FADD-DN基因转梁对氦氖激光诱导瘢痕成纤维细胞凋亡的影响

目的探讨氦氖激光诱导瘢痕成纤维细胞凋亡的分子机制。方法将培养瘢痕成纤维细胞随机分为转染组、转染对照组和非转染组,转染组细胞与绿色荧光蛋白(GFP)质粒cDNA、含目的基因片段的表达载体质粒pcDNA3-FADD-DNcDNA共转染,转染对照组细胞与GFP质粒cD-NA、空载体质粒pcDNA3共转染,非转染组细胞没有进行转染,转染后24h分别对各组细胞进行氦氖激光照射(100mW/cm2照射30min),1次/d,连续照射3d,然后采用TUNEL技术检测细胞凋亡。结果转染组、转染对照组与非转染组细胞凋亡率分别为9.27%,15.73%和12.87%,转染组细胞凋亡率明显小于转染对照组(q=4.55,P<0.01)和非转染组(q=4.14,P<0.05)。结论FADD-DN基因转染能减少氦氖激光诱导的瘢痕成纤维细胞凋亡,FADD可能是氦氖激光激活死亡信号途径的基本元件之一。     

FADD—DN基因转染对氦氖激光诱导瘢痕成纤维细胞凋亡的影响

目的 探讨氦氖激光诱导瘢痕成纤维细胞凋亡的分子机制。方法 将培养瘢痕成纤维细胞随机分为转染组、转染对照组和非转染组，转染组细胞与绿色荧光蛋白（GFP）质粒cDNA、含目的基因片段的表达载体质粒pcDNA3-FADD-DNcDNA共转染，转染对照组细胞与GFP质粒cD-NA、空载体质粒pcDNA3共转染，非转染组细胞没有进行转染，转染后24h分别对各组细胞进行氦氖激光照射（100mW/cm^2照射30min），1次/d，连续照射3d，然后采用TUNEL技术检测细胞凋亡。结果 转染组、转染对照组与非转染组细胞凋亡率分别为9.27%，15.73%和12.87%，转染组细胞凋亡率明显小于转染对照组（q=4.55,P&;lt;0.01）和非转染组（q=4.14,P&;lt;0.05）。结论 FADD-DN基因转染能减少氦氖激光诱导的瘢痕成纤维细胞凋亡，FADD可能是氦氖激光激活死亡信号途径的基本元件之一。     

氦氖激光重复照射对瘢痕成纤维细胞凋亡相关基因表达的影响

目的从蛋白质水平探讨氦氖激光诱导瘢痕成纤维细胞凋亡的机制。方法以632.8nm波长、100mW/cm2功率密度氦氖激光照射培养瘢痕成纤维细胞,1次/d,30min/次,连续照射3d,然后分别采用激光共聚焦扫描显微镜、流式细胞仪测定bcl-2,Fas,ICE蛋白的细胞分布与表达。结果在培养增生性瘢痕成纤维细胞有多种凋亡相关基因表达蛋白分布,氦氖激光照射后,Fas,ICE表达增加,bcl-2表达降低。结论氦氖激光诱导的瘢痕成纤维细胞凋亡与Fas,bcl-2,ICE表达蛋白有关。     

氦氖激光重复照射对培养瘢痕成纤维细胞凋亡相关基因表达的影响

目的 :从蛋白质水平探讨氦氖激光诱导瘢痕成纤维细胞凋亡的机制。方法 :以波长 6 32 .8nm、功率密度10 0mW /cm2 的氦氖激光照射培养瘢痕成纤维细胞 ,每日 1次 ,每次 30min ,连续照射 3天 ,然后分别采用激光共聚焦扫描显微镜、流式细胞仪测定Bcl- 2、Bax、Fas、ICE、p5 3、c -myc蛋白的细胞分布与表达。 结果 :在培养增生性瘢痕成纤维细胞有多种凋亡相关基因表达蛋白分布 ,氦氖激光照射后 ,Fas、ICE表达增加 ,Bcl- 2表达降低 ,Bax、p5 3、c -myc的表达无变化。结论 :氦氖激光诱导的瘢痕成纤维细胞凋亡与Fas、Bcl- 2、ICE表达蛋白有关     

