托瑞米芬对人肺腺癌细胞A549/DDP耐顺铂的逆转作用

【目的】研究托瑞米芬对人肺腺癌细胞系A549／DDP耐顺铂的逆转作用,探讨其与多药耐药蛋白表达之间的关系。【方法】以MTT法检测托瑞米芬及与顺铂联合对A549／DDP细胞的细胞毒性作用,以免疫细胞化学法检测A549／DDP细胞MRP的表达情况。【结果】15μmol／L、2．5μmol／L托瑞米芬对A549／DDP细胞的抑制率分别为5．39％、1．43％,与无药对照组比较无显著性差异（P〉0．05）。≥10μmol／L托瑞米芬可抑制A549／DDP细胞生长（P〈0．01）。2．5μmol／L、5μmol／L托瑞米芬可使顺铂对A549／DDP细胞的IC50从1．764μg／ml分别降至1．047μg／ml、0．588μg／ml,逆转A549／DDP细胞对顺铂的耐药（P〈0．01）,逆转倍数分别为1．686、3．001。A549／DDP细胞MRP呈强阳性表达。5μmol／L、2．5μmol／L托瑞米芬与顺铂联用可以下调MRP表达,与无药组及单用顺铂组比较,具有显著性差异（P〈0．01）。【结论】托瑞米芬能抑制A549／DDP细胞增殖和逆转A549／DDP细胞对顺铂的耐药;其耐药逆转可能与下调MRP表达有关。     

吉非替尼对前列腺癌DU145细胞生长增殖及表皮生长因子受体蛋白表达的影响

目的：观察吉非替尼（Gefitinib）对前列腺癌DU145细胞的生长抑制作用及对细胞表皮生长因子受体（EGFR）蛋白表达水平变化的影响。方法：不同浓度的Gefitinib（020μmol／L）分别作用于体外培养的前列腺癌DU145细胞24～120h后,采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞生长抑制率,流式细胞仪测细胞周期分布,蛋白免疫印迹（Westernb1ot）检测细胞EGFR蛋白表达水平。结果：Gefitinib可以显著抑制DU145细胞的生长,呈时间一剂量依赖效应,并且细胞生长多停滞于G0／G1期,细胞EGFR蛋白表达分别下降了10．92％（2．5μmol／L）、43．71％（5μmol／L）、53．53％（10μmol／L）和85．98％（20umol／L）,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：Gefitinib能显著抑制前列腺癌DU145细胞的生长,其机制可能与细胞生长在G0／G1期阻滞及EGFR蛋白表达水平下调等因素有关。     

p21WAF1/GIP1基因转染人宫颈癌Hela细胞对顺铂敏感性的影响

目的 探讨转染p21^WAF1／GIP1基因（p21基因），对宫颈癌Hela细胞生长抑制作用及p21基因转染Hela细胞对顺铂敏感性的影响。方法 应用脂质体转染技术，将质粒peDNA3转入人宫颈癌Hela细胞中，经G418筛选，转染阳性克隆细胞连续传代培养，并采用中性红摄入法测定顺铂对p21基因转染人宫颈癌Hela细胞增殖抑制作用，流式细胞仪（FCM）检测细胞周期变化。结果 经G418筛选，Hela细胞全部死亡，转染质粒peDNA3的Hela细胞存活，并可连续传代。p21基因转染后，细胞生长明显受到抑制，细胞周期停滞于G1期，与对照组相比，细胞周期G1期比例明显增加。同时p2l表达阳性的Hela细胞对顺铂敏感性增强。结论 p2l基因转染能使Hela细胞出现生长抑制并对顺铂化疗作用敏感性明显增强。     

米非司酮对人宫颈癌Hela细胞体外作用的研究

目的 观察米非司酮对人宫颈癌Hela细胞体外生长的影响。方法 选用生长良好的人宫颈癌Hels细胞株进行体外培养，不同浓度的米非司酮作用72h后，采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定米非司酮对细胞生长的抑制作用；应用光学显微镜、透射电子显微镜观察药物作用后细胞的形态学改变。终末脱氧核苷酸末端转移酶介导缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡情况，计数凋亡细胞，计算凋亡率。结果 米非司酮浓度分别为5、10、20、40μmol／L时作用72h，细胞生长受到不同程度的抑制，抑制率分别为36．74％、49．62％、61．96％、71．34％，明显高于对照组（P〈0．01）；同时出现明显的凋亡现象，光学显微镜、透射电子显微镜下均可观察到细胞凋亡的形态学改变，TUNEL法证实了凋亡率分别为28．67％、39．00％、54．33％、64．33％，明显高于对照组（P〈0．01），各浓度间凋亡率比较差异亦有显著性（P〈0．01）。结论 米非司酮显著抑制人宫颈癌Hels细胞的生长，并具有诱导细胞凋亡的作用，随着药物浓度的增加，效应明显增强。     

