胺碘酮联合甘草次酸增强肝癌HepG2细胞凋亡和自噬的实验研究

目的 研究胺碘酮联合甘草次酸对人肝癌HepG2细胞的活性、凋亡及自噬的影响。 方法 单独使用或联合使用20 μmol/L胺碘酮与不同浓度甘草次酸处理HepG2细胞48 h后,采用MTT法检测细胞存活率;单独或联合作用24 h后采用Annexin Ⅴ/PI流式细胞术检测细胞凋亡,采用蛋白质印迹技术检测自噬相关蛋白Beclin-1、LC3和p62的表达;荧光显微镜下观察EGFP-LC3绿色荧光聚集体的形成;另外,预先加入自噬抑制剂羟氯喹（HCQ）和自噬促进剂雷帕霉素,采用同样的实验方法研究自噬对细胞活性和凋亡的影响。 结果 不同浓度甘草次酸与20 μmol/L胺碘酮联合作用48 h后HepG2细胞存活率均低于单药组,当80 μmol/L甘草次酸与20 μmol/L胺碘酮时,细胞存活率为50%左右,故后续实验中甘草次酸浓度均为80 μmol/L。联合作用组细胞凋亡率高于单药组,Beclin-1和LC3Ⅱ蛋白的表达量高于单药组,p62蛋白的表达量低于单药组;荧光显微镜观察结果显示联合作用组EGFP-LC3荧光聚集体数量多于单药组;胺碘酮与甘草次酸联合作用于HepG2细胞,加入自噬抑制剂可抑制自噬促进细胞凋亡,降低细胞活性,采用自噬促进剂促进自噬细胞凋亡率降低,活性增加。 结论 胺碘酮与甘草次酸联用可诱导肝癌HepG2细胞凋亡增加,细胞活性降低,自噬水平增加;其诱导的自噬对细胞是一种保护性机制。     

雷公藤内酯醇联用甘草次酸的药代动力学研究

目的 探讨甘草次酸对雷公藤内酯醇在大鼠体内的药代动力学行为的影响. 方法 将SD大鼠随机分为雷公藤内酯醇单独给药组和雷公藤内酯醇与甘草次酸联合给药组,分别通过尾静脉注射雷公藤内酯醇0.2 mg/kg,采用液相色谱-质谱法(LC-MS),选择离子检测(SIM)的方式测定2组大鼠不同时间血浆中的雷公藤内酯醇浓度,比较2组在大鼠体内的药代动力学行为. 结果 在0.2～250 ng/mL质量浓度范围内,血浆中雷公藤内酯醇线性良好.定量下限为0.2 ng/mL,日内和日间精密度RSD均<12.0％,准确度为90％～105％,绝对回收率>80％,基质效应>90％,血浆样品的稳定性良好.药代动力学数据显示,联合给药组的最大血药浓度(cmax)、消除半衰期(t1/2)、平均滞留时间(MRT0～180 min)、血药浓度|时间曲线下面积(AUC0～180 min)分别是单独给药组的0.75,2.51,1.15及1.39倍,其中t1/2、MRT0～180 min在2组间的差别有统计学意义(P<0.05). 结论 甘草次酸与雷公藤内酯醇联用可降低雷公藤内酯醇的峰浓度,延长其体内滞留时间,从而提高其大鼠体内的生物利用度;该测定方法简便、效率高、重复性好,符合生物样品分析的基本要求.     

雷公藤内酯醇通过调控miR-194的表达诱导肝癌HepG2细胞凋亡和自噬

目的:研究雷公藤内酯醇通过调节微小RNA-194(miR-194)表达对肝癌HepG2细胞活力、凋亡和自噬的影响.方法:将HepG2细胞分为对照组及10 nmol/L、20 nmol/L、40 nmol/L、60 nmol/L和80 nmol/L雷公藤内酯醇处理组,采用MTT法和Western印迹实验检测各组HepG2...     

