ICR小鼠胚胎及生后不同阶段睾丸内生殖细胞的发育

目的 :观察ICR小鼠胚胎及出生后的睾丸内生殖细胞在不同阶段的发育情况 ,了解雄性生殖细胞分化、发育和成熟的过程。方法 :采用半薄切片甲苯胺蓝染色法 ,对雄性胚胎第 13,16 ,18d和出生后第 1,3,7,10 ,15 ,19d、4 ,6周及成年 (8周 )睾丸生殖细胞进行观察。结果 :原始生殖细胞向精原细胞的演化经历了一个分散 居中 分散靠边的过程。出生后第 7d ,支持细胞达到一个增殖高峰 ;出生后第 10d ,原始生殖细胞出现一个增殖高峰 ;出生后第 10d ,间质细胞达到一个增殖高峰 ;出生后第 15d ,出现初级精母细胞 ;出生后第 4周 ,产生精子细胞 ,同时间质细胞出现另一个增殖高峰并保持在一个高水平 ;出生后第 6周 ,开始有精子出现。结论 :当精原细胞大量增殖和生成精子细胞与精子时 ,生殖细胞可能需间质细胞提供大量激素相辅助 ;支持细胞在支持生精细胞、促进生精细胞转位及精子生成过程中起了一定作用。     

小白鼠生精上皮周期的形成

在小白鼠生后第1天到第56天,根据细胞核及精细胞顶体的形态变化,分别观察睾丸生精上皮周期的形成。结果表明,小白鼠在生后第1天睾丸的生精上皮由原始生殖细胞和支持细胞组成。生后7天出现精原细胞。生后14天出现分裂前期的初级精母细胞。生后21天出现发育早期的精细胞。生后35天少数曲细精管内出现了成熟精子,生精上皮周期已经形成,并与成鼠一样,生精上皮周期由12种时相组成。     

小鼠生后不同发育阶段睾丸生殖细胞的超微结构研究

目的:研究生精细胞、支持细胞、睾丸间质细胞在生后不同发育阶段的超微结构特点,了解雄性生殖细胞发育、分化和成熟的过程,亲代细胞与子代细胞间及3种生殖细胞在发育过程中的相互影响关系.方法:分别取生后5天、10天、20天雄性小鼠睾丸,固定后作超薄切片,染色后透射电镜下观察并拍片记录.结果:生精小管的细胞组合在不同发育阶段表现不同.生后5天,小管管腔很小,管壁细胞排列呈单层,细胞类型仅有精原细胞和幼稚的支持细胞两种,且均于基膜相贴,睾丸间质细胞不可见.生后10天,小管管腔增大,细胞排列呈2～3层,精原细胞增殖分化,支持细胞、睾丸间质开始发育.生后20天,细胞层数增多,出现各级生精细胞,增殖的子代细胞分布于近腔面,可见胞质间桥和变态发育中的精子;支持细胞、间质细胞发育成熟.结论:生精细胞在生精小管中的分布具有规律性,不同发育阶段表现出不同的细胞组合.在发育过程中,间质细胞、支持细胞的结构和功能的成熟先于生精细胞的分化,表明生精细胞的发育分化受间质细胞、支持细胞及基膜的共同参与下完成的.     

昆明胚鼠生殖腺发育的形态学观察

目的 研究及观察发育不同时期胚鼠生殖腺发育的形态变化。方法 取发育不同时期的胚鼠进行石蜡切片及H、E染色。结果 从胚胎切片标本中可观察到，交配后第11天出现生殖嵴，第12天出现未分化生殖腺，第13天可在胚胎标本切片上区分雌雄性，第14天雄性的生殖腺演变为睾丸，出现生精小管，为实心的小管。第16天出现睾丸间质细胞，支持细胞的细胞核明显可见。第16天雌性的生殖腺演变为卵巢．皮质及髓质两者分化明显。第20天睾丸内可见生精小管横断面数目明显增多。管腔内出现空腔，管内有一层精原细胞和一层精母细胞。卵巢内可见一团团粗大的生卵泡性索沿着卵巢周边分布，内含许多原始的卵原细胞，此时有原始的卵泡出现。结论 11～12d为分离原始生殖干细胞(PGCs)最佳时期。     

