应用PCR技术检测斑点热群立克次体特异性DNA

作者对不明热患者血液,立克次体细胞培养物,疫区的微小牛蜱,野鼠脾脏等标本,应用Ｒｒ．１９０．７０ｐ和Ｒｒ．１９０．６０２ｎ引物对,进行ＰＣＲ扩增,检测斑点热群立克次体特异性ＤＮＡ。检测结果１．２０份不明热患者或疑似立克次体病患者血液标本,检出阳性结果的有７份（７／２０阳性）。２．２７份不明热患者或疑似立克次体病患者血液标本的细胞分离培养物,检出阳性结果的有１４份（１４／２７阳性）。３．７组微小牛蜱有２组检出阳性结果（２／７阳性）。４．４７组野鼠脾脏８组检出阳性（８／４７阳性）。     

对黑龙江立克次体和远东蜱传斑点热调查研究的思考

斑点热立克次体病是由斑点热群立克次体(spotted fever group rickettsiae SFGR) 引起的蜱、螨传播的人兽共患病.该病广泛分布于世界各地.     

黑龙江蜱传斑点热研究进展

斑点热群立克次本 (SpottedFeverGroupRickettsiae ,SF GR)是引起斑点热的病原体 ,该病原体是立克次体目中最复杂的一群。 1984年版《Bergey’s鉴定细菌手册 )中收录了 8种SFGR ,其中 5种对人有致病性 ,另外 3种对人的致病性尚未证实。近年在世界各地又陆续发现了 10余种SFGR新种及其引致的斑点热。我国科研工作者经过 4 0余年的不懈努力 ,经病原学证实共发现 4种SFGR ,除国际上已知而在我国发现的引致北亚热的西伯利亚立克次体 (Rickettsiasibiri ca ,R .s)外 ,还发现了黑龙江立克次体 (R .heilongjiangii,R .hei)、内蒙古立克次…     

广东连平县存在新的蜱传斑点热立克次体

目的对采自广东省连平县的3种硬蜱进行蜱传斑点热立克次体检测分析。方法斑点热立克次体的ompA基因片段扩增并测定扩增片段的DNA序列。结果20只蜱分为17组,其中15组PCR检测阳性。对4个测序成功的标本进行聚类分析,证实其中3个序列单独聚为一类,与引起Flinders岛蜱传斑点热的弗诺立克次体(R.honei)、非洲蜱咬热的非洲立克次体(R.africa)、未定名斑点热的斯洛伐克立克次体(R.slovaca)以及西伯利亚立克次体BJ-90株等亲缘关系较近,另一序列与我国长白山地区检测到的JL-02具有较高的同源性。结论本研究提示该地区除了已证实的西伯利亚斑点热外,还存在新的蜱传斑点热。     

