跨膜型TNF-α突变体（△-28）的正向和反向信号对U937细胞的作用

目的观察跨膜段突变TM-INF-α（△-28mTM-TNF-α）正反向信号诱导U937促炎因子表达的影响。方法△-28mTM-TNF-α质粒分别转染COS-7，检测表达的△-28mTM-TNF-α诱导U937产生NO的量。同样△-28mTM-TNF-α质粒转染U937，sTNFRI激活反向信号后，检测U937促炎因子IL-8以及IL-1β的mRNA转录水平。结果△-28mTM-TNF-α不能够诱导U937产生NO，但被激活并传递反向信号促使U937的促炎因子转录和表达。结论跨膜段突变抑制了TM-TNF-α正向信号但不影响反向信号的传递。     

C1q调理酵母多糖颗粒刺激U937细胞产生TNF—α

Ｕ９３７细胞吞噬Ｃ１ｑ、ＩｇＧ和Ｃ１ｑ＋ＩｇＧ调理的酵母多糖颗粒（分别称为ＣＺ、ＩＺ、ＩＣＺ）后可产生ＴＮＦ－α，但对未调理酵母多糖颗粒（Ｚ）不应答。加入抗Ｃ１ｑＦ（ａｂ）２、将调理颗粒热灭活或以高浓度Ｃ１ｑ或抗Ｃ１ｑＲ ＭｃＡｂ Ｅ８预处理Ｕ９３７细胞，可完全或部分抑制ＣＺ或ＩＣＺ诱导的ＩＮＦ－α产生，但Ｃ１ｑ预处理却使ＩＺ诱生的ＴＮＦ－α增加，同时赋予原本无作用的Ｚ以ＴＮＦ－α诱生能力，从而证     

膜结合型 TNF-α与T细胞功能

膜结合型 Ｔ Ｎ Ｆ α（ｍ Ｔ Ｎ Ｆ α） 不仅是分泌型 Ｔ Ｎ Ｆ α（ｓ Ｔ Ｎ Ｆ α） 的前体， 也是一种重要的膜结合型细胞因子。ｍ Ｔ Ｎ Ｆ α是 Ｔ Ｎ Ｆ Ｒ８０ 的生理活化物， 且可通过同时激活 Ｔ Ｎ Ｆ Ｒ６０ 和 Ｔ Ｎ Ｆ Ｒ８０ 使靶细胞应答增强。ｍ Ｔ Ｎ Ｆ α可以表达于 Ｔ 细胞表面并参与其增殖、分泌、凋亡、免疫调节和细胞毒等多种功能。     

人类免疫缺陷病毒-1型感染对U937前单核细胞基因表达的影响

目的：研究人类免疫缺陷病毒-1型(HIV-1) 急性感染对U937前单核细胞基因表达的影响，探索AIDS的病理机制。方法:应用基因芯片技术分析HIV-1感染2-3 d后U937前单核细胞的550个RNA序列的表达水平,并用半定量RT-PCR加以验证。结果:感染HIV-1 后2-3 d的U937细胞有38 个基因受到不同的调节：26个基因被下调，12个基因上调。这些基因编码着功能各异的宿主 蛋白，这些蛋白质涉及不同的细胞内反应过程，包括受体介导的信号转换、亚细胞信号转导 、 凋亡、转录调节和化学趋向等。结论:HIV-1感染能引起U937前单核细胞 许多基因表达发生改变。     

跨膜型TNF-a突变体(△-28)的正向和反向信号对U937细胞的作用

目的 观察跨膜段突变TM-TNF-a(△-28mTM-TNF-a)正反向信号诱导U937促炎因子表达的影响.方法 △-28mTM-TNF-a质粒分别转染COS-7,检测表达的△-28mTM-TNF-a诱导U937产生N0的量.同样△-28mTM-TNF-a质粒转染U937,sTNFRI激活反向信号后,检测U937促炎因子IL-8以及IL-1β的mRNA转录水平.结果 △-28mTM-TNF-a不能够诱导U937产生NO,但被激活并传递反向信号促使U937的促炎因子转录和表达.结论 跨膜段突变抑制了TM-TNF-a正向信号但不影响反向信号的传递.     