氦氖激光重复照射对瘢痕成纤维细胞凋亡相关基因表达的影响

目的 从蛋白质水平探讨氯氖激光诱导瘢痕成纤维细胞凋亡的机制。方法 以632．8nm波长、100mW／cm^2功率密度氦氖激光照射培养瘢痕成纤维细胞，1次／d，30min／次，连续照射3d，然后分别采用激光共聚焦扫描显微镜、流式细胞仪测定bcl—2，Fas，ICE蛋白的细胞分布与表达。结果 在培养增生性瘢痕成纤维细胞有多种凋亡相关基因表达蛋白分布，氯氖激光照射后，Fas，ICE表达增加，bcl—2表达降低。结论 氦氖激光诱导的瘢痕成纤维细胞凋亡与Fas，bcl—2，ICE表达蛋白有关。     

595 nm Vbeam激光对兔耳增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的:观察595nmVbeam激光照射对增生性瘢痕动物模型伤口愈合中成纤维细胞增殖的抑制作用。方法:实验于2004-10/2005-06在哈尔滨医科大学附属第二医院激光美容中心完成。成年大耳白兔20只,建立兔耳腹侧面增生性瘢痕模型,上皮化后切取一组瘢痕8处,然后将瘢痕随机分为激光治疗组和对照组,激光治疗组在创面上皮化后按一定参数进行激光照射,开始时每周照射1次,1个月后改为每两周照射1次,共两个月。对照组不进行治疗。在上皮化后1,2,4,6,8周分别切除两组增生性瘢痕各8处,每次取材前用游标卡尺测量瘢痕厚度,对切取组织进行苏木精-伊红和Masson染色,并对上皮化后4周组织进行电镜观察,对上皮化和上皮化后4周组织进行增殖细胞核抗原蛋白测定,对比研究在瘢痕形成过程中595nmVbeam激光照射对兔耳增生性瘢痕成纤维细胞的影响,观察成纤维细胞超微结构的改变,检测增殖细胞核抗原蛋白表达变化。结果:实验大耳白兔20只全部进入结果分析。兔耳增生性瘢痕经595nmVbeam激光照射后,按不同时间段取材与对照组比较,①瘢痕厚度明显变薄:创面上皮化后即出现增生块高出于皮面,且不断增厚,在上皮化后4周时最高,以后逐渐下降。激光照射(即上皮化后)2,4,6周后激光治疗组瘢痕增生厚度显著小于对照组激光治疗组:(1.95±0.08),(2.16±0.09),(1.53±0.08)mm;对照组:(2.04±0.09),(2.37±0.11),(1.68±0.09)mm,P<0.05。②苏木精-伊红染色显示不同时间取材的兔耳增生性瘢痕组织对照组真皮层明显增厚,为周围正常真皮厚度的三四倍。而激光治疗组真皮层较对照组变薄。Masson染色显示瘢痕胶原纤维呈蓝色,对照组可见蓝染较深的胶原纤维,外形粗大,排列杂乱无章。而经激光照射的瘢痕虽然也可见蓝染的胶原纤维,但与对照组比较蓝染变浅且纤细,胶原排列也趋于一致。③高倍镜下成纤维细胞计数在上皮化后随时间逐渐增多,在上皮化后4周时达到高峰,以后又下降,但在上皮化后1,2,4,6,8周激光治疗组成纤维细胞数量与对照组比较未见明显减少(P>0.05)。④透射电镜观察显示经595nmVbeam激光照射4周后成纤维细胞核变小、畸变,胞质中细胞器减少,细胞功能不活跃,线粒体空泡变性,细胞周围的胶原呈溶解状态。⑤增殖细胞核抗原蛋白表达激光治疗组较对照组明显减弱(增殖细胞核抗原阳性细胞反应率上皮化后为18.33%,上皮化后4周,激光治疗组为41.93%,对照组为64.26%,P<0.05)。结论:595nmVbeam激光照射可抑制兔耳增生性瘢痕成纤维细胞的增殖过程,应用595nmVbeam激光预防和治疗瘢痕可行。     

