5-氮杂胞苷对骨髓间充质干细胞向肌细胞增殖及分化的影响

目的：探讨在不同浓度5-氮杂胞苷（5-Aza）诱导间充质干细胞(MSCs)分化为成肌细胞过程中，其对干细胞增殖及分化的影响。方法：分离纯化鉴定4周龄Wistar大鼠骨髓MSCs，以不同浓度5-Aza作用，用四唑盐（MTT）法测定细胞生长活力，观察细胞形态变化，通过RT-PCR及电泳测定诱导后大鼠的MSCs中骨骼肌肌动蛋白的表达。结果：0和1 μmol·L^-1 5-Aza对细胞增殖无明显影响；随着5-Aza浓度的增高，MSCs的增殖逐渐减弱；20~30 μmol·L^-1 5-Aza对细胞有毒性作用，影响其增殖。3和6 μmol·L^-1 5-Aza，MSCs有骨骼肌肌动蛋白的表达；9和12 μmol·L^-1 5-Aza，MSCs有骨骼肌肌动蛋白的表达，该浓度作用9 d后有部分细胞体明显增粗，12 d有肌管样细胞出现。结论：5-Aza影响干细胞分化，调控基因的表达及调控MSCs向肌细胞定向分化为肌管样细胞的过程。     

5-氮杂胞苷对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖及成肌分化的影响

[目的]观察5-氮杂胞苷(5-Aza)对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)体外增殖和成肌分化的影响.[方法]无菌条件下取SD大鼠骨髓组织,采用密度梯度离心法分离大鼠MSCs,传3代后的MSCs采用双标免疫组化法鉴定后,随机分为4组:浓度为5、10、15μmol/L的5-Aza组和空白对照组,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度5-Aza对MSCs生长增殖的影响;以含5、10、20μmol/L5-Aza的培养基诱导培养MSCs 24 h后,改用完全培养基继续培养,采用免疫组织染色法鉴定5-Aza诱导分化3、7、14d后细胞肌分化相关蛋白肌凝蛋白(myosin)和结蛋白(desmin)的表达情况.[结果]双标免疫组化染色结果显示:所培养细胞同时表达Brdu和CD44、CD54,表达率达96%,鉴定结果表明所培养细胞为MSCs;5、10μmol/L5-Aza对MSCs增殖无显著影响(P>0.05),15μmol/L5-Aza可显著抑制MSCs生长(P<0.05);不同浓度5-Aza诱导培养MSCs后第3天,部分细胞出现desmin阳性表达,诱导后14 d,部分细胞表达myosin,以10μmol/L5-Aza组作用为佳.[结论]高浓度5-Aza可抑制MSCs体外增殖;适宜浓度的5-Aza可诱导MSCs向成肌细胞定向分化.     

不同浓度5-氮胞苷对骨髓间质干细胞体外诱导分化的作用

目的 :比较不同浓度药物对骨髓间质干细胞(BMMSC)体外向心肌细胞诱导分化的影响 .方法 :分离大鼠BMMSC体外培养 ,分别使用终浓度为 1 ,5 ,1 0和 2 0 μmol·L-1 的 5 氮胞苷 (5 aza)对其定向诱导 ,观察细胞形态学变化 ,荧光免疫组织化学方法进行鉴定 .结果 :BMMSC体外经 5 aza诱导 4wk ,肌钙蛋白、肌动蛋白及Connexin4 3表达阳性 ,1 0μmol·L -1 5 aza组及 2 0 μmol·L -1 5 aza组表达较高 ,但 2 0μmol·L -1 5 aza组 5 0 %细胞死亡 .结论 :BMMSC可以在体外经 5 氮胞苷诱导分化为心肌细胞 ,以 1 0 μmol·L -1 5 aza诱导作用较好     