川芎嗪调控肝癌HepG2细胞凋亡及对相关蛋白表达的影响

目的 通过研究川芎嗪（Tetramethypyrazine,TMP）对肝癌HepG2细胞凋亡及相关蛋白表达的影响,探讨TMP抑制肝癌细胞增殖的作用机制。方法 通过实时细胞分析技术（Real-time cell analyzer,RTCA DP）检测TMP对HepG2细胞增殖的影响;应用流式细胞仪检测TMP对HepG2细胞凋亡及细胞周期的影响;通过全自动Western blot实验检测TMP对p53蛋白及Bcl-2/Bax蛋白表达的影响。结果 TMP对肝癌HepG2细胞的增殖有明显抑制作用,并呈现时间剂量依赖关系;TMP可显著诱导肝癌HepG2细胞凋亡,显著增加G0/G1期细胞,且呈一定的时间相关性;TMP能够显著促进p53蛋白的表达（P<0.01）和降低Bcl-2/Bax表达比值（P<0.01）。结论 TMP具有抑制肝癌HepG2细胞增殖的作用,其机制可能与影响肝癌HepG2细胞周期,导致细胞周期阻滞有关;同时TMP可促进p53蛋白的表达,抑制Bcl-2蛋白的表达从而降低Bcl-2/Bax表达比值,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肝癌细胞的增殖。      

雷公藤红素联合用药对HepG2细胞增殖的抑制作用

研究雷公藤红素分别与甘草次酸、紫杉醇、大黄酸联合用药对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用。采用MTT法,测定并计算雷公藤红素分别与甘草次酸、紫杉醇、大黄酸联用后HepG2细胞的存活率,利用协同指数(CI)、金氏公式判定协同药效。同时检测细胞凋亡情况以及细胞周期阻滞情况。结果表明,单独应用雷公藤红素、甘草次酸、大黄酸、紫杉醇均可抑制HepG2细胞增殖;雷公藤红素分别与甘草次酸、紫杉醇、大黄酸联用,能显著增强雷公藤红素对HepG2细胞增殖抑制效果,联合用药在一定浓度范围内呈现良好协同作用;联合用药使HepG2细胞凋亡率显著提高(P<0.01),并使更多HepG2细胞阻滞于G₂/M期。雷公藤红素与甘草次酸、紫杉醇、大黄酸联用对HepG2细胞的增殖具有良好的协同抑制效果,其与共同诱导凋亡及增加细胞G₂/M期阻滞相关。     

雷公藤内酯醇对肝癌H22细胞增殖凋亡及COX-2表达的影响

目的 观察雷公藤内酯醇(TPL)对肝癌H22细胞增殖、凋亡及环氧合酶-2(COX-2)表达水平的影响. 方法 以体外培养的鼠源性H22细胞株为研究对象,实验分对照组和不同浓度的TPL处理组.MTT比色法测定TPL对H22细胞株增殖抑制情况;TPL处理48 h后,Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术检测细胞凋亡情况,流式细胞术间接免疫荧光双标记法检测COX-2表达变化情况. 结果 随着药物浓度的增加及时间的延长,TPL能明显抑制H22细胞增殖.TPL诱导细胞凋亡及下调COX-2的表达具有浓度依赖性,不同浓度组比较,差别具有统计学意义(P<0.05). 结论 TPL可能通过诱导肝癌H22细胞凋亡及抑制COX-2表达发挥抗肿瘤作用.     

雷公藤内酯醇对小鼠H22腹水瘤细胞凋亡及PD\|L1表达的影响

目的 探讨雷公藤内酯醇诱导H22腹水瘤细胞凋亡以及作用机制。 方法 采用腹腔注射肝癌H22细胞建立小鼠腹水瘤模型,80只成模小鼠随机分为对照组、雷公藤内酯醇低、中、高剂量(0.05, 0.1, 0.2 mg/kg)组,每组20只。观察小鼠体质量变化、生存期; 计量腹水体积及计数腹水内肿瘤细胞数; 流式细胞仪检测肿瘤细胞凋亡及程序性死亡受体-配体1(PD-L1)表达的变化。 结果 与对照组比较,雷公藤内酯醇3个剂量组小鼠的体质量增长缓慢,生存期中位数均有显著延长(P<0.01); 雷公藤内酯醇低、中、高3个剂量组的腹水体积以及每毫升中的肿瘤细胞数均显著低于对照组(P<0.05); 流式细胞术检测结果显示,不同剂量的雷公藤内酯醇可以显著诱导H22细胞凋亡并下调H22细胞PD-L1的表达(P<0.05,P<0.01)。 结论 雷公藤内酯醇可能通过诱导肝癌H22细胞凋亡及抑制PD-L1表达,发挥抗肝肿瘤的作用。     

