性的改善作用.     

曲格列酮保存液对大隐静脉黏附分子和一氧化氮合酶表达的影响

目的 探讨过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPARγ)配体-曲格列酮是否能够减轻所保存的大隐静脉血管内皮细胞损伤.方法 9例CABG的大隐静脉移植血管自身配对分为对照组(自体肝素化血液保存组)和实验组(含20 μmol/L曲格列酮自体肝素化血液保存组)室温下保存1 h,采用免疫组织化学和Western免疫印迹法检测黏附分子和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的表达,以及酶化学法测定血管组织中髓过氧化物酶(MPO)活性.结果 在实验组黏附分子ICAM-1、VCAM-1表达分别为(753±132、3731±294)明显低于对照组(7201±934、8292±793,P＜0.01);而实验组eNOS表达(7983±834)明显高于对照组(3989±1008,P＜0.01),血管组织MPO活性明显低于对照组[(1.52±0.42)、(5.04±1.26)U/g,P＜0.01].结论 PPARγ配体-曲格列酮保存液能够减轻大隐静脉内皮细胞激活和减少白细胞黏附,对静脉移植血管具有一定保护作用.     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ激动剂15-脱氧前列腺素J2对小移植肝再灌注损伤的保护作用

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARy)激动剂15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)对小移植肝大鼠再灌注损伤的保护作用及其机制.方法 将108只SD大鼠随机分为3组:(1)15d-PGJ2预处理组;(2)15d-PGJ2+GW9662组;(3)生理盐水对照组(NS组).检测术后6、24、72 h血清丙氨酸转氨酶(ALT)和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;检测术后24 h肝组织中丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量;检测肝组织中髓性过氧化物酶(MPO)活性以反映中性粒细胞的浸润;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肝组织中肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;观察术后24h光镜下肝组织病理学变化.结果 与NS组和15d-PGJ2+GW9662组比较,15d-PGJ2预处理组术后6、24、72 h血清ALT和AST水平明显降低(P＜O.01);术后24h SOD活性明显升高而MDA含量降低,差异有统计学意义(P＜0.01);肝组织中TNF-α含量及MPO活性亦明显降低,差异有统计学意义(P＜0.01);苏木素-伊红(HE)染色显示:NS组和15d-PGJ2+GW9662组术后24 h,表现为明显的肝细胞空泡变性,肝窦扩张,炎症细胞浸润;15d-PGJ2组较其他两组肝组织损伤轻微.结论 PPARγ激动剂15d-PGJ2对小移植肝术后再灌注损伤有明显的保护作用,其保护机制可能与提高机体抗氧化能力,抑制脂质过氧化及减轻炎症反应密切相关.

Abstract：

Objective To investigate the protective effect of peroxisome proliferator-activated receptor γ (PPARγ) agonist 15d-PGJ2 against reperfusion injury in small-for-size liver grafts and its probable mechanisms. Methods 108 adult male SD rats were randomly divided into three groups: ( 1 ) 15d-PGJ2 group; (2) 15d-PGJ2 + GW9662 group; (3) NS control group. Serum aspartate aminotransferase (AST) and alanine aminotransferase (ALT) levels at 6, 24 and 72 h after reperfusion and histopathological changes were analyzed, the contents of malondialdehyde (MDA) and superoxide dismutase (SOD) in liver grafts after 24 h were determined, myeloperoxidase (MPO) activity was examined to assay neutrophil infiltration into the grafts at 24 h after reperfusion, and transforming growth factor (TGF)-α levels at 24 h after reperfusion were measured by using enzyme-linked immunosorbent assay ( ELISA method). Results As compared with NS control group and 15d-PGJ2 + GW9662 group, serum AST and ALT levels were significantly reduced at 6, 24 and 72 h after reperfusion in 15d-PGJ2 group (P ＜0. 01 ). Histopathological analysis revealed apparent bulb-like degeneration, hepatic sinusoid dilation, and inflammatory cell infiltration in periportal area at 24 h in NS group and 15d-PGJ2 + GW9662 group after transplantation, while in the 15d-PGJ2 group, minimal damage was observed at 24 h after transplantation under the light microscopy, the contents of MDA were lower and SOD levels were higher than in other groups ( P ＜0. 01 ). As compared with NS group and 15d-PGJ2 + GW9662 group, TNF-α levels and MPO activity at 24 h after transplantation were also significantly decreased in 15d-PGJ2 group (P ＜ 0. 01 ). Conclusion PPARγagonist 15d-PGJ2 could ameliorate reperfusion injury in small-for-size liver grafts significantly, which was mediated in part by increasing antioxidant ability, inhibiting lipid peroxidation, and down-regulating inflammatory reaetion.     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ与肾间质纤维化的研究进展

过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂不仅具有胰岛素增敏效应,而且具有控制炎症、调控细胞因子生成、抑制细胞外基质等作用,在肾间质纤维化过程中也发挥重要作用.本文就PPARγ与肾间质纤维化的关系作一.     

