胎鼠胰腺干细胞体内移植向胰岛样细胞团的分化

背景：由于干细胞的转分化受细胞外基质和基因程序的调控，因此在体外很难模拟体内干细胞巢的微环境而使干细胞定向分化，或许干细胞原位移植是可行方法之一。 目的：探讨胎鼠胰腺干细胞在糖尿病鼠体内不同部位移植后分化为胰岛细胞团的可能性。 设计、时间及地点：细胞学体内观察，于2006-03/2007-04在深圳市人民医院中心实验室完成。 材料：16 d龄SD胎鼠12只，10周龄200~250 g的SD雌鼠50只，均由广东省实验动物中心提供。 方法：分离纯化胎鼠胰腺干细胞，经荧光原位杂交检测为雄性的第5代胎鼠胰腺干细胞用于体内移植。50只SD雌鼠取10只作为正常对照组，余40只通过腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型，造模后分为4组：胰腺实质内移植组在胰腺实质内多点注射1×106个雄性胎鼠胰腺干细胞，肝内移植组行门静脉穿刺注射等量细胞悬液，肾包膜下移植组于左肾包膜下注射等量细胞悬液，模型对照组胰腺实质内多点注射相同体积的PBS液，10只/组，培养8周。 主要观察指标：定期监测大鼠血糖及血浆胰岛素水平，观察胰腺、肝脏及肾脏组织病理学变化。 结果：雄性胎鼠胰腺干细胞培养传3代后，巢蛋白阳性细胞率为74.1%。胰腺实质内移植组在移植后第3周血糖开始下降，血浆胰岛素水平逐渐升高；第5周血糖降至正常水平并维持，血浆胰岛素达到正常水平，病理学观察在胰腺内可见外源性胰岛样细胞团，胰岛素免疫组化染色呈阳性，巢蛋白免疫组化染色呈强阳性，荧光原位杂交检测Y染色体呈阳性。肝内移植组、肾包膜下移植组大鼠仍维持高血糖状态，相应组织内均未见外源性细胞团形成。 结论：分离纯化的胎鼠胰腺干细胞在胰腺内原位移植后，于体内可转分化为胰岛样细胞团，并使血糖降至正常水平。     

脐带源间充质干细胞与大鼠胰腺细胞共培养向胰岛样细胞分化及移植治疗1型糖尿病★

背景：脐带Wharton’s Jelly中间充质干细胞可以向胰岛样细胞诱导分化。 目的：验证脐带源间充质干细胞与大鼠胰腺细胞共培养向胰岛样细胞诱导分化的可能性，并观察移植后对糖尿病大鼠血糖的影响。 方法：分离、诱导、传代脐带Wharton’s Jelly中间充质干细胞，再与大鼠胰腺细胞共培养，诱导成胰岛细胞团样组织。将大鼠分为3组，正常对照组不进行移植及造模；模型组仅制备糖尿病大鼠模型；实验组造模后将胰岛样细胞移植入糖尿病大鼠肾脏包膜。 结果与结论：脐带Wharton’s Jelly细胞培养中有细胞从组织块中爬出，第7天形态发生变化，贴壁细胞部分变成梭形。分离培养的细胞表达具有间充质干细胞表面特有标志CD44、CD29、CD105，不表达CD34、CD45、CD14。诱导第7，10天PDX-1及人胰岛素强染色；胰岛素及C-肽浓度较单纯培养组明显升高；PDX-1及人胰岛素mRNA诱导第7、10天较高表达。移植第1周大鼠尾尖血糖链脲佐菌素实验组明显低于模型组(P < 0.01)，但明显高于正常照组(P < 0.01)。8周链脲佐菌素实验组肾脏被膜下发现胞核染棕色染色的Brdu阳性、胞浆棕色染色的胰岛素阳性细胞。结果表明，脐带Wharton’s Jelly中存在脐带源间充质干细胞，与大鼠胰腺细胞共培养可促进间充质干细胞向胰岛样细胞诱导分化，移植入糖尿病大鼠肾脏被膜下，可显著降低糖尿病大鼠血糖。     