TM-TNF-α介导的反向信号协同增强sTNF-α对U937细胞的激活作用

目的用sTNFRⅠ预先激活TM-TNF-α介导的反向信号，观测其对sTNF-α激活单核细胞系U937细胞的影响。方法预先用sTNFRⅠ与U937细胞作用30min，洗涤后加入sTNF-α作用不同时间，观测预激活反向信号对sTNF-α刺激U937产生活性氧、胞内促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-8 mRNA的转录及IkB-α水平(Western blot)的影响。结果单独用sTNFRⅠ激活的反向信号并不影响U937细胞的功能，而预激活反向信号能协同增强sTNF-α刺激U937细胞产生活性氧，且呈sTNFRⅠ浓度、sTNF-α浓度依赖关系；预激活反向信号协同增强sTNF-α刺激U937炎性细胞因子mRNA(TNF-α、IL-1β、IL-8等)的转录水平；并促进U937细胞IkB-α的降解。结论预先激活TM-TNF-α介导的反向信号协同增强sTNF-α对U937的激活作用，提示反向信号可能参与机体对早期炎症反应的调节。     

人血单核细胞和U937细胞产生IFN-α的比较

一般认为人体单核-巨噬细胞(Mo-Mφ)系在体外诱生IFN-α较为困难,本文试图找到适合的培养条件,使Mo-M(?)系能在体外诱生IFN-α.结果显示:经M-CSF长期预处理和IFN-γ的短期预处理或单用IFN-γ短期预处理后,NDV刺激均能使人外周血Mo-M(?)产生较高水平的IFN-α;U937细胞只能产生低水平的IFN-α.     

几种细胞因子对登革病毒感染U937细胞的影响研究

本文作者研究了几种细胞因子（ｒＩＬ－１，ｒＩＬ－２，ｒＩＬ－６，ｒＴＮＦ－α，ｎＩＦＮ－α和ｎＩＦＮ－γ）对Ｄ２Ｖ感染Ｕ９３７细胞的影响，结果显示：除ｎＩＦＮ－γ对ＤＶ感染Ｕ９３７细胞的感染无影响外，其余几种细胞因子都可使Ｄ２Ｖ感染Ｕ９３７细胞的感染率明显降低，为研究细胞因子在ＤＶ感染中的作用作了初步探索。     

上调c-myc基因的表达对U937白血病细胞的影响

 目的：构建稳定表达外源c-myc基因的人单核细胞白血病细胞株U937,并初步分析其特性。方法：首先构建重组质粒MSCV-c-myc-IRES-GFP （MMIG）载体,分别用MMIG及空载体MSCV-IRES-GFP（MIG）包装病毒,并感染U937细胞,用流式细胞术分选绿色荧光细胞,获得 U937/GFP和U937/MYC细胞,用荧光显微镜及流式细胞术检测GFP阳性率,用Western blotting测定细胞中c-Myc、survivin、X连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）和Bcl-2的蛋白表达水平,流式细胞术检测U937/GFP和U937/MYC细胞周期,并用MTT法测定U937/GFP和U937/MYC细胞的生长情况,克隆形成实验检测克隆形成能力。结果：荧光显微镜观察,MIG和MMIG病毒感染后,2种细胞均表达绿色荧光蛋白;流式细胞术结果显示,MIG病毒感染的细胞荧光率为26.0%,MMIG病毒感染的细胞荧光率为277%;Western blotting的结果显示,c-Myc蛋白在MMIG病毒感染的细胞中表达水平升高。流式细胞术分选后,荧光显微镜观察可见绿色荧光蛋白表达明显增多,U937/GFP和U937/MYC细胞绿色荧光蛋白表达率分别达98.7%和93.7%。 U937/MYC细胞中c-Myc蛋白表达较U937/GFP细胞显著升高,c-Myc蛋白下游的survivin表达增多,而凋亡相关蛋白XIAP及Bcl-2的表达则没有明显变化。细胞周期检测显示,U937/MYC细胞处于S期的细胞数增多。MTT实验结果显示,U937/MYC细胞的生长速率较U937/GFP细胞增快。U937/MYC细胞的克隆形成能力较U937/GFP细胞强。结论：成功构建了c-myc基因高表达的U937稳定细胞株U937/MYC。在U937/MYC细胞中,c-Myc及其下游的survivin表达明显上调,处于细胞周期S期的细胞数增多、细胞生长加快、克隆形成能力增强,提示c-Myc可能通过增强自我更新能力、加快细胞周期、促进相关抗凋亡蛋白表达从而提高细胞的存活率。     