蛇床子素对成骨样细胞UMR106增殖和分化的影响

目的：以在某种程度上可反映成骨细胞增殖的成骨样细胞UMR106为靶细胞，考察蛇床子素对其细胞形态、增殖率和分化程度的影响。方法：实验于2003-03／2004—03，在中国人民武装警察部队医学院药物化学教研室药物活性筛选室进行。以大鼠成骨肉瘤细胞系UMR106为靶细胞，以雌二醇1&;#215;10^-8mol／L为阳性对照，同时设空白对照组，蛇床子素干预组分为1&;#215;10^-8mol／L，1&;#215;10^-7mol／L，1&;#215;10^-6mol／L3个浓度组。①调整细胞浓度为4&;#215;10^-7L^-1，接种于12孔培养板上。48h后，倒置显微镜下观察细胞形态变化。②调整细胞浓度为2&;#215;10^7L^-1，接种于96孔培养板，采用四唑盐法测定各孔的吸光度，计算平均增殖率。③调整细胞浓度为2&;#215;10^7L^-1，接种于24孔培养板，磷酸对硝基苯基质动力学法测定细胞内外碱性磷酸酶括性。上述实验每组均设8个复孔。结果：①培养基中加入蛇床子素培养48h后，与对照组相比UMR106细胞数量明显增多，核分裂期多见，1&;#215;10^-6mol／L，1&;#215;10^-7mol／L组可见细胞重叠生长，分泌基质堆积明显。②UMRl06细胞经蛇床子素处理48h后，相对于对照组，1&;#215;10^-6mol／L组增殖率为52％，1&;#215;10^-7mol／L组为37％，1&;#215;10^-8mol／L组为16％。3个给药组与对照组相比差异均有显著性（t=37．36，14．94，6．81，P〈0．01）。③UMR106细胞经蛇床子素1&;#215;10^-6mol／L和经雌二醇1&;#215;10^-8mol／L处理24h和48h后。细胞内碱性磷酸酶活性均显著高于对照组[（825．17&;#177;1234），（775．16&;#177;8．67），（715．14&;#177;14．17）μkat／g；（2415．48&;#177;15．84），（2355．47&;#177;5．67），（2285．49&;#177;7．67）μkat／g；t=16．56，10．22；20．89，34．90，P〈0．01]。④UMR106细胞在浓度为1&;#215;10^-6，1&;#215;10^-7mol／L的蛇床子素及雌二醇10^-8mol／L培养24h后，细胞外碱性磷酸酶活性显著高于对照组[（781．66&;#177;50），（733．15&;#177;15．34），（728．81&;#177;9．84），（652．80&;#177;11．34）μkat／g；t=22．56，11．9，14.32,P〈0．01]。结论：蛇床子素可剂量依赖地促进UMR106细胞的增殖，刺激UMR106细胞的碱性磷酸酶活性，提示其可能具有直接促进成骨细胞增殖、分化的作用。     