罗格列酮对人多囊肾囊肿衬里上皮细胞增殖的抑制作用

目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂罗格列酮对常染色体显性遗传性多囊肾病（ADPKD）囊肿衬里上皮细胞增殖的抑制作用及其机制。 方法 MTT法检测罗格列酮对ADPKD囊肿衬里上皮细胞系（WT9-12）细胞增殖的作用;流式细胞术检测罗格列酮对WT9-12细胞周期及凋亡的影响;Western印迹法检测罗格列酮对哺乳类动物的雷帕霉素靶蛋白（mTOR）-p70核糖体S6激酶（p70S6K）信号通路的影响。给予PPARγ特异性抑制剂GW9662及PPARγ siRNA瞬时转染WT9-12细胞,检测罗格列酮对细胞增殖及对mTOR信号通路的作用是否为PPARγ依赖性的。 结果 罗格列酮抑制WT9-12细胞增殖,此作用在0~200 &#61549;mol/L范围内呈剂量依赖性及时间依赖性,作用72 h的50%抑制率浓度为100 &#61549;mol/L。细胞周期分析显示,罗格列酮（50、100 &#61549;mol/L）作用后,G0/G1期细胞较对照组显著增多（65.43%、64.02%比49.65%,P ＜ 0.05）。50、100 &#61549;mol/L罗格列酮对细胞凋亡影响不大,高浓度（200 &#61549;mol/L）罗格列酮可使凋亡细胞达6%（正常对照组为4%）。罗格列酮可呈时间及剂量依赖性下调WT9-12细胞p70S6K磷酸化表达,而对mTOR及其另一个下游4E结合蛋白1（4E-BP1）磷酸化水平无明显影响。加入GW9662及转染PPARγ siRNA阻断PPARγ表达后,可部分阻断罗格列酮对p70S6K磷酸化的影响（P ＜ 0.01）。 结论 罗格列酮可抑制ADPKD囊肿衬里上皮细胞增殖和阻滞细胞周期,可不依赖于mTOR途径直接下调p70S6K磷酸化表达。罗格列酮对ADPKD囊肿衬里上皮细胞p70S6K磷酸化的影响是PPARγ依赖性的。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ对人肝癌细胞生长和凋亡的影响及其机制

目的 检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)在人肝癌、癌旁和正常肝组织的表达,探讨激活或抑制PPARγ在肝癌细胞株生长和凋亡中的作用及其机制.方法 应用免疫组织化学方法检测20例肝癌、癌旁和正常肝组织中PPARγ的表达,Western blot检测2种肝癌和1种正常肝细胞株中PPARγ表达;PPARγ激动剂15dPGJ2和拮抗剂T0070907分别干预培养的2种肝癌细胞株,噻唑蓝(MTT)检测细胞生存率,流式细胞术(FCM)检测细胞周期及凋亡,试剂盒检测Caspase-3活性变化.结果 肝癌组织中PPARγ表达高于癌旁和正常肝组织(P＜0.05),PPARγ主要在肝癌细胞质中表达;肝癌细胞株PPARγ表达比正常肝细胞株高(P＜0.05);15dPG-J2抑制肝细胞增殖而T0070907则促进肝癌细胞增殖(P＜0.05).15dPG-J2可使肝癌HepG2和SMMC7721细胞G0/G1期细胞比例由(42.5±0.9)%和(49.0±3.8)%增高至(61.0±2.0)%和(67.5±2.2)%,(P＜0.05),S期由(30.5±0.3)%和(43.0±2.5)%降低至(6.6±1.1)%和(25.1±2.0)%(P＜0.05).而且,15dPG-J2可明显促进两种肝癌细胞凋亡,凋亡率分别增加约24.4%和22.4%,并可增强细胞Caspase-3活性(P＜0.05);Caspase抑制剂Z-VAD-FMK则可逆转15dPG-J2对肝癌细胞的促凋亡作用.结论 PPARγ在肝癌细胞中表达升高,其表达主要位于细胞质中,为无活性状态.PPARγ激动剂可活化PPARγ和Caspase通路,抑制肝癌细胞生长,促进细胞凋亡.