5-氮胞苷诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化的实验研究

目的:研究体外培养大鼠骨髓间充质干细胞(mensenchymal stem cells,MSCs) 经5-氮胞苷(5-aza) 诱导定向分化为心肌样细胞形态学及分子生物学特征?方法:SD大鼠股骨骨髓经密度梯度离心及贴壁分离培养传代MSCs,体外用5-aza定向诱导向心肌样细胞分化?相差显微镜观察心肌样细胞形态学变化?免疫组化检测肌钙蛋白T(cTnT)?α-肌动蛋白和缝隙连接蛋白Cx43表达?结果:密度梯度离心及贴壁法分离培养的MSCs生长稳定,增殖快?5-aza诱导后,部分细胞形态发生变化,有肌管样结构形成?随诱导后培养时间延长MSCs中cTnT?α-肌动蛋白和缝隙连接蛋白Cx43表达逐渐增强?结论:密度梯度离心及贴壁分离培养可获得大量纯度较高的骨髓间充质干细胞?经5-aza诱导骨髓间充质干细胞体外可分化为心肌样细胞?     

黄芪注射液与5-氮杂胞苷体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞的研究

目的研究黄芪注射液与5-氮杂胞苷（5-Aza）对大鼠骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）分化为心肌细胞的影响。方法在无菌条件下从成年大鼠胫骨骨髓分离出MSCs。以1：3的比例传代,取第3代的细胞．接种后随机将MSCs分为黄芪注射液诱导分化组、5-Aza诱导分化组、黄芪注射液预处理后5-Aza诱导分化组。分别以黄芪注射液、5-Aza及黄芪注射液＋5-Aza进行诱导,用相差显微镜观察各纽细胞形态变化;免疫细胞化学鉴定MSCs表面标志物及心肌特异性肌钙蛋白I。结果各组诱导后细胞形态发生改变,细胞之问形成连接,排列方向趋于一致,免疫组化检测结果显示肌钙蛋白I（eTnI）表达均阳性。黄芪注射液组与5-Aza组相比其诱导率无明显区别．但黄芪注射液＋5一Aza组阳性细胞比率均高于5-Aza组及黄芪注射液组．差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论黄芪注射液可体外诱导MSCs分化为心肌样细胞,采用黄芪注射液预处理后5-Aza诱导分化的方法优于单纯采用黄芪注射液或5-Aza谤导法。     

米非司酮对子宫肌瘤培养细胞雌、孕激素受体和表皮生长因子受体表达的影响

目的 :探讨米非司酮对子宫肌瘤培养细胞的雌、孕激素受体 (ER、PR)和表皮生长因子受体 (EGFR)水平的影响。方法 :测定并比较不同浓度米非司酮干预的子宫肌瘤细胞上的ER、PR、EGFR水平。结果 :(1)米非司酮干预后ER表达量无明显改变。 (2 )PR和EGFR在分泌期高于增生期 ,PR和EGFR在 1.0 μmol·L- 1 和 10 μmol·L- 1 组表达量明显下降 ,与 0 μmol·L- 1 和 0 .1μmol·L- 1 组之间差异有显著性 (P <0 .0 5 )。而 1.0 μmol·L- 1 和 10 μmol·L- 1 组之间无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :(1)米非司酮通过下调PR、EGFR而不是ER来抑制肌瘤的生长。 (2 )米非司酮下调子宫肌瘤PR、EGFR的作用存在剂量阈值。 1.0 μmol·L- 1 的米非司酮是抑制子宫肌瘤细胞PR和EGFR表达的阈值剂量。     

不同低氧分压对SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖分化的影响

目的研究体外不同低氧分压对SD大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖分化的影响。方法将体外培养的MSCs,分组置于常氧(21%)和低氧(2%、4%、6%、8%)培养箱中培养,用MTT法分别于1、3、5、7、9d检测细胞的增殖活性;用酶联免疫检测法分别于1、3、5、7、9d检测细胞碱性磷酸酶(ALP)和Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)的表达。结果不同低氧分压对MSCs细胞增殖活性有明显促进作用(P<0.05);低氧分压抑制MSCs细胞的ALP和COLⅠ表达(P<0.05)。结论低氧微环境可促进MSCs的增殖活性,但对细胞的成骨向分化起到抑制作用。     

