人白细胞介素（IL）-28和1L-29基因的克隆与序列分析

人IL-28A、IL-28B和IL-29是由外周血单个核细胞（PMBC）和树突状细胞（DC）等产生的细胞因子，组成一个新的细胞因子家庭。其基因结构与IL-10相近似，但氨基酸水平与干扰素（IFN）更接近，故Kotenko等也将它们相应地称为IFN-λ1（IL-29）、IFN-λ2（IL-28A）和IFN-λ3（IL-28B）。其基因均位于人19号染色体（19q13.13)。IL-29与IL-28氨基     

藏猪白细胞介素4基因Cdna的克隆及序列分析

目的：克隆藏猪白细胞介素4基因cDNA。方法：从体外ConA刺激70小时的藏猪外周血淋巴细胞中提取总RNA，应用RT-PCR技术扩增，pMD-T载体连接，常规转化后，进行酶切及序列测定进行鉴定。结果：研究表明克隆得到的IL-4基因cDNA与成华猪的IL-4同源性达到99％，与长白杂交猪的同源率为98％。结论：从藏猪外周血淋巴细胞中成功地分离到IL-4基因。     

人白细胞介素17基因的克隆及序列测定

应用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，参照国外发表的白细胞介素１７（ｈＩＬ－１７）ｃＤＮＡ全基因序列，利用自行设计合成的１对引物，从ＰＨＡ活化的正常人外周血单个核细胞中，扩增出ｈＩＬ＿１７ｃＤＮＡ基因，并定向插入ＰＵＣ１８载体，构建了ｈＩＬ－１７基因重组体，经ＤＮＡ序列测定，确认为ｈＩＬ－１７基因，这为是一步研究ｈＩＬ－１７的生物学功能提供可靠的物质基础。     

人白细胞介素13cDNA克隆及序列分析

人白细胞介素１３ｃＤＮＡ克隆及序列分析范灵芝，杨新科，段淑敏，刘彦仿，侯云德白细胞介素１３（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１３，ＩＬ－１３）是近年来发现的一种新的免疫调节介质［１］，它主要由激活的Ｔ淋巴细胞产生，具有调节单核细胞及Ｂ淋巴细胞的功能，在病毒免...     

人白细胞介素2受体α链基因第三内含子的克隆与核苷酸序列分析

应用ＰＣＲ技术扩增了人白细胞介素２受体α基因第三内含子２．５ｋｂ片段，并成功地克隆到ｐＢＳ－ＳＫ载体中，构建了一系列亚克隆并测定了２．５ｋｂ全核苷酸序列，其中２２２８ｂｐ碱基序列为国内外首次测定，其数据已被ＧｅｎＢａｎｋ接受，接受号为Ｕ５６３８９。     

人白细胞介素10（hIL—10）基因的克隆和序列测定

应用逆转录多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，自行设计并合成一对引物，成功地从活化的正常人外周血单个核细胞中扩增出ｈＩＬ－１０ｃＤＮＡ基因。并定向插入ｐＵＣ１８载体，经ＤＮＡ序列测定最终确定为ｈＩＬ－１０ｃＤＮＡ基因，这将为今后ｈＩＬ－１０基因探针的制备和基因表达，进一步在基因水平上探讨ｈＩＬ－１０的生物学功能提供了物质基础。     

IL-28B基因多态性与丙型肝炎相关性研究进展

白细胞介素-28 B(Interleukin-28B,IL-28 B)属于Ⅲ型干扰素家族,是一种新型的白细胞介素.它通过活化JAK- STAT信号通路,调节干扰素刺激基因转录,发挥抗病毒等生物学效应.新近研究发现,IL-28B基因多态性与丙型病毒性肝炎的发病、抗病毒治疗应答和疾病转归等密切相关.因此,通过对二者相关性的研究,可能有助于临床医师更合理的选择丙型肝炎的治疗措施、开展个性化治疗、及早判断患者的预后.     

人白细胞介素10（hIL－10）基因的克隆和序列测定

应用逆转录多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，自行设计并合成一对引物，成功地从活化的正常人外周血单个核细胞中扩增出ｈＩＬ－１０ｃＤＮＡ基因。并定向插入ｐＵＣ１８载体中，经ＤＮＡ序列测定最终确定为ｈｌＬ－１０ｃＤＮＡ基困，这将为令后ｈＩＬ－１０基因探针的制备和基因表达，进一步在基因水平上探讨ｈＩＬ－１０的生物学功能提供了物质基础。     