姜黄素改善肺癌A549细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体抵抗的机制

目的：观察中药提取物姜黄素联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对肺癌细胞株A549生长抑制率和对细胞凋亡相关因子表达的影响，探索姜黄素改善肺癌A549细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体抵抗的机制。方法：实验于2003—10／2004-10在上海东方医院中心实验室完成。用购于中科院上海细胞所肺腺癌细胞株A549，将培养的A549细胞暴露于姜黄素、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及两者联合中，分4组，每组6孔，姜黄素组（40μmol／L姜黄素）、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体组（25μg／L肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体）、联合组（40μmol／L姜黄素与25μg／L肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体联合）、对照组（RPMI1640细胞培养液）。①用四氮唑蓝法测定姜黄素组、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体组以及联合组的吸光值，根据吸光度值计算肺癌细胞株A549细胞生长抑制率。②应用ApoAlert半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶系列比色法凋亡相关蛋白半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8表达。③反转录聚合酶链反应测定凋亡调控蛋白bel-2／bax的表达。结果：①抑制率：肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对肺腺癌A549细胞的抑制明显低于姜黄素，25μg／L肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体作用24h细胞抑制率仅有（2．65&;#177;1．416）％；两药联合对肺腺癌A549细胞的抑制作用明显增加[高达（30．97&;#177;1．318）％，P〈0.011。②凋亡相关因子：联合组半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶8表达明显高于姜黄素组、肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体组、对照组[联合组：（50．77&;#177;0．812），（73．31&;#177;0.730）μmol／L；姜黄素组：（23．61&;#177;0.398），（26．84&;#177;1．511）μmol／L；肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体组：（9．63&;#177;1．024），（14．21&;#177;0．138）μmol／L；对照组：（3．69&;#177;0．486），（2．87&;#177;0．633）μmol／L，P〈0.011；联合组、姜黄素组的bel-2／bax明显高于肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体组（2．55&;#177;0．138，2．24&;#177;0．197，0．58&;#177;0．046，P〈0．01）。结论：肺癌A549细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体细胞耐受，姜黄素可能通过调整bcl-2／bax的表达，进而激活半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶家族，增加肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的敏感性。     

二甲双胍对宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤作用

目的以宫颈癌Hela细胞为研究对象,探讨二甲双胍对宫颈癌Hela细胞的体外抗肿瘤作用以及二甲双胍联合卡铂是否对宫颈癌Hela细胞的增殖抑制有协同作用。方法将宫颈癌Hela细胞分为空白对照组、不同浓度(0.01、0.5、1、5、10、20mmol/L)二甲双胍组,采用MTT法检测不同浓度二甲双胍对宫颈癌Hela细胞的增殖活性的影响;并应用AO/EB染色和流式细胞仪研究二甲双胍的体外抗肿瘤机制;将1.0mmol/L及5.0mmol/L的二甲双胍与25mg/L、50mg/L的卡铂单一或联合作用宫颈癌Hela细胞,采用MTT法检测各组细胞OD值,计算细胞增殖抑制率。结果二甲双胍对宫颈癌Hela细胞体外增殖能力有明显的抑制作用,且呈明显的浓度依赖性和时间依赖性;与对照组比较,荧光显微镜下计数发现不同浓度二甲双胍作用宫颈癌Hela细胞24h后,随着二甲双胍浓度的增加,细胞凋亡率逐渐升高(P0.05),而以不同浓度(0、1、5mmol/L)二甲双胍培养宫颈癌Hela细胞48h后,流式细胞仪检测实验组Hela细胞处于G0/G1期比例升高,S期细胞比例下降,差异具有统计学意义(P0.05);二甲双胍联合卡铂对抑制宫颈癌Hela细胞增殖具有协同作用,且随着二甲双胍浓度的增加,细胞增殖抑制率增加(P0.05)。结论证实二甲双胍对体外宫颈癌Hela细胞增殖有明显的抑制作用,它是通过诱导细胞凋亡、细胞周期G0/G1期阻滞来实现的;二甲双胍与卡铂联合应用能够增强卡铂对宫颈癌Hela细胞的增殖抑制作用。     

共轭亚油酸对胃癌MGC-803细胞增殖的影响

目的 研究共轭亚油酸（CLA）对体外培养人胃癌MGC-803细胞生长的影响。方法 采用体外培养人胃癌MGC-803细胞，用MTT比色、流式细胞光度术以及Cyclin D1蛋白表达检测的方法，观察不同浓度CLA（50．0、100．0、200．0μmol／L）对MGC-803细胞生长的影响。结果 MTT比色结果显示，不同浓度CLA可抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖，72h的抑制率分别为48．61％、62．02％、66．33％，呈现剂量-效应关系（P〈0．05）。流式细胞仪检测表明，不同浓度CLA（50．0、100．0、200．0μmol／L）作用MGC-803细胞48h，C1期细胞从0μmol／L浓度组的32．2％分别上升到43．1％、59．7％、63．9％，出现G1期阻滞。免疫组织化学结果显示，Cyclin D1蛋白表达随着CLA浓度的增加呈现逐渐下降的趋势。结论 CLA对体外培养的人胃癌MGC-803细胞增殖有良好的抑制作用。     

