小剂量氯胺酮对趾部切口疼痛模型大鼠脊髓背角谷氨酸含量和Fos表达的影响

目的探讨小剂量氯胺酮对趾部切口疼痛模型大鼠脊髓背角谷氨酸含量和Fos表达的影响。方法雄性SD大鼠32只,随机分为4组:正常对照组(A组)、手术切口组(B组)、氯胺酮10.0mg/kg术前30min腹腔内注射组(C组)和氯胺酮10.0mg/kg术后30min腹腔内注射组(D组),每组8只。除A组外,其他3组按Brennan法制作趾部切口疼痛模型。术后1h观察动物疼痛行为的改变,以累积疼痛评分评定疼痛行为。术后2h固定取材,用免疫组织化学方法观察脊髓背角谷氨酸含量和Fos表达的变化。结果与A组相比,手术后B组、C组和D组大鼠的累积疼痛评分明显上升(P<0.01)。与A组相比,B组、C组和D组大鼠手术侧脊髓背角谷氨酸含量明显下降(P<0.01),但3组之间差异无显著性。氯胺酮在手术前、后使用都能明显抑制切口疼痛刺激诱导的Fos在脊髓浅层和固有核的表达。浅层内Fos阳性神经元平均数由B组的(27±8)分别下降到C组的(15±3)和D组的(21±4),与B组相比差异有显著性(P<0.01),C组与D组相比有差异也有显著性(P<0.05);在固有核B、C和D组Fos阳性神经元平均数分别为(12±3)、(6±2)和(8±3),与B组相比差异有显著性(P<0.01或P<0.05)。结论在大鼠切口疼痛模型中,氯胺酮10mg/kg腹腔内注射对大鼠疼痛行为和脊髓背角谷氨酸含量无明显影响,但可明显抑制脊髓背角Fos的表达,且预先给药的抑制作用更强。     

鞘内注射吗啡对切口痛大鼠脊髓Fos表达的影响

目的: 动态观察鞘内注射(intrathecal,IT)吗啡对大鼠切口疼痛及脊髓Fos蛋白表达的影响。方法: 雄性SD大鼠96只,分成4组,以累积疼痛评分观察大鼠行为学,以免疫组织化学法测定大鼠脊髓Fos蛋白表达。结果: 在术后2 h、24 h、48 h时点,对照组大鼠的累积疼痛评分明显高于假手术组,术前和术后给药组评分较对照组均明显降低(P<0.01),但两组间差异均无统计学意义(P>0.05);术后第72 h,各手术组之间差异均无统计学意义(P>0.05);术后96 h和120 h,各组之间差异均无统计学意义(P>0.05)。在术后2 h,对照组大鼠Fos蛋白表达明显增多(P<0.01),而IT吗啡可明显抑制脊髓背角Fos蛋白表达,尤以术前给药为甚;术后24~120 h,各手术组间差异均无统计学意义(P>0.05)。结论: 术前或术后单次IT吗啡,仅在术后早期有镇痛作用并能抑制Fos蛋白表达的增加。     

氢溴酸高乌甲素注射液对手术致痛大鼠脊髓Fos蛋白及疼痛反应的影响

目的探讨氢溴酸高乌甲素注射液对手术致痛大鼠脊髓Fos蛋白表达及疼痛反应的影响。方法按Brennan法手术建立Sprague-Dawley大鼠手术切口疼痛模型。48只大鼠随机分为6组,每组各8只:对照组术前16min腹腔注射0.9%氯化钠溶液;术前低剂量高乌甲素组、术前中剂量高乌甲素组和术前高剂量高乌甲素组均于术前16min分别腹腔注射氢溴酸高乌甲素注射液1、2和4mg/kg;术后高乌甲素组于术后16min腹腔注射氢溴酸高乌甲素注射液4mg/kg;去甲肾上腺素(NE)生成减少组于术前2h腹腔注射二乙基二硫代氨基甲酸钠200mg/kg+术前16min腹腔注射4mg/kg氢溴酸高乌甲素注射液。采用术后大鼠1h累积疼痛评分进行疼痛行为观察,免疫组织化学方法进行脊髓背角Fos蛋白免疫反应阳性神经元(FLIN)计数。结果术前低剂量高乌甲素组、术前中剂量高乌甲素、术前高剂量高乌甲素组和术后高乌甲素组脊髓背角FLIN计数和疼痛累积评分均显著低于对照组(P值均<0.05),术前中剂量高乌甲素组显著低于术前低剂量高乌甲素组(P值均<0.05),术前高剂量高乌甲素组显著低于术前中剂量高乌甲素组、术前低剂量高乌甲素组、术后高剂量高乌甲素组和NE生成减少组(P值分别<0.05、0.01)。结论氢溴酸高乌甲素注射液腹腔注射可抑制手术致痛大鼠的脊髓背角Fos蛋白的表达以及疼痛反应,并呈量效关系,预先给药较术后给药的镇痛效果好。氢溴酸高乌甲素注射液可能通过促进中枢NE的释放,加强脑干下行调制系统,抑制外周伤害性刺激在脊髓水平的传入而达到镇痛作用。     

