Akt和mTOR在皮肤基底细胞癌中的表达

基底细胞癌(BCC)是较常见的皮肤肿瘤之一,尽管其生长缓慢,转移少见,但可造成局部组织破坏,造成感染及大出血,甚至毁损容貌.因此,其发病机制的研究具有重要的意义.Akt/mTOR信号通路普遍存在于各种细胞中,是参与细胞生长、增殖、分化调节的信号通路.其表达异常与人类多种恶性肿瘤的发生、发展密切相关.在乳腺癌、肺癌以及胶质瘤中均已发现Akt与mTOR的高表达[1-3].目前对Akt和mTOR在皮肤BCC中表达的研究报道不多,我们采用免疫组化法检测Akt和mTOR在BCC组织中的表达水平,旨在探讨Akt/mTOR信号通路在BCC发展过程中所起的作用.     

Akt和mTOR在皮肤基底细胞癌中的表达

基底细胞癌(BCC)是较常见的皮肤肿瘤之一,尽管其生长缓慢,转移少见,但可造成局部组织破坏,造成感染及大出血,甚至毁损容貌.因此,其发病机制的研究具有重要的意义.Akt/mTOR信号通路普遍存在于各种细胞中,是参与细胞生长、增殖、分化调节的信号通路.其表达异常与人类多种恶性肿瘤的发生、发展密切相关.在乳腺癌、肺癌以及胶质瘤中均已发现Akt与mTOR的高表达[1-3].目前对Akt和mTOR在皮肤BCC中表达的研究报道不多,我们采用免疫组化法检测Akt和mTOR在BCC组织中的表达水平,旨在探讨Akt/mTOR信号通路在BCC发展过程中所起的作用.     

HIF-1α和Glut-1在皮肤鳞状细胞癌和基底细胞癌中的表达

目的:检测缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、葡萄糖转运蛋白1(Glut-1)在皮肤鳞状细胞癌(SCC)、基底细胞癌(BCC)组织中的表达.方法:采用免疫组织化学方法检测74例SCC、71例BCC及30例正常皮肤组织中HIF-1α和Glut-1的表达.结果:SCC中HIF-1α和Glut-1蛋白阳性表达率分别为68.92%和82.43%.BCC中HIF-1α和Glut-1蛋白阳性表达率分别为61.97%和56.34%.均高于正常皮肤组织0%和6.67%(P<0.05).HIF-1α和Glut-1的表达与SCC和BCC患者的年龄、性别、分化程度无关,但与SCC淋巴结转移密切相关(P<0.05).结论:HIF-1α和Glut-1的过度表达可能与SCC和BCC的发生和转移有关.     

白藜芦醇对病理性瘢痕成纤维细胞mTOR信号通路相关分子表达的影响

目的观察白藜芦醇对病理性瘢痕成纤维细胞mTOR信号通路关键分子PI3K、Akt、mTOR表达的影响。方法应用免疫荧光检测PI3K、Akt、mTOR在病理性瘢痕及正常皮肤组织成纤维细胞中的表达;病理性瘢痕成纤维细胞经不同浓度白藜芦醇处理后,分别应用RT-PCR、Western Blot检测PI3K、Akt、mTOR mRNA和蛋白的表达。结果免疫荧光检测结果显示,PI3K、Akt、mTOR在病理性瘢痕成纤维细胞中表达明显增强,且主要表达于细胞核,而在正常皮肤组织成纤维细胞中未见明显表达;RT-PCR及Western Blot检测结果显示,病理性瘢痕成纤维细胞经不同浓度的Res干预后,Akt和mTOR mRNA和蛋白表达量降低,并且呈剂量依赖关系,与对照组相比,差异具有统计学意义(P0.05),而PI3K mRNA和蛋白表达量降低不明显,与对照组相比差异无统计学意义(P0.05)。结论白藜芦醇抑制病理性瘢痕成纤维细胞增殖的机制可能与其下调mTOR信号通路关键分子Akt、mTOR表达有关。     