昆明胚鼠生殖腺发育的形态学观察

目的 研究及观察发育不同时期胚鼠生殖腺发育的形态变化。方法 取发育不同时期的胚鼠进行石蜡切片及H、E染色。结果 从胚胎切片标本中可观察到,交配后第11天出现生殖嵴,第12天出现未分化生殖腺,第13天可在胚胎标本切片上区分雌雄性,第14天雄性的生殖腺演变为睾丸,出现生精小管,为实心的小管。第16天出现睾丸间质细胞,支持细胞的细胞核明显可见。第16天雌性的生殖腺演变为卵巢,皮质及髓质两者分化明显。第20天睾丸内可见生精小管横断面数目明显增多,管腔内出现空腔,管内有一层精原细胞和一层精母细胞。卵巢内可见一团团粗大的生卵泡性索沿着卵巢周边分布,内含许多原始的卵原细胞,此时有原始的卵泡出现。结论 11~12 d为分离原始生殖干细胞(PGCs)最佳时期。     

人类生精细胞凋亡的调控因素

细胞凋亡(apoptosis)是由多种因素调控的细胞程序性死亡,在生精细胞的发育中具有重要影响.现已证实,睾丸生精细胞退化是通过细胞凋亡实现的.在精子发生的各个阶段都存在生精细胞凋亡,但不同时期凋亡细胞数目有很大差异,精原细胞和精母细胞凋亡最多,而精子细胞凋亡很少发生.睾丸就是通过精原细胞不断增殖,同时过量的受到损伤的生精细胞不断凋亡,来控制精子细胞数目,维持精子发生的动态平衡.本文就睾丸生精细胞凋亡的调控因素作一综述.     

8 Hz/130 dB次声对大鼠睾丸超微结构的影响

目的:应用透射电镜技术观察8 Hz/130 dB次声作用后的雄性大鼠睾丸细胞超微结构变化,探讨次声对大鼠睾丸超微结构的影响. 方法:将48只SD雄性大鼠随机分为1,7,14,21 d和4个相应的对照组,每组6只. 实验组动物次声作用2 h/d. 对照组动物置于同一次声压力舱内,不予次声作用. 于次声作用后不同时间点(1,7,14 d)取睾丸组织,透射电镜下观察. 结果:随着次声作用时间的增加,睾丸细胞超微结构损伤加重,细胞凋亡增加、畸形精子增多. 次声作用终止后7 d,各种细胞超微结构的急性变化基本消失,细胞凋亡下降;14 d后7,14,21 d组畸形精子仍显著高于对照组. 结论: 8 Hz/130 dB次声作用可导致大鼠睾丸超微结构损伤、细胞凋亡、畸形精子增加,具有明显的量效关系;8 Hz/130 dB次声作用终止后,各种细胞急性变化恢复较快,但精子畸形恢复较慢.     

睾丸固定术对隐睾大鼠生殖细胞凋亡与eNOS表达的影响

目的 探讨睾丸固定术对隐睾大鼠生殖细胞发育与凋亡的影响.方法 22日龄 SD 雄性大鼠复制左侧隐睾模型.实验随机分为假手术组、隐睾组和隐睾固定术组,每组10 只.建立左侧隐睾模型,隐睾固定术组于建立左侧隐睾模型后14 d行隐睾下降固定术.以生物素-dUTP/ 酶标亲和素测定法检测睾丸生殖细胞凋亡数目,用免疫组化SABC法检测eNOS 基因表达.结果 与假手术组相比,隐睾组和隐睾固定术组隐睾侧睾丸发生生精细胞凋亡的数目显著增加(P＜0.01).与隐睾组相比,睾丸固定术后生殖细胞凋亡明显减少(P＜0.01).隐睾组睾丸退化的生精细胞胞浆中eNOS 基因表达明显增强.结论 隐睾大鼠生殖细胞凋亡增多,睾丸固定术可降低生精细胞的凋亡水平.eNOS表达与生精细胞凋亡有密切关系.     

