分泌抗H_(615)单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

用抗正常615纯系小鼠肝细胞抗体处理的H615瘤细胞免疫Balb/c小鼠、取其脾细胞与小鼠骨髓细胞融合、以间接免疫荧光法和细胞ELISA二种方法检测、建立两株分泌抗H615单克隆抗体的杂交瘤细胞系。两杂交瘤细胞系所产生的单克隆抗体与正常615小鼠的肝、脾、肺、肾、心肌、横纹肌、胸腺的组织细胞和小鼠肿瘤细胞及人肝癌细胞无交叉反应,证明两种单克隆抗体具有一定的特异性。对两种单克隆抗体进行亚类检定均属IgG_1。     

分泌本周氏蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立

本文报告了以人的本周氏蛋白(BJK)免疫BALB/C小鼠脾细胞与SP2/o—Ag14小鼠骨髓瘤细胞在聚乙二醇(PEG)MW400作用下融合,并经7次克隆后获得二株抗人的BJK杂交瘤细胞系(E_6,H_4)。经染色体核型分析证实为杂交瘤细胞。本单克隆抗体经标准兔抗小鼠IgG亚类血清鉴定,属小鼠IgG_2a,IgG_2b。两株细胞经液氮冻存、复苏仍能正常分泌抗体。用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定植瘤小鼠的腹水及其血清的抗体滴度分别为10~4—10~5,10~3—10~4。     

死亡受体5在肿瘤细胞系表面的表达

目的利用抗DR5单克隆抗体(mAb),检测死亡受体5(DeathRecepter5)在肿瘤细胞系表面的表达。方法sDR5免疫BALB/c小鼠,小鼠脾细胞与SP2/0-Ag14细胞在50%PEG条件下融合,获得能够分泌抗DR5单克隆抗体的杂交瘤细胞株,利用杂交瘤细胞株分泌的抗DR5特异性单克隆抗体,采用流式细胞仪技术测定抗DR5mAb结合至细胞表面的量来分析死亡受体在肿瘤细胞系的表达情况。结果不同肿瘤细胞表面DR5的表达水平分别为Jurkat细胞91.61%、NS-10.66%。结论抗DR5mAb能够特异性与DR5结合。DR5在Jurkat细胞系高水平表达,NS-1细胞系几乎不表达。该特异性mAb在研究TRAIL受体的生物功能上是一种有用的工具,对研究DR5在组织和细胞系表达十分有价值。     

抗黑色素瘤单克隆抗体的制备

本文用鼠骨髓细胞系NS_1与用黑色素瘤细胞系Cal_1,Cal_(32),Cal_(52),免疫的鼠脾细胞融合制备抗黑色素瘤单克隆抗体。通过使用淋巴细胞分离液MSL和在脾被膜上扎孔,用注射器注入GKN溶液使脾细胞冲出的方法制取脾细胞,使杂交瘤细胞融合率明显提高,并获两株分泌抗黑色素瘤单克隆抗体IgG_1的SM_(167)和SM_(230)细胞株。     

大鼠抗小鼠重组膜联蛋白A2单克隆抗体的制备与鉴定

目的 建立能够分泌特异性抗小鼠膜联蛋白A2( AnxA2)的大鼠—小鼠融合单克隆抗体杂交瘤细胞系.方法 利用重组小鼠AnxA2蛋白作为抗原免疫Wistar大鼠,通过细胞融合和杂交瘤筛选技术建立特异分泌抗小鼠AnxA2蛋白的大鼠—小鼠融合单抗杂交瘤细胞株.采用酶联免疫吸附方法确定单克隆抗体亚型,免疫印迹和流式细胞术验证所筛选的单克隆抗体的特异性.结果 通过对30多个分泌抗体的融合细胞克隆的筛选,获得一株分泌特异性抗小鼠AnxA2的大鼠—小鼠融合单克隆抗体杂交瘤细胞系SZ-158,连续培养传代后染色体分析证实,Wistar大鼠脾细胞与小鼠SP2/0细胞稳定融合;免疫印迹和流式细胞术显示该单克隆抗体可以特异识别小鼠AnxA2重组蛋白.结论 该研究所获得的大鼠—小鼠融合单克隆抗体特异性针对小鼠AnxA2蛋白,可用于AnxA2转基因小鼠中AnxA2表达的检测,为深入研究AnxA2的功能提供了物质保障.     