一氧化氮对血管平滑肌细胞增殖的影响及与细胞周期调节的关系

目的 :评价NO供体 (DETANO)抑制血管平滑肌细胞增殖的效应及其抗增殖效应与细胞周期抑制蛋白P2 7kip1的关系。方法 :将DETANO(10 -5～ 10 -3 mol·L-1)、DETA(10 -3 mol·L-1)及阴性对照 (DMSO)作用于体外培养的血管平滑肌细胞 ,观察不同处理因素的抗增殖效应。应用蛋白杂交方法分析G0 期、增殖期和DETANO作用的平滑肌细胞中P2 7的表达水平。结果 :DETANO能抑制血管平滑肌细胞的增殖 ,以 10 -3 mol·L-1浓度的DETANO效果最显著 ,而单纯DETA对细胞增殖无抑制效应。而且DETANO和DETA无细胞毒性效应。蛋白印迹分析表明处于G0期的细胞P2 7高水平表达 ,给予 10 %胎牛血清刺激 2 4h后 ,P2 7水平迅速下降。若预先给予DETANO(10 -3 mol·L-1)干预 ,则P2 7蛋白水平下调的效应减弱。结论 :DETANO能抑制血管平滑肌细胞增殖 ,其抗增殖机制与细胞周期调控和上调P2 7kip1相关。     

PDGFR-β反义寡核苷酸对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响

目的　研究血小板衍化生长因子 β受体 (PDGFR- β)反义寡核苷酸 (AODN)对血管平滑肌细胞 (VSMC)增殖的影响 .方法　建立大鼠血管平滑肌细胞体外增殖模型 .将细胞分为反义寡核苷酸组、正义寡核苷酸组、无义寡核苷酸组和空白对照组 ,其中反义组按浓度又分为 1,2 .5 ,5 ,10和 15μmol· L- 1 5小组 .在加药后 2 4,48和 72 h以流式细胞仪测定细胞周期 ,免疫细胞化学染色分析细胞核增殖抗原的表达 ,MTT(四唑盐 )比色法测定细胞增殖活力 .结果　 10μmol·L- 1 PDGFR- β AODN干预 VSMC48h后 ,处于 DNA合成前期 (G0 / G1 )细胞数分数 (0 .70 )高于空白对照组 (0 .0 7,P <0 .0 5 ) ;PCNA免疫细胞化学染色发现以 5～ 15μmol· L- 1PDGFR- β AODN干预 48h后 VSMC各组胞核染色强度为2 0 .4%～ 6 .4%明显弱于空白组 (73.8% ) ,正义组 (72 .9% )和无义组 (75 .6 % ) (P<0 .0 5 ) ;10μmol· L- 1 PDGFR-β AODN作用 48h后 VSMC的增殖抑制率为 6 6 .7% ,高于正义组 (8.1% ) ,错义组 (11.8% )和 5 μmol· L- 1 AODN组 (4 5 .4% ) (P<0 .0 5 ) ;同时 10μmol· L- 1 AODN组 48h增殖抑制率与 2 4h(9.1% )相比明显增加 (P<0 .0 5 ) .结论　 PDGFR- β AODN对VSMC增殖有明显抑制作用 ,并且呈时间和浓度依赖性 .     

