IκBα突变型基因提高过氧化氢处理后永生化星形胶质细胞的存活率

目的:探讨IκBα突变型基因对永生化星形胶质细胞株(IAST)NF-κB的活性及过氧化氢损伤后细胞存活率的影响。方法:通过脂质体法将携带IκBα突变型基因及对照载体转入IAST,通过Western Blot检测IκB蛋白的表达,用荧光素酶报告基因检测细胞中NF-κB的活性,用MTT法分别检测0.1 mmol/L、0.2 mmol/L、0.4 mmol/L过氧化氢处理2 h、4 h后转IκBα突变型基因及对照载体IAST的细胞存活率,免疫细胞化学法检测0.4 mmol/L过氧化氢处理4 h前后两组细胞中p65的表达。结果:转IκBα突变型基因的IAST中可见突变型IκBα表达,荧光素酶催化底物所发出的荧光强度较低(P<0.05)。各浓度过氧化氢处理4 h后转IκBα突变型基因的IAST细胞存活率较转对照载体的IAST高(P<0.05)。0.4 mmol/L过氧化氢处理4 h后转IκBα突变型基因及对照载体IAST中p65的表达出现核内移。结论:IκBα突变型基因可降低IAST中NF-κB的活性,提高过氧化氢处理后该细胞株的存活率。     

姜黄素对CD34~+人急性髓系白血病细胞增殖抑制作用及机制探讨

目的:探讨姜黄素对CD34+人急性髓系白血病细胞株KG1a和Kasumi-1增殖抑制作用及其机制。方法:以不同浓度姜黄素(0、20、40、80μmol/L)处理KG1a和Kasumi-1细胞48 h,采用台盼蓝染色计数法检测细胞活率,Western blot法测定姜黄素对细胞NF-κB P65核蛋白表达影响,免疫荧光检测姜黄素对细胞NF-κB P65核蛋白移位影响。结果:姜黄素可显著抑制KG1a和Kasumi-1细胞生长,随着姜黄素浓度的增加,细胞数量逐渐下降。姜黄素可下调KG1a和Kasumi-1细胞P65核蛋白表达,抑制NF-κB P65核移位,使NF-κB处于失活状态。结论:姜黄素可抑制KG1a和Kasumi-1细胞增殖,其机制可能与姜黄素抑制NF-κB P65核蛋白表达有关。     

苦参碱对人子宫内膜癌细胞增殖抑制的作用机制探究

目的探讨苦参碱对人子宫内膜癌细胞增殖的抑制作用及其机制。方法实验对象为人子宫内膜癌细胞株Ishikawa(常规培养),采用MTT法检测不同浓度苦参碱(0、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml、320μg/ml)作用24 h、48 h后对Ishikawa细胞增殖抑制率,采用流式细胞技术检测苦参碱对Ishikawa细胞周期的影响,采用Western Blot技术检测苦参碱对Ishikawa细胞血管内皮生长因子(VEGF)、核因子κB(NF-κB)p65蛋白表达的影响。结果随着苦参碱药物浓度的增加,对Ishikawa细胞增殖抑制率明显升高,呈一定的剂量依赖性;苦参碱作用24 h IC50为44.655μg/ml,苦参碱作用48h IC50为20.664μg/ml。Ishikawa细胞接受不同浓度苦参碱处理48 h后,G1期细胞百分比的增高情况明显,G2期以及S期细胞百分比降低(P0.05),且随着苦参碱药物浓度的增加,变化越显著(P0.05)。不同浓度苦参碱可有效抑制Ishikawa细胞VEGF、NF-κB p65蛋白表达(P0.05),且随着浓度的增高,Ishikawa细胞VEGF、NF-κB p65蛋白表达越低(P0.05)。结论苦参碱能够对人子宫内膜癌细胞产生明显的抑制,而且具有一定程度上的剂量依赖性,其可能具有将肿瘤细胞阻滞于G1期的作用机制,抑制VEGF、NF-κB p65蛋白表达。     