异搏定对人皮肤成纤维细胞增殖的影响

目的：探讨钙离子通道阻滞剂异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖的作用，为钙离子通道阻滞剂治疗瘢痕过度增生提供依据。方法：实验皮肤标本来源于2002—07／2003—07北京大学第三医院整形外科5例美容手术或植皮手术患者，取冗余全层皮肤组织，患者知情同意。体外培养3～8代的人皮肤正常成纤维细胞，实验分为异搏定组：包括1&;#215;10^-3, 1&;#215;10^-4, 1&;#215;10^-5, 1&;#215;10^-6, 1&;#215;10^-7, 1&;#215;10^-8,1&;#215;10^-9,1&;#215;10^-10mol／L组，分别在细胞培养孔中加入2mL相应浓度异搏定的培养液；氢化可的松组：在细胞培养孔中加入2mL浓度为1&;#215;10^-7mol／L氢化可的松的培养液；对照组：在细胞培养孔中加入2mL体积分数为0．005的新生牛血清的Dulbecco＇s改良的Eade＇s培养基。检测细胞活力采用锥虫蓝染色；细胞增殖状况测定应用^3氚标记的胸腺嘧啶掺入法；观察细胞增殖抑制率[抑制率（1％）=（阴性对照组每分钟脉冲数值-实验组每分钟脉冲数值）／阴性对照每分钟脉冲数值]，取各例样本的平均值。结果：①人皮肤正常成纤维细胞的增殖动力学结果：对照组人皮肤正常成纤维细胞在接种12h开始增殖，24h达到高峰，48h又逐渐降低。②异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖抑制的浓度效应：各浓度的异搏定对人皮肤成纤维细胞的增殖均有抑制作用，其中1&;#215;10^-6mol／L异搏定与1&;#215;10^-7mol／L氢化可的松对成纤维细胞增殖的抑制率无显著性差异（t=0．135,P=0．896〉0．05）。③浓度为1&;#215;10^-6mol/异搏定对人皮肤正常成纤维细胞增殖抑制的时间效应：氢化可的松在24h时对人皮肤正常成纤维细胞的增殖抑制作用显著高于6，12,48h时[（60．67&;#177;18．94）％比（-19．69&;#177;21．26）％，（10．89&;#177;11．61）％，（37．03&;#177;12．17）％，q=10．867．6．732，3．197；P〈0．051；异搏定在24h时对人皮肤正常成纤维细胞的增殖抑制作用显著高于6，12，48h时[（51．42&;#177;15．30）％比（-16．83&;#177;16．90）％．（1．09&;#177;11．62）％，（17．41&;#177;13．41）％，q=10．566，7．791，5．265，〈0．051；在药物作用48时异搏定对人皮肤正常成纤维细胞的抑制作用低于氢化可的松（t=2．423,P=0．042〈0．05）。结论：不同浓度的异搏定对体外培养人正常皮肤成纤维细胞增殖有抑制作用，异搏定可能通过抑制成纤维细胞的增殖达到治疗瘢痕过度增生的作用。     

甘氨脱氧胆酸对人肝癌细胞增殖抑制与诱导凋亡的实验研究

目的探讨甘氨脱氧胆酸（GDCA）对人肝癌细胞SMMC7721增殖的影响以及细胞凋亡作用。方法采用96孔细胞培养板体外培养人肝癌细胞株SMMC7721,在24、48、96h后加入GDCA,并进行四甲基偶氮唑蓝（MTT）实验,计算肝癌细胞的生长抑制率;采用流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡的影响。结果GDCA对肝癌细胞SMMC7721有增殖抑制作用,GDCA作用细胞72h后,200、400、800／μmo／L GDCA抑制率分别为18．18％、29．94％和88．54％;细胞周期分析显示,G1期细胞比例与对照组相比明显升高,GDCA200、400／μmol／L处理组P〈0．05,S期有不同程度的下降,GDCA400／μmol／L处理组P〈0．01。Annexin V-FITC检测结果显示GDCA 200、400μmol／L处理组48和72h后细胞凋亡比例比对照组明显增加,差异具有统计学意义。结论GDCA对人肝癌细胞有增殖抑制作用,并能诱导SMMC7721细胞凋亡。     