比较跨膜型和分泌型TNF-α的体内杀瘤效应及其机制

目的比较跨膜型和分泌型TNF-α在体内的抗瘤作用及机制.方法在小鼠接种肿瘤细胞H22第3天,于肿瘤接种部位分别皮下注射插入TNF-α及其突变体基因的质粒DNA(分泌型TNF突变体、跨膜型TNF突变体和野生型TNF-α),观察肿瘤的生长情况,并用TUNEL检测肿瘤细胞是否发生凋亡;用免疫组化检测肿瘤局部淋巴细胞浸润和肿瘤组织表达的Fas和CD44V3.结果TNF-α及其突变体均可被肿瘤细胞有效表达,并都可明显抑制肿瘤的生长(P<0.01),其中跨膜型TNF突变体抑瘤作用最强,可促进肿瘤表达Fas,引起肿瘤细胞发生明显凋亡,同时抑制其表达CD44V3(P<0.01);而分泌型TNF则可诱导肿瘤局部大量淋巴细胞(CD4+、CD8+)浸润(P<0.01),并引起肿瘤组织出血坏死.结论直接注射跨膜型和分泌型TNF-α裸DNA均可在体内有效杀瘤.跨膜型TNF的体内杀瘤机制可能不同于分泌型TNF,前者可直接和通过Fas途径间接诱导瘤细胞凋亡;后者则可能通过募集和激活淋巴细胞发挥抗瘤作用.     

需钙蛋白酶抑制剂Ⅰ对LPS攻击的RAW264．7细胞中iκBα表达和细胞因子分泌的影响

目的：探讨需钙蛋白酶抑制剂I（CI-I）对LPS攻击RAW264．7细胞后iκBα表达和细胞因子分泌的影响。方法：用CI—I预处理RAW264．7细胞1h后，再用LPS攻击，分别用Western blot和ELISA检测RAW264．7细胞iκBα蛋白表达和TNF-α、IL-6的分泌。结果：CI—I预处理RAW264．7细胞后，可抑制LPS导致的iκBα表达降低。LPS攻击RAW264．7细胞后4h和8h，TNF—α和IL-6的分泌均增加，CI—I和地塞米松（DEX）可抑制该效应，并具有协例抑制作用。结论：CI—I和DEX可抑制LPS攻击后RAW264．7细胞中iκBα表达和炎性细胞因子分泌，从而有助于减轻细胞损伤。     

外源性Rb基因对U937细胞泡沫化过程中载脂蛋白B的影响

目的：研究Rb基因在U937细胞泡沫化过程中对细胞内载脂蛋白B含量的影响，初步探讨Rb基因在泡沫细胞形成过程中的作用。 方法： 采用氧化型低密度脂蛋白（Ox-LDL）孵育U937细胞，以及Ox-LDL孵育同时导入外源性Rb基因转染U937细胞，分别于处理0 h、12 h、24 h收集细胞，半定量RT-PCR与流式细胞术检测Rb mRNA和蛋白的表达，流式细胞术检测细胞内载脂蛋白B的含量。平行实验重复3次，进行统计学方差分析。 结果： 氧化型低密度脂蛋白孵育U937细胞泡沫化过程中，12 h、24 h Rb基因的表达显著低于对照组0 h（P<0.05）；细胞内载脂蛋白B含量则显著高于对照组0 h（P<0.05）。而U937细胞在导入外源性Rb基因后，12 h、24 h细胞内的Rb基因的表达显著高于对照组0 h（P<0.05）；细胞内载脂蛋白B含量则显著低于对照组0 h（P<0.05）。 结论： 外源性Rb基因的导入可以下调细胞内载脂蛋白B的含量，表明Rb基因可能与单核细胞源性泡沫细胞形成有关，可能是影响泡沫细胞形成的相关基因的敏感候选基因之一。     