胰高血糖素样肽-1对晚期糖基化终末产物诱导的ECV-304细胞核转录因子-κB、血管细胞黏附分子-1表达的影响

目的本实验观察胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对晚期糖基化终末产物(AGEs)损伤的ECV-304细胞的细胞活性、核转录因子-κB(NF-κB)和血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达的影响。方法人工制备AGEs。培养ECV-304细胞至80%满瓶后分组:对照组(5.5mmol/L葡萄糖DMEM8h);AGEs组[5.5mmol/L葡萄糖DMEM+50μg/mlAGEs-人血清白蛋白(HSA)8h];加药组1(0.03nmol/mlGLP-1+5.5mmol/L葡萄糖DMEM8h);加药组2(0.03nmol/mlGLP-1+5.5mmol/L葡萄糖DMEM+50μg/mlAGEs-HSA8h)。使用MTT法检测细胞活性,用ELISA试剂盒检测细胞培养上清液NF-κB、VCAM-1的表达量。结果 (1)AGEs组与对照组相比,细胞活性下降、NF-κB和VCAM-1的表达量明显升高(P<0.05)。(2)0.03nmol/mlGLP-1和AGEs-HSA共同干预与单用AGEs-HSA干预的组别相比,前者细胞活性升高、NF-κB和VCAM-1的表达量明显减少(P<0.05)。结论 GLP-1能抑制AGEs对EC...     

去甲斑蝥素通过NF-κB/IκBα途径增强阿霉素的抗骨髓瘤效应

目的 研究去甲斑蝥素(NCTD)联合阿霉素(ADR)对多发性骨髓瘤细胞增殖、凋亡的影响及其机制.方法 以U266细胞为研究对象,采用NCTD(10 μmol/L)和ADR(0.25 μmol/L)单独或联合处理细胞,MTT法观察细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测核因子-κB P65( NF-κB P65)、磷酸化NF-κB P65( p-NF-κB P65)、NF-κB抑制因子IκBα、磷酸化IκBα(p-IκBα)、survivin、Bcl-2和Bax蛋白水平,免疫组化法测定血管内皮细胞生长因子(VEGF)水平.结果 ①NCTD能增强ADR的细胞毒和诱导凋亡作用,二者具有协同作用;②与ADR单药组比较,联合用药组胞核NF-κB P65和胞质p-IκBα的表达量分别由2.08±0.29和0.39±0.07降至0.48±0.08和0.02±0.01,胞质NF-κB P65和IκBα表达无变化;③联合用药组与ADR单药比较,survivin和Bcl-2的表达水平分别由0.31±0.05和0.23±0.05降至0.03±0.02和0.05±0.02,而Bax的表达由0.46±0.06升至0.62±0.08;④ADR组和联合用药组VEGF的阳性率分别为(44.6±4.4)％和(27.0±2.1)％,NCTD增强ADR对VEGF表达的抑制作用.结论 NCTD通过抑制NF-κB/IκBα途径,调节下游信号分子survivin、Bcl-2、Bax和VEGF的表达,增强ADR的抗骨髓瘤效应.     

血必净注射液对脂多糖诱导大鼠肾脏微血管内皮细胞组织因子表达的影响及机制探讨

目的 观察血必净注射液对脂多糖(LPS)诱导大鼠肾脏微血管内皮细胞(RMECs)组织因子(TF)表达的影响,并探讨其可能机制.方法 采用胰酶消化法原代培养大鼠RMECs,用Ⅷ因子相关抗原免疫荧光法鉴定.取生长良好的3、4代细胞,分为对照组、LPS刺激组和血必净治疗组;采用透射电镜观察各组细胞形态,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞内TF mRNA和内皮素(ET)mRNA表达,用免疫荧光法检测核转录因子-κB(NF-κB)活化程度.结果 与对照组比较,10 mg/L LPS刺激组电镜下可见细胞粗面内质网和高尔基体空泡变性明显)LPS(1～100 mg/L)刺激组TF mRNA和ET mRNA表达均随浓度增加显著上调(P<0.05或P<0.01),NF-κB核移位明显;血必净(12.5、25.0、50.0 g/L)治疗组较LPS刺激组细胞形态明显改善,TF mRNA和ET mRNA表达均明显减少,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),未观察到NF-κB核移位.结论 LPS可呈剂量依赖性诱导TF mRNA和ET mRNA表达;血必净注射液可通过降低TF mRNA表达来抑制LPS诱导的微血管内皮细胞凝血系统的启动,其保护作用的机制可能与降低ET mRNA表达并抑制NF-κB活化有关.     

