利血平对转染VMAT2基因的CHO细胞抵抗鱼藤酮及多巴胺毒性作用的研究

目的研究单胺囊泡转运蛋白 2（VMAT2）抑制剂利血平（RE）作用于转染VMAT2基因的中国仓鼠卵巢细胞（VMAT2 CHO）时,VMAT2 CHO对鱼藤酮（Rotenone）、多巴胺（DA）的毒性抵抗作用。方法采用MTT比色法检测RE与不同浓度Rotenone及DA共同作用下的VMAT2 CHO细胞存活率;采用流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）水平。结果Rotenone对VMAT2 CHO细胞有毒性作用,随浓度增大,细胞存活率下降;Rotenone和DA对细胞有协同毒性作用。随DA浓度增大,VMAT2 CHO细胞产生的ROS增加;VMAT2抑制剂利血平增加DA的毒性,使同样浓度的DA诱发VMAT2 CHO细胞产生的ROS增加,存活率下降。结论RE使VMAT2功能抑制时DA在胞浆内聚集,触发DA内源性毒性,通过氧化应激系统而发挥毒性作用。DA内源性毒性可协同环境毒物Rotenone增加对细胞的毒性作用。     

氧化应激诱导细胞凋亡通路的研究进展

氧化应激是指由于种种原因,机体有氧代谢产生的活性氧自由基(ROS)增多或和机体自行清除的ROS减少,对大多数细胞产生毒性作用,导致细胞的DNA、蛋白质和脂类破坏的病理性生物化学反应。氧化应激致使细胞氧化损伤,最终导致细胞凋亡。目前研究发现,氧化应激诱导细胞凋亡的通路主要有:Fas通路、P53/MPTP通路、NF-kB通路、JNK通路。本文通过对氧化应激诱导细胞凋亡的通路进行总结,为其诱导机制的进一步研究提供参考。     

氧化应激与肾脏细胞凋亡

氧化应激产生的活性氧(ROS)与细胞凋亡存在密切的关系。ROS可通过激活线粒体、Bcl-2家族、NF-κB及MAPKS家族、Caspase家族等途径引起细胞凋亡,细胞凋亡在肾脏疾病的发病过程中起着重要作用。本文就氧化应激在肾脏疾病发生发展中的作用及其诱导细胞凋亡的机制进行了综述。     

氧化应激及其介导的细胞凋亡在糖尿病肾病中的作用

氧化应激产生的活性氧簇(ROS)在糖尿病肾病(DN)的发病机制中起重要作用.ROS通过激活线粒体、DNA氧化损伤、NF-κB及影响基因表达等途径诱导细胞凋亡,促进DN病的发生发展.减少ROS的生成及阻断ROS产生后所激活的细胞凋亡途径可成为治疗DN的新靶点.     

还原型谷胱甘肽合用粉防己碱对帕金森病大鼠脑线粒体酶复合体I及活性氧的影响

目的 观察还原型谷胱甘肽(GSH)合用粉防己碱(Tet)对帕金森病(PD)大鼠氧化应激水平的影响并探讨其作用机制.方法 应用6-羟基多巴立体定向注射制作PD大鼠模型,将成功大鼠模型随机分为模型组、GSH组、GSH Tet组、左旋多巴组,另设正常对照组,给药50d后测定鼠脑黑质线粒体酶复合体I活性及纹状体活性氧(ROS)含量.结果 GSH Tet对PD大鼠黑质线粒体酶复合体I有保护作用,GSH Tet能明显降低PD大鼠纹状体活性氧(ROS)水平.结论 GSH Tet能减轻PD大鼠黑质及纹状体氧化应激损伤,并对线粒体呼吸链有一定保护作用.     

红细胞抗氧化机制的研究进展

氧化应激(oxidative stress)是指机体在遭受各种有害刺激时,体内高活性分子如活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)和活性氮自由基(reactive nitrogen species,RNS)产生过多,从而导致的细胞和组织损伤。红细胞的携氧功能使其不断暴露于内源性和外源性ROS所引起的氧化损伤中,因此红细胞建立了强大的抗氧化及损伤修复系统来及时清除ROS并保护细胞免受过氧化损伤。本文将重点介绍红细胞抗氧化机制方面的研究进展,以期为减轻红细胞的氧化损伤提供更多思路。     