维生素K2对人骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1增殖抑制作用的实验研究

目的研究维生素K2(VK2)对人骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1的生长抑制作用.方法采用光镜或电镜技术观察VK2作用于MUTZ-1细胞株后细胞形态和超微结构的改变;应用四甲基偶氮唑蓝( MTT)法检测细胞的增殖抑制作用.结果VK2作用于MUTZ-1 72 h后呈现典型凋亡细胞的形态学改变, 且随着VK2浓度的增加和作用时间的延长凋亡细胞所占的百分比增高;MTT结果显示10 μmol·L-1及以上浓度的VK2处理MUTZ-1细胞株后细胞生长明显受抑,并呈浓度依赖性,与对照组比有显著性差异(P＜0.05);且随着VK2作用时间的延长细胞凋亡率也逐渐增高,且呈明显的时间依赖性(P＜0.05).5μmol·L-1的VK2有促MUTZ-1细胞株增生的趋势,但与对照组相比无显著性差异(P＞0.05).结论低浓度VK2(5μmol·L-1)对MUTZ-1细胞株有促增殖趋势;较高浓度的VK2(10～40μmol·L-1)主要是通过诱导MUTZ-1细胞凋亡而抑制其增殖.     

乳胞素联合卡铂对卵巢癌SKOV3细胞的增殖抑制作用和促凋亡作用

目的：探讨蛋白酶体抑制剂乳胞素（LAC）对体外卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响,并阐明其作用机制。方法：体外培养卵巢癌SKOV3细胞,采用0、2.5、5.0、10.0和20.0μmol·L^-1 LAC干预SKOV3细胞48 h,5μmol·L^-1 LAC干预SKOV3细胞0、24、48和72 h;将细胞分为对照组（细胞不经药物干预）、LAC组（加入5μmol·L^-1 LAC）、卡铂组（加入10、20、40及80μmol·L^-1卡铂）和LAC联合卡铂组（加入5μmol·L^-1 LAC和10、20、40、80μmol·L^-1卡铂）。采用MTT法和流式细胞术（FCM）检测各组卵巢癌SKOV3细胞的增殖抑制率和凋亡率。结果：MTT检测,随着LAC作用时间的延长和浓度的升高,SKOV3细胞的增殖受到明显抑制,48 h时LAC的半数抑制浓度（IC₅₀）为5.36μmol·L^-1;LAC联合卡铂组细胞的增殖抑制率较相同浓度卡铂组明显升高（P<0.05）,卡铂的IC₅₀由58.08μmol·L^-1下降至18.37μmol·L^-1。FCM检测,随着LAC作用时间的延长,SKOV3细胞凋亡率呈升高趋势;与卡铂组和LAC组比较,LAC联合卡铂组SKOV3细胞凋亡率明显升高（P<0.05）。结论：LAC可有效抑制卵巢癌SKOV3细胞的体外增殖且能诱导其凋亡,并可以明显增强卡铂对卵巢癌SKOV3细胞株的增殖抑制作用。     

樟脑磺哑嗪对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用及其机制

目的：探讨樟脑磺哑嗪对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的诱导作用及其机制。方法：人宫颈癌HeLa细胞分为对照组和不浓度樟脑哑嗪组,分别以浓度为0、0.5、1.0、5.0和10.0 μmol·L^-1樟脑磺哑嗪处理,24 h后MTT法检测各组HeLa细胞存活率和增殖抑制率。人宫颈癌HeLa细胞分为0、0.5、1.0和5.0 μmol·L^-1樟脑磺哑嗪组,12 h后倒置显微镜下观察各组HeLa细胞形态表现,Hoechst 33258染色检测各组HeLa细胞凋亡形态表现,Western blotting法检测HeLa细胞中凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2相对表达水平。结果：MTT法检测,与对照组（0 μmol·L^-1）比较,0.5,1.0,5.0和10.0 μmol·L^-1樟脑磺哑嗪组HeLa细胞存活率降低（P<0.05或P<0.01）,增殖抑制率升高（P<0.05或P<0.01）;樟脑磺哑嗪对HeLa细胞的半数抑制浓度（IC₅₀）为2.6 μmol·L^-1。对照组（0 μmol·L^-1樟脑磺哑嗪组）细胞生长状态良好,0.5、1.0和5.0 μmol·L^-1樟脑磺哑嗪组HeLa细胞的体积明显缩小,细胞间连接消失;Hoechst 33258染色,樟脑磺哑嗪处理的细胞出现明显的染色增加。Western blotting法检测,与对照组（0 μmol·L^-1樟脑磺哑嗪组）比较,0.5、1.0和5.0 μmol·L^-1樟脑磺哑嗪组HeLa细胞中Bcl-2蛋白相对表达水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,Bax蛋白相对表达水平明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：樟脑磺哑嗪可有效抑制体外培养的宫颈癌HeLa细胞的增殖,诱导HeLa细胞凋亡。     