甘草对雷公藤二萜内酯体内代谢产物的影响研究

目的：研究甘草对雷公藤甲素和雷公藤内酯酮体内代谢产物的影响,为阐明甘草对雷公藤的减毒增效作用机制奠定基础。方法采用LC-MS/MS法研究雷公藤甲素和雷公藤内酯酮单独给药以及与甘草联合给药后在大鼠尿液中的相应代谢成分,分析比较单独给药及联合给药后代谢产物种类和生成量的差异。结果在雷公藤甲素单独给药和与甘草联合给药的大鼠尿液中,均发现代谢产物5个：m/z（[M＋H]^＋）377,359,359,359,375;在雷公藤内酯酮单独给药和与甘草联合给药的大鼠尿液中,均发现代谢产物3个：m/z（[M＋H]^＋）413,397,375;各代谢产物生成量在单独给药组和联合给药组中有很大差异。结论雷公藤甲素和雷公藤内酯酮单独给药和与甘草联合给药后其部分代谢产物相同,但是代谢产物的生成量存在很大差异。     

雷公藤内酯醇对人喉癌Hep-2细胞增殖的影响

目的 探讨雷公藤内酯醇(TL)对人喉癌Hep-2细胞生长的影响.方法 采用MTT法检测喉癌Hep-2细胞的生长抑制作用;应用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记技术法(TUNEL)评价细胞凋亡;透射电镜观察雷公藤内酯醇对喉癌Hep-2细胞超微结构的影响.结果 10～40ng/mL的雷公藤内酯醇作用48h后能明显抑制Hep-2细胞的增殖(P<0.01),并呈剂量依赖性;透射电镜观察到明显的细胞凋亡特征.结论 在体外培养的条件下雷公藤内酯醇能明显抑制喉癌Hep-2细胞的增殖,并可诱导喉癌Hep-2细胞凋亡.     

热疗对人肝癌HepG2细胞凋亡的影响

原发性肝癌是我国常见恶性肿瘤之一,在各种恶性肿瘤的死亡顺序中居第二位,每年死亡20多万人,约占世界肝癌死亡人数的一半以上[1].恶性肿瘤的发生、发展的过程,是细胞的过度增殖和细胞凋亡受到抑制的过程[2].诱导细胞凋亡已成为治疗肿瘤的一个新热点.应用加热治疗肿瘤早已被临床所接受,但加热对肝癌HepG2细胞凋亡的影响未见报道.为此,我们以肝癌HepG2细胞为模型,观察不同加热时间对肝癌HepG2细胞凋亡的影响.     

大蒜素诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的影响及机制

目的 探讨大蒜素对体外培养的人肝癌HepG2细胞凋亡的促进作用及其分子机理.方法 采用TUNEL法检测大蒜素对HepG2细胞凋亡的影响,提取Bcl-2基因的mRNA,以RT-PCR方法研究大蒜素对Bcl-2基因表达的影响.结果 大蒜素使人HepG2细胞凋亡指数增加(P<0.01),且呈剂量依赖效应;Bc1-2基因mRNA水平随大蒜素浓度升高而降低.结论 大蒜素可促进人HepG2细胞的凋亡过程,并使Bcl-2基因mRNA水平降低,从而起到抗肿瘤的治疗作用.探讨大蒜素体内外诱导人肝癌细胞HepG2细胞凋亡的作用及机制.     

小白菊内酯对肝癌HepG2细胞凋亡作用及其机制

目的 探讨小白菊内酯(PN)对人肝癌HepG2细胞的抗肿瘤作用及其机制.方法 取对数生长期的HepG2细胞分成两组,DMSO组以换液形式加入含1/1000 DMSO的DMEM高糖培养基,PN处理组分别加入PN浓度为15.0、17.5、20.0、22.5、25.0、27.5μmol/L的DMEM高糖培养基,应用WST-8...     

雷公藤内酯醇对人绒毛膜癌细胞株JAR增殖凋亡及凋亡调控蛋白BCL-2/BAX表达的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇(triptolide,TP)对人绒癌细胞株JAR增殖、凋亡及凋亡调控蛋白BCL-2/BAX表达的影响。方法:以体外培养的人绒癌细胞株JAR为研究对象,MTT法检测TP对细胞增殖的抑制情况;TUNEL法观察TP作用于细胞后引起细胞凋亡情况,PCR和Western blot检测TP对凋亡调控蛋白BCL-2/BAX mRNA和蛋白表达的影响。结果:随着作用浓度的增加及时间延长,TP能明显抑制JAR细胞增殖并诱导其凋亡(P<0.05);并能下调凋亡抑制蛋白BCL-2的mRNA和蛋白的表达,上调凋亡促进蛋白BAX的mRNA和蛋白表达(P均<0.05)。结论:雷公藤内酯醇在体外能抑制人绒癌细胞株JAR增殖,诱导其凋亡;凋亡调控蛋白BCL-2/BAX表达水平的变化可能是TP诱导JAR细胞凋亡的重要机制。     

