凝血因子Ⅷ及血脂升高在缺血性脑卒中发病中的意义

目的探讨凝血因子Ⅷ活性(FⅧ:c)水平、纤维蛋白原(Fbg)、甘油三酯(TG)、胆固醇(CHO)及高、低密度脂蛋白胆固醇(HDLC和LDLC)在缺血性脑卒中(IschemicStroke,IS)发病中的意义。方法观察78例IS初发患者及56例复发患者血浆FⅧ:c、Fbg及血清TG、CHO、HDLC和LDLC水平。以健康对照组血浆FⅧ:c水平分布的90%值为临界值(cutoff值)。结果FⅧ:c、Fbg及TG水平在IS组均明显升高,且IS复发组明显高于初发组和健康对照组(P<0.01)。结论缺血性脑卒中的发病与多种危险因素有关,其中FⅧ:c、Fbg及TG水平升高在该病发病过程中起重要作用。     

人凝血蛋白因子Ⅷ(FⅧ:C,FⅧC:Ag)单克隆抗体的制备

纯化FⅧ:C是从人血浆冰冻沉淀-融解虹吸而提取。首先大部分纤维蛋白(99.9％)经过Ancrod(马来亚人获得的蛇毒液)处理而除掉,然后将整个FⅧ复合物吸附到抗因子Ⅷ相关抗原(FⅧR:Ag)的当地制备的绵羊抗体上,这种相关抗原已经过碘酸盐氧化、还原氨基的作用连接在Sephacryl S-1000上。再经过缓冲液1(0.4％柠檬酸钠,0.15M NaCl,0.01％吐温80,pH7.2)于是以缓冲液2(50mM imdazole/HCl pH7.2 0.01％吐温80)充分冲洗后,FⅧ:C在通过缓冲液2中含有0.1％正常鼠血清作为载体的300mM CaCl_2进一步洗脱,而FⅧR:Ag仍保留在结合的固相抗体上,被洗脱的FⅧ:C的峰值通过一层液相放     

蛋白C、蛋白S、抗凝血酶、凝血因子Ⅷ在不同Child-Pugh肝功能分级的慢性肝硬化患者中的应用研究

目的 探讨血浆蛋白C(protein C,PC)、血浆蛋白S(protein S,PS)、血浆抗凝血酶(antithrombin, AT)、血浆凝血因子Ⅷ(coagulation factor Ⅷ,F Ⅷ)在不同Child-Pugh肝功能分级的慢性肝硬化患者中的应用意义。方法 选取2020年12月至2021年12月首都医科大学附属北京佑安医院进行诊治的96例慢性肝硬化患者作为研究对象，另选择同期体检正常的15例正常人作为对照组，分别采用发色底物法和凝固法测定不同Child-Pugh肝功能分级患者的PC、PS、AT、FⅧ等水平并进行比较，并分析相关性。结果 蛋白C、蛋白S、AT、FⅧ在不同Child-Pugh肝功能分级的分组间有显著差异。随着Child-Pugh肝功能分级变差，患者的蛋白C、蛋白S和AT的活性明显降低，FⅧ活性增加。结论慢性肝硬化有高凝风险，建议检测和评估血栓形成的可能。     

用长距离PCR技术检测江西籍重型血友病甲Ⅷ因子基因倒位基因

目的用长距离PCR（LD-PCR）技术检测江西籍重型血友病A（hemophiliaA,HA）有无Ⅷ因子基因倒位。方法用Bigg′s一期法检测血浆凝血因子FⅧ活性（FⅧ：C）,LD-PCR方法,以0.6%琼脂糖凝胶电泳技术,检测55例江西籍重型HA进行凝血因子Ⅷ（FⅧ）倒位基因,电泳出现11kb带,示FⅧ基因倒位;12kb带,示非FⅧ倒位,这两条带同时出现者为FⅧ倒位基因携带者。结果检测30例无亲缘关系的重型HA患者中,发现11例患者（或家属成员）有FⅧ倒位基因,占重型HA患者的36.7%;9家系中查出基因倒位携带者4名。结论LD-PCR技术结合血浆FⅧ：C可快速、准确检测重型血友病FⅧ基因倒位。     