HU-MSCS诱导为胰岛样细胞移植治疗糖尿病大鼠的研究

摘要目的: 观察人脐带间充质干细胞体外诱导分化为胰岛β样细胞及治疗糖尿病大鼠的效果方法：经培养，当细胞融合至70%~80%，诱导人脐带间充质干细胞向胰岛样细胞团分化，并用双硫腙染色法进行鉴定。采用完全随机法将40只SD大鼠分为正常对照组6只，链脲佐菌素组34只。空腹12h后，链脲佐菌素组腹腔注射链脲佐菌素（70mg/kg）和柠檬酸钠缓冲液(0.1 mol/L) 。大鼠分别于注射前、后48 h、第5 d和第8 d空腹断尾采血, 测定全血血糖浓度。选用连续2次血糖浓度高于16.7mmol/L的大鼠作为糖尿病模型。采用完全随机法从已成模的糖尿病大鼠中选出30只分为3组：胰岛样细胞移植组12只，进行肾被膜下胰岛样细胞团移植, 每只大鼠注入胰岛样细胞2×106 个；脐带间充质干细胞组12只，肾被膜下注入未进行诱导的脐带间充质干细胞, 细胞数2×106个；糖尿病对照组6 只, 肾被膜下移植不含细胞的培养液。3 组大鼠均于移植前及移植后48 h 测定空腹血糖浓度, 每周定点测空腹血糖及称体重1次。结果:（1）成功将人脐带间充质干细胞体外诱导分化为胰岛样细胞团, 双硫腙染色阳性。（2）胰岛样细胞团移植组大鼠移植2周，血糖浓度显著降低, 且血糖下降的趋势一直维持至第6周。脐带间充质干细胞组移植2周，血糖浓度显著下降，但是4周后血糖浓度出现上升。糖尿病对照组大鼠血糖浓度一直处于糖尿病血糖浓度范围内。结论：人脐带间充质干细胞体外可诱导分化为胰岛样细胞团，并对糖尿病大鼠有治疗作用。     

人脐带间充质干细胞体外向胰岛样细胞诱导分化及其治疗糖尿病效果

背景：相对于其他来源的干细胞而言，脐带间充质干细胞免疫排斥反应和免疫原性较小，但并不等同于无任何免疫排斥反应。 目的：观察人脐带间充质干细胞体外向胰岛样细胞的诱导分化，及其移植后对糖尿病大鼠的治疗效果。 设计、时间及地点：细胞学体内对照观察，于2008-11在辽宁医学院解剖学教研室实验室完成。 材料：清洁级雄性SD大鼠36只，随机分为4组：胰岛样细胞组12只、间充质干细胞组12只、模型对照组6只、正常对照组6只。人脐带间充质干细胞由天津国家干细胞中心提供。 方法：取传至第3代的人脐带间充质干细胞，待细胞融合至70%~80%后，换用含碱性成纤维细胞生长因子、尼克酰胺的DMEM高糖培养基，向胰岛样细胞诱导分化。除正常对照组外，其余3组大鼠均腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型。造模后，胰岛样细胞组于肾被膜下植入胰岛样细胞2×106个，间充质干细胞组同法植入等量未诱导的脐带间充质干细胞，模型对照组植入不含任何细胞的培养液1 mL。 主要观察指标：诱导后胰岛样细胞的鉴定，胰岛样细胞的移植效果。 结果：诱导前脐带间充质干细胞呈长梭形贴壁生长；诱导4 d后细胞向中央聚集，出现胰岛样细胞团，此后胰岛样细胞团逐渐增大且数量增多；诱导7 d双硫腙染色呈阳性表达。移植后2周，胰岛样细胞组血糖浓度明显降低，一直维持至第6周；间充质干细胞组血糖浓度在移植后很快下降，但4周后血糖浓度上升；模型对照组血糖浓度一直处于糖尿病血糖浓度范围内。免疫组化染色结果显示，移植后4周胰岛样细胞组胰腺管腔内可见大量胰岛素表达，间充质干细胞组仅有表达少量胰岛素，正常对照组胰岛素表达无明显变化。 结论：人脐带间充质干细胞体外可诱导分化为胰岛样细胞。与脐带间充质干细胞相比，胰岛样细胞能够较长时间维持大鼠血糖浓度在正常水平，且植入后可迅速发挥降糖作用。     

