口腔粘膜下纤维性变中成纤维细胞形态学初步研究

为探讨口腔粘膜下纤维性变（ＯＳＦ）中胶原堆积的原因，电镜下对（ＯＳＦ）患者病变部位中的成纤维细胞（Ｆｂ）的形态学进行研究，并对各阶段的Ｐｂ进行计数。结果显示：幼稚的Ｆｂ（少分化Ｆｂ和幼Ｆｂ）在正常及病变各均无差别，肌成纤维细胞在ＯＳＦ中期增多，纤维细胞在ＯＳＦ早期减少，中期增加至正常水平，晚期则较其余各期增多，研究结果提示：ＯＳＦ中的Ｆｂ形态发生了改变。     

口腔粘膜下纤维性变中胶原纤维的超微结构研究

为探讨口腔粘膜下纤维性变（ＯＳＦ）中胶原堆积的原因，电镜下对ＯＳＦ患者病变部位中的胶原纤维形态进行研究，结果显示：（１）胶的原纤维横断面：ＯＳＦ早期“负染”胶原和管状胶原较正常增多，中期主要为“负染”胶原和管状胶原，晚期则绝大多数“负胶原”（２）胶原原纤维纵切面；ＯＳＦ早期以黑色纤维为主，中期黑白纤维混杂，晚期以白色纤维为主。研究结果提示：ＯＳＦ的胶的纤维发生了变性，其程度随病变发展而加 。     

口腔粘膜下纤维变性中胶原纤维的超微结构研究

目的 探讨口腔粘膜下纤维变性（ＯＳＦ）中胶原堆积的原因。方法 电镜下对ＯＳＦ患者病变中胶原纤维进行研究，测量胶原原纤维的直径及周期性横纹。结果 ①胶原原纤维的直径：ＯＳＦ早期原纤维直径与正常无差别、中期、晚期直径逐渐增大；②周期性横纹：ＯＳＦ早期与正常无差别，中期、晚期逐渐增大。结论 ＯＳＦ的胶原纤维的形态表现异常，共程度随病变发展而加重。     

口腔粘膜下纤维性变组织中Ⅰ型和Ⅲ型胶原免疫组化及定量分析

目的：了解口腔粘膜下纤维性变（ＯＳＦ）组织中Ⅰ型及Ⅲ型胶原的分布及变化情况。方法：应用免疫组织学方法观察Ⅰ型及Ⅲ型胶原在ＯＳＦ中的分布，并应用图像分析仪对正常颊粘膜及ＯＳＦ各期中的Ⅰ、Ⅲ型胶原进行定量分析。结果：Ⅰ、Ⅲ型胶原在口腔颊粘膜中均有分布；Ⅰ、Ⅲ型胶原随ＯＳＦ病变程度加深逐渐增加，Ⅰ型原原在ＯＳＦ早、中、晚三期增多均有统计学意义，而Ⅲ型胶原仅在ＯＳＦ晚期增多有显著性差异。结论：随ＯＳＦ早、     

内皮素-1(ET-1)在口腔粘膜下纤维性变中的表达水平

为探讨ＥＴ－１与口腔粘膜下纤维性变（ＯＳＦ）的关系,应用免疫组化染色和图像分析技术,检测了ＯＳＦ３０例、正常口腔粘膜（ＮＯＲ）１０例组织中ＥＴ－１的定位分布和含量。结果显示：①ＯＳＦ组织中ＥＴ－１有异常表达,其免疫阳性物质主要分布于上皮棘细胞、基底细胞,间质成纤维细胞、血管内皮细胞及平滑肌细胞的胞浆胞膜上;②ＥＴ－１在ＯＳＦ组织表达的阳性率及相对含量均显著高于ＮＯＲ（Ｐ＜０．０１）;③ＯＳＦ各期ＥＴ－１相对含量存在差别,其中早、中期上皮细胞ＥＴ－１相对含量显著高于晚期（Ｐ＜０．０５）。由此提示,ＥＴ－１可能参与了ＯＳＦ的纤维化过程     

槟榔提取液诱发大鼠口腔粘膜下纤维性变的实验研究 Ⅱ.肥大细胞对胶原代谢的影响

借助组织化学、生化分析和透射电镜方法，探讨肥大细胞对水溶性槟榔提取液诱发的大鼠口腔粘膜下纤维性变（ＯＳＦ）的胶原代谢的影响。结果发现：在ＯＳＦ发生过程中，肥大细胞与成纤维细胞关系密切，其数量明显增多，与同期对照组比较具有显著性差异，且随刺激时间延长而逐渐增加；模型组颊粘膜胶原纤维大量堆积，组织羟脯氨酸含量明显高于同期对照组，且随刺激时间延长而升高；各时期模型组肥大细胞计数与组织羟脯氨酸含量均呈高度正相关；血清总羟脯氨酸含量各期各组间无显著性差异。提示：槟榔某些水溶性成份可能通过激发肥大细胞增殖与活化，干扰组织胶原代谢而诱发ＯＳＦ。     