不同浓度胰岛素对体外培养新生鼠心肌细胞生长和增殖的影响

背景：小鼠高胰岛素血症模型研究发现，高胰岛素可引起心肌肥厚的发生。 目的：观察胰岛素对体外培养的新生鼠心肌细胞增殖和肥大的浓度效应。 设计、时间及地点：细胞学体外观察，于2006—01／2007-03在新乡医学院解剖学与组织胚胎学重点学科实验室完成。 材料：1—3d龄Wistar新生鼠20只，胰岛素为美国sigma公司产品。 方法：采用胰蛋白酶消化法和差速贴壁法体外分离培养和纯化新生鼠心室肌细胞，分别加入10^-8，10^-7，10^-6mol／L胰岛素处理48h，并设立空白对照组，细胞周期分析选取10^-7mol／L胰岛素组。 主要观察指标：显微测量细胞直径、细胞活力和细胞计数，免疫细胞化学染色观察心肌细胞中细胞周期素E的变化。 结果：各组心肌细胞活力均在90％以上。与空白对照组比较，10^-8，10^-7，10^-6mol／L胰岛素组心肌细胞长径和短径均显著增加（t=2．7815，P〈0．01）；10^-8，10^-7mol／L胰岛素组心肌细胞数目无明显变化（P〉0．05），10^-6mol／L胰岛素组心肌细胞数目显著下降（f=1．9762，P〈0．05）；10^-7mol／L胰岛素组心肌细胞内细胞周期素E阳性颗粒吸光度值明显下降（t=2．1743，P〈0．05），平均灰度值明显增加（t=-2．4587，P〈0．05）。 结论：10^-8～10^-6mol／L胰岛素具有促进新生鼠心肌细胞肥大的作用，但无法促进心肌细胞增殖。     

汉防己甲素联合伊马替尼对K562／G01细胞诱导凋亡作用及其相关机制

本研究探讨伊马替尼（imatinib,IM）和汉防己甲素（tetrandrine,Tet）单用和联合应用对K562／G01细胞的凋亡诱导作用及其可能机制。应用M1fr法检测IM和Tet单用及联合用药对细胞增殖抑制的作用,用流式细胞术（FCM）检测细胞周期和凋亡率,用实时荧光定量PCR检测caspase-3、BCL-2mRNA的表达,应用Westernblot分析caspase-3、BCL-2蛋白的表达情况。结果表明,1．0μmol／LIM和／或1．5μmol／L Tet单用及联合作用于K562／G01细胞48h后,对细胞增殖的抑制率分别是（22．74±0．05）％、（20．34±0．57）％、（44．28±0．60）％,两药联合应用较单药抑制作用明显。流式细胞术检测显示,Tet作用后细胞向G,／s期转化;Tet1．5μmol／L、3μmol／L与1．0μmol／LIM联合应用48h的早期凋亡率分别为（7．81±0．16）％、（14．10±0．28）％,诱导凋亡作用比单药组明显增加。FQ—PCR和Westernblot检测均显示单独应用Tet和IM后caspase-3表达上调,BCL-2表达下调,联合用药组作用更显著。结论：单独应用Tet对K562／G01细胞有诱导凋亡的作用,两药联合应用具有明显的协同效应,且具有时间和剂量依赖性,其机制可能与上调caspase-3mRNA及其蛋白表达和下调BCL-2mRNA及其蛋白的表达有关。     

孤啡肽诱导白血病细胞K562凋亡

本研究探讨孤啡肽对白血病细胞K562增殖的影响及诱导凋亡的作用，采用MTT（四唑氮蓝）法检测不同浓度的孤啡肽对K562细胞生长的影响，应用瑞氏染色、电子显微镜观察药物作用后K562细胞形态的改变，流式细胞术检测孤啡肽对K562细胞细胞凋亡作用，DNA琼脂糖凝胶电泳观察孤啡肽作用后K562细胞内DNA的损伤程度。结果表明：10^-6～-10^-13mol／L孤啡肽明显抑制K562细胞的生长，且存在时间依赖性，而剂量依赖性不明显；10^-6-10^-7、10^-9、10^-12mol／L孤啡肽作用72小时后显示明显的细胞毒作用。与对照组相比，10^-9mol／L孤啡肽作用72小时后K562细胞出现典型凋亡特征；流式细胞术检测发现：0、10^-7、10^-8、10^-9mol／L孤啡肽作用72小时后出现凋亡峰，凋亡率分别为0％、22．8％、23．8％、26．5％；DNA琼脂糖凝胶电泳显示典型的梯状条带。结论：孤啡肽能够抑制K562细胞增殖，诱导其凋亡。     