不同方法移植骨髓间充质干细胞治疗大鼠糖尿病的疗效比较

背景：目前多数研究集中于探讨骨髓间充质干细胞移植后的转分化及其调控机制，而缺少干细胞移植治疗糖尿病的方法学和功能学研究。 目的：观察不同途径移植骨髓间充质干细胞对糖尿病模型鼠的治疗效果。 设计、时间及地点：随机对照动物实验，于2008-03/11在深圳市人民医院临床研究中心完成。 材料：1周龄雄性SD大鼠4只，用于制备骨髓间充质干细胞。8周龄雌性SD大鼠32只，随机分为胰腺包膜下移植组、静脉移植组、糖尿病对照组、正常对照组，8只/组。 方法：全骨髓法体外分离培养大鼠骨髓间充质干细胞，贴壁法纯化扩增。胰腺包膜下移植组、静脉移植组、糖尿病对照组大鼠通过腹腔注射链脲佐菌素建立糖尿病模型。造模后，胰腺包膜下移植组取5×106个第3代骨髓间充质干细胞，重悬于0.2 mL PBS中，多点注射至胰腺包膜下；静脉移植组经股静脉注射等量骨髓间充质干细胞悬液；糖尿病对照组及正常对照组不接受任何处理。 主要观察指标：动态观察移植后血糖、胰岛素、C-肽水平变化，以及糖耐量实验结果。 结果：与糖尿病对照组比较，移植后30 d内胰腺包膜下移植组和静脉移植组血糖值均明显降低(P < 0.05)，且胰腺包膜下移植组下降幅度更为显著(P < 0.05)；移植后第2，4，6周胰腺包膜下移植组与静脉移植组的胰岛素、C-肽水平均明显升高(P < 0.05)，且胰腺包膜下移植组升高幅度更为显著(P < 0.05)，但仍低于正常对照组(P < 0.05)。糖耐量实验中腹腔注射葡萄糖后，胰腺包膜下移植组血糖水平30 min达峰值，90 min降低至空腹水平，接近正常对照组的葡萄糖处理能力；静脉移植组对葡萄糖的处理能力略强于糖尿病对照组(P < 0.05)，但此2组在180 min内均未能恢复到正常血糖水平。 结论：骨髓间充质干细胞移植途径与糖尿病的治疗效果有直接关系，胰腺包膜下移植效果优于静脉移植。     

食源性肥胖大鼠2型糖尿病模型的建立

背景：高脂饮食加小剂量链脲佐菌素是目前国内最常用的2型糖尿病大鼠造模方式，但高脂饮食仅能诱导50%大鼠发生胰岛素抵抗，因此还需寻找更理想的2型糖尿病大鼠建模方法。 目的：选择食源性肥胖大鼠进行小剂量链脲佐菌素腹腔注射，建立更理想的2型糖尿病动物模型。 方法：将SD大鼠随机分成对照组和高脂饮食组。4周后，据大鼠体质量将高脂饮食组分为食源性肥胖组和食源性肥胖抵抗组。8周后，所有大鼠均给予小剂量链脲佐菌素(30 mg/kg)腹腔注射，将注射10 d后空腹血糖> 7.8 mmol/L且稳定2周以上者纳为2型糖尿病大鼠模型。检测各组大鼠的空腹血糖、血脂、胰岛素；评价各组大鼠的胰岛素抵抗程度；比较各组大鼠的2型糖尿病成模率。 结果与结论：与对照组及食源性肥胖抵抗组相比，食源性肥胖组大鼠出现明显的体质量增加、高血脂、高胰岛素血症及胰岛素抵抗(P < 0.01)。注射链脲佐菌素后食源性肥胖组2型糖尿病成模率高达100%，食源性肥胖抵抗组成模率仅为12.5%。由结果可知选择食源性肥胖组大鼠作为2型糖尿病造模对象，是2型糖尿病造模方法的成功改良。     

体外转染绿色荧光蛋白基因的肌源性干细胞移植修复大鼠脊髓损伤

背景：肌源性干细胞易于提取、分离及扩增,在特定条件下可分化为骨、软骨、肌肉等中胚层组织细胞,还可以跨胚层分化为神经细胞等,是组织工程临床用于脊髓损伤修复的理想种子细胞。 目的：观察肌源性干细胞移植对脊髓半切损伤大鼠运动功能的修复作用。 方法：40只成年SD大鼠随机数字表法分为移植组和对照组,每组20只。均进行脊髓半切损伤,伤后9 d,移植组于伤处移植体外转染绿色荧光蛋白基因的大鼠肌源性干细胞,而对照组仅注射等量PBS,于移植后1,2,3,4周用斜板实验和BBB评分测大鼠的运动功能,同时进行损伤脊髓取材、快速冰冻切片进行荧光显微镜观察。 结果与结论：所有大鼠脊髓半切损伤手术均成功,术后无动物死亡。肌源性干细胞移植后1周,移植组与对照组均有所恢复,斜板实验和BBB评分差异无显著性意义(P > 0.05);2~4周移植组恢复明显较好,斜板实验和BBB评分显著高于对照组(P < 0.05),移植组后肢活动与前后肢活动的协调性明显优于对照组。荧光显微镜观察经诱导分化和基因标记的肌源性干细胞在损伤脊髓组织局部生长良好,并且有沿着脊髓神经束向头尾两侧迁移的趋势。提示脊髓半切损伤大鼠经肌源性干细胞移植后能在损伤脊髓组织局部长期存活并明显改善其运动功能,肌源性干细胞移植对脊髓半切损伤大鼠有修复作用。 关键词：肌源性干细胞;移植;脊髓损伤;绿色荧光蛋白;大鼠     