顺铂诱导肺腺癌H1650细胞线粒体氧化应激损伤的实验研究

目的:研究顺铂诱导肺腺癌H1650细胞氧化应激致线粒体功能损伤。方法:用不同剂量的顺铂(0、0.5、1.0、2.0μg/mL)处理肺腺癌H1650细胞后,分别采用荧光探针DCFH-DA和JC-1检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)及线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)水平,荧光素酶测定细胞内三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)浓度。结果:顺铂处理后,H1650细胞内的ROS含量在5 min时达到最高水平,之后逐渐下降,对照组(培养液不加顺铂)内的ROS含量没有变化。不同浓度顺铂处理细胞24 h后,随着顺铂浓度的增加,细胞的绿色荧光强度逐步增加,红色荧光强度逐步减弱,表明细胞内MMP水平随顺铂浓度的增加而降低。ATP含量测定显示,随着顺铂浓度增加,ATP含量逐步减少。结论:顺铂通过诱导肺腺癌H1650细胞产生ROS导致氧化应激,使MMP降低,ATP含量减少,线粒体功能受损,细胞能量供应受限而发挥抗肿瘤作用。     

全反式维甲酸诱导分化对SH-SY5Y细胞拮抗细胞毒性研究的影响

[目的]观察全反式维甲酸(RA)诱导分化对以人神经母细胞瘤SH-SY5Y作为体外神经毒性研究模型的影响。[方法]RA诱导SH-SY5Y细胞分化并于相差显微镜观察细胞形态学变化;采用MTT法检测细胞活力;通过测定细胞内乳酸脱氢酶(LDH)的释放量观察毒性物质对SH-SY5Y细胞的作用;硝基蓝四氮唑(NBT)还原法检测细胞的还原能力;荧光探针(DCFH-DA)测定细胞内活性氧(ROS)荧光强度。[结果]MTT检测和LDH测定发现,RA诱导SH-SY5Y细胞分化,提高了细胞活力,使SH-SY5Y细胞拮抗其对毒性物质的反应。NBT还原实验和DCFH-DA测定显示,RA诱导分化可降低H2O2诱导的细胞内ROS的水平。[结论]RA通过提高细胞活力而拮抗毒性物质对SH-SY5Y细胞的毒性作用,其作用机制可能与细胞内ROS水平有关。未分化型SH-SY5Y细胞是进行PD疾病的神经毒性实验和神经保护研究的良好细胞模型。     

不同大气颗粒物对人Ⅱ型肺泡上皮细胞的毒性效应比较

目的比较4种大气颗粒物对人Ⅱ型肺泡上皮细胞A549的毒性效应。方法将收集的新乡市冬季大气细颗粒物(PM2. 5)与常用的标准参考颗粒物(柴油机尾气颗粒物DEP-Sagai、SRM 2975及城区扬尘标准颗粒物SRM1649)分别用磷酸盐缓冲液制备成颗粒物悬液,对人肺泡上皮细胞株A549进行24 h不同剂量染毒,采用甲基噻唑基四唑比色法、乳酸脱氢酶(LDH)测定试剂盒、活性氧(ROS)检测试剂盒及人白细胞介素-8(IL-8)酶联免疫吸附试验试剂盒分别检测细胞相对存活率、细胞培养上清液中LDH和IL-8水平、细胞内ROS水平。结果 4种颗粒物均可致A549细胞损伤,且该效应呈剂量依赖性。低剂量SRM 1649即可明显引起细胞死亡,当剂量超过30 mg·L-1后其细胞存活率趋于稳定。4种颗粒物处理的细胞培养上清液中的LDH水平自高至低依次为SRM 2975> SRM 1649> DEPSagai> PM2. 5,IL-8水平自高至低依次为PM2. 5> DEP-Sagai> SRM 2975> SRM 1649; 4种颗粒物均可不同程度地诱导A549细胞内ROS水平升高,在相同剂量下4种颗粒物诱导ROS产生的能力依次为DEP-Sagai> SRM 2975> SRM1649> PM2. 5。结论 4种大气颗粒物在受试剂量范围内均能不同程度地引起A549细胞损伤、氧化应激和炎症反应,且呈剂量效应。     