Abstract：

Objective To investigate the expression of peroxisome proliferator-activated receptor γ (PPARγ) in human liver cancer tissue and cells, and to explore the effects and mechanisms of PPARγ on growth and apoptosis in human hepatocellular carcinoma cells. Methods The expression of PPARγ in 20 cases of liver cancer, tumor adjacent tissue, normal liver, one liver cell line and two liver cancer cell lines were detected by immunohistochemistry or Western blotting. Two incubated malignant cell lines were exposed to PPARγ agonist 15dPGJ2 or antagonist T0070907, cell viability was determined by methyl thiazol tetrazolium (MTT) assay and cell cycle distribution and apoptosis were examined by flow cytometry (FCM). Consequently, the activity of caspase-3 following treatments of 15dPGJ2 or T0070907 was observed by the commercial Caspase-3 Activity Kit. Results The expression of PPARγin liver cancer was higher than that in adjacent and normal liver tissue ( P ＜ 0. 05) and PPART was predominantly expressed in the cytoplasm. Further,the expression of PPARγwas higher in hepatoma cell line than that in normal liver cell line (P＜ 0.05 ). PPARγ agonist 15dPG-J2 inhibited the proliferation while the antagonist T0070907 induced the growth of hepatoma cells (P ＜ 0. 05). G0/G1 phase of HepG2 and SMMC772 cells was blocked by 15dPG-J2, and the ratio were raised from (42.5 ±0.9)% and (49.0 ±3.8)% to (61.0 ±2. 0)% and (67.5 ±2. 2)% ,respectively. Meantime,S phase ratio were decreased from (30. 5 ± 0. 3 ) % and (43.0 ± 2. 5 ) % to ( 6. 6 ± 1. 1 ) % and ( 25. 1 ± 2. 0 ) %. Further, 15 dPG-J2 facilitated significant apoptosis in those cell lines and the increased apoptosis ratio were 24. 4% and 22. 4% respectively.Accordingly,the activity of Caspase-3 induced by 15dPGJ2 were 21-and 23-fold higher than those in control groups (P ＜ 0. 05 ). The Caspase inhibitor Z-VAD-fmk expectedly reversed the apoptosis induced by 15dPGJ2 in HepG2 and SMMC772 cells. Conclusion The expression of PPARγ increases in human hepatoma predominantly in cytoplasm with its inactivated form. 15dPG-J2 ,an agonist of PPART inhibits growth and induces apoptotic in hepatoma cells through activation of PPARγ pathway and the consequent Caspase3 signal.     

PPARγ激动剂对腹膜透析相关性急性腹膜炎大鼠PPARγ、Toll样受体4表达及STAT1信号活化的影响

目的 观察过氧化物酶体增殖物活化受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮和15脱氧前列腺素J2（15d-PGJ2）对脂多糖（LPS）诱导大鼠腹膜透析相关性急性腹膜炎模型腹膜组织PPARγ、Toll样受体4（TLR4）表达、STAT1活化及腹腔局部炎性反应的影响。 方法 24只雄性SD大鼠随机分成4组，每组6只。对照组：腹腔注入4.25%葡萄糖乳酸盐腹膜透析液（简称腹透液，90 ml/kg）；LPS组：LPS 1 mg/kg腹腔注入4 h后，再注入腹透液；罗格列酮+ LPS组（罗格列酮组）：罗格列酮20 mg&#8226;kg-1&#8226;d-1灌胃预处理3 d，注入LPS及腹透液；15d-PGJ2 + LPS组（15d-PGJ2组）：15d-PGJ2 0.3 mg&#8226;kg-1&#8226;d-1腹腔注入预处理3 d，注入LPS及腹透液。注入腹透液4 h后处死大鼠，留取腹水、壁层及脏层腹膜组织。ELISA法检测腹水中IL-6浓度。常规行腹膜组织Masson染色和腹水白细胞计数。RT-PCR检测腹膜组织PPARγ、TLR4 mRNA的表达；Western印迹法检测腹膜组织PPARγ、TLR4、磷酸化（p）-STAT1、STAT1蛋白的表达。 结果 LPS组大鼠腹水IL-6浓度[268.53（201.87～335.19） ng/L]高于对照组[147.62（130.60～164.64） ng/L）]（P < 0.01）；罗格列酮组大鼠腹水IL-6浓度[110.20（77.60～142.80） ng/L]低于LPS组（P < 0.05）。与对照组比较，LPS组大鼠腹膜组织明显水肿，腹膜组织PPARγ、TLR4 mRNA及蛋白表达均显著增强（P < 0.05）。与LPS组相比，罗格列酮组大鼠腹膜组织水肿明显减轻，PPARγ、TLR4 mRNA表达显著增高（P < 0.05），但其蛋白表达显著减弱（P < 0.05）。15d-PGJ2组大鼠腹膜组织水肿明显减轻，PPARγ mRNA及其蛋白表达均显著减弱（均P < 0.05），TLR4 mRNA表达显著增强（P < 0.01），但其蛋白表达减弱（P < 0.05）。各组间腹水白细胞计数差异无统计学意义。罗格列酮、15d-PGJ2均明显上调LPS诱导的p-STAT1表达（P < 0.01）。 结论 罗格列酮和15d-PGJ2可负性调节LPS诱导的大鼠急性腹膜炎性反应，并对LPS信号通路中相关功能蛋白起一定的调控作用。