星形细胞肿瘤中的细胞凋亡及其与p53、bcl—2的关系

目的探讨细胞凋亡在星形细胞肿瘤发展中的作用及其与p53、bcl-2的关系.方法对52例星形细胞肿瘤标本分别进行HE染色,TUNEL及PCNA、p53、bc1-2免疫组化染色.结果高级别星形细胞肿瘤的PI(增殖指数)显著高于低级别肿瘤(P＜0.01);高级别肿瘤和低级别肿瘤间的AI(凋亡指数)无显著性差异(P＞0.05).高级别星形细胞肿瘤p53的表达高于低级别肿瘤(0.01＜P＜0.05);p53阴性组和p53阳性组的AI(P＞0.05)和PI(P＞0.05)无显著性差异.低级别肿瘤中bcl-2的表达较高级别组肿瘤高(0.01＜P＜0.05);bc1-2免疫组化染色表达的阳性组与阴性组的AI(P＞0.05)和PI(P＞0.05)无显著性差异.结论与低级别星形细胞肿瘤相比,高级别肿瘤中的细胞凋亡受到了抑制;p53免疫组化染色结果可作为分析星形细胞肿瘤生物学行为的参考指标.星形细胞肿瘤中bcl-2的过表达对细胞凋亡未产生明显影响.     

氦氖激光诱导培养瘢痕成纤维细胞的凋亡

目的:氦氖激光重复照射能诱导瘢痕成纤维细胞凋亡,进一步探讨氦氖激光功率密度与培养瘢痕成纤维细胞凋亡之间的关系。方法:实验于1999-02/10在创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室完成。以不同功率密度氦氖激光(10,50,100和150mW/cm)照射培养人2瘢痕成纤维细胞,照射时间分别为10,30min,1次/d,连续照射3d后24h,采用TUNEL技术、琼脂糖凝胶电泳法检测细胞凋亡,锥虫蓝染色法检测细胞坏死。结果:10,50mW/cm照射细胞10min或30min,无凋亡细胞出现;2100mW/cm照射细胞10,30min时凋亡率分别为7.20±0.43)%,2((12.73±0.75)%;150mW/cm照射细胞10,30min时凋亡率为2(14.47±0.68)%,(16.27±0.96)%,分别大于同期100mW/cm照2射(t=0.36,P<0.01,t=0.24,P<0.001);DNA裂解片段分析示100,150mW/cm照射30min时可见特征性梯带存在;所有功率密度2照射培养细胞10min或30min,都无坏死细胞出现。结论:以100mW/cm或150mW/cm功率密度氦氖激光重复照射能22诱导培养瘢痕成纤维细胞凋亡。就诱导细胞凋亡而言,激光的功率密度比能量密度更重要。     

苦参碱对人增生性瘢痕治疗作用的临床研究

目的研究苦参碱(Matrine,Mat)对人增生性瘢痕治疗中成纤维细胞(fibroblast,FB)增生和凋亡的影响。方法以20例患者深Ⅱ度烧伤创面愈合后增生性瘢痕为研究对象,局部注射Mat后,利用DNA末端标记技术(TdT-mediateddUTPnick-endlabelingmethod,TUNEL),检测其FB的凋亡数量及其标记指数;利用免疫组织化学法检测其FB的增殖细胞核抗原(Proliferatingcellnuclearantigen,PCNA)的表达和其标记指数。结果增生性瘢痕局部注射Mat后与自身未经Mat治疗的增生性瘢痕对照组比,前者其FB凋亡数量明显增加,凋亡指数14d分别为0.32和0.07,28d分别为0.54和0.11;治疗组PCNA表达明显弱于对照组,PCNA标记指数14d分别为0.28和0.5,28d分别为0.54和0.75。结论Mat明显增加人增生性瘢痕FB的凋亡数量,降低其增殖活性,促进增生性瘢痕FB凋亡,使增生性瘢痕尽早地趋于非增生状态。     