高糖和光损伤对人视网膜色素上皮细胞HIF-1α、Caspase-9表达的影响

目的探讨高浓度葡萄糖和光损伤对体外培养人视网膜色素上皮(RPE)细胞的影响及缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)和Caspase-9蛋白表达的影响。方法体外培养人RPE(ARPE-19),(2000±500)Lux光照建立光损伤模型,给予25 mmol/L葡萄糖模拟高糖环境,通过MTT法检测细胞活力。免疫细胞化学、免疫荧光染色和双标荧光染色法观察各组细胞HIF-1α、Caspase-9蛋白的表达,酶联免疫吸附试验定量分析各组细胞HIF-1α、Caspase-9蛋白的表达。结果 (2000±500)Lux光照及25 mmol/L高糖均可引起体外培养的人RPE细胞活性下降,高糖联合光损伤的RPE细胞活力最低。正常对照组无HIF-1α、Caspase-9表达,免疫细胞化学染色和双标免疫荧光染色显示光损伤、高糖、高糖联合光损伤均可诱导RPE细胞HIF-1α、Caspase-9蛋白的表达。酶联免疫吸附试验检测结果显示,光损伤和高糖均可使HIF-1α、Caspase-9蛋白表达增加,高糖组的RPE细胞HIF-1α、Caspase-9蛋白表达低于高糖联合光损伤组,但高于光损伤组(P<0.01)。结论 (2000±500)Lux光照可导致体外培养人RPE细胞的损伤,高浓度葡萄糖可加重RPE细胞光损伤,高糖可使光损伤诱导的RPE细胞HIF-1α、Caspase-9蛋白表达增加。     

核因子-κB对胰腺AR42J细胞肿瘤坏死因子-α表达的调控

目的 探讨脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)对胰腺腺泡AR42J细胞细胞因子表达的影响及其可能机制,进一步阐明急性胰腺炎的发病机制.方法 用不同质量浓度的LPS(0.001,0.01,0.1,1,10,100 mg/L)刺激AR42J细胞18 h,同时用10mg/L的LPS刺激AR42J细胞不同时间(2,6,12,18,24h),RT-PCR检测核因子-κB(NF-κB)P65和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)mRNA表达的变化,放射免疫法(RIA)检测培养液上清TNF-α蛋白浓度的改变.对NF-κB(P65)mRNA的表达与TNF-α mRNA的表达进行相关和回归分析.结果 RT-PCR结果表明0.001 mg/L的LPS处理AR42J细胞时即可出现TNF-α及NF-κB(P65)mRNA表达的明显上调,且呈量效关系;用10 mg/L的IPS处理后,在2 h后即可出现TNF-α及NF-κB(P65)mRNA表达的明显上调,并且呈时效关系.RIA结果表明用0.01 mg/L的LPS处理AR42J细胞后即可出现TNF-α蛋白表达的明显上调,且呈量效关系;用10mg/L的LPS处理后,在6 h后即可出现TNF-α蛋白表达的明显上调,并且呈时效关系.TNF-α mRNA的表达与P65 mRNA的表达呈正相关.结论 LPS可以以时间剂量依赖方式地刺激AR42J细胞NF-κB(P65)和TNF-α的表达,NF-κB(P65)mRNA的表达与TNF-αmRNA的表达呈正相关.针对NF-κB靶点,抑制其活性,可为包括AP的治疗提供一条新的途径.     