鼻咽癌的单克隆抗体研究:杂交瘤细胞系的建立及初步鉴定

用鼻咽癌细胞株 CNE-1作抗原,免疫 Balb/c 小鼠,取脾细胞与骨髓瘤细胞融合,获得13株杂交瘤细胞系,用酶联免疫吸附试验,杂交瘤 H_(13)分泌的单克隆抗体显较好的特异性,用间接免疫荧光检查,这些抗体作用部位为癌细胞膜上的肿瘤相关抗原。     

两个新的抗人小细胞肺癌单克隆抗体的制备及其应用研究

用人小细胞肺癌细胞系免疫BALB/C小鼠。免疫脾细胞与SP2/0细胞融合,获得两株分泌抗人小细胞肺癌表面相关抗原单克隆抗体的杂交瘤细胞系,2D6和2F1。经ELISA测定,它们与人小细胞肺癌细胞呈强阳性反应。与肺腺癌、肺鳞癌、食管癌、喉癌、人白血病细胞系(molt4)、Hela细胞系及人周血单核细胞均呈弱反应。~(120)Ⅰ标记的抗体在人小细胞肺癌裸鼠异种移植模型上的放射免疫显像表明,在72h时放射标记物在瘤区高度浓集。提示,单克隆抗体对人小细胞肺癌具有相当高特异性和亲和力。对这两个单克隆抗体的其他特性及临床应用前景正在研究中。     

大鼠抗小鼠重组膜联蛋白A2单克隆抗体的制备与鉴定

目的建立能够分泌特异性抗小鼠膜联蛋白A2（AnxA2）的大鼠-小鼠融合单克隆抗体杂交瘤细胞系。方法利用重组小鼠AnxA2蛋白作为抗原免疫Wistar大鼠,通过细胞融合和杂交瘤筛选技术建立特异分泌抗小鼠AnxA2蛋白的大鼠-小鼠融合单抗杂交瘤细胞株。采用酶联免疫吸附方法确定单克隆抗体亚型,免疫印迹和流式细胞术验证所筛选的单克隆抗体的特异性。结果通过对30多个分泌抗体的融合细胞克隆的筛选,获得一株分泌特异性抗小鼠AnxA2的大鼠-小鼠融合单克隆抗体杂交瘤细胞系SZ-158,连续培养传代后染色体分析证实,Wistar大鼠脾细胞与小鼠SP2/0细胞稳定融合;免疫印迹和流式细胞术显示该单克隆抗体可以特异识别小鼠AnxA2重组蛋白。结论该研究所获得的大鼠-小鼠融合单克隆抗体特异性针对小鼠AnxA2蛋白,可用于AnxA2转基因小鼠中AnxA2表达的检测,为深入研究AnxA2的功能提供了物质保障。     

抗人成骨肉瘤杂交瘤细胞系的建立及单克隆抗体特性

目的：建立抗人成骨肉瘤单克隆抗体杂交瘤并对杂交瘤细胞及抗体特性进行研究。方法 利用我室自建成骨肉瘤细胞系（ＯＳ－９６０７）免疫ＢＡＬＢ／c小鼠，取其脾细胞与骨髓 瘤细胞Ｓp２／０两便，经筛选和克隆化，制备杂交瘤细胞系，用免疫组化ＡＢＣ方法研究交瘤细胞分泌的单克隆抗体特性。结果：制得２株能持续、稳定分汔抗体的杂交瘤细胞系。其中６Ｅ７和５Ｄ３株杂交瘤细胞经过１００d连续培养，背地里克隆抗体６Ｅ７mＡb和５     

抗黄疸出血群赖型017株钩端螺旋体单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选和检定

用黄疸出血群赖型017株钩端螺旋体免疫BALB/c/小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞系SP2/0融合,经克隆化获得分泌抗赖型017株钩端螺旋体的单克隆抗体的杂交瘤细胞株,用酶联免疫吸附试验和间接免疫荧光抗体法,证实该株杂交瘤细胞所分泌的是特异性抗体,注入同系小鼠腹腔可诱生合高效价单克隆抗体的腹水,与杂交瘤细胞培养上清效价相比,增高800倍。单克隆抗体亚类检定结果为IgM及IgG_(2b)。     