口腔粘膜下纤维性变组织中Ⅴ型胶原和纤维连结蛋白的免疫组化及定量分析

利用免疫组化及定量分析技术 ,研究口腔粘膜下纤维性变 (ｏｒａｌｓｕｂｍｕｃｏｕｓｆｉｂｒｏｓｉｓ ,ＯＳＦ)病变组织中Ⅴ型胶原及纤维连结蛋白 (ｆｉｂｒｏｎｅｃｔｉｎ ,ＦＮ)的分布、形态及数量变化 ,旨在探讨ＯＳＦ的病因。1.材料与方法 :标本取自ＯＳＦ患者颊部病变组织 ,对照组取自无槟榔嗜好的健康人。ＯＳＦ早、中、晚期及对照组各10例标本用辣根过氧化物酶染色 ,图像分析仪下测算Ｖ型胶原及ＦＮ百分比。2 .结果 :正常口腔颊粘膜中Ⅴ型胶原分布于整个粘膜固有层及粘膜下层 ,近上皮基底膜处及血管壁外周分布较集中 ,呈丝状。ＯＳ…     

不同来源人牙龈成纤维细胞体外降解胶原能力研究

目的 :体外培养条件下比较健康人及侵袭性牙周炎患者的牙龈成纤维细胞对鼠I型胶原降解的影响和差异。方法 :在 6孔板底制备胶原膜 ,取固定数量的对数生长期健康人及侵袭性牙周炎患者的牙龈成纤维细胞接种于胶原膜中央 ,分别于孵育 2 4、48、72h后消化弃去细胞 ,考马斯亮兰液染色胶原膜 ,显微镜下测定降解区和非降解区的光密度来比较不同时间段各组细胞的胶原降解量。结果 :健康人和侵袭性牙周炎各 3例标本来源细胞的结果基本一致 ,表现为随时间的延长 ,胶原降解量相应增加 ;而各时间段病变组的胶原降解量较健康组明显增加(P <0 .0 5 )。结论 :健康人和侵袭性牙周炎的牙龈成纤维细胞对鼠I型胶原均有降解作用并呈现出时间效应 ,而且病变组的作用更强。     

转化生长因子β1在口腔粘膜下纤维性变角朊细胞中的表达

为探讨转化生长因子β１在口腔粘膜下纤维性变发病机理中的作用，作者应用原位杂交方法，对２５例口腔粘膜下纤维性变（ｏｒａｌｓｕｂｍｕｃｏｕｓｆｉｂｒｏｓｉｓ，ＯＳＦ）、５例正常口腔粘膜（ＮＯＲ）及１０例口腔扁平苔藓（ｏｒａｌｌｉｃｈｅｎｐｌａｎｕｓ，ＯＬＰ）组织角朊细胞中转化生长因子β１（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒβ１，ＴＧＦβ１）ｍＲＮＡ进行了检测。结果：１５例（６０％）ＯＳＦ组织角朊细胞中有ＴＧＦβ１ｍＲＮＡ表达，阳性表达主要分布于早、中期ＯＳＦ组织角朊细胞中；５例ＮＯＲ及１０例ＯＬＰ组织角朊细胞表达呈阴性。结果提示：ＯＳＦ组织角朊细胞可合成分泌ＴＧＦβ１，ＴＧＦβ１在ＯＳＦ的发病机理中可能起重要作用，可能作为一中间介质参与了ＯＳＦ的发病过程。     

口腔粘膜下纤维性变组织中内皮素1的免疫组织化学和定量研究

目的：探讨ＥＴ－１在口腔粘膜下纤维性变（ＯＳＦ）发病机制中的作用。方法：采用免疫组化染色ＳＡＢＣ法和图像分析技术,对ＯＳＦ早、中、晚期各１０例、口腔扁平苔藓（ＯＬＰ）１０例以及正常人１０例的颊粘膜组织中ＥＴ－１表达进行定量分析。结果：①ＯＳＦ组织中ＥＴ－１免疫阳性物质超量表达,正常及ＯＬＰ组织中ＥＴ－１表达微弱;②ＯＳＦ早、中、晚期组织中ＥＴ－１含量显著高于正常（Ｐ〈０．０１）,且早、中期显著高于晚期（Ｐ〈０．０１）;③ＯＳＦ早、中期组织ＥＴ－１含量显著高于ＯＬＰ（Ｐ〈０．０１）,晚期间质ＥＴ－１含量显著高于ＯＬＰ（Ｐ〈０．０５）,上皮ＥＴ－１含量两者差异不显著（Ｐ〉０．０５）;④口腔粘膜中上皮和间质的ＥＴ－１含量呈显著正相关（Ｐ〈０．０５）。结论：ＥＴ－１在ＯＳＦ的表达具有特异性,且可能影响ＯＳＦ病变的发生发     