汉防己甲素联合屈洛昔芬对K562和K562/A02细胞NF-κB蛋白表达的影响

目的 研究汉防己甲素(Tet)和屈洛昔芬(DRL)单独及联合用药后对K562细胞及其耐药细胞株K562/A02的核因子κB(NF-κB)表达的影响,以进一步探讨其逆转多药耐药的作用机制.方法 采用免疫细胞化学及Western blotting法分别检测Tet(1μmol/L)、DRL(5 μmol/L)单独及联合作用于K562和K562/A02细胞后NF-κB核转位水平和胞核NF-κB蛋白表达水平的变化.结果①K562/A02细胞NF-κB核转位水平[(65.0±4.2)%]及胞核NF-κB蛋白表达(3.545±0.219)明显高于K562细胞[(39.6±0.9)%和2.366±0.141](P＜0.01);②Tet、DRL单独及联合作用6、12 h,对K562细胞NF-κB核转位水平及胞核NF-κB蛋白表达水平无明显影响(P＞0.05);③两药单独及联合作用6、12 h,可明显降低K562/A02细胞NF-κB蛋白核转位水平和胞核NF-κB蛋白表达水平(P＜0.05和P＜0.01),两药联合作用增强(P＜0.05),作用12 h较作用6 h效果更显著(P＜0.05).结论K562/A02细胞的胞核NF-κB蛋白表达水平明显高于K562细胞,NF-κB的活化可能参与了K562/A02细胞耐药的发生;抑制NF-κB活化可能参与了Tet和DRL逆转K562/A02细胞多药耐药过程.     

新藤黄酸对人肺癌细胞株A549的增值和凋亡的影响

目的探讨新藤黄酸(GNA)对人肺癌细胞株A549的增值和凋亡的影响及其调控的可能机制。方法用不同浓度的GNA处理A549细胞,分为对照组和GNA组(GNA浓度分别为0.5、1.5、2.0mg/L),采用MTT、细胞划痕、Hoechst染色法观察细胞的增殖、迁移和凋亡状况;Western blot检测凋亡相关蛋白caspase3、caspase9、p53和NF-κB的表达变化。结果 GNA能明显抑制细胞的体外增殖和迁移且呈剂量依赖性;Hoechst染色显示GNA能诱导细胞凋亡,且随着浓度的升高凋亡现象越来越明显;Western blot显示GNA能上调促进凋亡的蛋白caspase3、caspase9、p53和下调NF-κB的表达(P0.05)。结论 GNA能明显抑制人肺癌细胞株A549的增殖和迁移并诱导凋亡。     

右美托咪定抑制NF-κB核易位减轻大鼠创伤性脑损伤神经炎症

目的探究右美托咪定(dexmedetomidine, DEX)调节创伤性脑损伤(traumatic brain injury, TBI)后小胶质细胞(microglial, MG)极化及神经炎症的机制。方法 42只成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为假手术组(sham组)、TBI组、TBI+DEX组(又分为治疗1 d、3 d和7 d组)、TBI+NF-κB抑制剂(pyrrolidine dithiocarbamate, PDTC)组和TBI+DEX+PDTC组, 每组6只。采用改良Feeney自由落体法制备大鼠TBI模型, 造模后1 h腹腔注射PDTC 100 mg/kg、2 h腹腔注射DEX 100 μg/kg, 直至取材。于取材前采用改良的神经功能缺损评分法(modified neurological severity score, mNSS)评价大鼠神经功能, ELISA检测血清炎症因子, 取大鼠损伤皮质通过Western Blot检测MG M1和M2表型标记物及MyD88、NF-κB p65蛋白表达, 免疫荧光染色观察损伤皮质处NF-κB p65在MG中的表达及入核情况。计量资料...     