葡萄糖调节蛋白78在大鼠肝肺综合征肺微血管重构中的作用

 目的：探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)引发大鼠肝肺综合征（HPS）肺微血管重构的机制。方法：Wistar大鼠被随机分为4周组、6周组和8周组3个时点,采用复合致病因素法制备大鼠肝硬化合并HPS模型,并设标准饮食的正常大鼠作为对照组。免疫组化染色法观察肺组织GRP78、Ⅷ因子相关抗原(FⅧ-RAg)C/EBP 同源蛋白(CHOP)/生长阻滞及DNA损伤诱导蛋白153(GADD153)、caspase-12、Bcl-2和核因子(nuclear factor,NF)-κB的表达。RT-PCR和Western blotting法检测肺组织血管内皮生长因子(VEGF) mRNA和蛋白表达水平。结果：模型组动物肺组织中GRP78、FⅧ-RAg及VEGF蛋白的表达随HPS进展逐步增高,CHOP/GADD153及caspase-12的表达随HPS进展逐步降低,Bcl-2和NF-κB随病程进展表达逐渐增加,NF-κB尤以胞核表达增高明显。GRP78与FⅧ-RAg及VEGF蛋白水平呈明显正相关(P<0.01),而与CHOP/GADD153及caspase-12的表达呈明显负相关(P<0.01)。在各时点,模型组动物肺组织GRP78和FⅧ-RAg显著高于正常对照组;VEGF蛋白和mRNA均显著高于正常对照组;而CHOP/GADD153及caspase-12 的表达均低于正常对照组(P<0.05)。结论：GRP78可能通过促进血管内皮细胞增殖和抑制其凋亡,促进肺微血管重构,导致HPS的发病。     

层粘连蛋白受体、Ⅳ型胶原的表达及微血管密度与乳腺癌转移的关系

目的：探讨乳腺癌组织层粘连蛋白受体（LN－R）、Ⅳ型胶原（Col Ⅳ)、间质微血管密度与乳腺癌淋巴结转移的关系。方法：应用免疫组织化学S－P方法标记82例乳腺癌组织中LN－R、Col Ⅳ、FⅧRAg，并在第Ⅷ因子相关抗原（FⅧRAg)标记切片上计算微血管密度（MVD）。结果：LN－R表达强度及MVD的高低在乳腺癌有淋巴结转移组和无淋巴结转移组间有差异；ColⅣ在两组间无差异。结论：乳腺癌间质微血管密度增加及LN－R表达增强可作为预测肿瘤转移及判断预后的指标。     

用于研究人凝血因子Ⅷ重链抗原表位的双色荧光免疫印迹分析法

目的:寻找更简便精确的方法来检测人凝血因子Ⅷ的抗原表位.方法:采用PCR技术从人凝血因子Ⅷ的克隆载体pENTR223.1/FVⅢ上克隆出FⅧ重链(FⅧ-N)的cDNA.将cDNA插入原核载体pET21a构建重组表达载体pET21 a-FⅧ-N,并转化大肠杆菌BL21( DE3),以IPTG诱导表达His-FⅧ-N融合蛋白.以表达产物免疫BALB/c小鼠,制备小鼠抗FVⅢ-N的抗血清.接着在重组表达载体pET21 a-FⅧ-N中引入内参Flagotag.对FⅧ-N进行定点突变,构建两个突变克隆N1和N2,对二者以及原FⅧ-N进行双色荧光免疫印迹分析.用双色红外激光成像系统进行扫描和定量分析,以绿荧光与红荧光的光密度比值表示突变克隆抗原性的大小.结果:双色荧光免疫印迹分析表明,突变克隆N1,N2的抗原性与原FⅧ-N相比均有显著下降(P＜0.05).FⅧ A2区的三个氨基酸残基Arg484,Arg489,Arg593对FⅧ-N 抗原性起着重要的作用.结论:成功建立了人凝血因子Ⅷ重链抗原表位检测的双色荧光免疫印迹分析法.     

脉管性肿瘤免疫组化标记的初步观察

对25例脉管性肿瘤及其它10例软组织肿瘤,应用免疫组化法(PAP法)标记Ⅷ因子相关抗原(FⅧR:Ag),部份脉管性肿瘤同时进行荆豆凝集素(UEA-1)的标记(ABC法)。标记结果:FⅧR:Ag:24例血管源性肿瘤中18例阳性,占75%,其中血管外皮肉瘤,血管球瘤各1例亦为阳性;1例淋巴管瘤为阳性。UEA-1标记:16例血管源性肿瘤,14例阳性,占87.5%;一例淋巴管瘤阳性。FⅧR:Ag及UEA-1是内皮性肿瘤有价值的标记物;UEA-1优于FⅧR:Ag。     