睾丸去神经支配诱发生殖细胞凋亡与FAS基因表达

目的 研究切除精索神经对睾丸生殖细胞凋亡及FAS基因表达的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠18只,随机分为假手术组(n=6)、精索上神经切除组(n=6)、精索下神经切除组(n=6).解剖显微镜下建立睾丸去神经支配大鼠模型,于术后1个月分别采用脱氧核搪核酸末端转移酶介导的dUTP的缺口末端标记技术(TUNEL)和SP免疫组化法观察睾丸生殖细胞凋亡与睾丸组织中FAS蛋白的表达.结果 术后1个月各手术组大鼠睾丸组织中大量Leydig细胞和精原细胞发生凋亡,Leydig细胞Fas蛋白表达显著升高.结论 精索神经对Leydig细胞和精原细胞的生存具有重要意义,Fas基因参与对睾丸去神经支配诱发Leydig细胞凋亡过程的调控.     

生精细胞的体外培养

目的：在体外培养中,观察精原细胞的增殖、分化和形态变化规律。方法：用胶原酶、透明质酸酶和胰蛋白酶分次消化法制取睾丸组织的细胞悬液．密度梯度离心法富集生精细胞,贴壁培养后观察生精细胞的存活、分裂和形态变化,并行Annexin V—FITC／PI染色,采用激光共聚焦扫描显微镜检测细胞的凋亡情况。结果：睾丸组织细胞悬液中的体细胞在培养中较早贴壁,胞质形成多个突起;精原细胞贴壁较迟．贴壁后呈规则的圆形或卵圆形,以链状或团块状位于体细胞层之上,细胞分裂不完全,相互间以细胞间桥相连。Annexin V—FITC／PI染色显示,培养第2天时精原细胞已出现凋亡,但数量极少,后逐渐增多。结论：在本实验所提供的体外培养条件下,精原细胞能够存活并发生贴壁、分裂、分化等行为,但同时也有细胞凋亡。     

输精管结扎对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

为探讨输精管结扎对睾丸曲细精管生精细胞凋亡程度的影响，应用流式细胞仪和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记（ＴＵＮＥＬ）技术，检测大鼠输精管结扎和假手术后２～１２周睾丸生精细胞的凋亡情况。结果：流式细胞仪检测发现结扎组的亚单倍体峰增高，亚单倍体细胞百分率升高；ＴＵＮＥＬ法则显示结扎后总的生精细胞凋亡数较假手术后明显增加（Ｐ＜０．００１）。结扎后不同时间组与同期假手术组比较，２周、６周、１０周组精原细胞和初级精母细胞凋亡数前者均高于后者（Ｐ均＜０．０５），１２周组精原细胞凋亡数前者高于后者（Ｐ＜０．０５）。结果表明输精管结扎会导致生精细胞凋亡增加。     

输精管结扎对大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

为探讨输精管结扎对睾丸曲精管生精细胞凋亡程度的影响，应用流式细胞仪和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的ｄＵＴＰ缺口末端标记技术，检测大鼠输精管结扎和假手术后２－１２周睾丸生精细胞的凋亡情况。     

嘉陵江C市段水中有机污染物睾丸毒性分子机制初步研究

目的 探讨水中有机污染物对大鼠睾丸损伤的分子机制.方法 采用XAD-2树脂浓缩水中有机污染物;大鼠经灌胃暴露于水中有机提取物,用TUNEL法检测细胞凋亡;免疫组化与免疫印迹方法检测水中有机提取物对fas,fasL,scf,c-kit蛋白表达的影响.结果 高剂量组水中有机污染物可增加精子细胞凋亡率(P＜0.05),精原细胞也观察到凋亡,但实验组与对照组之间没有统计学差异.高剂量组水中有机污染物可明显增加精原细胞fas,fasL和c-kit蛋白表达(P＜0.05).结论 水中有机污染物对精原细胞的发育分化有影响,并可诱导精子细胞凋亡,有可能破坏精原细胞的生精过程,但详细机制还需进一步研究.     