重组人血管内皮抑制素可抑制兔耳增生性瘢痕

背景:增生性瘢痕局部血流量明显增高,微血管密度明显高于萎缩期及成熟的正常瘢痕.目的:观察重组人血管内皮抑制素对新西兰大耳兔兔耳增生性瘢痕的抑制作用及其对瘢痕中血管内皮生长因子的作用.方法:建立兔耳增生性瘢痕动物模型.随机分为2 组,实验组局部注射重组人血管内皮抑制素,对照组局部注射生理盐水.结果与结论:药物干预后30 d 实验组兔耳瘢痕较对照组颜色变淡、质地柔软、厚度薄.苏木精-伊红染色实验组真皮层较对照组薄,单位面积内成纤维细胞数较对照组少,呈平行排列,毛细血管管径较对照组细;实验组瘢痕增生指数显著低于对照组(P < 0.01).实验组瘢痕组织血管内皮生长因子阳性表达量显著低于对照组(P < 0.01).说明重组人血管内皮抑制素注射液可能通过降低血管内皮生长因子蛋白的表达,从而抑制兔耳增生性瘢痕组织增生.     

大功率氦氖激光治疗增生性瘢痕的实验研究

Previousstudiesshowedthathigh－powerHe－Nelaserirradiationnotonlyinhibitgrowth犤１犦ofculturedcellsinhypertrophicscarbutinduceapoptosis犤２犦．Theobjectiveofthisstudywastoexploreroleofhigh－powerHe－Nelaserirradiationinbodyandprovidetheexperi－mentalbaseforclinicalapplicationthroughestablishinghypertrophicscaranimalmodel．１Materialandmethod１．１Material４Japanesewhiterabbitswithlargeearwerese－lectedasexperimentalanimalswithoutregardinggender．Therabbitsweightedbetween２．０～２．５kg，mea…     

He-Ne激光重复照射抑制培养增生性瘢痕成纤维细胞胶原合成的实验研究

Hypertrophicscar（HS），atypeoffibrosisdiseaseofskinwhichischaracterizedbyhyperproductionanddepositionofcolla－genmatrix．So，inhibitionofcollagensynthesisanddepositionofcollageninfibroblastsareimportantforpreventionofHS犤１犦．Inthecurrentstudy，He－NelaserofvariouspowerdensitywasusedtoirradiateculturedfibroblastsderivedfromHStostudythepre－ventingeffectsofHe－NelaseronHS．１Materialsandmethod１．１Cellcultureandgrouping５casesofHSwereincludedinthisstudyaged１２～３１yearsold（２males，…     

氦-氖激光诱导瘢痕成纤维细胞凋亡的分子机制

目的探讨氦-氖激光诱导瘢痕成纤维细胞凋亡的分子机制。方法将培养瘢痕成纤维细胞随机分为转染组、转染对照组和非转染组,转染组细胞与绿色荧光蛋白(GFP)质粒cDNA、含目的基因片段的表达载体质粒pcDNA3-FADD-DNcDNA共转染,转染对照组细胞与GFP质粒cDNA、空载体质粒pcDNA3共转染,非转染组细胞没有进行转染,转染后24h分别对各组细胞进行氦-氖激光照射(100mW/cm2照射30min),1次/d,连续照射3d,然后采用TUNEL技术检测细胞凋亡。结果转染组、转染对照组与非转染组细胞凋亡率分别为9.27%、15.73%和12.87%,转染组细胞凋亡率明显小于转染对照组(q=4.55,P<0.01)和非转染组(q=4.14,P<0.05)。结论FADD-DN基因转染能减少氦-氖激光诱导的瘢痕成纤维细胞凋亡,Fas相关死亡域蛋白(FADD)可能是氦-氖激光激活死亡信号途径的基本元件之一。     

氦氖激光抑制培养瘢痕成纤维细胞生长的实验研究

目的　探讨氦氖激光体外照射对培养的瘢痕成纤维细胞生长的抑制作用。方法　以6 32 .8nm波长氦氖激光 (功率密度 5 0mW /cm2 ) ,3J/cm2 ,30J/cm2 ,90J/cm2 ,180J/cm2 剂量 ,分别照射培养的人瘢痕成纤维细胞 1次 ,3次和 5次 ,每日 1次 ,然后进行细胞计数和细胞周期分析。结果180J/cm2 重复照射 3次和 5次 ,细胞总数都明显少于同期对照组 ,差异均有显著性 (P <0 .0 5 )。细胞周期分析表明 ,180J/cm2 照射细胞 3次和 5次后 ,S期细胞数从 5 1%降低到 2 0 %和 14% ,G0 /G1期细胞从 2 8%分别上升到 5 5 %和 6 0 % ,Sub -G2 期细胞百分比分别为 6 .7%和 9.8%。结论　一定剂量 (180J/cm2 )氦氖激光重复照射能抑制培养的瘢痕成纤维细胞生长 ,原因可能是由于氦氖激光引起G0 /G1期细胞停滞和细胞凋亡所致     