家兔多器官衰竭发病过程中血浆因子Ⅷ相关抗原含量的变化

多器官衰竭时血浆因子Ⅷ相关抗原(ⅧR:Ag)含量变化,迄今未见报道。探讨血浆ⅧR:Ag含量变化在MOF发病机制中的病理生理意义。大耳白兔14只随机分对照(n=5)和实验(n=9)组。实验组于实验前1 h饲     

血管生成素对糖尿病大鼠股骨头血管新生及渗漏的影响

目的　探讨血管生成素1(angi.Poietin-1,Ang-1)对糖尿病大鼠股骨头微血管新生及渗漏的影响。 方法　建立速发型链脲佐菌素（streptozotocin,STZ）糖尿病大鼠模型,随机分为正常5周组　(CON1)、10周组(CON2)及15周组(CON3),糖尿病5周组（DM1）、10周组（DM2）及15周组（DM3）,每组　10只。墨汁灌注观测股骨头微血管密度;摘取模型动物股骨头组织,免疫组化分析凝血因子Ⅷ（FⅧ）表达;原位杂交分析血管内皮生长因子（VEGFmRNA）表达强度;RT-PCR分析Ang-1的mRNA表达。 结果　糖尿病大鼠股骨头随病程发展,Ang-1、FⅧ因子表达上升,与正常组相比有显著性差异（P<0.01）。　VEGFmRNA表达量均高于正常组（P<0.01）;微血管密度加大,显示血管增生、渗漏。 结论　糖尿病股骨头　Ang-1与VEGFmRNA相互协同或拮抗分别促进微血管增生、抗血管渗漏。表达于血管内皮细胞的FⅧ及VEGFmRNA与微血管密度（MVD）变化存在正相关。     

用第Ⅶ因子基因的分析作血友病A产前诊断

血友病A是由于第Ⅷ因子缺陷引起.男性中受累者约占1/10,000,直到最近,对其出生前诊断是根据检测18～21周的胎血中X染色体连锁的FⅧ凝集原(FⅧ:CAg)和常染色体FⅧ相关抗原(FⅧR:Ag).另一种方法是对那些与血友病基因位点连锁的DNA多态标记的研究.这个方法涉及到DNA重组技术、羊膜穿剌术和绒毛膜绒毛取样以及整个家族的DNA标记与血友病A基因位点之间连锁的研究.这种方法的主要缺点是诊断的精确性要依靠标记与     

血友病A并颅内出血10例抢救体会

血友病A(hemophilia A)是先天性凝血障碍中最常见的一种出血性疾病,为性连锁隐性遗传,是血浆中因子Ⅷ(抗血友病球蛋白AHG)的活性部分Ⅷ:C减少或缺失所致[1].     

FⅧR Ag作为血管内皮标记物之应用

FactorⅧ(亦称抗血友病因子)是血浆中一种大分子或大分子复合物,属糖蛋白,参与凝血机制的内源性启动途径。正常人血浆中含微量(5～10μg/ml)。     

重型甲型血友病FⅧ基因的倒位

甲型血友病是一种由于FⅧ缺乏导致凝血系统紊乱的X染色体性-连琐隐性遗传病。近来,发现一种FⅧ基因的倒位(占重型甲型血友病的45％),这是一个崭新的发现。 这种FⅧ基因的倒位由一种特殊的DNA序列(称为A序列)的3份拷贝所表达。1份拷贝位于FⅧ基因中第22内含子(IVS22),另两段A序列距前     

RNAi介导的Bip表达下调促进基于蛋白质剪接的双链共转基因细胞分泌FVIII凝血活性

目的 探讨用RNA干扰技术下调内质网蛋白伴侣免疫球蛋白重链结合蛋白(Bip)的表达,对基于蛋白质剪接的双链共转凝血因子VIII (FⅧ)基因HEK293细胞分泌剪接FⅧ蛋白的量和活性的影响.方法 以培养的HEK293细胞,用含蛋白内含子的B区缺失型FⅧ( BDD-FⅧ)的重链和轻链基因表达载体共转染经Bip-siRNA处理的细胞,免疫印迹法检测Bip的表达,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞生长,用酶联免疫吸附( ELISA)和发色分析法分析转基因细胞分泌的剪接BDD-FⅧ蛋白量和活性.结果 RNA干扰下调Bip表达作用明显,细胞生长不受影响;Bip下调的共转基因细胞分泌的剪接BDD-FⅧ和重链量分别为(142±33) μg/L和(197±43) μg/L,明显高于对照细胞[分别为(89±23)μg/L和(120±27) μg/L];Bip下调的共转基因细胞分泌的FⅧ凝血活性为(1 050±160)IU/L,明显高于对照细胞[640±170(IU/L)].结论 Bip表达下调通过促进剪接BDD-FⅧ的分泌可有效提高基于蛋白质剪接的双载体转BDD-FⅧ基因功效,为进一步动物体内实验提供了依据.     