铜绿假单胞菌活菌诱导不同分化状态的U937细胞表达IL-8的研究

目的探讨铜绿假单胞菌（Pseudomonas aenginasa，Pα）活菌对不同分化状态的U937细胞表达IL-8的诱导作用及通过蛋白激酶C（PKC）和核因子κB（NF-κB）的调控机理。方法采用ELISA和RT-PCR法，分别对Pα诱导不同分化状态的人单核白血病细胞系U937细胞分泌IL-8及U937细胞IL-8 mRNA表达进行研究，应用Western blot检验IκB及NF-κB的蛋白表达，观察PKC和NF-κB活化抑制剂对IL-8表达的影响。结果Pα可促进U937细胞及佛波酯（PMA）分化的U937细胞IL-8 mRNA的表达及IL-8的分泌，而且具有明显的量效和时效关系。Pα能直接诱导并迅速活化NF-κB，1h达到高峰，以后逐渐下降。PKC阻断剂calphostin C及NF-κB阻断剂PDTC均能显著抑制NF-κB的活化及IL-8的表达（P〈0．01）。结论IL-8的产生可能与U937细胞的分化状态有关；Pα可能通过PKC信号通路促进NF-κB的活化，从而启动IL-8的高效表达和分泌。     

跨膜型与分泌型TNF对中性粒细胞功能的影响

目的比较跨膜型和分泌型TNF-α对中性粒细胞生物学功能影响的异同,以探讨两型TNF在炎症中的作用。方法通过吞噬、呼吸爆发、原位杂交等方法研究跨膜型和分泌型TNF-α对中性粒细胞生物学功能的影响。结果分泌型TNF-α可促进中性粒细胞吞噬(P<0.001)、呼吸爆发功能(P<0.05)及IL-1βmRNA水平的表达,对中性粒细胞产生NO无明显影响;跨膜型TNF-α对中性粒细胞吞噬、呼吸爆发功能无明显影响,对IL-1βmRNA水平的表达仅有微弱的促进作用,但可明显促进中性粒细胞产生NO。结论分泌型TNF-α对中性粒细胞有明显的激活作用,而跨膜型TNF-α则可能对其功能具有调节作用。     

U937与鼻咽癌细胞混合培养对其CD36表达的影响

U937是一种前单核细胞,其主要是以悬浮生长为主,细胞形态成圆球状,表面光滑,没有突起。在PMA,内毒素或生长因子的刺激下细胞可由悬浮状态衍变为贴壁生长,细胞形态由圆球状变化为多边型,细胞表面有突起伸出。本实验采用流式细胞术检测了U937与鼻咽癌细胞CNE－2混合培养对其CD36表达的影响。结果发现：U937与CNE－2混合培养以促进U937对CD36的表达,共同培养24小时,CD36表达显增加。表明：前单核细胞与肿瘤细胞混合培养可促进前单核细胞向单核细胞的分化。     

TPA及细胞因子对U937细胞中IL—1β mRNA表达的影响

本文利用Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交法，检测了几种细胞因子及ＴＰＡ对人单核细胞白血病传代细胞系Ｕ９３７细胞中ＩＬ－１βｍＲＮＡ表达的影响。结果显示，ＴＮＦ－α，ＩＬ－６，ＩＦＮ－γ，ＩＬ－２，ＩＬ－３，ＩＬ－８，ＩＬ－９和ＧＭ－ＣＳＦ对ＩＬ－１βＲＮＡ的表达，均有不同程度的刺激作用，尤以ＴＮＦ－α和ＩＬ－６最为明显，ＴＰＡ刺激Ｕ９３７细胞表达ＩＬ－１β ｍＲＮＡ的时间效应显示，１２ｈ表达量较高；９ｈ表达     

