肌动蛋白是大鼠肝细胞核基质的组分之一

目的：证实肌动蛋白存在于大鼠肝细胞核基质中。方法：应用SDS－PAGE法分析大鼠肝细胞核基质的组分,以肌动蛋白多克隆抗体进行Westem Blot免疫印迹检测。结果：核基质蛋白SDS－PAGE图谱中可见相当于肌动蛋白的43KD条带,Westem Blot分析证实核基质中存在肌动 蛋白条带。结论：肌动蛋白是大鼠肝细胞核基质的组分之一。     

蜜蜂毒中蜂毒素的分离纯化方法及含量测定

目的：从蜜蜂毒中分离纯化蜂毒素（melittin),建立以SDS-聚丙烯酰 胺凝胶电泳(SDS－PAGE）及HPLC进行蜂毒素定性定量分析的方法。方法：用Sephadex G-25、Sephadex G-50、Sephadex G-75三步层析法从蜜蜂毒中分离纯化蜂毒素,以SDS－PAGE定性,以HPLC进行含量测定。结果：样品经SDS－PAGE测定为单一条带,相对分子质量约3000。HPLC含量测定,平均回收率为95．97％,相对标准差（RSD）为1．07％。结论：以上述分离纯化法可制得高纯度的蜂毒素,检测方法准确、可靠、简单。     

p65 DNA结合域的克隆、表达及其酵母双杂交自身激活作用检测

目的：获得NF－κB p65亚基DNA结合域cDNA及构建酵母双杂交系统中的靶基因，并检测靶基因的表达和自身激活活性。方法：利用引物二聚体搭桥技术，扩增p65亚基DNA结合域基因片段，并将基克隆入酵母双杂交载体pG-BKT7 DNA-BD。应用醋酸锂法转化酵母细胞AH109，在SD／Trp选择培养基上培养，观察转化株的生长情况。按尿素／SDS法抽提酵母蛋白，用SDS－PAGE电泳和Western-blot鉴定靶蛋白在酵母细胞中的表达。利用液相法和平板法检测阳性转化株β－半乳糖苷酶的活性。结果：获得p65 DNA结合域基因片段，并成功构建酵母双杂交系统中的靶基因。靶基因能在酵母细胞中表达，对酵母细胞无毒性作用，无自身激活活性。结论：NF－κB p65亚基DNA结合域可作为酵母双杂合系统中的靶基因，用于肽库筛选，捕捉与之相互作用的多肽。     

醇酒酵母S—腺苷甲硫氨酸合酶基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

目的：构建S－腺苷甲硫氨酸合酶基因工程菌,为酶促转化法生产S－腺苷甲硫氨酸奠定基础。方法：应用PCR技术从S－腺苷甲硫氨酸高产酿酒酵母染色体DNA中扩增得到S－腺苷甲硫氨酸合成酶基因sam2，将其克隆至表达载体pT7－7，转化大肠杆菌，1％琼脂糖电泳比较大小，筛选重组予。结果：SDS－PAGE显示重组菌S－腺苷甲硫氨合成酶亚基分子量约为42KDa，平均表达量约占菌体总可控性蛋白的42％，酶活达到14．1U/g湿菌体，比宿主菌酶活提高15．7倍。结论：酿酒酵母SAM合成酶基因在大肠杆菌中高效表达，重组菌已具有初步的工业化应用价值。     

BMP-4cDNA的克隆表达及活性的初步测定

目的：利用原核基因工程生产有诱骨活性的骨形态发生蛋白－4（BMP－4），方法：应用RT－PCR技术，从成熟人的胎盘组织中扩增出长0．34Kb编码入骨形态发生蛋白－4成熟肽的基因序列，经测序证实后，装入表达载体pET-22b，诱导表达后SDS－PAGE显示在14kd处有一明显的表达条带，经初步鉴定，证实表达蛋白部分位于裂菌处理后的上清中，部分以包涵体的形式存在于沉淀中，将沉淀中的包涵体蛋白纯化，变性和复性处理，和上清中的蛋白分别经真空冷冻干燥后，植入小鼠的肌肉内检测蛋白活性。结论：第14d和21d，组织切片可见骨细胞和骨基质的形成，结论：大肠杆菌表达的BMP－4的经复性处理后具有诱骨活性。     