血友病甲携带者检出及产前诊断研究进展

血友病甲是遗传性出血性疾病最常见的一种。进行血友病甲携带者检出及产前诊断,有两种检测方法:即用免疫生物学方法检测携带者及胎儿的Ⅷ因子基因的表现型(Ⅷ因子组分检测)及用分子生物学方法检测Ⅷ因子的基因型(DNA分析)。本文就这方面研究进展作一综述。一、Ⅷ因子组分检测在判定携带者及产前诊断中的应用1.Ⅷ:C或ⅧcAg/ⅧR:Ag测定判定血友病甲携带者:Ⅷ因子由两部分组成:一部分为Ⅷ因子凝血活性(Ⅷ:C)及其抗原     

血液循环中白细胞组织因子活性的测定方法及临床意义

目的:建立一种用于辅助临床诊断血栓性疾病的白细胞组织因子促凝活性(TF-PCA)测定方法。方法:利用动态监测法测定脂多糖(LPS)刺激后单个核白细胞(MLC)的TF-PCA的变化,利用流式细胞技术检测其TF抗原的表达,以鉴定检测方法的特异性,并进行临床验证。结果:凝血动力学指标变化与细胞数、LPS浓度、反应时间等有不同程度的相关性,TF-PCA在内源性乏凝血因子Ⅷ、Ⅸ血浆凝固中显示明显的促凝活性,而外源性乏凝血因子Ⅶ、Ⅹ则未显示TF-PCA;TF-PCA与凝血动力学的凝固延迟时间和纤维蛋白单体聚合速率呈良好的负、正相关(r=-0.986、r=0.928);LPS对MLC刺激上调TF表达具有较高的特异性,由此印证了本检测方法的可行性。结论:凝血动力学检测能较简单、快捷的检测MLC的TF-PCA,并有较高的特异性和敏感性,对血栓性疾病的诊断及防治有应用价值。     

黑色素瘤细胞诱导骨髓间充质干细胞向血管内皮细胞分化的初步研究

目的 体外观察和分析小鼠黑色素瘤细胞B16诱导小鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)向血管内皮细胞分化的现象和过程,初步分析肿瘤细胞分泌血管生长因子(VEGF)-a在该诱导过程中的时序关系.方法 利用Transwell系统进行BMSC与B16细胞共培养,利用免疫荧光、蛋白印迹、透射电镜等技术观察BMSC经B16诱导后向内皮细胞分化的过程,利用ELISA检测培养液内VEGF-a的水平.结果 BMSC表型鉴定为CD44+/CD73+/CD90+/CD105+/CD166+/CD34-/CIM5-/CD133-,经B16诱导后出现内皮细胞标志物VEGFR-1、VEGFR-2和第八因子(FⅧ)的表达并随时间延长而增强,共培养48 h后VEGFR-1、VEGFR-2及FⅧ均可见明显表达,72 h时VEGFR-2表达量较48 h时增加了1倍,FⅧ表达量增加了约3倍.共培养体系培养基中可检测到由B16细胞分泌的VEGF-a量随时间增多.结论 B16细胞可能通过分泌VEGF-a来诱导BMSC具备血管内皮细胞表型,提示BMSC在肿瘤血管生成中起了重要的作用.     

糖尿病激活微血管病变通路对股骨头退行性变的交互作用

目的:用正交设计方法探讨早期糖尿病激活微循环障碍的交互作用对股骨头组织的骨质疏松倾向变化的影响.方法:建立速发型链脲佐菌素(STZ)高血糖大鼠模型,随机分为正常组、模型组.观察各组股骨头成骨细胞、空缺骨陷窝的演变、骨髓腔与骨小梁等骨松质结构并分析.观察各组股骨头结构以及凝血因子Ⅷ(FⅧ)免疫组织化学表达情况;墨汁灌注行微血管密度测定;用正交设计方法进行交互性分析.结果:糖尿病大鼠股骨头随病程发展,骨小梁变少变薄;成骨细胞减少,FⅧ因子表达上升,微血管密度增大,均高于正常组.结论:糖尿病随病程延长激活微循环障碍的协同作用对大鼠股骨头结构退变有统计学意义,具有交互作用.