大鼠肌源性干细胞移植对失神经腓肠肌萎缩进程的影响

背景：目前，国内外有关肌源性干细胞移植的研究主要集中在治疗肌营养不良性萎缩症方面，尚未见涉及将肌源性干细胞应用于失神经肌萎缩综合治疗的报道。 目的：探讨大鼠肌源性干细胞移植对失神经腓肠肌萎缩进程的影响。 设计、时间及地点：随机对照动物观察，于2007-02/2008-07在沈阳医学院完成。 材料：成年健康雄性Wister大鼠19只，由沈阳医学院实验动物中心提供。 方法：取3只大鼠，无菌条件下切取肱三头肌，体外分离培养肌源性干细胞，贴壁法纯化扩增。余16只大鼠均切断右后肢胫神经，建立失神经腓肠肌模型，分为2组：细胞移植组于已切断的胫神经支配的腓肠肌的内外侧注射经DAPI标记的肌源性干细胞悬液0.2 mL，模型对照组于相同位置注射等量生理盐水，培养4周。 主要观察指标：采用计算机生物信号采集处理系统测定反映肌张力的腓肠肌阈强度恢复率和最适强度恢复率变化，通过电子天平计算肌湿质量残存率，应用图像分析系统测定肌纤维横截面积残存率。 结果：与模型对照组比较，细胞移植组失神经腓肠肌的阈强度恢复率、最适强度恢复率均明显降低(P < 0.01，P < 0.05)，肌湿质量残存率、肌纤维横截面积残存率均明显升高(P < 0.01)。 结论：肌源性干细胞移植对大鼠失神经肌萎缩进程有较明显的延缓作用。     

神经干细胞移植对脑出血模型大鼠神经功能的影响☆

背景：外源性神经干细胞具有神经修复作用，可能对脑出血后的神经功能恢复起到一定的作用。 目的：观察胎鼠神经干细胞的体外生长、分化及移植到脑出血大鼠后的存活、迁徙、分化情况，探讨神经干细胞对脑出血模型大鼠受损神经功能的修复作用。 设计：完全随机分组设计，对照动物实验。 单位：复旦大学附属华山医院神经外科 材料：选用健康雄性成年SD大鼠18只为受体，体质量280~320 g，由中国科学院上海实验动物中心提供。实验用鼠抗BrdU为Neomarkers产品, 鼠抗胶质纤维酸性蛋白和兔抗微管相关蛋白2 为Chemicon产品。 方法：实验于2006-02/12在复旦大学附属上海医学院解剖组胚实验室完成。从胎龄14 d的胎鼠海马中分离、培养、鉴定神经干细胞。16只受体SD大鼠被随机分为3组：对照组，PBS组和移植神经干细胞组。均通过尾状核内注射自体动脉血制作大鼠脑出血模型。移植NSC组在造模后30 min在血肿腔周围四点分别移植浓度为2×1011 L-1神经干细胞悬液5μL；PBS组于相同时间点在脑内相同部位注射PBS；PBS和神经干细胞的移植方法同自体血的移植方法。对照组大鼠在造模后30 min只造成四点损伤，不注射任何物质。 主要观察指标：在造模后立即，1，3，5，14，21，28 d采用前肢评分和转身评分对大鼠神经功能进行评估。大鼠于造模后28 d麻醉后取脑，并通过双标胶质纤维酸性蛋白、微管相关蛋白2、BrdU免疫组化来检测移植入脑的神经干细胞在体内的分化情况。 结果：①神经功能评分：造模后5 d，各组差异无显著性意义（P > 0.05）。造模后14~28 d，干细胞移植组较其他3组明显改善（P < 0.05）。②脑组织切片双免疫组织学双标染色结果：干细胞移植组血肿周围凋亡细胞少于PBS组。受体大鼠脑组织切片显示有BrdU, 微管相关蛋白2,胶质纤维酸性蛋白阳性细胞，说明神经干细胞可以在宿主脑内存活、迁徙和分化，可以分化为神经元样细胞和神经胶质样细胞。 结论：神经干细胞移植可能通过分化为神经元样细胞和神经胶质细胞促进大鼠脑出血的神经功能恢复。     