P62和Caspase-8在皮肤基底细胞癌组织中的表达

目的：比较基底细胞癌（BCC）及正常皮肤组织中Caspase-8和P62的表达水平,探讨Casepase-8和P62在BCC发病中的作用。方法：利用免疫组织化学染色法检测45例BCC病理组织及10例正常皮肤上皮组织中Caspase-8和P62蛋白的表达。结果：44%(20/45) BCC和90%(9/10)正常皮肤组织中Caspase-8阳性表达,两组Caspase-8阳性率差异有统计学意义（Z=-2.711,P<0.01）; 87%（39/45）BCC中和40%(4/10)正常皮肤组织中P62呈阳性,两组P62阳性率差异有统计学意义（Z=-2.951,P<0.01）。Caspase-8和 P62在BCC中的表达水平呈现负相关（r= -0.322,P<0.05）。结论：Caspase-8 和P62在BCC组织中低表达,可能与BCC的发病机制有关。     

五倍子瘢痕膏对瘢痕疙瘩miR-21/mTOR信号通路相关分子表达的影响

目的观察五倍子瘢痕膏对瘢痕疙瘩miR-21/mTOR信号通路关键分子miR-21、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、10号染色体张力缺失蛋白磷酸酶(PTEN)、蛋白激酶B(Akt)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达的影响。方法将36只裸鼠瘢痕疙瘩模型随机分成治疗组和对照组,每组18只。治疗组涂抹五倍子瘢痕膏,对照组仅涂抹制作五倍子瘢痕膏的基质,3次/d,连续30 d。然后分别应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化技术检测治疗组、对照组及正常皮肤组中miR-21和PI3K、PTEN、Akt、mTOR的表达。结果RT-PCR检测结果显示,治疗组和正常皮肤组miR-21相对表达量差异无统计学意义(P>0.05,t=1.24),但二者与对照组相比均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05,t=2.76、2.81);免疫组化检测结果显示,PI3K、Akt、mTOR在对照组中高表达,而在治疗组和正常皮肤组中低表达;PTEN在对照组中低表达,而在治疗组和正常皮肤组中高表达。结论五倍子瘢痕膏抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的机制可能与其通过抑制miR-21表达而上调PTEN表达,进而下调mTOR信号通路中PI3K、Akt、mTOR表达有关。其中PTEN是负反馈调节因子;下游的核糖体蛋白S6激酶(S6K)、真核细胞翻译起始因子4E结合蛋白(4EBP),二者均是蛋白翻译的关键调节因子。     

PI3K-Akt在皮肤鳞状细胞癌组织中的表达

【摘 要】 目的 检测皮肤鳞状细胞癌(SCC)组织中磷脂酰肌3-激酶(PI3K)及其下游分子蛋白激酶B(AKT)蛋白的表达,探讨其在SCC增殖及癌变中的作。 方法 采用免疫组织化学SP法检测41例SCC,11例正常皮肤组织石蜡标本中PI3K,AKT蛋白的表达。结果 SCC组织中PI3K,AKT蛋白的阳性表达率(65.85%和73.17%)明显高于正常皮肤(18.18%和0%,P<0.05)。SCC组织中PI3K的阳性表达率与AKT的阳性表达率呈正相关(r=0.418,P<0.05)。结论 PI3K-AKT通路可能在SCC的发生过程中起重要作用。     

神经生长因子受体TrkA在皮肤癌中的表达及意义

检测神经生长因子受体TrkA在人皮肤鳞状细胞癌(CSCC)和基底细胞癌(BCC)中的表达并探讨临床意义.采用原位杂交技术检测28例CSCC、17例BCC、15例CSCC旁正常皮肤组织中TrkA mRNA的表达水平,并结合临床资料进行分析.TrkA mRNA在CSCC中阳性表达率为21.43%,与BCC(88.24%)和癌旁正常皮肤组织(53.33%)比较均有差异(均P<0.05),其表达率与CSCC的病理分级、淋巴结转移有相关性(均P<0.05).TrkA的低表达或失表达与皮肤癌发生、发展和侵袭转移有关.     

紧密连接蛋白claudin-1在皮肤基底细胞癌组织中的表达

目的研究紧密连接蛋白claudin-1在皮肤基底细胞癌(BCC)组织中的表达,初步探讨claudin-1在BCC发病机制中的作用。方法收集2014年11月—2016年11月苏州市吴江区中医医院38例BCC患者的组织标本,以其对应的癌旁正常皮肤组织作为对照组,采用免疫组化法检测癌旁正常皮肤组织和BCC组织中claudin-1蛋白的表达。结果在癌旁正常皮肤组织中,claudin-1蛋白主要表达于表皮基底层至颗粒层的角质形成细胞膜上,呈强阳性表达,阳性率可高达100%,显著高于BCC的21.05%,两者比较差异有统计学意义(P0.05)。结论 claudin-1蛋白表达下调可能与BCC的发生、发展密切相关。     