BPDE诱导GC-1细胞凋亡及褪黑素的保护作用

目的 探讨7,8-二羟-9,10-环氧苯并[a]芘(benzo[a]pyrene-7,8-diol-9,10-epoxide,BPDE)对小鼠精原细胞株GC-1的细胞毒性机制及褪黑素的保护作用.方法 不同浓度BPDE处理GC-1细胞,采用Annexin V/PI染色及流式细胞仪检测细胞凋亡,JC-1探针染色检测线粒体膜电位,Western blot检测细胞质Cyt C及细胞总蛋白中caspase-9/3的活化水平,DCFH-DA探针及流式细胞仪检测细胞内的活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平.褪黑素预处理细胞后再进行BPDE染毒,采用上述方法检测褪黑素对BPDE细胞毒性的影响.结果 BPDE可提高GC-1细胞凋亡率,存在剂量-效应关系.同时,BPDE可降低细胞线粒体膜电位,促进线粒体Cyt C的释放,提高细胞中caspase-9和caspase-3蛋白的活化水平,并诱导细胞中ROS水平升高.褪黑素预处理则可降低BPDE诱导的细胞凋亡,抑制Cyt C的释放及caspase-9/3的活化,并激活Nrf-2/ARE抗氧化通路,降低细胞ROS水平.结论 BPDE可诱导小鼠精原细胞GC-1线粒体途径细胞凋亡和氧化应激,而褪黑素在这一过程中起保护作用.     

干预脂毒性改善糖尿病大鼠胰岛素分泌及氧化应激的损害

目的 探讨干预脂毒性改善糖尿病大鼠胰岛分泌功能及氧化应激损害的机制.方法 将大鼠分为4组①正常组(NC),全程普通饲料喂养;②高脂组(HF),全程高脂饲料喂养.糖尿病组,高脂饲料喂养8周后腹腔注射低剂量STZ (30 mg/kg),48 h后行OGTT试验判断成模情况后分组.③糖尿病对照组(DM),不给予药物干预;④血脂干预组(SIM),灌胃辛伐他汀5mg/(kg·d)4周干预脂毒性.通过免疫组化染色观察胰岛B、A细胞形态学特点,RT-PCR测定胰腺内胰岛素原mRNA表达水平,DHE荧光染色检测胰岛中活性氧化产物ROS水平.结果 与糖尿病对照组相比,干预脂毒性4周后血清胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)水平分别下降了22.9% (P<0.01) 和57.0% (P<0.05).OGTT血糖水平均显著下降 (P<0.01).胰岛中B细胞相对量是对照组的2.6倍(P<0.01),B细胞胞质内胰岛素水平增加了26.5% (P<0.05),胰岛素原mRNA表达升高18.3% (P<0.01);A细胞相对量减少了50% (P<0.01).血清丙二醛(MDA)水平和胰腺中ROS表达显著下降.结论 辛伐他汀干预脂毒性4周可以显著改善糖尿病大鼠胰岛分泌功能和氧化应激损害.     

脑梗死运动障碍患者早期康复治疗与氧化应激的关系

目的研究脑梗死早期运动障碍患者经过康复治疗后,体内氧化应激水平的改变并探讨其机制。方法回顾性对比分析2010年3月至2012年12月本院神经内科住院的脑梗死早期康复治疗患者与未做康复治疗患者各45例临床资料,采用临床神经功能缺损程度评分标准评定脑患者的病情严重程度,检测入院时及治疗后血中ROS、SOD水平,对日常生活活动能力(Barthel指数)及运动功能(FMA)进行评定,并做出统计学分析。结果治疗前两组患者间FMA评分、Barthel指数、血清中ROS及SOD水平比较差异均无统计学意义(P0.05),经过不同治疗3周后,两组患者间FMA评分、Barthel指数、血清中ROS及SOD水平较治疗前均有统计学意义(P0.05)。结论脑梗死后康复锻炼可降低体内氧化应激,减轻其对机体的损害作用。     

抗氧化剂的研究进展

氧化应激是指机体在遭受各种有害刺激时,体内的氧化分子如活性氧自由基(ROS)和活性氮自由基(RNS)产生过多,超出了氧化物的清除能力,产生了氧化还原的失衡状态,是导致疾病的重要因素之一。抗氧化剂(Antioxidants)能够清除自由基或阻断自由基参与氧化反应,显著降低氧化应激水平。近年来,发现抗氧化剂不仅仅与自由基作用,还可参与机体其他生理功能的调节。本文就抗氧化剂对机体的作用进行综述。     