重组人血管内皮抑制素可抑制兔耳增生性瘢痕

背景：增生性瘢痕局部血流量明显增高,微血管密度明显高于萎缩期及成熟的正常瘢痕。目的：观察重组人血管内皮抑制素对新西兰大耳兔兔耳增生性瘢痕的抑制作用及其对瘢痕中血管内皮生长因子的作用。方法：建立兔耳增生性瘢痕动物模型。随机分为2组,实验组局部注射重组人血管内皮抑制素,对照组局部注射生理盐水。结果与结论：药物干预后30d实验组兔耳瘢痕较对照组颜色变淡、质地柔软、厚度薄。苏木精-伊红染色实验组真皮层较对照组薄,单位面积内成纤维细胞数较对照组少,呈平行排列,毛细血管管径较对照组细;实验组瘢痕增生指数显著低于对照组（P〈0.01）。实验组瘢痕组织血管内皮生长因子阳性表达量显著低于对照组（P〈0.01）。说明重组人血管内皮抑制素注射液可能通过降低血管内皮生长因子蛋白的表达,从而抑制兔耳增生性瘢痕组织增生。     

氦氖激光诱导培养瘢痕成纤维细胞凋亡的实验研究

Objective To explore He- Ne laser inducing apoptosis of cultured fibroblasts in hypertrophic scars(HS).Methods Cultured fibroblasts in HS were irradiated with He- Ne laser. Apoptosis was examined by TUNEL technique and cell necrosis was counted by trypan blue staining. Results There was no cell apoptosis after repeated irradiation with 10mW/cm2 and 50mW/cm2 for 10 and 30 minutes. The percent of apoptosis was 7.20% and 12.73% after repeated irradiation with 100mW/cm2 for 10 and 30 minutes. The percent of apoptosis was 14.74% and 16.27% after laser irradiation with 150mW/cm2 for 10 and 30 minutes.No necrotic cell was presented after repeated irradiation for 10 and 30 minutes at various power densities. Conclusion Repeated He- Ne irradiation of HS- derived fibroblast cultures at power densities of 100mW/cm2 and 150 mW/cm2 can induce cell apoptosis. Power density is more important than energy density so far as laser- inducing apoptosis of scar fibroblasts concerned.     

转化生长因子β1对病理性瘢痕中成纤维细胞增殖及凋亡水平的影响

目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)在病理性瘢痕形成过程中的作用及其对病理性瘢痕成纤维细胞增殖和凋亡的影响。方法:收集病理性瘢痕标本58例、正常瘢痕标本42例和正常皮肤标本30例。采用免疫组织化学方法检测成纤维细胞TGF-β1、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,以及TUNEL法检测成纤维细胞的凋亡水平。结果:病理性瘢痕组织中TGF-β1表达水平高于正常瘢痕组织(P<0.05),正常皮肤组织中TGF-β1表达水平明显低于病理性瘢痕及正常瘢痕组织(P<0.05)。而PCNA在病理性瘢痕成纤维细胞中表达水平与正常瘢痕及正常皮肤相比明显增高(P<0.05),正常瘢痕中成纤维细胞PCNA的表达亦高于正常皮肤(P<0.05)。另一方面,病理性瘢痕中成纤维细胞凋亡水平较正常瘢痕降低(P<0.05),而正常皮肤与正常瘢痕间差异无显著性(P>0.05)。比较病理性瘢痕组织中成纤维细胞增殖指数、凋亡指数与TGF-β1间的关系发现,细胞增殖指数与TGF-β1表达水平呈正相关关系(P<0.05),凋亡指数则与TGF-β1呈负相关关系(P<0.05)。结论:TGF-β1可能是通过调节瘢痕组织中成纤维细胞的增殖和(或)凋亡水平,来实现对瘢痕形成的调节。TGF-β1表达水平的失控可能是病理性瘢痕形成的重要诱因之一。