Survivin和p53在皮肤癌中的表达及其临床意义

为检测凋亡抑制基因Survivin和p53基因在皮肤鳞状细胞癌(SCC)和基底细胞癌(BCC)中的表达及临床意义.用免疫组织化学SP法对40例BCC,30例SCC,18例脂溢性角化(SK),16例正常皮肤组织石蜡标本进行Survivin和p53蛋白表达的检测和分析.(1)Survivin在BCC、SCC中的表达阳性率分别为70%和80%,明显高于正常皮肤和SK组(P＜0.01).(2)p53在BCC和SCC中的阳性表达率分别为:45%和56.67%,明显高于正常皮肤和SK组(P＜0.01).(3)BCC和SCC中Survivin与p53的表达呈正相关(r=0.373,r=0.404,P＜0.05).凋亡抑制基因Survivin可能参与BCC和SCC的发生发展,Survivin和p53的检测对BCC和SCC的诊断和进一步治疗提供有效的依据.     

IL-23/Th17相关细胞因子在基底细胞癌中的表达水平及意义

目的探讨IL-23/Th17相关细胞因子在基底细胞癌(BCC)疾病进展中的作用。方法采用免疫组织化学染色的方法检测35例BCC组织及10例正常皮肤组织中IL-17、IL-22及IL-23的表达水平。结果IL-17在基底细胞癌中的表达水平高于正常皮肤组织(P<0.05),IL-17在基底细胞癌组织细胞和肿瘤间质细胞胞质中均有表达。IL-23在基底细胞癌中的表达水平高于正常皮肤组织(P<0.05),IL-23主要在基底细胞癌组织细胞胞质表达,部分位于肿瘤间质细胞胞质中。IL-22在基底细胞癌和正常皮肤组织的表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。基底细胞癌中IL-17和IL-23的表达水平呈正相关(P<0.05)。结论IL-23/Th17相关细胞因子可能参与基底细胞癌的发生、发展。IL-23可能通过诱导Th17细胞的发育和增殖,促进IL-17分泌并在基底细胞癌的发生、发展中发挥协同作用。     

Survivin和COX-2在皮肤基底细胞癌和鳞状细胞癌组织中的表达及相关性

目的了解皮肤基底细胞癌和皮肤鳞状细胞癌中Survivin和COX-2的表达情况及两者的关系。方法采用免疫组化法检测10例正常对照组、23例基底细胞癌、18例鳞状细胞癌组织中Survivin和COX-2的表达情况。结果 Survivin蛋白在正常组织中不表达,基底细胞癌和鳞状细胞癌中Survivin蛋白的表达率分别为60.87%和66.67%。COX-2在正常组织中的表达率为10%,基底细胞癌和鳞状细胞癌中COX-2的表达率分别为65.22%和66.67%,且明显高于其在正常组织中的表达率。Survivin的表达和COX-2的表达呈显著正相关(P0.05)。结论 Survivin蛋白和COX-2在皮肤基底细胞癌和皮肤鳞状细胞癌中高表达,两者呈正相关。     

乙酰肝素酶mRNA和蛋白在恶性黑素瘤皮损及A375细胞株中的表达

目的探讨乙酰肝素酶mRNA和蛋白在恶性黑素瘤皮损及A375细胞株中的表达及意义。方法选择恶性黑素瘤30例、黑素细胞痣30例、恶性黑素瘤A375细胞株及15例正常皮肤组织,分别采用原位杂交、免疫组化法检测皮损及细胞株中乙酰肝素酶mRNA及蛋白的表达。结果A375细胞株及19例(19/30,63.33%)恶性黑素瘤皮损中乙酰肝素酶mRNA呈阳性表达,2例(2/30,6.67%)黑素细胞痣皮损中乙酰肝素酶mRNA表达阳性,正常皮肤组织中无1例呈阳性表达;恶性黑素瘤皮损中乙酰肝素酶蛋白的阳性表达率与黑素细胞痣、与正常对照组相比,差异均有显著性意义(χ12=19.200,P=0.000;χ22=25.714,P=0.000)。乙酰肝素酶蛋白在恶性黑素瘤、恶性黑素瘤A375细胞株、黑素细胞痣及正常皮肤组织的表达情况与mRNA相一致。结论乙酰肝素酶mRNA和蛋白的高表达可能与恶性黑素瘤的发生发展有关,有望作为治疗黑素瘤的靶点。     