人骨髓间充质干细胞体外定向诱导分化为心肌样细胞的超微结构

目的：培养人骨髓间充质干细胞（hMSCs）,体外向心肌细胞(CMs)定向诱导分化,进行超微结构观察,为hMSCs体外向CMs诱导分化提供理论依据。方法：体外分离培养扩增hMSCs并进行流式细胞仪分析鉴定;选用生长良好,纯度高的P5代hMSCs,用5-氮杂胞苷（5-Aza,10 μmol•L^-1）体外定向向CMs诱导分化,对其进行Desmin检测,在倒置显微镜及透射电镜下观察细胞形态学和超微结构。结果：流式细胞仪检测显示体外分离纯化培养扩增出细胞不表达CD34,高表达CD44,表明扩增细胞为hMSCs。hMSCs经5-Aza诱导分化后其形态发生改变,逐渐由长梭形变为多角形及星形,并表达Desmin。透射电镜下可见细胞大小不一致,细胞表面有许多微绒毛;细胞器丰富,胞质内可见丰富的线粒体、粗面内质网;部分细胞内可见大量糖原颗粒沉积,小部分细胞内可见髓样小体;胞浆内可见肌丝样结构,细胞间存在细胞连接。结论：体外分离培养扩增的hMSCs经5-Aza诱导,可分化成具有CMs超微结构特性的心肌样细胞。     

体外诱导人骨髓间充质干细胞定向分化为心肌细胞实验方法的建立

目的:探讨体外培养并诱导人骨髓间充质干细胞(hMSCs) 分化为心肌细胞（CMs）的实验方法。方法:采用密度梯度离心法联合贴壁培养法分离、纯化hMSCs,采用5-氮杂胞苷( 5-Aza)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对hMSCs进行联合诱导,诱导3～4周,观察细胞形态学的变化,免疫组织化学方法鉴定肌细胞及心肌细胞特异蛋白的表达。结果:hMSCs体外经5-Aza 和bFGF联合诱导1～2周后,细胞体积较诱导前增大,呈长梭形。诱导2～3周后细胞伸出伪足呈多爪形;诱导3～4周后细胞伪足间相互连接形成肌管样结构。联合诱导3～4周后免疫组织化学鉴定结蛋白(Desmin)、肌钙蛋白(cTnⅠ)和横纹肌肌动蛋白（α-sarcomeric actin）表达均呈阳性。结论:hMSCs在体外经5-Aza和bFGF联合诱导可以分化为CMs。     

不同浓度bFGF对体外培养人牙髓细胞增殖的影响

目的：探讨不同浓度碱性成纤维细胞生长因子(bFGF) 对体外培养人牙髓细胞增殖的影响，为寻求最佳影响浓度提供参考依据。方法：以常规组织块培养法体外获得牙髓细胞,随机分为5组，实验组分别加入bFGF，使其终浓度为0.1、1.0、10.0及100.0 μg•L^-1，无bFGF组作为阴性对照。采用MTT法分别测定各组吸光度A值，计算细胞相对增殖率（RGR），观察bFGF对牙髓细胞的增殖作用。结果：人牙髓细胞在不同浓度bFGF的作用下，除0.1 μg•L^-1bFGF组外，其他实验组RGR均高于对照组 (P<0.01)；组间比较显示10.0 μg•L^-1 bFGF组RGR最高，与1.0 μg•L^-1bFGF组比较差异有显著性(P<0.01)，但与100.0 μg•L^-1bFGF 组比较差异无显著性(P>0.05)。结论：bFGF能促进人牙髓细胞的增殖，bFGF的最小显效浓度是1.0 μg•L^-1，最佳增殖浓度是10.0 μg•L^-1。       