高乌甲素对大鼠膀胱福尔马林刺激引起的脊髓及肾上腺Fos表达的影响

目的研究高乌甲素对福尔马淋刺激大鼠膀胱诱发的脊髓和肾上腺Fos表达的影响。方法采用甲醛刺激膀胱模型及免疫组化技术进行研究。结果ISO组脊髓及肾上腺均未见明显Fos表达。其余3组眷髓背角内均出现Fos阳性细胞，以腰6、骶1节段数量多且集中，主要分布在脊髓后角内侧缘、双侧Ⅰ层内侧部、中间带外侧核(IML)和后联合核(DCN)处，以后联合核处比较集中。在肾上朦皮质均发现Fos阳性细胞。肾上腺髓质未见明显Fos表达。高乌甲素(6mg/kg)腹腔注射可显著减少脊髓及肾上腺Fos阳性细胞数量。结论高乌甲素可抑制膀胱福尔马林伤害性刺激引起的脊髓及肾上腺Fos表达。     

吗啡对伤害性电刺激隐神经诱发大鼠脊髓Fos蛋白表达的影响

目的：观察躯体伤害性电刺激能否引起脊髓神经元Fos蛋白表达的改变,以及吗啡对该变化的影响.方法：采用免疫组化方法研究伤害性电刺激隐神经（saphenous nerve,SN）后脊髓神经元Fos蛋白表达的变化以及皮下注射吗啡对该变化的影响.结果：伤害性电刺激SN后30 min能够引起脊髓神经元Fos蛋白表达的显著增加;皮下注射吗啡可抑制伤害性电刺激SN引起的脊髓神经元Fos蛋白表达的增加.结论：伤害性电刺激SN模拟躯体痛后可致脊髓神经元Fos蛋白表达的显著增加,表明SN传入的伤害性信息能够到达脊髓腰骶段,吗啡抑制了伤害性电刺激SN引起的脊髓神经元Fos蛋白表达的增加,说明此反应具有伤害性感受性质.     

激活多巴胺受体对大鼠脊髓背角Fos样蛋白生成的抑制作用

以免疫细胞化学ＡＢＣ法，观察多巴胺受体激动剂和拮抗剂对伤害性电激大鼠单侧后爪诱发的同侧腰段脊髓背角Ｆｏｓ阳性神经元的影响。发现伤害性电刺激诱发的Ｆｏｓ阳性神经元，多数位于同侧背角浅层，排列密集，少数位于同侧背角深层，排列稀疏；腹腔注射多巴受体激动剂使同侧背角浅层和深层的Ｆｏｓ阳性神经元显著减少，而多巴胺二型受体拮抗剂能够完全阻断多巴受受体激动剂的抑制作用。提示多巴胺受体参与疹水平伤害性信息递的调     

完全弗氏佐剂致炎性痛大鼠脊髓背角Fos蛋白的表达

目的:探讨完全弗氏佐剂(CFA)所致炎性痛大鼠Fos蛋白在脊髓背角痛觉传导通路中的表达及意义.方法:64只SD大鼠随机均分为两组,于右后肢踝关节外侧皮下分别注射0.9%生理盐水(NS)或CFA 50 μl,每组取8只观察注射前后热缩足反射潜伏期(TWL)的变化;余48只以免疫组化法检测脊髓背角Fos蛋白表达.结果:大鼠注射CFA后TWL逐渐降低,并在12 h时达最低点(下降62%),持续3 d后缓慢上升,14 d时基本恢复至基础水平;NS组脊髓背角Fos蛋白散在表达,而CFA组中1 h后Fos蛋白最先在大鼠右侧脊髓背角Ⅰ～Ⅱ层表达(P<0.01),4 h时Ⅴ～Ⅵ层蛋白表达逐渐增多(P<0.01),12 h时脊髓全层蛋白表达最多,至14 d时背角各层少见Fos蛋白.结论:50 μl CFA能诱导大鼠产生为期2周的炎性痛病程.炎症期间脊髓背角Fos蛋白的持续表达与外周痛觉信号的传导和中枢的调控有关.     