小白菊内酯诱导人肝癌BEL-7402细胞凋亡的实验研究

小白菊内酯属于倍半萜内酯,是墨西哥、印度药用植物的活性成分,也是欧洲小白菊这一常用草药的活性成分[1],主要用于治疗偏头痛、炎症和各种肿瘤。20世纪90年代末,中国学者从中国特有药用植物观光木树皮中分离得到这一抗肿瘤活性物质,并且经过体外抑瘤实验证实,小白菊内酯(10.0μg/mL)对人肝癌细胞的体外抑制率为67.17%,可见其对人肝癌细胞抑制作用比较明显[2]。近年来,随着医学技术和分子生物学技术的发展及各种检测手段的出现,发现小白菊内酯可抑制NF-κB的激活[3,4],诱导细胞凋亡[1],产生细胞毒作用[5,6]。但有关从分子生物学水平研究小…     

姜黄素诱导人肝癌HepG2细胞发生凋亡及对细胞生长周期的影响

目的研究中药姜黄素在体外诱导人肝癌HepG2细胞发生凋亡的机制及对细胞生长周期的影响。方法体外培养人肝癌HepG2细胞,用不同浓度的姜黄素（0.5、1.0、2.0、4.0、8.0和16.0μmol/L）刺激人肝癌HepG2细胞24、36和48h,MTT法及台盼蓝拒染法检测姜黄素对人肝癌HepG2细胞生长增值的影响并绘制生长曲线图,流式细胞术（FCM）检测其对细胞生长周期的影响。结果MTT法结果表明姜黄素对人肝癌细胞HepG2的生长具有抑制作用,2.0μmol/L浓度组在24h与对照组比较便具有统计学意义（P〈0.05）,16μmol/L浓度组与HepG2细胞作用48h后对HepG2细胞的生长抑制作用最强（54.78±2.35）%,台盼蓝拒染法发现细胞存活率与姜黄素浓度间具有剂量和时间效应;流式细胞仪检测结果表明8.0μmol/L姜黄素诱导了人肝癌HepG2细胞发生凋亡,并对细胞生长的S期有明显的阻滞作用。结论姜黄素在体外能阻滞HepG2细胞的生长增值,诱导了人肝癌HepG2细胞发生凋亡。     

甘草不同灭菌方法对甘草次酸含量的影响

目的:考察不同灭菌方法对甘草中的甘草次酸含量的影响.方法:同一批甘草药材分别采用Co60灭菌、环氧乙烷灭菌、热压灭菌、微波灭菌.结果:以上灭菌方法均可达到灭菌效果,但不同灭菌方法对甘草中甘草次酸含量的影响不同.结论:以上4种灭菌方法仅Co60灭菌方法对甘草中甘草次酸的含量影响较小,为保证产品质量,实际生产中应采用Co60灭菌方法对甘草进行灭菌.     

甘草次酸对人胃癌SGC7901细胞增殖的影响及机制

目的探讨甘草次酸(GA)对人胃癌SGC7901细胞增殖的影响及其可能机制。方法常规培养人胃癌SGC7901细胞,分为实验组1~7组和阴性对照组,实验组1~7组为培养SGC7901细胞加入GA的二甲基亚砜(DMSO)溶液,使GA的终浓度分别为6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、150.00、200.00μmol·L~(-1),阴性对照组加入和终浓度GA相同体积的DMSO。GA作用48 h,采用四甲基偶唑蓝(MTT)法检测GA对人胃癌SGC7901细胞的增殖作用,用流式细胞仪检测碘化丙啶单染细胞的DNA含量。结果 MTT法测定结果显示,终浓度为6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、150.00、200.00μmol·L~(-1)的GA对人胃癌SGC7901细胞抑制率分别为(8.27±1.80)%、(13.74±3.16)%、(25.85±4.35)%、(46.03±5.88)%、(97.78±1.10)%、(99.56±0.21)%、(98.86±0.35)%;GA终浓度低于100.00μmol·L~(-1)时,人胃癌SGC7901细胞抑制率随GA浓度的增加而逐渐增加,呈明显的剂量依赖关系(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,终浓度为6.25、12.50、25.00、50.00、100.00、150.00、200.00μmol·L~(-1)的GA作用人胃癌SGC7901细胞48 h后,DNA处于亚二倍体、二倍体、四倍体、介于二倍体和四倍体之间的细胞数量差异有统计学意义(P<0.001);浓度低于150.00μmol·L~(-1)时,亚二倍体的细胞数量逐渐增加,且呈浓度依赖性(P<0.05);浓度高于150.00μmol·L~(-1)后,亚二倍体的细胞数量逐渐减少;浓度低于100.00μmol·L~(-1)时,二倍体的细胞数量逐渐增加,介于二倍体与四倍体之间、四倍体的细胞数量则逐渐减少;当浓度超过100.00μmol·L~(-1)时,二倍体的细胞数量逐渐减少,四倍体的细胞数量逐渐增加,介于二倍体与四倍体之间的细胞数量变化不大。结论 GA对人胃癌SGC7901细胞的生长有抑制作用,其抑制过程可能有细胞凋亡的参与,也有周期的改变。     