磷脂酰肌醇3激酶和磷酸化Akt在尖锐湿疣和宫颈鳞状细胞癌组织中的表达

目的 探讨磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）和磷酸化Akt （P-Akt）在尖锐湿疣和宫颈鳞状细胞癌发病中的作用。方法 采用免疫组化和Western印迹法检测30例尖锐湿疣、30例宫颈鳞状细胞癌及15例正常人包皮组织中PI3K和磷酸化Akt的表达,利用计算机图像采集与分析系统对免疫组化结果进行平均吸光度（A值）测定,并对免疫印迹测定结果进行灰度扫描。采用SPSS17.0软件行t检验和方差分析。结果 15例正常人皮肤中,仅表皮基底层可见PI3K及P-Akt阳性细胞;30例尖锐湿疣皮损中,PI3K及P-Akt表达增强,表皮全层均可见阳性细胞;而30例宫颈鳞状细胞癌组织中PI3K及P-Akt表达更强,明显高于尖锐湿疣,可见大量PI3K及P-Akt强阳性细胞。免疫组化图像分析结果显示,宫颈鳞状细胞癌PI3K和P-Akt表达（A值）分别为0.28 ± 0.05和0.20 ± 0.07,尖锐湿疣分别为0.22 ± 0.04和0.17 ± 0.03,正常人对照组分别为0.16 ± 0.04和0.10 ± 0.02,经方差分析,F值分别为44.87和20.64,P值均 < 0.01。Western印迹结果与免疫组化检测一致,宫颈鳞状细胞癌PI3K和P-Akt表达的相对灰度值分别为3.48 ± 0.48和3.33 ± 0.26,尖锐湿疣分别为1.99 ± 0.11和1.96 ± 0.11,正常人对照组分别为1.00 ± 0.03和1.00 ± 0.03,经方差分析,F值分别为354.83和302.33,P值均 < 0.01。结论 尖锐湿疣和宫颈鳞状细胞癌中PI3K/Akt信号通路被异常激活,HPV有可能通过影响PI3K和P-Akt的表达上调引起感染上皮的异常增殖。     

麦冬皂苷B通过抑制PI3K/Akt/mTOR通路诱导人黑色素瘤A375细胞凋亡

目的探讨麦冬皂苷B对人黑色素瘤(Melanoma)A375细胞增殖,凋亡和细胞周期的影响以及相关机制。方法麦冬皂苷B处理A375细胞后,采用CCK-8法检测细胞活力;流式细胞仪检测A375细胞周期变化及细胞凋亡水平;Hoechst33258荧光染色法观察细胞凋亡形态;免疫印迹法检测麦冬皂苷B对A375细胞PI3K,p-PI3K,AKT,p-AKT蛋白以及通路下游凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax,Cleaved-caspase3表达的影响。结果麦冬皂苷B能抑制A375细胞增殖活力及PI3K/Akt/mTOR通路的活化;麦冬皂苷B促进了A375细胞内Bax和Cleaved-caspase 3的表达,抑制Bcl-2表达,诱导人黑色素瘤细胞发生凋亡;麦冬皂苷B阻滞了A375细胞细胞周期,G0/G1期细胞比例明显升高;PI3K/Akt/mTOR通路活化剂IGF-1处理A375细胞后抑制了麦冬皂苷B的上述作用。结论麦冬皂苷B能抑制A375细胞的增殖,诱导细胞发生凋亡,阻滞细胞周期于G0/G1期。     

Livin和Caspase-3在皮肤基底细胞癌和皮肤鳞状细胞癌组织中的表达及相关性分析

目的了解皮肤基底细胞癌和皮肤鳞状细胞癌组织中Livin和Caspase-3的表达情况及二者的关系。方法采用免疫组化法检测25例基底细胞癌、18例鳞状细胞癌组织中Livin和Caspase-3的表达情况。结果①Livin蛋白在正常皮肤组织中不表达,基底细胞癌和鳞状细胞癌组织中Livin蛋白的阳性表达率分别为64.00%和72.22%。②Caspase-3在正常皮肤组织中表达,且明显高于基底细胞癌和鳞状细胞癌组织中Caspase-3的表达。③Caspase-3的表达与Livin的表达呈显著负相关。结论Livin在基底细胞癌和鳞状细胞癌组织中高表达,Caspase-3蛋白在基底细胞癌和鳞状细胞癌组织中低表达,且与Livn的表达呈负相关,提示二者可能共同参与基底细胞癌和鳞状细胞癌发病过程。     