脑源性神经营养因子基因修饰骨髓间质干细胞移植对痴呆大鼠记忆功能的影响

背景：一些研究已显示，重组脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间质干细胞具有向神经样细胞分化的潜能，且能提高脑缺血模型鼠的神经缺失功能。 目的：拟进一步观察脑源性神经营养因子基因修饰的骨髓间质干细胞移植对阿尔茨海默病鼠学习记忆能力的改善。 设计、时间及地点：随机对照动物观察，于2006-01/2007-06在中山大学一附院神经病学实验室完成。 材料：清洁级8周龄雄性SD大鼠48只，随机分为正常对照组、损伤模型组、基因修饰细胞组、未修饰细胞组，12只/组。另取出生3 d的清洁级SD大鼠10只，用于骨髓间质干细胞的分离培养。 方法：取传至第6代的骨髓间质干细胞，双酶切后亚克隆至pcDNA3质粒，行增强型绿色荧光蛋白基因转染，采用电穿孔法得到重组腺病毒Ad-BDNF，转染293细胞进行病毒包装。除正常对照组外，其余3组大鼠均建立阿尔茨海默病模型。造模后12 d，基因修饰细胞组取重组腺病毒脑源性神经营养因子基因修饰的不含血清骨髓间质干细胞悬液，于伤侧侧脑室坐标前囟后1.6 mm、外侧1.5 mm、腹侧4.0 mm注入8 μL；未修饰细胞组移植等量的单纯骨髓间质干细胞悬液。 主要观察指标：Western blotting法鉴定重组病毒在骨髓间质干细胞中表达，流式细胞仪检测基因感染效率。细胞移植后2周采用Morris水迷宫检测大鼠学习记忆能力。 结果：Ad-BDNF感染的骨髓间质干细胞存在Mr14 000的脑源性神经营养因子蛋白条带，2 d后约34%骨髓间质干细胞被感染。基因修饰细胞组、未修饰细胞组大鼠平均逃避潜伏期均明显低于损伤模型组（P < 0.01），且前者基本达到正常水平。与损伤模型组寻找平台的运动策略比较，基因修饰细胞组与未修饰细胞组趋向式、直线式显著增多（P < 0.01），边缘式、随机式明显减少（P < 0.01），且前者基本达到正常水平。 结论：移植的骨髓间质干细胞经脑源性神经营养因子基因修饰后，可明显改善阿尔茨海默病模型鼠的记忆能力。     

Stem cell transplantation for treatment of cerebral ischemia in rats Effects of human umbilical cord blood stem cells and human neural stem cells

BACKGROUND:Exogenous neural stem cell transplantation promotes neural regeneration. However, various types of stem cells transplantation outcomes remain controversial. OBJECTIVE:To explore distribution, proliferation and differentiation of human neural stem cells (hNSCs) and human umbilical cord blood stem cells (hUCBSCs) following transplantation in ischemic brain tissue of rats, and to compare therapeutic outcomes between hNSCs and hUCBSCs. DESIGN, TIME AND SETTING:Randomized controlled animal studies were performed at the Experimental Animal Center of Nanjing Medical University and Central Laboratory of Second Affiliated Hospital of Nanjing Medical University of China from September 2008 to April 2009. MATERIALS:hNSCs were harvested from brain tissue of 10-13 week old fetuses following spontaneous abortion, and hUCBSCs were collected from umbilical cord blood of full-term newborns at the Second Affiliated Hospital of Nanjing Medical University of China. hNSCs and hUCBSCs were labeled by 5-bromodeoxyuridine (BrdU) prior to transplantation. METHODS:Rat models of cerebral ischemia were established by the suture method. A total of 60 healthy male Sprague Dawley rats aged 7-9 weeks were randomly assigned to hNSC transplantation, hUCBSC transplantation and control groups. The rat models in the hNSC transplantation, hUCBSC transplantation and control groups were infused with hNSC suspension, hUCBSC suspension and saline via the caudal vein, respectively. MAIN OUTCOME MEASURES:The distribution, proliferation and differentiation of hNSCs and hUCBSCs in ischemic brain tissue were observed using immunohistochemical methods. Neurological function in rats was assessed using the neurological severity score. RESULTS:The number of BrdU-positive cells was significantly greater in the hNSC transplantation group compared with hUCBSC transplantation group at 14 days following transplantation (P < 0.05). The number of BrdU-positive cells reached a peak at 28 days following transplantation. Nestin-positive, glial fibrillary acidic protein-positive, cyclic nucleotide 3' phosphohydrolase-positive and neuron specific enolase-positive cells were visible following transplantation. No significant difference was determined in the constituent ratio of various cells between hNSC and hUCBSC transplantation groups (P > 0.05). The neurological severity score was significantly decreased in rats at 21 days following transplantation (P < 0.05). No significant difference was detected in neurological severity score between hNSC and hUCBSC transplantation groups at various time points (P > 0.05). CONCLUSION:The transplanted hNSCs and hUCBSCs can migrate into ischemic brain tissue, proliferate and differentiate into neuron-like, astrocyte-like and oligodendrocyte-like cells, and improve neurological function in rats with cerebral ischemia.     