我国部分地区蜱传斑点热分子流行病学调查研究

目的 进一步了解我国斑点热群立克次体存在的多样性,发现可能存在的斑点热群立克次体新成员、潜在媒介和动物宿主。方法 建立了扩增斑点热群立克次体190kDa rOmpA基因片段的PCR检测、鉴定方法,并用此方法检测了采用福建省和内蒙古自治区的蜱、动物和人血液标本。对扩增于越原血蜱、森林革蜱和FNH97未鉴定菌株的PCR产物采用PHYLIP软件包进行了序列分析。同时,为了寻找特异的斑点热群立克次体分类检测方法,建立了针对四种斑点热群立克次体的半巢式PCR方法,并对斑点热立克次体阳性标本进行了分类检测。结果 采用190kDa rOmpA.701/70p引物可以从7株斑点热群立克次体中的6株扩增出外膜蛋白A基因片段（小蛛立克次体除外）。并从采自福建省和内蒙古自治区的多种蜱及野生动物、人血液标本中扩增出了斑点热立克次体DNA片段,其中越原血蜱、卵形硬蜱、中华硬蜱、豪猪血蜱、森林革蜱、野鼠血块和人群血块的阳性率分别为15．69％、56．94％、8．70％、7．70％、43．56％、82．51％和0．98％。对来自越原血蜱和森林革蜱以及FNH97菌株的斑点热立克次体190kDa外膜蛋白A630bp左右核苷酸片段序列分析和推测的氨基酸序列分析结果表明：福建越原血蜱立克次体（福建立克次体）核苷酸序列与日本立克次体的该序列同源性最高（94％）。推测氨基酸序列同源性也与该立克次体最高（94％）。推测氨基酸序列同源性也与该立克次体最高（89％）;内蒙古森林革蜱立克次体（森林革蜱立克次体）核苷酸序列与扇头蜱立克次的该序列同源性最高（97％）,测氨基酸序列的同源性也最高（95％）。遗传发育分析,这两种立克次体分别与日本立克次体和扇头蜱立克次体均为同一个分支。序列中限制性核酸内切酶的位点也显示了对应的相似性。但是它们的核苷酸和推测的氨基酸序列与康氏立克次体和西伯利亚立克次体以及内蒙古立克次体（HA－91）差别较大。提示,这两种蜱携带的立克次体可能是我国尚未发现的斑点热群立克次体新成员。用初步分类引物对蜱标本、血液标本检测结果显示,以“福建立克次体”序列设计的引物检测越原血蜱阳性率为8．49％,卵形硬蜱阳性率为20．83％,中华硬蜱阳性率为4．35％,豪猪血蜱为阴性;以西伯利亚立克次体序列设计的引物检测卵形硬蜱阳性率24．39％,越原血蜱阳性率为5．56％,中华硬蜱和豪猪血蜱均为阴性。以内蒙革蜱立克次体序列设计的引物扩增森林革蜱阳性率为43．56%。结论 通过本次研究,在以下方面获得了新的认识：越原血蜱、卵形硬蜱、豪猪血蜱和中华硬蜱是福建南方蜱传斑点热立克次体的媒介或潜在媒介,其中卵形硬蜱、豪猪血蜱和中华硬蜱为我国首次证实的携带斑点热立克次体;福建的越原血蜱和内蒙古的森林革蜱分别携带一种未知斑点热群立克次体,并分别与日本立克次体和扇头蜱立克次体近缘;取自斑点热立克次体rOmpA基因的引物用于PCR,作为一种快速简便手段可直接用于斑点热立克次体初步分类和分子流行病学调查;我国可能存在斑点热群立克次体的多个成员及其自然疫源地。     

四川石渠县牦牛源蜱感染斑点热群立克次体分子流行病学调查

目的 了解四川省石渠县牦牛体表寄生蜱的种类及其斑点热群立克次体的感染情况。方法 采集牦牛体表的蜱,经形态学初步鉴定后,提取蜱总DNA,PCR扩增蜱16S rRNA基因及斑点热群立克次体ompA、ompB基因,并对扩得阳性产物进行测序和构建进化树分析,从而确定蜱及其携带斑点热群立克次体的种类。结果 在石渠县4个乡共采集到蜱818只,其中西藏革蜱占78.97%(646/818)、青海血蜱占21.03%(172/818)。在818只蜱中有408只扩得斑点热群立克次体ompA、ompB基因,总阳性率为49.8%。经比对分析, ompA基因总共得到4条序列(uncultured Rickettsia sp.shiqu1、R.raoultii.shiqu2、R.raoultii.shiqu3和R.raoultii.shiqu4),ompB基因也得到4条序列(uncultured Rickettsia sp.shiqu1、R.raoultii.shiqu2、R.raoultii.shiqu3和R.raoultii.shiqu4)。经遗传进化分析显示ompA基因的uncultured Rickettsia sp.shiqu1与我国青海未定种的Uncultured Rickettsia sp.(MG228270)亲缘关系最近;ompB基因的uncultured Rickettsia sp.shiqu1与韩国未定种的Rickettsia sp.(KC888953)和Candidatus Rickettsia longicornii(MG906675)亲缘关系最近;ompA和ompB基因的R.raoultii.shiqu2-4与对人有致病性的劳氏立克次体(R.raoultii)的亲缘关系最近。结论 首次在牦牛体表寄生的西藏革蜱中检出劳氏立克次体。石渠县存在西藏革蜱和青海血蜱,蜱传劳氏立克次体感染率较高并且具有感染人的风险。     