兜甲蛋白和细胞色素P4503A5在口腔黏膜下纤维化中的表达及意义

目的探讨兜甲蛋白（LOR）和细胞色素P450 3A5（CYP 3A5）在口腔黏膜下纤维化颊黏膜（OSF）和正常颊黏膜中的表达以及在上皮防御作用中的意义。方法首先采用免疫组化染色检测66例OSF颊黏膜和14例正常颊黏膜中LOR和CYP 3A5这2种蛋白的表达和定位,然后采用Western blot和RT-PCR方法分别在OSF患者颊黏膜和正常人颊黏膜中检测LOR和CYP 3A5的蛋白和mRNA表达。结果42例（63.6%）OSF呈LOR阳性表达,其在早、中期之间差异有统计学意义（P<0.05）,而中、晚期之间差异无统计学意义（P＞0.05）;正常颊黏膜中CYP 3A5均呈阳性表达,5例（7.6%）OSF出现棘细胞弱阳性表达,33例（50%）出现内皮细胞弱阳性表达,与病理分期呈负相关（P<0.05）。RTPCR显示LOR和CYP 3A5 mRNA在OSF与正常黏膜中表达的差异均有统计学意义（P<0.05）;而Western blot检测显示,只有CYP 3A5蛋白表达在两者间差异有统计学意义（P<0.05）。结论LOR和CYP 3A5的异常表达是OSF黏膜上皮防御能力改变的表现,它们在OSF发生发展和癌变过程中可能发挥了重要作用。     

Experimental study on aqueous areca nut extracts inducing oral submucous fibrosis in rats. II. Effection of mast cells on collagen metabolism]

The effection of mast cells (MC) on collagen metabolism of oral submucous fibrosis (OSF) induced by aqueous areca nut extracts (AANE) in rats was studied by transmission electron microscope, histochemical and biochemical analyses. The results revealed that there was a close relationship between MC and fibroblats (FB) in the pathogensis of OSF; MC which appeared in the buccal mucosa in the model groups increased significantly and became more active in the function. A great deal of collagen compacted in the buccal mucosa in the model groups. The contents of tissue hydroxyproline (Hyp) in the model groups were obviously higher than those in the control groups. Moreover, the longer the time of irritation continued, the higher the contents were. The number of MC had a higher positive correlation with the contents of tissue Hyp at the same time. Total serum Hyp had no significant difference among all the groups and any stages. The results indicated that some aqueous components of areca nuts might disturb collagen metabolism by accumulation and activation of MC.     

槟榔提取液诱发大鼠口腔粘膜下纤维性变的实验研究 Ⅰ.组织形态学观察

采用粘膜下注射及表面涂布水溶性槟榔提取液（ＡＡＮＥ）相结合方法，诱发ＳＤ大鼠颊部口腔粘膜下纤维性变（ＯＳＦ）。在实验第１２，１６，２２及２８周分别进行颊粘膜显微及超微结构观察。结果发现：模型组动物在各个时期均出现了不同程度的ＯＳＦ样改变，即：上皮萎缩，钉突变平或消失；固有层大量炎症细胞浸润，胶原纤维堆积，排列紊乱并玻璃样变；病变进一步发展可波及深部肌层。停止使用ＡＡＮＥ６周后，病变未见明显逆转。对照组未见明显的组织形态学改变。采用粘膜下注射及表面涂布ＡＡＮＥ相结合方法可快速诱发出大鼠颊部比较典型、稳定的ＯＳＦ模型。     