TRAIL逆转人卵巢癌COC1／DDP细胞对DDP耐药性的研究

目的：研究TRAIL对卵巢癌COC1／DDP细胞生长的影响,以及化疗药物DDP等对TRAIL受体（DR4、DR5）表达的影响,揭示TRAIL与COC1／DDP细胞顺铂耐药性的关系。方法：用MTT法检测不同浓度TRAIL蛋白和TRAIL与DDP联合用药对COC1／DDP细胞生长的影响,用RT—PCR方法检测DDP对TRAIL受体（DR4、DR5）表达的影响。结果：①TRAIL蛋白对COC1／DDP细胞生长有抑制作用,且随着TRAIL蛋白浓度升高,细胞抑制率逐渐上升。②DDP（2．5μg／mL）对COC1／DDP细胞生长抑制作用较弱（抑制率为3．31％）,DDP在加入TRAIL蛋白后对细胞生长抑制率显著升高（P〈0．05）。③DDP使COC1／DDP细胞的DR5表达水平显著增强为正常对照组的3．54倍（P〈0．001）。结论：TRAIL蛋白对COC1／DDP细胞生长有抑制作用,DDP与TRAIL联合使用COC1／DDP细胞生长抑制更明显,TRAIL可逆转COC1／DDP细胞对DDP的耐药性,耐药性的逆转可能与DDP导致TRAIL受体DR5水平增高促进了肿瘤细胞的凋亡有关。     

硼替佐米和柔红霉素联合应用对多发性骨髓瘤细胞株KM3的作用

为了研究硼替佐米（bortezomib,Bor）单用及与柔红霉素（daunorubicin,DNR）联合应用对多发性骨髓瘤（multiple mydoma,MM）细胞株KM3细胞的抑制作用,采用MTT法检测Bor单用及与DNR联合应用对KM3细胞的抑制作用,求出其IC50。结果表明：Bor、DNR对KM3细胞生长抑制作用呈浓度依赖性,IC50分别为0．27μmoL／L,0．16μmol／L;Bor联合DNR对KM3细胞生长抑制作用明显增强（P〈0．05）。结论：在体外,Bor联合DNR对KM3细胞生长抑制有协同作用。     

凋亡抑制基因survivin反义寡核苷酸联合bcl-2反义寡核苷酸诱导肺癌细胞株凋亡的实验观察

目的：探讨凋亡：抑制基因survivin反义寡核苷酸单用或联用bcl-2反义寡核苷酸对肺癌细胞株的作用，探讨其在抗癌方面的作用。方法：①实验于2002-08／2003-04在蚌埠医学院免疫学实验室完成。将对数生长期NCI—H446细胞分为6组：空白对照组，脂质体10mg／L组（仅加空脂质体），NSODN 500nmol／L组（该3组均为对照组），survivin反义寡核苷酸500nmol／L组，bcl-2反义寡核苷酸5μmol／L，survivin反义寡核苷酸500nmol／L＋bcl-2反义寡核苷酸5μmol／L组（分别在脂质体介导下转染不同寡核苷酸，48h后收取细胞进行以下检测）。②在脂质体介导下，以survivin的反义寡核苷酸作用于肺癌细胞株NCI-H446和SPC—A1，于72h用反转录聚合酶链反应检测survivin mRNA表达。凋亡指数：（静止期／DNA合成前期）占整个细胞周期的百分比；增殖指数=（DNA复制期＋合成后期／有丝分裂期）占整个细胞周期的百分比。②survivin反义寡核苷酸单独或联合bcl-2反义寡核苷酸作用NCI—H446后，用四甲基偶氮唑盐法检测细胞生长抑制率并计算两药相互作用指数，锥虫蓝拒染实验检测细胞死亡率。（3）计量资料差异性比较采用方差分析和q检验。结果：①两种肺癌细胞株皆表达survivin基因。survivin反义寡核苷酸作用细胞株后，出现生长抑制和细胞凋亡，细胞survivin mRNA明显下调，反义寡核苷酸500nmol／L作用72h后NCI—H446和SPC—A1细胞survivin mRNA抑制率分别达62．72％和67．43％。②四甲基偶氮唑盐法检测结果显示，survivin反义寡核苷酸和bcl-2反义寡核苷酸单独应用对NCI—H446细胞均有生长抑制作用；联合应用survivin反义寡核苷酸和bcl-2反义寡核苷酸的细胞生长抑制率为64．9％，优于单独应用（单用bcl-2反义寡核苷酸为34．2％）（P〈0．01），两药相互作用指数为0．708。锥虫蓝拒染实验显示，survivin反义寡核苷酸500nmol／L＋bcl-2反义寡核苷酸5μmol／L组细胞死亡率为62．1％，高于两药单用时的31．4％和41．4％。流式细胞仪检测凋亡显示，与各对照组相比，survivin反义寡核苷酸和bcl-2反义寡核苷酸均可诱导细胞凋亡，凋亡率分别为43．6％和30．7％，两者联用凋亡率提高到58．6％（p〈0．01）。结论：①survivin反义寡核苷酸能抑制肺癌细胞株survivin基因表达，并诱导细胞凋亡和抑制生长。②survivin反义寡核苷酸联合bcl-2反义寡核苷酸具有显著协同抗癌作用。     