从包涵体中纯化重组人幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位

目的：建立一种有效从包涵体中纯化重组人幽门螺杆菌热休克蛋白A亚单位HspA的方法。方法：重组基因工程大肠杆菌发酵后，表达的Hp r HspA包涵体经洗涤，变性，复性，采用Q Sepharose High Performance阴离子交换层析和Superdex75凝胶过滤层析分离纯化，使用SDS－PAGE和HPLC检测纯度，选用ELISA和动物实验对纯化蛋白的免疫学活性和生物学活性进行鉴定。结果：Hp的HspA包涵经洗涤和溶解后，Hp的HspA的纯度＞60％，包涵体溶解液经阴离子交换层析和凝胶过滤层析后纯度超过95％，Hp的HspA纯品经检测具有良好的免疫学活性和生物学活性。结论：本研究建立的分离纯化方法可从包涵体中获得高纯度的重组HspA蛋白，为进一步的动物实验研究奠定了基础。     

VD3结合蛋白的分离纯化

目的：纯化VD3结合蛋白（DBP）。方法：利用DBP的相对分子质量及电荷性质，分别用阳离子交换剂、阴离子交换剂和凝胶过滤等分离目的蛋白,SDS-PAGE鉴定纯度，并进行活性分析。结果：分离到相对分子质量为58000的蛋白质，SDS－PAGE呈单一区带。结论：成功分离纯化出DBP。     

人白细胞介素-18在大肠杆菌中的高效表达

目的 在大肠杆菌中实现人IL－18成熟蛋白（mhIL-18）的高效表达。方法 采用RT－PCR由人肝脏Kupffer细胞中扩增mhIL-18基因，构建非融合型原核表达质粒petTT/mhIL-18，转化至大肠杆菌DH5α，用IPTG诱导热处理重组蛋白表达，超声裂解细胞提取包涵体，采用SDS－PAGE及Western blot分析重组蛋白的表达，包涵体蛋白经8mol/L尿素溶解，透析复性，ELISA检测重组蛋白诱导人外周血单个核细胞（PBMC）产生IFN－γ的能力。结果 所扩增的mhIL-18基因与GenBank公布的序列一到，经IPTG诱导，mhIL-18在大肠杆菌中的表达量占菌体蛋白的40％以上，，在细胞中以包涵体形式存在，复性的重组蛋白具有诱生IFN-γ的能力。结论 mhIL-18可在大肠杆菌中高效表达。     

人Lipocalin前列腺素D合酶的克隆表达及其抗体制备

目的 研究Lipocalin型前列腺素D合酶（L－PGDS）的编码蛋白质在大肠杆菌中的表达,进一步制备抗L－PGDS编码蛋白质的多克隆抗体。方法 用逆转录多聚酶链式反应（RT－PCR）方法克隆L－PGDS基因蛋白编码序列。构建该基因的表达质粒,在大肠杆菌中诱导表达,SDS－PAGE分析表达的蛋白质。用RediPack GST亲和层析柱纯化的蛋白质免疫BALB／c小鼠制备多抗。结果 RT－PCR所分离的L－PGDS基因蛋白编码序列,经测序证明与基因库所报道的L－PGDS的基因序列完全一致。SDS－PAGE分析证实该基因编码的蛋白质在大肠杆菌中表达,并获得效价为1：6400的多克隆抗体。结论 L－PGDS基因编码蛋白质能够在原核细胞中表达,并能获得抗L－PGDS基因编码蛋白质的多克隆抗体,为进一步深入研究该蛋白质的结构与功能打下了基础。     

人S-腺苷蛋氨酸脱羧酶α亚基的克隆、表达与纯化

目的：构建人S 腺苷蛋氨酸脱羧酶(SAMDC)的α亚基的原核表达载体，诱导该质粒在大肠杆菌中表达并纯化表达的重组蛋白。方法：从大肠癌细胞中提取总RNA，RT PCR方法扩增人SAMDCα亚基的cDNA片段801?bp，经TA克隆及亚克隆方法构建原核表达载体pTriEx 4 SAMDC α。将重组表达质粒转化入E.coli JM109(DE3)中，经IPTG诱导表达，SDS PAGE电泳和Western blot鉴定表达蛋白，并通过6×His•Tag，利用亲和层析法纯化表达的融合蛋白。结果：酶切鉴定和DNA测序显示，人SAMDC α亚基的cDNA片段成功插入表达载体pTriEx 4且方向正确，SDS PAGE电泳显示表达出32kD的外源蛋白。Western blot检测结果显示，表达出的蛋白为6×His•Tag的融合蛋白，且Ni NTA亲和层析法纯化了该重组蛋白。结论：成功构建、表达且纯化了重组SAMDC α亚基，为制备抗SAMDC抗体、研究SAMDC基因与结直肠肿瘤的关系提供了必要的工具。