上皮间质转化相关蛋白在口腔黏膜下纤维化及其癌变组织中的表达

目的：探讨上皮间质转化相关标记蛋白E－cadherin和β－catenin在口腔黏膜下纤维化组织（oral submu－cous fibrosis,OSF）及其癌变组织中的表达特点及作用。方法：应用免疫组化SP法检测60例OSF患者,15例OSF癌变患者以及5例正常对照者的口腔黏膜组织中E－cadherin和β－catenin的表达并用IPP图像处理软件分析其平均光密度值。结果：①E－cadherin免疫组化阳性反应基本位于细胞膜,在正常黏膜和OSF早、中、晚期以及OSF癌变组织中其异常表达率分别为0、5％、20％、35％和53．3％;其平均光密度值分别为0．125±0．004,0．116±0．0006,0．109±0．008,0．103±0．009与0．095±0．008,各组之间表达均有显著性差异（P＜0．05）。②β－catenin免疫组化阳性反应在正常细胞基本位于细胞膜,而在OSF各组病变组织细胞中出现膜表达减少而质核表达增加的现象。在正常黏膜和OSF早、中、晚期以及OSF癌变组织中其异常表达率分别为0、60％、80％、90％和93．3％;其平均光密度值分别为0．105±0．007,0．098±0．009,0．106±0．012,0．114±0．007与0．119±0．003,β－catenin蛋白含量在早期组略有下降,但与正常组相比,表达无显著性差异（P＞0．05）;而OSF病变组间比较,表达均有显著性差异（P＜0．05）。结论：OSF及其癌变组织中E－cadherin的表达降低,β－catenin胞质核表达明显升高,EMT可能参与OSF及其癌变过程。     

Experimental study on aqueous areca nut extracts inducing oral submucous fibrosis in rats. I. Observation of histomorphology]

The purpose of this study was to establish the animal model of oral submucous fibrosis (OSF) in buccal mucosa of SD rats by submucosa injecting and surface painting aqueous areca nut extracts (AANE). The animals of all groups were killed randomly in the 12th, 16th, 22nd and 28th week. The buccal mucosae were collected, and were detected by light microscope and transmission electron microscope. The results were obtained: at different stages, the OSF-like lesions appeared in different degrees among some animals of the model groups, including atrophic epithelium with loss or partial loss of rate pegs, inflammation, accumulation and disorder of collagen fibre in juxta-epithelial region, along with concomitant muscle degeneration. The lesions didn't reverse obviously themselves after the authors stopped using AANE. Histomorphologic changes didn't appear in any animal of the control groups. The results indicated that the typical and stable OSF animal model were induced rapidly by submucosa injecting and surface painting AANE.     

口腔黏膜下纤维化癌变过程中G2、M期细胞周期蛋白与存活素磷酸化的研究

目的 探讨细胞周期G2、M期重要分子细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)、细胞分裂周期蛋白2(cell division cycle 2,p34cdc2)和存活素磷酸化在口腔黏膜下纤维化(oral submucosa fibrosis,OSF)癌变过程中的作用与意义.方法 应用Western blotting检测10例正常口腔黏膜上皮组织、40例OSF上皮组织及42例OSF癌变组织中Cyclin B1、p34cdc2和存活素磷酸化的表达情况,免疫共沉淀实验分析p34cdc2激酶与存活素的相关性.结果 Cyclin B1、p34cdc2、磷酸化p34cdc(p-p34cdc2)和存活素磷酸化在OSF组织中表达显著高于正常口腔黏膜(P＜0.05);在OSF癌变组织中的表达显著高于OSF组织(P＜0.05);但在OSF早、中、晚期3组间差异无统计学意义(P＞0.05).免疫共沉淀实验证实了p34cdc与存活素的结合.结论 细胞周期G2、M期重要分子Cyclin B1、p34cdc2及存活素磷酸化在OSF细胞分裂增殖过程中起促进作用,对OSF癌变的早期诊断和治疗具有重要的临床意义.     

Extracellular matrix remodeling in oral submucous fibrosis: its stage-specific modes revealed by immunohistochemistry and in situ hybridization

BACKGROUND: Oral submucous fibrosis (OSF) is a chewing habit-related pre-cancerous condition of the oral mucosa affecting predominantly south Asians. It is histopathologically characterized by epithelial atrophy and fibrosis of the subepithelial connective tissue. Fibrosis extends all the way into the muscle layer, leading to difficulty in mouth opening. However, the dynamics of extracellular matrix (ECM) remodeling with OSF progression is largely unknown. METHODS: Forty biopsy specimens of OSF and 10 of normal buccal mucosa were examined for expression/deposition modes of eight ECM molecules by histochemistry, immunohistochemistry, and in situ hybridization. RESULTS: In the early stage of OSF, tenascin, perlecan, fibronectin, collagen type III were characteristically enhanced in the lamina propria and the submucosal layer. In the intermediate stage, the ECM molecules mentioned above and elastin were extensively and irregularly deposited around muscle fibers. In the advanced stage, such ECM depositions decreased and were entirely replaced with collagen type I only. Their gene expression levels varied with progression of fibrosis, but the mRNA signals were confirmed in fibroblasts in the submucosal fibrotic areas. CONCLUSIONS: The results indicate that the ECM remodeling steps in OSF are similar to each phase of usual granulation tissue formation. Restricted mouth opening may be a result of loss of variety of ECM molecules including elastin into the homogeneity of collagen type I replacing muscle fibers.