DADS对人宫颈癌细胞生长及VEGF蛋白表达的影响

【目的】探讨二烯丙基二硫（DADS）对人宫颈癌Hela细胞生长及血管内皮生长因子（VEGF）蛋白表达的影响。【方法】体外培养人宫颈癌Hela细胞,采用MTT比色法测定DADS对Hela细胞增殖活性的影响;裸鼠皮下注入人宫颈癌Hela细胞建立人宫颈癌裸鼠并种移植模型,观察腹腔注射DADS对宫颈癌移植瘤在Balb／c-nu裸鼠体内生长情况的影响,HE染色后进一步观察DADS对移植瘤组织形态的改变,SP免疫组织化学法观察移植瘤细胞VEGF蛋白酌表迭情况。【结果】DADS对人宫颈癌Hela细胞增殖有一定抑制作用,并呈浓度依赖性,以DADS60mg／L高剂量药物组抑制活性最强;腹腔注射DADS剂量为50mg／kg、100mg／kg和200mg／kg时,细胞增殖抑制率分别为28．1％、38．6%、55．3％,瘤重抑制率分别是35．9％,49．9％,55．4％;HE染色结果示DADS具有杀伤人宫颈癌裸鼠移植瘤细胞作用;SP免疫组织化学法示DADS下调移植瘤细胞VEGF表达。[结论]DADS具有抑制人宫颈癌细胞的生长作用,此作用可能与下调移植瘤细胞VEGF表达有关。     

叶酸在体外对人肝癌细胞生长的抑制作用

目的：体外采用叶酸对人肝癌细胞株SMMC-7721进行处理，分析叶酸抑制人肝癌细胞生长的作用。方法：实验于2003—09／2005—08在重庆医科大学完成。①人肝癌细胞SMMC-7721细胞株由四川大学华西校区分子生物学教研室提供；人胚肌腱细胞由四川大学华西校区分子生物学教研室提供。③细胞生长实验：常规培养细胞，待处于对数生长期时接种于24孔培养板内．每孔调整细胞数为1&;#215;10^4个，共分7组：加入叶酸，使各组叶酸的终浓度分别为15，75，375，750，1875nmol／L；加入顺铂，使顺铂组的终浓度为33nmol／L；以未加受试物、只单纯加入培养基为阴性对照组。通过绘制生长曲线计算各组细胞的增殖抑制率。③四唑盐比色实验：取对数生长期生长状态良好的SMMC-7721和人胚腱细胞，分别接种于96孔培养板，共分7组：加入叶酸，使各组叶酸的终浓度分别为15，75．375，750，1875nmol／L；加入顺铂，使顺铂组的终浓度为33nmol／L；以未加受试物、只单纯加入培养基为阴性对照组。继续培养24h后加入四唑盐（5g／L，20μL／孔）孵育。通过酶联免疫检测仪计算平均吸光度值和抑制率。④流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率。结果：①叶酸对人肝癌细胞株体外增殖的影响：叶酸浓度为75，375，750，1875nmol／L时可显著抑制SMMC-7721细胞的增殖（P〈0．05）：随时间的延长和剂量的增加，SMMC-7721细胞的抑制率呈上升趋势，其生长曲线较阴性对照下移。②叶酸对肝癌细胞、人胚肌腱细胞活性及功能状态的影响：叶酸对人胚肌腱细胞的活性和功能状态无影响，但对人肝癌细胞株有抑制作用。③叶酸对SMMC-7721细胞周期各时相分布及凋亡率的影响：与S期及G2／M期比较，G0／G1期细胞比例增大（P〈0．01或P〈0．05），使其受阻于G0／G1期，细胞生长停滞，细胞凋亡率随浓度的增加而明显上升。结论：叶酸对人胚肌腱细胞无抑制作用，表明叶酸对正常人体细胞无不良影响；但叶酸对癌细胞存在明显的抑制作用。     