Akt/mTOR活化抗UVB诱导HaCaT细胞凋亡的研究

目的 探讨Akt/mTOR信号通路活化抗中波紫外线（UVB）诱导的HaCaT细胞凋亡。方法 UVB照射角质形成细胞,Western印迹检测Akt/mTOR通路中相关信号分子的动态水平变化。免疫荧光 Hoechst 33342染色观察HaCaT细胞凋亡率。结果 UVB能活化Akt/mTOR信号通路,并在一定范围内（5 ～ 30 mJ/cm2）成剂量依赖性,在一定范围内（5 ～ 30 min）成时间依赖性。EGFR抑制剂PD 153035、PI3K抑制剂LY 294002和mTOR抑制剂雷帕霉素能显著抑制UVB对Akt/mTOR信号通路的活化作用。UVB照射前加入雷帕霉素、LY 294002预处理,HaCaT细胞凋亡率增加。结论 Akt/mTOR活化抗UVB诱导的HaCaT细胞凋亡。     

皮肤鳞状细胞癌中Patched-1和Gli-1蛋白检测及mRNA表达的研究

目的探讨Hedgehog信号转导通路在皮肤鳞状细胞癌皮损中的激活水平及状态。方法采用免疫组化和原位杂交方法检测皮肤鳞状细胞癌皮损及正常皮肤中Hedgehog信号通路的Patched-1和Gli-1的蛋白水平及mRNA的表达和分布。结果Patched-1和Gli-1蛋白及mRNA检测呈明显阳性着色,主要分布于鳞癌细胞胞浆中。结论鳞癌皮损中Hedgehog信号转导通路处于激活状态。     

埃兹蛋白在皮肤鳞癌、基底细胞癌中的表达及相关研究

目的 探讨埃兹（Ezrin）蛋白在皮肤基底细胞癌（BCC）和鳞状细胞癌（SCC）中的表达及在肿瘤侵袭转移过程中的作用.方法 采用免疫组化SP法检测Ezrin蛋白在皮肤BCC（30例）、SCC（32例）及正常皮肤对照组（10例）中的表达情况.结果 Ezrin蛋白在BCC、SCC及正常皮肤对照组中阳性表达率分别为60.0％、84.4％和10％.Ezrin蛋白在各组之间表达差异有统计学意义（P＜0.05）.Ezrin蛋白阳性表达与SCC的分化程度和淋巴结转移密切相关,各组间表达差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 Ezrin蛋白的检测可能成为预测皮肤恶性肿瘤转移和预后的一项指标.     

Paget病皮损中p-Stat3,p-Akt,cyclinD1蛋白表达及其相关分析

目的探讨磷酸化细胞信号转导与转录活化因子3(p-Stat3)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、细胞周期蛋白D1(cyclinD1)在Paget病中的表达及意义。方法采用免疫组化法检测p-Stat3,p-Akt和cyclinD1在21例Paget病(包括乳房及乳房外)、15例汗管瘤和10例正常人皮肤组织中的表达水平,利用图像分析技术测量阳性细胞的平均光密度值,并对这3种蛋白的表达进行相关性分析。结果 Paget病中p-Stat3,p-Akt和cyclinD1的平均光密度值均明显高于汗管瘤和正常人皮肤组织,差异均有统计学意义(P均<0.001),而汗管瘤和正常皮肤组织比较差异无统计学意义(P>0.05);乳房Paget病与乳房外Paget病比较,p-Stat3,p-Akt和cyclinD1蛋白的表达差异均无统计学意义(P均>0.05);p-Stat3与cy-clinD1的表达,p-Akt与cyclinD1的表达及p-Stat3与p-Akt的表达均呈正相关(r=0.809,0.776,0.516,P均<0.05)。结论 Paget病中存在p-Stat3,p-Akt和cyclinD1的高表达,p-Stat3,p-Akt可能通过JAK/Stat3信号转导通路及PI3K/Akt信号转导通路诱导cyclinD1的过度表达,促使肿瘤细胞的生长及增殖。