恶性疟原虫疫苗研究VIPfCMR基因与人白细胞介素-2基因的连接与克隆

用限制性内切酶ＥｃｏＲＩ和ＳａｌＩ将恶性疟原虫复合抗原基因ＰｆＣＭＲ从质粒ｐＷＲ４５０－１／ＰｆＣＭＲ中切下，插入质粒ｐＢＶ２２０／ＩＬ－２中人白细胞介素－２（ＩＬ－２）基因的ＥｃｏＲＩ位点。重组质粒转化大肠杆菌ＤＨ５ａ，通过ＰＣＲ扩增和酶切鉴定，筛选出正向插入的重组载体ｐＢＶ２２０／ＰｆＣＭＲ－ＩＬ－２。为表达ＰｆＣＭＲ－ＩＬ－２融合蛋白打下基础。     

人NYD-SP28基因原核表达及其多克隆抗体的制备

目的:构建人NYD-SP28基因原核表达载体,表达其原核蛋白,制备其多克隆抗体,以探讨其在精子发生中的作用。方法:以原始质粒为模板,用PCR法扩增人的NYD-SP28基因开放阅读框全长,将其克隆到原核表达质粒pET28a(+)中,构建重组质粒pET28a-NYD-SP28。将该重组质粒转化大肠杆菌BL21,以IPTG诱导原核蛋白的表达,纯化蛋白以免疫小鼠,制备多克隆抗体,用ELISA法测定抗体的滴度。结果:成功构建了用于原核蛋白表达的重组质粒,并在BL21菌中表达NYD-SP28原核蛋白,用亲和层析Ni柱进行纯化得到NYD-SP28原核蛋白。用纯化的NYD-SP28蛋白免疫小鼠2个月后,得到相应的多克隆血清抗体,经ELISA检测,滴度达到1/10万。结论:成功构建人NYD-SP28原核表达载体,并获得了高纯度的NYD-SP28蛋白及鼠抗NYD-SP28多克隆抗体,为进一步研究NYD-SP28的功能奠定了基础。     

人CD28基因的分子克隆及其痘苗病毒载体介导的真…

用ＲＴ－ＰＣＲ方法从人Ｊｕｒｋａｔ细胞克隆了ＣＤ２８ ｃＤＮＡ，将ＣＤ２８全编码区基因片段重组入ＰＵＣ质粒，测序证实所获得的为人ＣＤ２８基因。以痘苗病毒天坛株国载体，构建表达人ＣＤ２８的重组痘苗病毒株，并在重组病毒感染的细胞膜上表达人ＣＤ２８膜抗原，拟用该抗原免疫小鼠以制备抗ＣＤ２８的抗体。     

TTV部分基因的克隆及序列测定

为了弄清萍乡地区ＴＴ病毒 (ＴＴＶ)感染情况 ,分析本地区ＴＴＶ株基因结构特点 ,我们对江西省萍乡地区 8例ＴＴ病毒株进行了部分基因的克隆及序列测定。1　材料和方法1 1　材料　血清标本采用本地区流行病学调查和本院的临床阳性标本。Ｔ载体、ＸＬ1 Ｂｌｕｅ菌为美国Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ公司产品。Ｔａｑ酶、ｄＮＴＰｓ及Ｔ4ＤＮＡ连接酶购自华美公司。ＰＣＲ试剂由中国军事医学科学院提供。1 2　引物合成　根据Ｏｋａｍｏｔｏ等报道的ＴＴＶ基因序列 ,采用Ｇｏｌｄｋｅｙ软件在ＴＴＶＯＲＦ保守区设计两对套式引物 ,引物序列如下 :外…     

幽门螺杆菌ureB基因的克隆及序列分析

目的 对幽门螺杆菌（Hp)ureB核苷酸序列及推定氨基酸序列进行同源性比较分析,确定Hp菌株的ureB基因差异性,为疫苗的研究和诊断用品的评价提供依据。方法 自选设计引物,PCR扩增来自国内不同病人的4株Hp菌株的ureB基因,与pGEM-T载体克隆连接、测序;进一步同GenBank上发表的其他4株国外Hp菌株ureB的全基因序列进行比较分析。结果 8株Hp菌株的ureB基因序列出现了33种长度,CAPMF3和CPM630分别为1269bp和1680bp,其他为1710bp。6株1710bp的ureB基因序列的分析表明,国外3株Hp的ureB同源性较高,三者氨基酸的同源性达到100％。国内3株Hp的ureB变异较大,推定氨基酸同源性为98．7％－98．9％。结论 UreB作为保护性同时存在免疫保护覆盖率问题,研究疫苗和诊断用品时要注意选择使用在人群中流行占优势的Hp菌株的高度保守的UreB抗原肽,使其具有更高的覆盖率。     

大肠杆菌突变的thyA基因的克隆及序列分析

目的 研究ｔｈｙＡ基因天然缺陷菌株ｔｈｙＡ＊基因的改变。方法 用ＰＣＲ插入法将ｔｈｙＡ＊基因克隆到ｐＵＣ１８上,进行序列测定及分析。结果 突变的ｔｈｙＡ基因其第１３１位碱基Ｔ突变为碱基Ａ。结论 ｔｈｙＡ基因缺陷的大肠杆菌的ｔｈｙＡ基因第１３１位碱基Ｔ突变为碱基Ａ,是导致该基因功能丧失的直接原因。     