小白菊内酯通过NF-κB信号通路对LPS诱导的气道上皮细胞IL-8分泌水平影响的研究

目的探究小白菊内酯(PTL)对脂多糖(LPS)诱导的气道上皮细胞IL-8的分泌水平影响以及具体的作用机制。方法 CCK8法检测0μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml的LPS对气道上皮细胞的毒性作用,RT-q PCR和Western blot检测不同浓度LPS对IL-8表达水平的影响。添加0μmol/L、10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、160μmol/L PTL后,CCK8法检测细胞活性变化; RT-q PCR和Western blot检测白介素8(IL-8)表达水平的变化; Western blot检测PTL对NF-κB p65和IκBα蛋白表达水平的影响。结果 LPS呈时间和浓度依赖性抑制气道上皮细胞活性; LPS呈时间依赖性促进IL-8表达水平;添加LPS能够使IκB表达下调,NF-κB p65表达上调。添加适当浓度的PTL能够缓解LPS对细胞的毒性影响,使IL-8表达下调,具有浓度依赖性;并且促使IκB下调,NF-κB p65上调。结论小白菊内酯能够通过NF-κB信号通路抑制气道上皮细胞炎症因子IL-8的分泌水平。     

吡咯烷二硫代氨基甲酸盐增强TNF-α对宫颈癌HeLa细胞的毒性作用及相关机制

目的研究核因子-κB(NF-κB)抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)联合TNF-α对宫颈癌HeLa细胞生长及凋亡的影响,并初步探讨其作用机制。方法应用噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度PDTC、TNF-α及两者联合作用对HeLa细胞生长抑制率的影响;采用光镜及DAPI法观察细胞形态学变化及凋亡情况;Westernblot法检测HeLa细胞A20和caspase-3蛋白的表达。结果 PDTC(50,100μmol/L)或TNF-α(30,60,120mg/L)可明显抑制细胞的增殖;低浓度PDTC(25μmol/L)不影响细胞增殖,但与TNF-α联合应用与单用TNF-α比较,细胞增殖抑制率明显增加(P<0.01);光镜与DAPI染色结果显示,不同浓度药物组的细胞均有明显的细胞凋亡特征,且联合用药组细胞凋亡率增高(P<0.01);PDTC(25μmol/L)与TNF-α(60mg/L)联合用药与单用TNF-α(60mg/L)或PDTC(50μmol/L)比较,胞质A20蛋白表达无明显变化,但caspase-3蛋白的表达明显增加(P<0.05)。结论 PDTC可增强TNF-α对宫颈癌HeLa细胞的毒性作用,其机制可能与PDTC抑制TNF-α诱导的核转录因子NF-κB的活性,最终上调凋亡蛋白caspase-3表达有关。     

调控A20对NF-κB表达及Jurkat细胞的影响

目的:探讨在急性T淋巴细胞白血病糖皮质激素耐药Jurkat细胞株中,调控A20对NF-κB表达以及Jurkat细胞生物学特性的影响。方法:CCRF CEM和Jurkat细胞中分别加入100、10、1、0.1、0.01和0.001μmol/L地塞米松(DEX),培养24、48和72 h,应用CCK-8检测细胞增殖抑制的变化。构建A20质粒,设计并合成A20-siRNA,分别通过脂质体转染Jurkat细胞,CCK-8检测不同浓度DEX处理组、不同浓度DEX联合A20质粒和A20-siRNA处理组的Jurkat细胞增殖率。应用RT-qPCR检测NF-κB的m RNA表达水平,Western bolt检测蛋白表达水平,采用流式细胞术检测Jurkat细胞凋亡。结果:不同浓度地塞米松(DEX)对CCRF CEM细胞生长的抑制作用呈显著的时间依赖性(r=0.984,P0.05)和浓度依赖性(r=0.966,P0.05);CCRF CEM细胞在24 h时,IC50接近1μmol/L,Jurkat细胞在1μmol/L和10μmol/L开始出现较大差异。由于1μmol/L DEX处理的Jurkat细胞增殖率无明显变化,故选取1μmol/L DEX处理的Jurkat细胞为对照组。检测显示A20质粒转染联合不同浓度DEX处理组细胞增殖率较DEX组及A20-siRNA联合DEX组低(P0.05)。A20质粒转染Jurkat细胞后,NF-κB的mRNA及蛋白表达明显低于对照组(P0.05),细胞凋亡率较对照组明显增高(P0.05);A20-siRNA转染Jurkat细胞后,NF-κB的mRNA及蛋白表达水平明显高于对照组(P0.05),A20-siRNA组细胞的凋亡率与对照组无明显改变(P0.05)。结论:Jurkat细胞对DEX耐药,A20过表达联合DEX可增加对DEX耐药细胞的敏感性,降低Jurkat细胞增殖率;下调Jurkat细胞中NF-κB的表达水平,促进Jurkat细胞的凋亡。     