MSC体外诱导分化为心肌样细胞的鉴定及Nesprin蛋白表达研究

目的 体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)向心肌细胞分化并进行相关鉴定,观察分化过程中细胞Nesprin蛋白表达的变化.方法 大鼠MSC经Ficoll密度梯度离心法分离获得后贴壁传代培养,流式细胞术鉴定第2代MSC表面抗原表达.以10μmoL/L 5-氮杂胞苷(5-Aza)诱导第2代MSC向心肌细胞分化,观察细胞形态学改变;RT-PCR、免疫组织化学法和免疫荧光细胞化学染色鉴定心肌细胞相关蛋白Desmin、α-sarcomeric actin、cardiac Troponin I(cTn I)mRNA和蛋白表达;Western blotting检测MSC分化前后Nesprin蛋白表达.结果 经5-Aza诱导分化后的MSC细胞及细胞核增大,形态渐趋一致,大部分呈长梭形;细胞Desmin、α-sarcomeric actin、cTn I mRNA和蛋白呈阳性表达.免疫荧光细胞化学染色显示Nesprin蛋白定位于核膜,Western blotting分析发现诱导分化后细胞Nesprin蛋白表达明显增加(P<0.05).结论 成功诱导大鼠MSC向心肌细胞分化;Nesprin蛋白在分化后细胞中的表达明显增加,提示Nesprin可能参与MSC向心肌细胞样变化的过程.     

人骨髓间充质干细胞定向移植对局灶性脑缺血大鼠行为学的影响

目的：探讨人骨髓间充质干细胞(MSCs)对局灶性脑缺血大鼠神经功能的影响。方法：采用密度梯度分离法、贴壁筛选法体外培养、扩增人MSCs，并用流式细胞术鉴定其免疫学表型；健康Wistar大鼠50只随机均分为正常对照组(A组)、假手术组(B组)、脑缺血/再灌注后无处理组(C组)、脑缺血/再灌注后移植无血清DMEM组(D组)、脑缺血/再灌注后移植人MSCs组(E组)，每组10只。D、E两组脑缺血周边区(右侧)分别移植无血清培养基5 μL和5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记MSCs (4×10⁵• μL^-1) 5 μL；采用免疫组化技术检测BrdU 标记的人MSCs在局灶性脑缺血大鼠体内存活情况；采用前肢不对称 应用试验及姿势反射试验，观察各组大鼠术后1、3、7及28 d行为学变化。结果：成功地分离并纯化人MSCs；流式细胞术检测P3 MSCs结果显示，CD44、CD29均呈阳性表达，CD34、CD45、CD31均呈阴性表达；移植的人MSCs在局灶性脑缺血大鼠缺血周边区聚集并存活。各组大鼠行为学评分随着细胞移植后时间延长均逐渐降低，移植人MSCs组大鼠行为学评分较其他组显著降低 (P<0.05)，该组大鼠移植人MSCs后7 d时行为学评分低于同组内其他时间点(P<0.01)。结论：局灶性脑缺血周边注射人MSCs显著地改善大鼠脑缺血症状，前肢不对称应用试验可更客观地评价大鼠长时间运动功能变化。     