异丙酚鞘内注射对蜜蜂毒致痛大鼠脊髓组织中Fos蛋白表达的影响

目的:通过对蜜蜂毒(BV)致痛大鼠蛛网膜下腔给予异丙酚,观察大鼠脊髓背角组织中Fos蛋白表达的改变,从组织形态学角度探讨异丙酚在脊髓水平的镇痛作用及其机制.方法:选取鞘内置管成功的60只SD大鼠随机分为致痛前给药组和致痛后给药组两大组.其中致痛前给药组包括:二甲基亚砜(DMSO)+生理盐水组(DN组)、DMSO+BV组(DB组)、异丙酚5 μg+BV组(PSB组)、异丙酚10 μg+BV组(P10B组)、异丙酚20 μg+BV组(P20B组);致痛后给药组包括:生理盐水+DMSO组(ND组)、BV+DMSO组(BD组)、BV+异丙酚5 μg组(BP5组)、BV+异丙酚10 μg组(BP10组)、BV+异丙酚20 μg组(BP20组).每组均6只大鼠.DN组、DB组、P5B组、P10B组、P20B组在实验开始时分别鞘内注射DMSO 5 μL、DMSO 5 μL、异丙酚5 μg、异丙酚10 μg、异丙酚20 μg,实验开始后15 min除DN组在大鼠右侧后足底注射生理盐水50 μL外,其余各组均注射体积分数0.4% BV 50 μL;ND组、BD组、BP5组、BP10组、BP20组在实验开始时除ND组在大鼠右侧后足底注射生理盐水50 μL外,其余各组均注射体积分数0.4%BV 50 μL,实验开始后5 min分别鞘内注射DMSO 5 μL、DMSO 5 μL、异丙酚5 μg、异丙酚10 μg、异丙酚20 μg.所有药物单次注射容积均为5 μL.各组大鼠足底注射后2 h取脊髓L4～L6节段行Fos免疫组织化学染色,测定积分光密度(IOD)值及Fos蛋白表达抑制率.结果:BY致痛前,鞘内注射异丙酚(5、10和20μg)后,P5B、P10B、P20B组与DB、DN组比较,Fos表达的10D值升高(P均<0.01);BV致痛后,鞘内注射同剂量异丙酚,BP5、BP10、BP20组与DN、BD组相比较,Fos表达的10D值升高(P均<0.01).且对大鼠脊髓背角Fos的表达产生剂量依赖性抑制作用(P<0.01).而且致痛后给药优于致痛前给药(P<0.05).结论:异丙酚在脊髓水平具有镇痛作用且有剂量依赖性,对疼痛的治疗作用优于预防作用.     

疼痛对不同年龄大鼠脊髓背角Caspase-3表达的影响

目的 探讨凋亡相关蛋白Caspase-3在大鼠疼痛模型脊髓背角中的表达及与年龄的关系。方法 应用免疫组织化学和免疫印迹反应方法检测Caspase-3在脊髓背角的表达。结果 未刺激侧不同年龄组间Caspase-3表达量无显著性差异（P〉0．05）;疼痛刺激侧青年组Caspase-3表达量明显高于中、老年组（P〈0．05）,中、老年组之间Caspase-3表达量无显著性差异（P〉0．05）;老、中、青各组刺激侧Caspase-3的表达均较同组未刺激侧增加（P〈0．05）。结论 疼痛刺激可以促进脊髓背角Caspase-3的表达,并且疼痛刺激时Caspase-3的表达与年龄有密切的关系。     

大鼠前列腺伤害性刺激诱导脊髓内P2X3和Fos的表达及其意义

目的：研究大鼠前列腺伤害性刺激诱导脊髓内P2X3和Fos的表达及其意义。方法：建立大鼠前列腺伤害性刺激动物模型，采用抗Fos蛋白和抗P2X3的免疫组织化学方法，对大鼠前列腺伤害性刺激诱导的脊髓内Fos、P2X3表达部位进行观察。结果：Fos阳性神经元和P2X3阳性神经元主要分布在脊髓后角胶状质。结论：交感神经通路在大鼠前列腺伤害性信息传递过程中具有重要作用；P2X3可能参与了前列腺伤害性刺激的传导。     