核转录因子NF-κB和血管内皮生长因子在不同病程尖锐湿疣中的表达及其意义

目的:探讨核转录因子NF-κB和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在不同病程尖锐湿疣(CA)中的表达情况及其临床意义.方法:将确诊的尖锐湿疣患者40例分为短病程组20例、长病程组20例,同时以20例正常人包皮组织为对照组,用RT-PCR和Western Blot的方法分别检测不同病程CA以及正常皮肤组织中的核转录因子NF-κB和VEGF的mRNA及蛋白表达.结果:(1)短病程组CA疣体中NBκB mRNA、YEGFmRNA的表达水平分别为1.16±0.17、1.01±0.11,长病程组中NF-κB mRNA、VEGF mRNA的表达水平分别为0.75±0.10、1.11±0.10,均明显高于对照组的0.47±0.11和0.61±0.12(均P＜0.05);同时短病程组CA疣体中NF-κB mRNA、VEGF mRNA的表达水平与长病程组比较差异有显著性(P＜0.05).(2)短病程组CA疣体中NF-κB蛋白、VEGF蛋白表达水平分别为0.78±0.12、0.81±0.12,长病程组中NF-κB蛋白、VEGF蛋白表达水平分别为0.66±0.11、0.91±0.11,显著高于对照组的0.31±0.08和0.29±0.09(均P＜0.05).NF-κB蛋白以短病程组表达最高,且短病程组与长病程组比较差异有显著性(P＜0.05).结论:核转录因子NF-κB和血管内皮生长因子在尖锐湿疣疣体中高表达并与病程相关,可能共同参与了CA的发病以及转归.     

丝裂原活化蛋白激酶与核因子-κB在碳酰氯吸入性肺损伤中的作用

目的:探讨丝裂原活化蛋白激酶[mitogen activated protein kinases,MAPKs;包括细胞外信号调节蛋白激酶1/2(extracellular signal-regulated kinase 1/2,ERK1/2)、蛋白激酶p38和c-氨基末端蛋白激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)]与核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)在碳酰氯吸入性肺损伤中的作用及相互关系。方法:选取40只雄性Wistar大鼠,体质量220~280 g,随机分为空气对照组、碳酰氯吸入组、PD98059(ERK1/2特异性阻断剂)干预组、SB203580(p38特异性阻断剂)干预组和SP600125(JNK特异性阻断剂)干预组,每组8只。空气对照组吸入空气,碳酰氯吸入组与3个干预组均吸入相同浓度的碳酰氯(8.33 L/mg)。3个干预组均在吸入碳酰氯前给予PD98059、SB203580和SP600125。HE染色后光镜下观察肺组织病理学改变;分别采用免疫组织化学法及蛋白质印迹(Western blotting)法检测各组肺组织中NF-κB p65蛋白的表达。结果:与空气对照组比较,碳酰氯吸入组出现肺损伤的典型病理学特征,SP600125和SB203580干预组肺损伤有不同程度好转。免疫组织化学法及Western blotting法结果显示,与空气对照组比较,碳酰氯吸入组NF-κB p65蛋白表达明显增强(P0.01);与碳酰氯吸入组比较,SP600125干预组、SB203580干预组NF-κB p65蛋白表达明显下降(P0.05)。结论:碳酰氯吸入可激活MAPKs信号通路,可能通过上调NF-κB表达而发挥作用。     