MSC体外诱导分化为心肌样细胞的鉴定及Nesprin蛋白表达研究

目的体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞（MSC）向心肌细胞分化并进行相关鉴定,观察分化过程中细胞Nesprin蛋白表达的变化。方法大鼠MSC经Ficoll密度梯度离心法分离获得后贴壁传代培养,流式细胞术鉴定第2代MSC表面抗原表达。以10μmol／L5-氮杂胞苷（5-Aza）诱导第2代MSC向心肌细胞分化,观察细胞形态学改变;RT—PCR、免疫组织化学法和免疫荧光细胞化学染色鉴定心肌细胞相关蛋白Desmin、α—sarcomeric actin、cardiac Troponin Ⅰ（cTnⅠ）mRNA和蛋白表达;Western blotting检测MSC分化前后Nesprin蛋白表达。结果经5-Aza诱导分化后的MSC细胞及细胞核增大,形态渐趋一致,大部分呈长梭形;细胞Desmin、α-sarcomericactin、cTn ⅠmRNA和蛋白呈阳性表达。免疫荧光细胞化学染色显示Nesprin蛋白定位于核膜,Westernblo Ring分析发现诱导分化后细胞Nesprin蛋白表达明显增加（P〈0．05）。结论成功诱导大鼠MSC向心肌细胞分化;Nesprin蛋白在分化后细胞中的表达明显增加,提示Nesprin可能参与MSC向心肌细胞样变化的过程。     

Skeletal muscle-derived stem cells exhibit cardiocyte competences

Adult stem cells from skeletal muscle cells were induced to differentiate into cardiocytes to see if stem cells from another different but histologically-comparable tissues can differentiate to the target cells. Skeletal muscles-derived stem cells （MDSCs） were isolated from adult skeleton muscle tissues by differential adhesion, and immunocytochemically identified by using Sca-1. In order to induce the proliferation but not differentiation of MDSCs, the cells were cultured in Dulbecco’s modified Eagle’s medium/F12 （DMEM/F12） supplemented with 1：50 B27, 20 ng/mL basic fibroblast growth factor （bFGF）, 20 ng/mL epidermal growth factor （EGF） in a suspension for 6 days. Then these stem cells were treated with 5 μmol/L 5-azacytidine for 24 h in an adherence culture. The characteristics of induced cells were examined by immunocytochemistry, quantitative real time RT-PCR and morphological observation of cell phenotype. Our results showed that the appearance of some cells gradually changed from spindle-shape into polygonal or short-column-shape. Some of these post-treated cells could contract spontaneously and rhythmically. The expression of GATA-4 and cTnT was increased 1 and 2 week（s） after the treatment. And about 16.6% of post-treated cells were cTnT-positive. Therefore, we are led to conclude that skeletal muscle-derived stem cells could differentiate into cardiocyte-like cells, which exhibited some characteristics of cardiocytes.     

胎胰蛋白促进人脂肪来源的间充质干细胞向胰岛素及C-肽阳性细胞的分化及细胞鉴定

目的：利用大鼠胚胎胰腺组织蛋白提取物诱导人脂肪来源的间充质干细胞(hASCs)向胰岛素分泌细胞分化,为临床胰岛移植寻找新的细胞来源。方法：将新生SD大鼠的胚胎胰腺匀浆后提取胎胰蛋白,重建胰腺微环境,诱导hASCs向胰腺方向分化。诱导组为胎胰蛋白培养组,对照组不添加胎胰蛋白,其余培养条件相同,诱导20 d后,荧光定量PCR技术检测2组胰腺发育相关基因的表达水平,ELISA法检测细胞悬液胰岛素水平,荧光免疫组织化学检测细胞C-肽蛋白表达。结果：在胎胰蛋白诱导过程中,hASCs重要标志基因Oct3/4及Nanog的表达持续降低,说明hASCs逐渐失去全能干细胞的特性;在诱导的第6天开始检测到PDX-1和CK-19的表达上调,诱导细胞出现了胰腺方向的分化,12 d开始检测到胰岛素的阳性表达。所获分化细胞基础相分泌胰岛素量为（287.17± 15.67） mIU•L^-1,高糖刺激下为（401.09±28.94 ）mIU•L^-1,二者比较差异有统计学意义（P<0.01）,且均明显高于对照组的（4.85±1.04） mIU•L-1 (P<0.01);免疫荧光检测,诱导组可见C肽阳性细胞,对照组未见C-肽阳性细胞。结论：模拟的微环境可诱导hASCs分化为有功能的胰岛素产生细胞,具有替代胰岛细胞治疗糖尿病的潜在可能性。