免疫组化技术检测脊髓背角Fos蛋白表达及意义

目的研究痛觉传导通路中脊髓背角Fos蛋白的表达及意义。方法用免疫组化技术检测脊髓背角Fos蛋白的表达。结果注射Formalin侧脊髓背角Fos样免疫阳性(FLI)神经元的数量较生理盐水(NS)对侧明显增多。结论Fos免疫组织化学方法可被应用于痛觉机制研究,脊髓背角Fos蛋白表达阳性的神经元可作为伤害性反应神经元的标志。     

钙网蛋白在不同疼痛模型大鼠脊髓中的表达

目的:观察钙网蛋白在三种疼痛模型大鼠的脊髓中表达的变化,探讨其与疼痛的可能关系.方法:分别制作甲醛炎性痛模型、保留性坐骨神经分支损伤(SNI)模型和慢性缩窄性坐骨神经损伤(CCI)模型,观察大鼠疼痛行为学改变,并分别用免疫组化和Western Blot技术检测大鼠脊髓c-Fos和钙网蛋白的表达.结果:与对照组相比,各模型组大鼠脊髓后角c-Fos 阳性神经元增多(P＜0.05); SNI模型组和CCI模型组大鼠脊髓钙网蛋白的表达均上调(P＜0.05),甲醛炎性模型组大鼠脊髓钙网蛋白变化无统计学意义(P＞0.05).结论:脊髓钙网蛋白的表达上调与SNI和CCI模型的慢性神经病理痛发生过程有关.     

雌激素对福尔马林致痛后小鼠脊髓背角c-Fos和P物质的影响

目的观察雌激素对福尔马林致痛后小鼠痛觉评分及脊髓背角c-Fos和P物质(SP)表达的影响。方法选用雌性C57/BL6小鼠15只,分成对照组(control)、去卵巢手术组(OVX+V)、去卵巢手术加雌激素组(OVX+E),每组5只。采用痛觉评分分析雌激素对小鼠福尔马林足底注射后痛行为的影响,结合c-Fos及SP免疫组化,观察雌激素对脊髓L3～L5节段背角浅层神经元激活及痛觉传入的影响。结果小鼠福尔马林致痛后control组、OVX+V组和OVX+E组在第一时相的痛觉评分组间无统计学差异(P>0.05);间歇期及第二时相早期的痛觉评分OVX+V组明显高于control组和OVX+E组(P<0.05)。卵巢摘除增加福尔马林致痛后引起的脊髓背角FLIN数(P<0.01)和SP免疫阳性反应物,而雌激素能有效抑制福尔马林引起的注射侧背角FLIN数的升高(P<0.01)以及SP免疫阳性反应物显著降低。结论雌激素通过调节脊髓背角浅层感觉神经元的活动及痛觉纤维的传入参与对小鼠福尔马林致痛的镇痛作用。     

鞘内注射氯胺酮对甲醛炎性疼痛大鼠脊髓背角蛋白激酶C表达的影响

目的观察甲醛炎性疼痛大鼠脊髓背角蛋白激酶C(PKC)的表达,以及鞘内注射氯胺酮对甲醛炎性痛大鼠脊髓背角PKC表达的影响。方法 32只SD大鼠采用改良Yaksh法进行鞘内置管,随机分为4组(每组8只):对照组(C组)、鞘内注射生理盐水组(NS组)、氯胺酮50μg组(K1组)和氯胺酮100μg组(K2组)。NS、K1、K2组于置管5 d后,复制甲醛炎性疼痛模型。采用疼痛加权评分法(PIS)评估大鼠甲醛致痛后1 h内的疼痛行为,24 h后测量致痛足厚度并用免疫组化法观察大鼠腰5节段水平脊髓背角PKC的表达。结果与NS组比较,K1组和K2组在甲醛炎性痛第二时相的PIS值明显降低(P<0.01);致痛24 h后,NS组大鼠致痛足厚度与对照组比较明显增加,而K1、K2组致痛足厚度与NS组比较则明显减少(P<0.05);NS组大鼠脊髓背角PKC免疫反应阳性细胞数量及免疫组化评分均较C组明显增加(P<0.01),而K1、K2组则明显低于NS组(P<0.05)。结论鞘内注射氯胺酮对甲醛炎性痛大鼠具有明显的抗伤害作用;鞘内注射氯胺酮可明显抑制甲醛炎性痛引起的脊髓背角PKC表达的增加,PKC在脊髓水平伤害性信息的传递和调节中可能发挥重要作用。     

Effect of pre-electroacupuncture on p38 and c-Fos expression in the spinal dorsal horn of rats suffering from visceral pain