氧化应激对铁过载造血干祖细胞造血功能的影响

目的 体外诱导脐血来源的造血干祖细胞铁过载,检测参与氧化应激的活性氧物质(ROS)的水平以及对造血干祖细胞造血功能的影响.方法 通过体外培养脐血单个核细胞(MNC)的过程中添加枸橼酸铁铵(FAC),建立铁过载造血干祖细胞模型.实验分组:对照组、FAC组、FAC+N-乙酰半胱氨酸(NAC)组、FAC+谷胱甘肽(GSH)组.检测各组细胞内ROS水平,并用抗氧化剂处理,检验这一过程中ROS、细胞内可变铁池(LIP)、凋亡水平、造血集落形成和脐血各系造血细胞数目的变化.结果(1)在培养液中加入不同浓度FAC(50、100、200、400μmol/L)培养不同时间(6、12、24 h),发现ROS水平随着FAC的浓度和培养时间变化,且在200μmol/L FAC的培养液中培养24h时ROS水平达到最高.(2)用抗氧化剂(NAC、GSH)联合FAC处理细胞发现,抗氧化剂处理组细胞内总的ROS以及髓系细胞和红系细胞内的ROS明显低于FAC组(均P＜0.05).(3)在200 μmol/LFAC的浓度下,培养脐血MNC 24 h后细胞内总的LIP、髓系细胞和红系细胞内LIP水平均显著高于对照组(均P＜0.05),但抗氧化剂NAC和GSH对铁过载细胞内LIP没有明显影响.(4)对脐血造血干祖细胞造血功能的检测发现:FAC组细胞凋亡比例[(20.90±3.45)％]明显高于对照组[(9.20±1.29)％](P＜0.05);造血集落形成单位(CFU-E、BFU-E、CFU-GM、CFU-mix)计数明显低于对照组(前3项两组间差异具有统计学意义,P ＜0.05);CD34+、CD33+、GlyA+细胞比例及细胞计数均显著低于对照组(均P＜0.05);这些损伤都可以通过NAC或GSH处理部分恢复.结论 氧化应激在铁过载造血干祖细胞的损伤中扮演着重要角色,可以通过升高细胞内ROS水平抑制其造血功能,清除细胞内多余的ROS能减轻这些损伤.研究结果可为治疗铁过载患者因氧化应激诱导的造血功能低下提供新的靶点和研究思路.     

线粒体和细胞凋亡

线粒体在能量代谢和自由基代谢过程中占有十分重要的地位.线粒体产生大量超氧阴离子,并通过链式反应形成活性氧(reactive oxygen species,ROS),当ROS水平较低时,可促进细胞增生;而当ROS水平较高时,使得线粒体MPTP开放,不仅导致跨膜电位崩溃,也使细胞包素C外漏[1].     

活性氧在顺铂致HepG2凋亡中的作用

目的利用Acivicin阻断GGT的功能,观察其单独对HepG2凋亡及联用顺铂后对HepG2的凋亡、细胞内ROS产生的影响.方法细胞毒性测定采用MTT法.Acivicin和顺铂分别或联合处理HepG2细胞.采用DCFH-DA能被ROS作用发光的特性.通过流式细胞仪测定细胞内ROS的变化.凋亡检测采用细胞凋亡原位检测法(TUNEL法).结果MTT法测定HepG2I IC50值Acivicin为1.4 mmol/L,顺铂为67μmol/L.Acivicin 1.4 mmol/L和顺铂67μmol/L以及Acivicin(1.4mmol/L) 顺铂(67μmol/L)HepG2 24h细胞内的ROS显著升高,尤其是在当与顺铂联用时HepG2细胞内的ROS升高就更加明显.TUNEL法测定Acivicin(1.4 mmol/L)在24、48、72 h致HepG2的凋亡率分别分(16.3±3.5)%、(27.9±4.3)%、(47.2±3.0)%.与对照组相比差异显著(P＜0.05).顺铂(67μmol/L)HepG2 24h的凋亡率为(73.4±1.5)%,Acivicin(1.4 mmol/L) 顺铂(67 μmol/L)HepG2 24h的凋亡率为(94.7±0.5)%,较单用显著增加(P＜0.01.结论顺铂致HepG2凋亡的机制之一是增加细胞内ROS的产生.Acivicin抑制GGT,干扰GSH代谢,可致HepG2细胞内的ROS升高,使细胞凋亡,并增强顺铂的细胞毒性.     