雌激素对5-羟色胺在体外狗冠状动脉上量效收缩的压低作用及超敏现象的启示

目的：在狗的冠状动脉上建立17β-雌二醇和5-羟色胺之间作用的量效曲线；寻找超敏血管环并观察其变化规律。 方法：实验于2005—06／12在湘南学院机能实验室完成。选用雄性杂交家狗，取狗心放在冰冷的K—H液中。利用灌流肌槽这种体外模型，从调节血管张力的角度出发进行实验。①17β-雌二醇对5-羟色胺量效收缩体外冠状血管环（无超敏现象）的抑制作用：血管环稳定后，向浴槽中加入累积浓度为10^-8，10^-7.5，10^-7,10^-6.5，10^-6，10^-5.5和10^-5mol/L 5-羟色胺。建立5-羟色胺量效曲线，以此为对照；然后分别加入30nmol/L，1，3或10μmol／L 17β-雌二醇温育20min后，再重新建立5-羟色胺量效曲线。②冠状血管环（超敏现象）的5-羟色胺收缩变化：凡10^-7mol／L 5-羟色胺引发收缩力大于500mg的血管环即被定格为超敏血管环，用10^-7mol／L 5-羟色胺再连续激发两次。并记录这3次张力的变化值。（3）17β-雌二醇和维拉帕米对这类血管环收缩反应影响：分别用1，3和10μmol／L 17β-雌二醇及10^-6mol／L维拉帕米温育20min，加入10^-7mol／L5-羟色胺。并记录张力的变化。④再次加入10^-7mol／L 5-羟色胺，并记录张力的变化值。 结果：①在无超敏现象的血管环：5-羟色胺（10^-7-10^-5.5mol／L）使动脉环产生明显的剂量依赖性收缩，除30nmol/L浓度外，1，3，10μmol／L 17β-雌二醇温育后，5-羟色胺量效收缩明显抑制，表现曲线明显右移，血管环对5-羟色胺的敏感性和最大收缩明显降低（P〈0.05，0．01，0．001）。②有超敏现象的血管环10^-7mol／L5-羟色胺引发的是一次快速而短暂的收缩活动，且前3次收缩强度依次加大（P〈0．05），3μmol／L 17 β-雌二醇不能使其压低（P〉0．05），10μmol,／L 17 β-雌二醇和10^-6mol／L维拉帕米则使血管环收缩反应明显降低（P〈0．05,0．01）。 结论：5-羟色胺受体密度的不同可能是超敏现象发生的原因，有可能是变异性心绞痛发生发展的病理基础，这种现象也存在于人以外的其他动物种群。     

青蒿琥酯对小鼠宫颈癌U14细胞体内外抑制作用的研究

目的观察青蒿琥酯（Art）对小鼠宫颈癌U14细胞体外增殖的影响以及对U14荷瘤小鼠肿瘤生长的影响。方法四氮甲唑兰染色法（NTT法）检测不同浓度Art对体外培养的U14细胞增殖的影响;同时建立小鼠U14腹水瘤和实体瘤模型,分别用Art200mg／（k9·d）、100mg／（kg·d）、50mg／（kg·d）、顺铂2mg／（kg·d）、Art50mg／（kg·d）加顺铂1mg／（kg·d）治疗U14腹水瘤和实体瘤小鼠,生理盐水为对照组。观察实体瘤抑瘤率,腹水瘤的生命延长率。结果MTr法结果显示Art在体外对小鼠U14细胞增殖有明显抑制作用,其半抑制率（IC50）为62．77μg／ml;不同剂量Art组及阳性对照组和联合用药组对小鼠宫颈癌实体瘤抑瘤率分别为52．59％、44．44％、31．84％、61．45％和51．85％,Art大剂量组抑瘤率明显高于小剂量组（P〈0．05）,但大剂量与中剂量、中剂量与小剂量间抑瘤率差异无显著性（JP〉0．05）;腹水瘤组生命延长率分别为76．7％、45．0％、31．7％、100％和93．3％,Art大剂量组生命延长率明显高于中小剂量组（P〈0．05）。结论Art对小鼠宫颈癌U14细胞具有明显的抑制作用,其中大剂量抑瘤效果明显优于小剂量组。