Ang 1-7对雨蛙素刺激的胰腺腺泡AR42J细胞p38 MAPK/NF-κB信号通路的影响

目的探讨血管紧张素1-7(Ang 1-7)干预雨蛙素(caerulein,CAE)刺激的胰腺腺泡细胞AR42J后,p38MAPK/NF-κB信号蛋白的表达变化。方法将AR42J细胞随机分为3组:对照组、雨蛙素组(10 nmol/L,CAE组)、Ang1-7组(10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L Ang 1-7+10 nmol/L雨蛙素)。对照组为正常生长的AR42J细胞,CAE组用10 nmol/L的雨蛙素刺激AR42J于2 h、6 h、12 h、24 h及48 h收集细胞,Ang 1-7组为不同浓度Ang 1-7作用30 min后再用雨蛙素刺激24 h收集细胞,Western blot技术检测各组细胞中ACE2、Mas受体、p38 MAPK、p-p38 MAPK及NF-κB的蛋白表达。结果 AR42J细胞中可见ACE2-Ang 1-7-Mas受体轴表达;与对照组相比,CAE组ACE2和Mas受体的表达呈先增多后减少的趋势,均于24 h达高峰(P0.05);p38 MAPK、p-p38 MAPK及NF-κB的表达亦是24 h达峰值(P0.05);Ang 1-7(10-7mol/L、10-6mol/L及10-5mol/L)上调Mas受体的表达,下调p38 MAPK、p-p38MAPK、NF-κB蛋白的表达,Ang 1-7的浓度为10-5mol/L时,后三者的表达水平与CAE组比较,差异均具有统计学意义(P0.05)。结论雨蛙素刺激的AR42J细胞中,Ang 1-7可通过Mas受体抑制p38MAPK/NF-κB信号通路的活性。     

米诺环素对三叉神经痛大鼠三叉神经节卫星胶质细胞炎症反应的影响

目的分析米诺环素对三叉神经痛(TN)大鼠三叉神经节卫星胶质细胞(SGCs)炎症反应的影响。方法通过激光化学法激发三叉神经损伤,建立TN大鼠模型。按照随机原则,将24只大鼠分为Ⅰ组(正常大鼠,未给予任何用药)、Ⅱ组(构建TN模型)、Ⅲ组(建立TN模型,并给予米诺环素进行灌胃),每组各8只。比较三组大鼠神经颜面部支配区机械疼痛阈值,并比较三组大鼠三叉神经节白细胞介素-1β(IL-1β)和内核转录因子-κB(NF-κB) mRNA及蛋白表达的差异,对NF-κB采取免疫组化染色处理,并用胶质纤维酸性蛋白染色法以观察SGCs的激活情况。通过硝酸甘油建立TN三叉神经节SGCs的炎症模型,经体外培养大鼠三叉神经节SGCs,并将细胞模型分为A组(常规培养)、B组(给予硝酸甘油0. 55 mmol/L)、C组(给予硝酸甘油0. 55 mmol/L+米诺环素15μmol/L)、D组(给予硝酸甘油0. 55mmol/L+米诺环素30μmol/L)。对各组细胞内NF-κB与IL-1β表达水平进行检测,并用Fluo-3/AM探针负载对SGCs中钙离子Ca~(2+)的浓度进行检测。结果相比Ⅰ组,Ⅱ、Ⅲ组大鼠疼痛阈值均明显下降,而Ⅲ组疼痛阈值较Ⅱ组明显升高(P 0. 05)。相比Ⅰ组,Ⅱ、Ⅲ组大鼠三叉神经节IL-1β和NF-κB蛋白及mRNA表达水平均明显升高,Ⅲ组IL-1β和NF-κB蛋白及mRNA的表达水平较Ⅱ组明显下降(P 0. 05)。Ⅰ组NF-κB阳性细胞数量极少;Ⅱ组NF-κB阳性细胞数量较多;Ⅲ组NF-κB阳性细胞数量较Ⅱ组明显减少。Ⅲ组SGCs细胞数量明显减少,Ⅱ组SGCs细胞数量较Ⅰ、Ⅲ组明显增多。相比B组,A、C、D组NF-κB与IL-1β蛋白表达水平明显下降,其mRNA相对表达量明显下降(P 0. 05)。相比A组,B、C组大鼠Ca~(2+)浓度均明显升高,C、D组Ca~(2+)浓度较B组明显下降(P 0. 05)。结论米诺环素可通过阻滞三叉神经节SGCs的激活,下调炎症因子IL-1β与NF-κB的水平以发挥减轻TN症状的作用。     