雷公藤内酯醇对鳞癌A431细胞增殖凋亡及其COX-2和survivin表达的影响

目的 观察雷公藤内酯醇(TP)对皮肤鳞癌A431细胞株增殖与凋亡、环氧合酶-2(COX-2)和生存素(survivin)mRNA表达水平的影响,探讨TP抗皮肤肿瘤的作用机制.方法 以体外培养的人皮肤鳞癌A431细胞株为研究对象,MTT比色法测定不同浓度TP对A431细胞株增殖活性的影响,光镜观察细胞形态学变化,流式细胞仪检测TP作用于A431细胞株后细胞周期的分布以及凋亡峰的出现.RT-PCR法检测TP对A431细胞株COX-2和survivin mRNA表达水平的影响.结果 随着TP剂量的增加及作用时间的延长,TP对A431细胞株增殖活性的抑制作用增强,TP能够诱导A431细胞株凋亡和改变细胞周期的分布,与对照组相比,G0/G1期细胞比例增多(P<0.05),S期细胞比例减少(P<0.05);另外,TP能抑制A431细胞COX-2和survivin mRNA的表达,不同浓度处理组两两相比,差异具有显著性(P<0.01).结论 TP通过诱导A431细胞凋亡、抑制A431细胞COX-2和survivin mRNA表达发挥抗皮肤肿瘤的作用.     

雷公藤内酯对海人酸诱导大鼠脑小胶质细胞MHC分子表达的影响

目的:评价雷公藤内酯对海人酸致痫大鼠神经元的免疫保护作用。方法:结晶紫染色观察神经元形态,免疫组化技术检测小胶质细胞MHC-Ⅰ、Ⅱ类分子的表达。结果:30μg/kg雷公藤内酯可使大鼠的癫痫抽搐状态明显较海人酸组缓和,出现时间较海人酸组晚(P<0.05),且可使海人酸诱导大鼠活化小胶质细胞的数量减少,凋亡神经元数量减少。30μg/kg雷公藤内酯可下调海人酸诱导大鼠脑小胶质细胞表达MHC-Ⅰ、Ⅱ类分子(P<0.01)。结论:雷公藤内酯通过抑制小胶质细胞表达MHC-Ⅰ、Ⅱ类分子和免疫应答对海人酸诱导大鼠神经元凋亡具有免疫保护作用。     

二十碳五烯酸对人肝癌HepG2凋亡细胞线粒体的影响

目的:探讨二十碳五烯酸(EPA)诱导人肝癌HepG2细胞凋亡及其对线粒体的影响. 方法:HepG2细胞与经EPA处理后,DNA Ladder检测细胞凋亡的发生,应用线粒体荧光探针和四唑盐(MTT)比色法分析细胞线粒体数量和功能,应用免疫印迹法和特异性底物检测HepG2细胞Caspase-9蛋白酶的表达和活性. 结果:终浓度为120 μmol/L EPA处理HepG2细胞24 h后,可以检测到凋亡标志性的DNA梯形带;细胞线粒体数量减少,MTT比色法检测A值为0.173±0.065(P＜0.01),提示线粒体功能降低;线粒体相关凋亡级联反应的启动分子Caspase-9蛋白表达增加,Caspase-9酶活性增强至75.4±4.8,与未经EPA处理HepG2细胞相比差异有统计学意义(P＜0.01). 结论:EPA可能通过损伤线粒体诱导人肝癌HepG2细胞凋亡.