黑龙江立克次体054株单克隆抗体对斑点热群立克次体抗原…

本文利用三株黑龙江立克次体０５４株（ＨＬＪ－０５４）单克隆抗体对四株斑点热群立克交体西伯利亚种（Ｒ．ｓ．）２４６株，清河株（ＪＨ－７４），立氏立克次体（Ｒ．ｒ．）Ｒ株及ＨＬＪ－０５４株进行了血清学分析，对其蛋白组成及单抗结合抗原特性等方面进行了研究，结果表明：ＪＨ－７４株与２４６株在上述三个方面完全一致，不同于ＨＬＪ－０５４及Ｒ．ｒ．Ｒ株；ＨＬＪ－０５４株与Ｒ．ｒ．Ｒ株与三株单抗血清学反应高度交叉     

海南部分地区不明热患者斑点热立克次体血清学和病原学调查

斑点热是由斑点热群立克次体引起的蟀媒传染病。近年来调研资料表明,海南岛存在该病的自然疫源地[1,2]。由于该病多无特征性临床病征,临床上易误诊为不明原因发热。为了解海南岛斑点热的流行病学特征,探明“不明热”的病因,我们在lgu年4－8月间在海南琼中、三亚等收集了诊为不明原因发热的患者血液切份,应用R3UII：I？liP方法检测斑点群立克次体特异性核酸,结果报告如下。1材料与方法1．1标本的采集lop年4－8月间,在海南琼中大丰农场、新进农场及长征农场职工医院及三亚市人民医院收取诊为不明热的血液标本81份,液氮保存。1．2…     

应用PCR技术检测斑点热群立克次体特异性

作者对不明热患者血液,立克次体细胞培养物,疫区的微小牛蜱,野鼠脾脏等标本,应用Ｒｒ．１９９０．７０ｐ和Ｒｒ．１９０．６０２ｎ引物对,进行ＰＣＲ扩增,检测斑点热群立克次体特异性ＤＮＡ。     

蜱传斑点热群立克次体研究进展

斑点热（spotted fever）是蜱螨叮咬传播由斑点热群立克次体（Spotted fever group rickettsia,SFGR）所引起的一组疾病的总称。它近年来随着诊断技术和研究手段的快速发展,蜱传斑点热的流行病学、病原学、实验诊断和分子生物学方面都有显著进展。     

我国斑点热立克次体感染与免疫的实验研究

研究证明黑龙江立克次体能够感染人血管内皮细胞和BALB/c小鼠,引起小鼠菌血症和器官损伤;全基因组序列分析发现黑龙江立克次体毒力相关基因。表面蛋白质组分析鉴定了黑龙江立克次体和立氏立克次体的表面蛋白,用表面蛋白免疫C3H/HeN小鼠,发现某些表面蛋白为保护性抗原,并揭示这些保护性抗原均能够诱导抗原特异CD₄⁺和CD₈⁺ T细胞增殖并产生和分泌IFN-γ和/或TNF-α,以及诱导高水平特异性IgG2a产生,在这些免疫因素的协同作用下使小鼠有效抵抗立克次体感染。用黑龙江立克次体感染Tim-3高表达或低表达人血管内皮细胞以及Tim-3高表达转基因小鼠,结果有力证明Tim-3高表达能够促进人血管内皮细胞和小鼠抵抗黑龙江立克次体感染。     

我国南方媒介蜱中首次检出黑龙江立克次体(R.heilongjiangii)及马赛立克次体(R.massilliae)近缘菌

目的研究我国南方媒介蜱斑点热群立克次体带菌状况。方法采用斑点热群立克次体外膜蛋白ompA基因特异引物,对我国广东省连平县采集的长角血蜱进行检测分析。结果15组蜱标本中,14组检测阳性,阳性率为93.3%。通过测序分析,发现当地长角血蜱携带黑龙江立克次体及马赛立克次体近缘菌。结论我国南方地区除已证实的北亚蜱传斑点热外,还应加强当地其他斑点热的监测及临床鉴别诊断。     