COX2抑制剂对大鼠肺泡巨噬细胞生长及炎症反应的影响及机制研究

目的探讨环氧合酶2(COX2)抑制剂塞来昔布对肺泡巨噬细胞凋亡、炎症反应及吞噬能力的影响。方法四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测0. 1μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L塞来昔布对大鼠肺泡巨噬细胞株NR8383的细胞毒性,选择合适的塞来昔布浓度。将NR8383细胞随机分为3组,即对照组、LPS组和LPS+塞来昔布组。对照组:细胞培养板加等体积磷酸盐缓冲液(PBS); LPS处理组:细胞用终浓度为1μg/ml的脂多糖(LPS)处理; LPS+塞来昔布组:10μmol/L的塞来昔布处理细胞1 h后,加1μg/ml的LPS处理细胞24 h。流式细胞术检测细胞凋亡率; Western blotting检测NF-κBp65、IκBα、Bax和Bcl-2蛋白表达; qRT-PCR检测炎症因子TNF-αmRNA表达;激光共聚焦技术检测巨噬细胞的吞噬能力。结果 0. 1～10μmol/L塞来昔布处理对NR8383细胞无细胞毒性,20μmol/L塞来昔布处理可抑制NR8383细胞活力。LPS组与对照组比较,细胞凋亡率升高,NF-κBp65和Bax蛋白表达升高,IκBα和Bcl-2蛋白表达降低,TNF-αmRNA表达升高,细胞吞噬能力降低(P 0. 05),LPS+塞来昔布组与LPS组比较,细胞凋亡率降低,NF-κBp65和Bax蛋白表达降低,IκBα和Bcl-2蛋白表达升高,TNF-αmRNA表达降低,细胞吞噬能力升高(P 0. 05)。结论塞来昔布可通过下调NF-κB信号抑制LPS诱导的NR8383细胞凋亡及炎症反应,并维持吞噬功能,从而对肺损伤起保护作用。     

HMGB1、TNFAIP3蛋白对狼疮性肾炎系膜细胞增殖的影响及其NF-κB信号通路机制

目的 基于核因子-κB(NF-κB)信号通路研究高迁移率族蛋白1(HMGB1)、肿瘤坏死因子α诱导蛋白3(TNFAIP3)对狼疮性肾炎(LN)肾小球系膜细胞(MC)增殖的影响。方法 分离、培养10只MRL-Faslpr/JNju小鼠(LN小鼠)的MC,将其分为空白对照组、溶剂对照组、HMGB1干预组。空白对照组不作任何处理,溶剂对照组加入200μg/L甲醇溶剂,HMGB1干预组加入200μg/L人重组HMGB1蛋白。采用CCK8法检测12、24、36、48 h时3组肾小球系膜细胞增殖率。采用免疫印迹法(Western Blotting)检测3组MC中HMGB1、TNFAIP3、NF-κB、NF-κB抑制蛋白α(IκB-α)蛋白表达量。结果 12、24、36、48 h时,HMGB1干预组MC增殖率显著高于空白对照组、溶剂对照组(P 0. 05);HMGB1干预组MC增殖率随时间延长而显著升高(P 0. 05); HMGB1干预组MC中HMGB1、TNFAIP3、NF-κB蛋白表达量显著高于空白对照组、溶剂对照组(P 0. 05);干预组MC中IκB-α蛋白表达量显著低于空白对照组、溶剂对照组(P 0. 05);溶剂对照组MC增殖率及HMGB1、TNFAIP3、NF-κB、IκB-α蛋白表达量较空白对照组差异无统计学意义(P 0. 05)。结论 HMGB1可能通过上调TNFAIP3表达,诱发NF-κB信号通路活化,介导LNMC过度增殖,这可为LN的发病机制研究和靶向治疗提供理论基础。