局部注射骨髓间充质干细胞治疗大鼠脊髓损伤：运动功能有改善吗？

背景：目前研究多为骨髓间充质干细胞的体外培养及细胞移植对颅内疾病的治疗,对植入细胞在损伤脊髓中的成活、分化、迁移、结构重建等了解有限。 目的：探讨局部骨髓间充质干细胞移植在脊髓损伤修复中的作用和骨髓间充质干细胞替代治疗的可行性。 方法：成年健康雌性SD大鼠随机分为细胞移植组和对照组,建立SD大鼠脊髓横断损伤模型,伤后即刻分别向损伤区局部移植大鼠骨髓间充质干细胞悬液或无钙镁磷酸缓冲液。在术前和术后1 d,1周,2周,3周,4周和8周进行BBB评分,观测大鼠的运动功能,并于移植后1周免疫组织化学染色法观察BrdU标记的骨髓间充质干细胞在脊髓损伤处的存活情况,移植后4周进行损伤脊髓的大体观察和组织学检测。 结果与结论：移植后第1~8周细胞移植组BBB评分均髙于对照组;术后1周免疫组织化学染色结果显示在细胞移植组大鼠脊髓远端检测到BrdU阳性细胞,术后4周脊髓损伤处发现有神经纤维。证实通过损伤后立即局部注射的方式将骨髓间充质干细胞移植进大鼠脊髓损伤区,细胞可在损伤区存活;存活的骨髓间充质干细胞可分化为神经元,在损伤局部形成神经元通路,从而促进脊髓神经纤维传导功能的恢复,并促进高位脊髓损伤后大鼠后肢运动功能恢复。     

基于细胞支架大鼠原位移植肝癌模型的制备

超声引导下瘤细胞注射法已应用于制备大鼠原位移植肝癌模型,但成瘤率不高,且易形成腹腔种植。 目的：实验拟采用细胞基质胶Matrigel包裹瘤细胞,超声引导下注射到大鼠肝内制备肝癌模型,以提高成瘤率,减少腹腔种植。 设计、时间及地点：验证性实验,于2007-12/2008-03在福建医科大学药学院药理系动物实验室完成。 材料：取Wistar大鼠20只,按随机数字表法分为瘤细胞悬液注射组和瘤细胞Matrigel注射组,每组10只。 方法：取大鼠皮下移植的Walker-256肿瘤组织匀浆制备细胞悬液,在超声引导下注射到10只瘤细胞悬液组大鼠肝实质内,每只2×106个细胞。瘤细胞与Matrigel混合后,超声引导下注射到瘤细胞Matrigel组10只大鼠肝内。 主要观察指标：定期超声监测大鼠肝脏移植肿瘤生长情况,移植后第21天麻醉处死动物进行大体解剖,取肿瘤行病理组织学检查。 结果：瘤细胞Matrigel组10只大鼠有9只形成了肝脏移植肿瘤灶,仅1只大鼠发生腹腔种植。瘤细胞悬液组10只大鼠仅6只出现肝脏移植肿瘤灶,而发生腹腔种植达6只。大鼠原位移植肝癌病理切片显示典型的肿瘤组织形态学特征。 结论：采用Matrigel作为细胞支架制备大鼠肝癌模型可提高成瘤率,明显降低腹腔种植的发生率,是一种较为理想的大鼠原位移植肝癌模型制备方法。     