白细胞介素-27对白血病细胞株U937细胞生物学行为的影响

目的: 探讨白细胞介素-27(IL-27)对人单核细胞白血病细胞株U937细胞的影响及其机制。方法: 用不同剂量的重组人IL-27和U937细胞分别共培养24h和48h,用荧光定量PCR测定细胞中促凋亡基因 p53、bax 及caspase-3、主要组织相容性复合物Ⅰ(MHCⅠ)类分子、协同刺激分子CD86和黏附分子CD54的表达,流式细胞仪检测U937细胞表面CD86和CD54的表达,并用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定IL-27对细胞增殖的影响。结果: PCR结果显示经过不同剂量IL-27刺激后,U937细胞中促凋亡基因 p53和bax表达增加,同时,U937细胞中凋亡相关蛋白caspase-3的表达及活性也有相应增加;MTT结果显示,IL-27可以抑制U937细胞增殖并和抗肿瘤药物阿糖胞苷产生协同作用;IL-27可以诱导U937细胞中的MHCⅠ类分子(HLA-A,B,C)、表面的协同刺激分子CD86和黏附分子CD54的表达增加。结论: IL-27可以诱导U937细胞中促凋亡基因的表达,直接抑制细胞增殖,对细胞中MHCⅠ、CD86和CD54的表达有诱导作用。这可能是IL-27抗肿瘤作用的重要机制。     

TNF-α对小鼠腹腔渗出细胞抗真菌活性的影响

目的：研究TNF—α对小鼠腹腔渗出细胞的激活和杀菌活性的效应。方法：以IL-12、IL-18、IFN—γ、TNF-α及抗体诱导小鼠腹腔渗出细胞和巨噬细胞，应用ELISA法测定细胞因子变化，Griess反应法测定培养上清液中NO的含量，检测巨噬细胞内新型隐球菌菌落数。结果：IL-12和IL-18联合应用协同诱导腹腔渗出细胞产生TNF—α，且能被IFN—γ抗体所抑制。IFN—γ、TNF-α协同诱导巨噬细胞产生NO和增强其杀伤新型隐球菌活性。结论：TNF—α在细胞因子相互调节诱导增强巨噬细胞杀真菌活性中起重要作用。     

同型半胱氨酸对单核细胞NF-κB活化及巨噬细胞炎性蛋白-1α表达的影响

目的　探讨同型半胱氨酸对体外培养的人单核细胞株THP -1核因子-κB(NF -κB)、抑制因子(IκB- α)活性的影响及其与巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP- 1α)表达上调的关系。方法　THP -1单核细胞分别用同型半胱氨酸和NF- κB抑制剂PDTC预处理后,应用Northernblot和流式细胞术分别检测MIP- 1αmRNA和蛋白的表达,并应用Western蛋白印迹进一步检测核蛋白NF -κB蛋白含量和胞质IκB -α含量。结果　与未加任何处理因素的对照组比较,MIP- 1αmRNA和蛋白在0. 1mmol/L同型半胱氨酸处理后明显增加,分别为对照组的3 .69倍和1 .16倍(P<0 .01),同时NF κBP65亚基核转位亦增加。而加入100μmol/LNF κB抑制剂PDTC预处理30min后,再用同样浓度的同型半胱氨酸刺激,则MIP -1αmRNA和蛋白表达受到明显的抑制,NF- κBP65核转位增加。单独加入PDTC对MIP -1αmRNA、蛋白表达及NF -κBP65核转位无明显影响。此外,同型半胱氨酸( 0 .1mmol/L)处理THP- 1可引起IκB -α蛋白水平显著降低, 120min后有所回升。结论　同型半胱氨酸在病理浓度可促进NF -κB活化,发生核转位,进而促进THP -1细胞表达MIP 1αmRNA和蛋白,这种作用与IκB -α蛋白磷酸化降解有关。     

内毒素、地塞米松对体外培养大鼠肺泡巨噬细胞中NF-κB活化的影响

目的 探讨内毒素（LPS）和地塞米松（Dex)对体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞（AM）中NF－κB活化的影响，以及AM中NF－κB活化在急性肺损伤中的可能作用。方法 通过建立大鼠AM体外培养技术，应用免疫组化染色法，观察LPS和Dex对AM中NF－κBP^65,IκB-α，TNF-α和ICAM－1蛋白表达的动态变化。结果 LPS能使培养的AM中NF－κBP^65,TNF-α和ICAM－1的表达增加，IκB－α的表达降低；Dex的作用与LPS恰相反。结论 LPS促进AM中的NF－κB活化，可能是急性肺损伤肺内炎症损害发生的启动及促进因素，Dex抑制NF－κB的活化，可能是其抗炎作用的重要机制之一。