Background Acupuncture is an effective way to relieve pain, but the mechanism by which electroacupuncture （EA） decreases the visceral pain state still remains unclear. This study aimed to evaluate the effects of pre-electroacupuncture on pain behaviors, p38 phosphorylation, and c-Fos protein and mRNA expression in both the colonic wall and spinal dorsal horn of rats suffering from visceral pain. This study also investigated the probable signaling regulatory mechanism of the analgesic effect induced by electroacupuncture. Methods All rats were randomized into the control （Con） group, the Con＋EA group, the visceral pain （VP） group, and VP＋EA group （n=8 for all groups）. The visceral pain model was established using 40 ul of 5% formalin solution injected into the colon of rats. EA was applied to the bilateral Jiaji acupoints for 20 minutes before application of visceral pain. Parameters for EA were set at a continuous wave （20 Hz） and intensity where the rats shook their whiskers but did not scrabble （≤1 mA）. The visceral pain score was recorded and the expressions of p38 and c-Fos protein were detected using Western blotting. Real-time quantitative PCR was also used to determine the expression of c-Fos mRNA. Results Rats in the VP group immediately presented with obvious visceral pain behaviors after being injected with formalin. p38 activity and c-Fos protein and mRNA expression in both the colonic wall and spinal dorsal horn were higher in the VP group than in the Con group （P 〈0.05）. By contrast, visceral pain behaviors were delayed in rats from the VP＋EA group. p38 activity and c-Fos protein and mRNA expression were lower in the VP＋EA group than that in the VP group （P〈0.01）. Conclusions Pre-electroacupuncture of the Jiaji acupoint has prophylactic analgesic effects on rats suffering from visceral pain. The p38 signal transduction pathway may be partly involved in the regulatory mechanism of this analgesic effect.     

大鼠坐骨神经分支选择结扎切断模型的建立及脊髓背脚N-甲基-D-天冬氨酸受体检测

目的采用免疫组织化学方法,观察SNI模型大鼠脊髓背角神经元NMDAR的表达。方法健康雄性SD大鼠15只,随机分为3组：对照组（C1组）、假手术组（C2组）和生理盐水组（NS组）,每组5只。C1组不做任何处理,其他2组均根据改良Yaksh法进行鞘内置管。置管5d后,NS组按Woolf等方法建立神经病理性疼痛模型（SNI）,C2组除不损伤神经外处理同NS组;制模2d后,C2组和NS组用微量注射器鞘内注射20μL生理盐水,然后用生理盐水冲管（共20μL）。在30min后,C2组、NS组均进行疼痛行为学观察。3组均在注药后2h处死大鼠,用免疫组化法观察大鼠腰5节段水平脊髓背角NMDAR的表达。结果C1组和C2组在各时点均无机械性异常疼痛出现,热刺激后爪退缩潜伏时间差异也均无统计学意义（P〉0.05）;NS组在SNI手术后第1天和第2天出现明显的痛觉过敏（机械性异常疼痛痛阈降低）,与C1组比较差异有统计学意义（P〈0.01）,但对热刺激的后爪退缩潜伏时间与C1组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;NS组大鼠脊髓背角NMDAR免疫阳性细胞数量与C1及C2组比较明显增加,两者之间差异有统计学意义（P〈0.05）;NS组的脊髓背角NMDAR免疫阳性细胞数密度值与C1,C2组相比显著增高（P〈0.05）,NS组的阳性细胞光密度值较C1组和C2组增高（P〈0.05）。结论SNI模型可引起大鼠损伤侧肢体机械性痛觉过敏,但对热刺激不敏感;SNI模型引起大鼠脊髓背角神经元NMDAR表达上调。     

牵涉区皮下注射利多卡因对大鼠膀胱伤害性刺激引起的脊髓Fos表达的影响

目的　研究皮下注射利多卡因对大鼠膀胱伤害性刺激引起的脊髓Fos表达的影响。方法　采用甲醛膀胱痛刺激模型、结合c -fos免疫组织化学技术进行研究。结果　膀胱内注入甲醛 2h后可观察到 :在L5～S2 节段脊髓背角出现Fos阳性标记细胞 ,以L6～S1节段脊髓背角的数目多而集中 ,且主要出现于背角Ⅰ层内侧部、后连合核 (DCN)、中间带外侧核 (IML)等部位。预先在牵涉区皮下注射利多卡因 ,可以明显减少膀胱伤害性刺激引起的L6～S1节段脊髓背角Fos阳性细胞的数量 (P <0 .0 1)。结论　牵涉区皮下注射利多卡因有可能减轻膀胱痛