造血干细胞与神经生长因子联合移植治疗脑梗死

背景：目前采用外周血造血干细胞移植治疗脑缺血方面的研究还比较少,缺乏大量、系统的实验数据。神经生长因子可调控神经元再生所需的微环境,对神经细胞的存活、增殖起重要作用。 目的：观察造血干细胞移植后,神经生长因子对其在脑梗死大鼠脑内的存活、分化及神经功能的影响。 设计：随机对照动物实验。 材料：清洁级成年雄性SD大鼠120只,随机分为3组：单纯细胞移植组、细胞移植+神经生长因子组、模型对照组,40只/组。神经生长因子为北大之路药业有限公司产品。 方法：大鼠颈部皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子后,密度梯度离心法分离培养造血干细胞,移植前行Brdu标记。3组大鼠根据改良Longa线栓法建立大脑中动脉闭塞模型,造模后7 d,大鼠麻醉后暴露前囟,选取注射位点：前囟后方1.2 mm,中线向右旁开3 mm,硬膜下4 mm。单纯细胞移植组缓慢注入1×106个造血干细胞,细胞移植+神经生长因子组注入1×106个造血干细胞+200 ng神经生长因子,模型对照组给予等量磷酸盐缓冲液。 主要观察指标：采用神经功能缺损评分检测神经功能的改善情况,免疫组化染色观察梗死半球Brdu/CD34、Brdu/Nestin、Brdu/NSE、Brdu/vWF双阳性细胞的分布,TCC染色观察梗死体积的变化。 结果：与移植前比较,移植后1,2周仅细胞移植+神经生长因子组神经功能缺损评分均明显下降(P < 0.05),移植后3,4周各组神经功能缺损评分均明显下降(P < 0.05或0.01),且细胞移植+神经生长因子组下降幅度尤为显著(P < 0.01)。移植后1周,细胞移植+神经生长因子组Brdu/CD34、Brdu/Nestin、Brdu/NSE、Brdu/vWF双阳性细胞数明显多于单纯细胞移植组(P < 0.01);第4周两组未见Brdu/CD34双阳性细胞,Brdu/Nestin较1周时减少,Brdu/NSE、Brdu/vWF双阳性细胞均明显增多(P < 0.05),且细胞移植+神经生长因子组明显多于单纯细胞移植组(P < 0.01);模型对照组始终未见Brdu双阳性细胞。 结论：神经生长因子对外源性移植的造血干细胞在局灶性脑梗死大鼠脑内存活、分化以及神经功能的恢复具有明显促进作用。     

异体骨髓间充质干细胞治疗大鼠糖尿病足溃疡及血管内皮生长因子的表达☆

背景：目前在临床多采用自体骨髓干细胞及自体外周血干细胞治疗糖尿病足溃疡,少见利用骨髓间充质干细胞治疗糖尿病足溃疡的基础研究。 目的：观察局部移植异体骨髓间充质干细胞治疗大鼠糖尿病足溃疡的效果及血管内皮生长因子的全身及局部表达情况。 方法：取雄性Wistar大鼠90只,随机数字表法分为3组：对照组(正常足部溃疡)、干细胞治疗组、糖尿病对照组。干细胞治疗组、糖尿病对照组建立2型糖尿病足溃疡模型,造模后分别注射同种异体骨髓间充质干细胞、干细胞培养基DMEM。造模后第1,4,8天观察各组大鼠溃疡面积、细胞核染色示踪及病理学检查,ELISA法测外周血血管内皮生长因子浓度、Western-blotting法测局部血管内皮生长因子浓度。 结果与结论：与糖尿病对照组比较,干细胞治疗组溃疡愈合速度迅速,但仍较对照组愈合缓慢,外周血中血管内皮生长因子表达增高,也未达到正常水平。异体干骨髓间充质干细胞治疗前期(1~4 d)能明显提高局部血管内皮生长因子浓度,但在后期(8 d)局部浓度提高不足。干细胞治疗组愈合缓慢,表皮覆盖不完全,但较糖尿病对照组愈合明显提前,表皮覆盖较明显;细胞核染色示移植后干细胞均聚集于溃疡区周围。提示异体移植骨髓间充质干细胞可促进大鼠糖尿病足溃疡的愈合,其促进愈合的可能机制为其上调了血管内皮生长因子在全身尤其局部的表达。     

丝胶干预2型糖尿病大鼠海马及大脑皮质血红素加氧酶1的表达

目的：探讨丝胶对2型大鼠海马及大脑皮质血红素加氧酶1（HO-1）表达的影响。方法：30只雄性SD大鼠随机分为3组,正常对照组、糖尿病模型组和丝胶治疗组,每组10只。糖尿病模型组和丝胶治疗组大鼠均采用链脲佐菌素连续腹腔注射建立2型糖尿病大鼠模型,以血糖≥16.7mmol/L作为成模标准。待模型成功建立后,模型组大鼠不再作任何处理,丝胶治疗组大鼠给予丝胶（2.4g/kg/d）灌胃35天。HE染色观察海马和大脑皮质的形态变化;分别采用Western Blotting和RT-PCR法检测海马和大脑皮质HO-1蛋白及mRNA的表达。结果：糖尿病模型组大鼠海马及大脑皮质的神经细胞均出现明显的病理变化,HO-1蛋白及mRNA的表达明显高于正常对照组大鼠（P＜0.01）。丝胶治疗组大鼠海马、大脑皮质神经细胞的病理变化明显减轻,HO-1蛋白及mRNA的表达明显低于模型组大鼠（P＜0.01,P＜0.05）。结论：丝胶可通过下调海马及大脑皮质HO-1的表达,减轻糖尿病时HO-1高表达对海马及大脑皮质神经细胞的毒性损害,发挥对糖尿病神经系统损伤的保护作用。     