鸡干扰素基因的分子克隆与序列测定

目的：从接种新城疫Ｆ４８Ｅ９病毒的Ｌａ Ｓｏｔａ疫苗免疫鸡体外有丝分裂原刺激的脾淋巴细胞中克隆鸡干扰素基因。方法：应用逆转录多聚酶链式反应技术扩增,常规平端连接、转化及序列测定技术进行验证。结果：研究表明克隆得到的基因与国外报道的鸡胚成纤维细胞干扰素基因。结论：鸡在该状态下其脾淋巴细胞表达鸡胚成纤维细胞干扰素ｍＲＮＡ。     

小鼠MBL-A基因的克隆和序列分析

目的：克隆小鼠甘露聚糖结合凝集素-A(MBLA)基因的全长编码区cDNA。方法：利用RT-PCR方法，从Balb/c小鼠的肝细胞中，分离出MBL-A基因cDNA片段，克隆入pUC-T载体，测序并进行分析。结果：扩增得到的小鼠MBL-A基因cDNA全长720bp，编码240个氨基酸残基，包含了完整的富含半胱氨酸区、胶原区、颈区和糖识别域。分析表明，与Genbank中发表的序列具有99.9％的同源性。结论：获得小鼠MBL-A基因的克隆，为进一步研究MBL-A分子在体内的生物学功能奠定了一定基础。     

致肾盂肾炎大肠杆菌papA基因的克隆及序列分析

目的 对致肾盂肾炎大肠杆菌（ＵＰＥＣ）１３２株的ｐａｐＡ基因进行克隆和序列分析。方法 根据Ｆ１３型ｐａｐＡ基因序列设计引物,并在二引物５′端加上限制性内切酶ＥｃｏＲⅠ和ＢａｎＨⅠ的酶切位点。采用此引物扩增１３２菌株ｐ菌毛粘附基因群的ｐａｐＡ基因,扩增产物克隆人质粒,选取阳性重组质粒进行核苷酸序列分析。结果 ＵＰＥＣ１３２株经ＰＣＲ法扩增获得约７００ｂｐ的ｐａｐＡ片段,经克隆获得阳性重组质粒ｐＣＴ２     

中国人IL—18结构蛋白cDNA的克隆和序列分析

目的克隆人白介素 - 18结合蛋白 (h IL- 18BP)的 c DNA,以研究其结构与功能的关系。方法从中国汉族人的胎盘组织中提取总 RNA,以 RT- PCR方法扩增出全长 5 85个 bp的 IL- 18BP c DNA,将其与表达载体 pc DNA3连接 ,转化大肠杆菌 DH5 α,建立了 h IL- 18BP的 c DNA克隆。结果序列分析表明 ,与国外文献报道的人 IL- 18BP的 c DNA序列完全一致。结论 h IL- 18BP已成功地得到克隆。     

人肝肿瘤细胞选择性白细胞介素-7剪接变异体cDNA的克隆和序列测定

目的:寻找人肝肿瘤细胞选择性的白细胞介素-7(IL-7)剪接变异体。方法:运用自行设计的IL-7引物,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术,分离正常肝组织、原发肝癌组织、培养肝癌细胞株IL-7mRNA,再对电泳所获条带进行克隆、测序。结果:正常肝组织、原发肝癌组织、培养肝癌细胞株(BEL-7402和SMMC-7721)都能检测到IL-7mRNA,而且从肝癌组织、培养肝癌细胞株分离出1条新带,经亚克隆及测序,证实该条带系人IL-7基因cDNA第4外显子缺乏所致。结论:肝癌组织及培养的肝癌细胞株存在选择性IL-7剪接变异体。该变异体的发现,为肝癌病人的免疫调节紊乱以及肝癌病人的临床免疫治疗提供了新的研究方向。     

白细胞介素7(IL-7)选择性剪接变异体的筛选和序列测定

目的：寻找人肿瘤细胞选择性的白细胞介素7（Interleukin-7）剪接变异体。方法：运用自行设计的IL-7引物，采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术，分离正常肝组织、原发肝癌组织、正常胃组织和胃癌组织IL-7mRNA，再对电泳所获条带进行克隆、测序。结果：正常肝组织、原发肝癌组织、正常胃组织和胃癌组织都能检测到IL-7mRNA，而且从肝癌组织、胃癌组织中各分离出一条新带，经亚克隆及测序，证实这两条带分别是人IL-7基因eDNA第四外显子（肝癌组织）和第五外显子（胃癌组织）缺乏所致。结论：肝癌组织和胃癌组织存在不同选择性IL-7剪接变异体。这些变异体的发现，为肿瘤病人的免疫调节紊乱以及肿瘤病人的临床免疫治疗提供了新的研究方向。