虾青素对氧化应激下平滑肌细胞自噬与凋亡的影响

目的:探讨氧化应激对平滑肌细胞的影响及虾青素通过清除过量氧化物因子调节平滑肌细胞的自噬和凋亡的机制。方法:采用CCK-8法分析不同浓度虾青素及过氧化氢对传代培养的平滑肌细胞(HA-SMC)增殖的影响,检测细胞内活性氧(ROS)水平、线粒体膜电位,利用Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡,Western Blot技术检测细胞自噬和凋亡蛋白表达差异。结果:CCK-8结果显示虾青素对HA-SMC的最佳保护浓度为25μmol/L,过氧化氢半数最大抑制浓度(IC50)为200μmol/L。虾青素预处理后,过氧化氢对HA-SMC毒性作用降低,ROS水平降低,线粒体膜电位回升,自噬相关蛋白表达上调,抑制凋亡(P<0. 01)。结论:过氧化氢诱导的氧化应激抑制HA-SMC的增殖;虾青素通过抑制氧化应激适当增强自噬作用,减少细胞的凋亡。     

SOD对青石棉诱导BEAS-2B细胞产生过氧化物歧化酶的作用

目的:探讨SOD对青石棉诱导BEAS-2B细胞产生过氧化物歧化酶(ROS)的抑制作用。方法:采用台盼蓝吞噬实验和乳酸脱氢酶同工酶(LDH)试剂盒分别测定0mg/L、100mg/L、250mg/L、500mg/L青石棉作用后BE-AS-2B细胞成活率和培养上清LDH水平。分别采用双氢溴乙啶(DHE)和双氯荧光素双醋酸盐(DCF)荧光探针测定青石棉刺激BEAS-2B细胞后ROS的产生情况,同时使用200USOD与青石棉共孵育观察其对ROS产生的抑制作用。结果:100mg/L以下剂量的青石棉与BEAS-2B细胞共培养24h后细胞成活率为97%,未显示明显毒性;DHE荧光染色显示青石棉可诱导BEAS-2B细胞产生ROS,细胞呈深红染色,使用SOD后可抑制ROS产生,细胞染色减弱;且不同剂量青石棉作用BEAS-2B细胞不同时间后DCF染色差异无统计学意义(P>0.05)。结论:青石棉可诱导BEAS-2B细胞产生ROS,且该作用可被SOD抑制。     

抗坏血酸对钴纳米粒子及钴离子致成纤维细胞毒性的保护作用

目的 探讨抗坏血酸(AA)对降低钴(Co)诱导的成纤维细胞毒性作用.方法 将实验分为空白对照、Co2+、Co2++AA、钴纳米粒子(CoNPs)、CoNPs+ AA、AA 6个组.AA提前预处理1h.分别用CCK8检测CoNPs、Co2+诱导及AA处理后细胞毒性,采用荧光染色技术检测J线粒体中活性氧生成,Western blot检测相关蛋白表达,实时定量PCR检测相关分子mRNA水平.并检测细胞质中细胞色素C的水平.结果 当使用CoNPs和Co2+处理细胞后,细胞出现凋亡.CoNPs可以明显诱导活性氧(ROS)生成;促凋亡因子(Caspase 3及Bax)表达明显升高,而抗凋亡因子Bcl-2表达减少;细胞色素C及细胞凋亡诱导因子(AIF)均表达增加,并从线粒体进入细胞质中;使用AA预处理后,CoNPs所引起的这些改变可被减少.结论 AA可以通过减少ROS的生成与释放降低CoNPs导致的细胞毒性,但不能减弱Co2毒性作用.     

不同饮水消毒方法对水中有机提取物毒性的影响

目的探讨不同消毒方法对饮水中有机提取物所致人肝肿瘤HepG2细胞的氧化损伤和凋亡作用的影响。方法分别采用不同预消毒方法(氯、二氧化氯或臭氧)结合氯消毒对汉江水进行消毒,提取消毒水中有机物,分别测定不同消毒水中有机提取物对人肝肿瘤HepG2细胞活性氧族(ROS)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)水平及细胞凋亡率的影响。结果不同消毒方法对水中有机提取物的氧化应激水平的影响无明显差异,对细胞凋亡的影响也无明显差异。结论与常规的氯预消毒方法比较,二氧化氯以及臭氧预消毒的汉江水对HepG2细胞的氧化应激和凋亡的影响无明显差异。对于有机物含量较高的汉江水,单纯改变预消毒方法,并不能减低水中有机提取物的氧化应激水平和凋亡毒性。