脂肪来源神经干细胞移植局灶性脑缺血模型大鼠的血管新生

背景：脂肪组织来源的神经干细胞移植可改善脑缺血大鼠神经功能,但其机制尚不明确。 目的：观察人脂肪组织来源神经干细胞移植对大鼠局灶性脑缺血后血管新生的影响。 方法：体外培养脂肪基质细胞,诱导分化为神经干细胞。60只健康雄性SD大鼠分为4组：正常组6只,假手术组6只,缺血对照组24只,移植治疗组24只。后两组线栓法制作大鼠大脑中动脉缺血2 h再灌注模型,又分为缺血2 h再灌注7,14,21,28 d组,每个时点各6只。假手术组不闭塞大脑中动脉。造模成功后24 h,移植治疗组经尾静脉移植人脂肪组织来源神经干细胞悬液,细胞浓度为2×109 L-1;缺血对照组经尾静脉注射生理盐水。免疫组织化学法进行微血管密度计数,观察脑缺血区血管增生情况。 结果与结论：免疫组织化学结果显示,与缺血对照组比较,移植治疗组缺血2 h再灌注7,14,21,28 d的微血管密度值均显著高于缺血对照组,差异有显著性意义(P < 0.05~0.01)。提示脂肪组织来源的神经干细胞移植可促进脑缺血区新生血管的形成。     

大鼠近交系间原位肝移植急性排斥模型的建立与评价

背景：目前国内常用的封闭群品系大鼠(SD与Wistar大鼠)所建立肝移植急性排斥模型并不理想,易产生肝移植耐受。 目的：通过二袖套法建立稳定的DA-Lewis大鼠原位肝移植急性排斥模型。 方法：实验分为两组：同基因组：Lewis-Lewis 24例;异基因组：DA-Lewis 24例。观察移植后一般情况及移植后存活时间,两组受体分别于移植后3,5,7,10 d随机取3只处死取标本,观察肝脏组织病理变化,测定天冬氨酸转氨酶、总胆红素、细胞因子水平变化。 结果与结论：同基因组大鼠无急性排斥反应表现,中位生存时间超过100 d,肝脏组织发生轻度形态学改变。异基因组大鼠移植后黄疸明显,中位生存时间为11 d,移植后第7天肝脏组织病理表现典型急性排斥反应(Banff国际标准)。同期相比异基因组天冬氨酸转氨酶、总胆红素、细胞因子水平均高于同基因组(P < 0.001)。提示,DA-Lewis是稳定的大鼠肝移植急性排斥模型,是研究肝移植排斥反应及免疫耐受的理想动物模型。     

Xbp-1基因重组神经干细胞移植对大鼠局灶脑缺血再灌注损伤的影响

背景：将转染Xbp-1基因的神经干细胞移植至脑损伤病变部位,不但确保了Xbp-1基因的稳定及持续表达发挥抗凋亡的作用,也可促进移植后神经干细胞的存活与分化能力。 目的：验证Xbp-1基因对移植大鼠脑缺血损伤处神经干细胞的分布、分化、抗凋亡作用及神经功能恢复的影响。 方法：选取成年SD大鼠采用线栓法建立大脑中动脉阻塞模型,并随机分成4组干预：对照组(不作处理)、PBS移植组、神经干细胞移植组、Xbp-1-神经干细胞移植组。于干预后7,14,28 d进行NSS评分,并取脑制备组织切片,免疫荧光染色观察神经干细胞在脑内的存活与分布情况。移植后第28天使用TUNEL染色检测缺血区域神经细胞凋亡情况,Western blot检测Bcl-2表达水平。 结果与结论：移植后7,14,28d Xbp-1-神经干细胞移植组NSS评分显著低于其他3组(P < 0.05);神经干细胞可以成功迁徙到脑缺血区域并成活、分化为成熟神经细胞,Xbp-1基因修饰后的神经干细胞成活、增殖以及分化能力均强于普通神经干细胞(P < 0.05);与其他3组比较,Xbp-1-神经干细胞移植组脑缺血区域神经细胞凋亡数量明显减少,Bcl-2水平升高 (P < 0.05)。证实了Xbp-1基因修饰可以增加神经干细胞存活、迁徙能力,并通过抗内质网应激显著降低移植后大鼠缺血模型的NSS评分,促进其神经功能恢复。