190 kD R.rOmpA基因序列对斑点热群立克次体的检测

目的为探讨190 kD R.rOmpA基因序列对斑点热群立克次体的检测作用.方法从立氏立克次体190 kD外膜蛋白A(R.rOmpA)基因序列设计引物,利用PCR检测的方法,检测了683只蜱类标本和146个鼠类脏器标本,并随机抽取1株森林革蜱阳性扩增产物进行克隆与序列测定.结果从蜱类标本和鼠类脏器标本中检测出了斑点热立克次体DNA片段;所测序列的分型结果表明与前苏联的DnS 14株型别一致,与我国曾经检测出的斑点热立克次体株差异较大.结论190kD外膜蛋白A基因序列可用于斑点热立克次体检测,并可用于斑点热群立克次体基因型或亚型之间的鉴别.     

吉林省林区家畜中斑点热群立克次体与莱姆病螺旋体复合感染的血清学调查

目的了解吉林珲春地区家畜中斑点热、莱姆病及其复合感染的情况。方法应用间接免疫荧光法检测家畜血清中斑点热群立克次体和伯氏疏螺旋体的IgG抗体。结果牛血清中斑点热感染率为18.0%,莱姆病感染率为27.5%,复合感染率为9.5%;羊血清中斑点热感染率为19.2%,莱姆病感染率为31.5%,复合感染率为12.8%。结论吉林珲春地区家畜中广泛存在斑点热和莱姆病的复合感染。     

东北林区啮齿动物的查菲埃立克体核酸检测

目的 调查东北林区啮齿动物的查菲埃立克体感染水平。方法 采用巢式PCR检测吉林省集安和辽宁省宽甸林区野鼠脾脏样本的查菲埃立克体16S rRNA DNA;对阳性扩增产物作DNA序列测定,并对测定的序列进行同源性比较和聚类分析。结果 检测两地野鼠132只,阳性19只,阳性率14.39%。其中,集安野鼠阳性率 7.58%(5/66),宽甸野鼠阳性率 21.21%(14/66), 宽甸野鼠阳性率明显高于集安(χ²=3.9348, P=0.0473)。不同鼠种查菲埃立克体阳性率无明显差异。扩增阳性DNA片段测序后与GenBank中注册的埃立克体16S rRNA基因对应序列进行同源性比较, JA-m51(集安株)、KD-m18(宽甸株)二者基因序列相差4个核苷酸,而JA-m51与查菲埃立克体美国株及我国云南株核苷酸序列完全一致,进化树分析显示JA-m51、KD-m18与查菲埃立克体同属一个分支。结论 辽宁省、吉林省林区野鼠查菲埃立克体感染较普遍,该地区存在单核细胞埃立克体病的自然疫源地。     

Molecular detection and characterization of spotted fever group rickettsiae in Taiwan

Rickettsioses are emerging infectious diseases caused by rickettsiae in association with arthropods. We report the detection of spotted fever group rickettsiae (SFGR) in Taiwan using molecular methods. Phylogenetic analyses of the 17-kd protein and citrate synthase (gltA) genes showed that SFGR TwKM01 detected in Rhipicephalus haemaphysaloides ticks was most similar to Rickettsia rhipicephali. Three TwKM01 isolates were obtained from three individual R. haemaphysaloides ticks. Small, intracellular, coccobacillary bacteria were found in infected L929 cells using immunofluorescence antibody testing and transmission electron microscopy. Two other SFGRs, TwKM02 and TwKM03, identified in Leptotrombidium chigger mites, were closely related to R. australis and R. felis URRWXCal(2), respectively. The TwKM03 strain was also detected in Ixodes granulatus ticks and widely distributed in Hualien, Kinmen, and Lienchiang counties in Taiwan. The endonucleases MaeII and HhaI selected for restriction fragment length polymorphism analysis of the gltA and 17-kd polymerase chain reaction products, respectively, were useful for genotyping Rickettsia species TwKM01, TwKM02, TwKM03, and other SFGRs. Although their infectivity and pathogenicity for vertebrates are unknown, the finding of SFGRs raises the possibility that bacteria other than Orientia tsutsugamushi, Coxiella burnetii, and R. typhi may be involved in rickettsial diseases in Taiwan.