Survivin蛋白在小鼠生精恢复过程中的表达及其与生殖细胞凋亡的关系

目的: 探讨新的凋亡相关基因survivin蛋白在小鼠生精恢复过程中的表达及其与生殖细胞凋亡的关系. 方法: 间隔24 d两次腹腔注射白消安建立小鼠生精恢复过程的动物模型,第2次给药后随机分为1,2,3,4,6,8,10 wk 7组,于相应时间点及给药前取材,采用免疫组化S-P法和透射电镜、DNA原位末端标记TUNEL法分别检测survivin蛋白的表达和细胞凋亡. 结果: Survivin蛋白主要表达于间质细胞、次级精母细胞和精子细胞,生殖细胞的凋亡主要发生于初级精母细胞和圆头精子细胞. Survivin蛋白的表达与生殖细胞凋亡指数(AI)呈负相关(r=-0.784,P<0.01). 结论: Survivin蛋白表达而引起的凋亡抑制,有利于生殖细胞凋亡稳态的维持,对正常的精子发生起重要作用.     

Expression of Telomerase Gene mTR in the Testis of SD Rats and Its Significance

Summary:To study the expression of mTR gene in the testis of SD rats with varied ages and its sig-nificance,in situ hybridization(ISH)techniques were applied to detect the expression of telomerasegene mTR mRNA in the testis of SD rats.The expression of mTR was found in testes of different-age male SD rats.There was a positive correlation between the expression of mTR and the location ofgerm cells(spermatogonia,spermatocyte,spermatid).In Setoli cells,leydig cell and spermatozoa,no telomerase mTR was detectable.Type A spermatogonia expressed the highest level of telomerasemTR mRNA.It was suggested that the expression of mTR gene in the testis of SD rats is of lifetimeand coincides with the telomerase activity.     

人睾丸精原细胞的分离和纯化

目的探讨人睾丸精原细胞的分离纯化.方法用联合二步酶消化法获得人生殖细胞悬液,经Percoll不连续密度梯度离心,再用差异粘附法纯化得到成活率较好、含量较高的人精原细胞.结果所获得睾丸组织细胞悬液内活细胞、死细胞平均所占百分比分别为89.71%、10.29%.Percoll不连续密度梯度中,细胞主要在相邻梯度的界面处形成细胞带,其中精原细胞主要分布于27%～35%Percoll梯度间,根据细胞体外培养时的形态学特征等进行判断和分析,经纯化后精原细胞的纯度达到60.42%.结论应用联合酶消化法、Percoll不连续密度梯度离心和差异粘附等方法可以有效地对人精原细胞进行分离和纯化.     

切除精索上神经诱发大鼠生殖细胞凋亡的研究

目的：探讨精索上神经对精子发生的调控作用。方法：SD大鼠分为实验组和假手术组，实验组分离并切除睾丸精索上神经，假手术组分离但不切除该神经，运用光镜和电镜观察睾丸组织病理学变化；脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)检测生殖细胞凋亡。结果：切除精索上神经导致生精上皮萎缩、生精功能退化，电镜下生殖细胞内染色质出现浓缩、断裂等改变，TUNEL进一步显示切除精索上神经诱发精原细胞和间质细胞大量凋亡。结论：精索上神经参与对精子发生的调控，其对于生精过程的正常进行是不可缺少的。     

成年型睾丸间质细胞激活素A的作用不容忽视

睾丸支持细胞和间质细胞功能紊乱所导致的睾丸发育不全是引起男性不育的重要原因之一．传统观点认为,胚胎时期支持细胞是睾丸索形成的主要上皮细胞,其分泌信号诱导睾丸索的生长和分化,间质细胞则分泌雄激索,并不参与睾丸索的形成。而2010年6月8日刊登在《美国科学院院刊》（Proc Natl Acad Sci USA）上的一篇文学提出,胚胎型间质细胞分泌的激活素A也参与胚胎时期睾丸索的形成。本文就其中的一些发现提出自己的观点,即成年型间质细胞分泌的激活素A存在生后睾丸的发育和生殖细胞分化中也起一定的作用。