10株分泌HSV—Ⅱ型单克隆抗体的杂交瘤细胞系的建立

用HSV-ⅡUW268株免疫BALB/c鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选、克隆化后获得10株分泌抗HSV-ⅡUW268株单克隆抗体的细胞系。其中1株仅与HSV-ⅡUW268株发生特异免疫反应,9株与HSV-Ⅱ和HSV-IF_(17)均发生免疫反应。用免疫沉淀试验检测单克隆抗体的Ig类型为IgG_1。保存的杂交瘤细胞仍能稳定地分泌抗HSV-ⅡUW268株的单克隆抗体。     

分泌抗猪囊尾蚴囊液抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

Kohler及Milstein(1975)首创的制备单克隆抗体的杂交瘤技术,已在医学、生物学等方面的研究中得到广泛应用。在寄生虫学领域内,国内外已对廿余种(亚种)寄生虫应用杂交瘤技术进行研究,至今尚未见到有关猪囊尾蚴单克隆抗体的研究报道。我们用猪囊尾蚴囊液抗原免疫BALB/C小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞系NS-○融合,获得成功。经克隆化获得三株分泌抗猪囊尾蚴囊液抗原的McAb杂交瘤细胞,分别命名为Aq_1、G_11、F_3,用ELISA和IHA检测证实三株杂交瘤细胞分泌特异抗体。     

抗RalB单克隆抗体的制备及初步应用

目的制备抗Ras相关蛋白RalB的单克隆抗体(McAb),探讨RalB蛋白在哺乳动物真核细胞中的表达,为进一步研究RalB功能奠定基础。方法以纯化的原核表达RalB蛋白免疫的BALB/c小鼠脾细胞与Sp2/0融合,通过间接ELISA的筛选和有限稀释克隆化,获得稳定分泌抗RalB蛋白的McAb的杂交瘤细胞株。通过免疫组织化学方法和Western-blot方法分别对RalB在组织中的表达及特异性进行鉴定。结果获得2株能高效分泌特异性McAb的抗RalB的杂交瘤细胞系F001,F002,其免疫球蛋白亚类均为IgG1。免疫组织化学实验结果表明RalB定位于肝癌细胞的细胞膜,Western-blot显示RalB在不同的肝癌细胞及正常肝细胞中均有表达。结论成功获得抗RalB的特异性的单克隆抗体,为进一步研究RalB与肿瘤的相关功能研究创造了条件。     

615系成年小鼠脾脏自然杀伤细胞活性的观察

我国自己培育的615近交系小鼠,已广泛地用于免疫学及实验肿瘤学的研究。迄今未见有关615系小鼠自然杀伤细胞(Natural Killer,NK)活性的报道。本文报道正常615系成年小鼠脾细胞对~(125)I-udR标记的肿瘤靶细胞的体外NK效应。材料与方法一、动物:615系小鼠,自中国医学科学院实验动物中心引入,在本室繁殖饲养,鼠龄2～2 1/2月,雌雄均有。二、脾细胞(效应细胞)制备:按常规方法制备     

用单克隆抗体鉴定人类单核细胞上的抗原

著者用单克隆抗体鉴定出人的外周血单核细胞上存在两种抗原,一种是Mo_1,一种是Mo_2。这两种抗原是通过自制的两种1gM单克隆抗体(抗—Mo_1与抗—Mo_2)确定的。单克隆抗体是用NS_1骨髓瘤细胞和免疫的小鼠脾细胞融合之后的杂交瘤制备的,小鼠是用人的外周血单核细胞免疫过的。然     

分泌抗hCG-抗HRP双特异单克隆抗体的二次杂交瘤细胞株E_4和E_7

用分泌抗人绒毛膜促性腺激素(hCG)单克隆抗体的6-巯基鸟嘌呤抗性杂交瘤突变株BAH_1-TG细胞与用辣根过氧化物酶(HRP)免疫的小鼠脾细胞进行二次杂交。二次杂交瘤细胞的培养上清用双抗原夹心放射免疫测定法和双抗原夹心酶联免疫测定法检测抗hCG-抗HRP双特异抗体。经多次克隆和筛选,获得两株分泌抗hCG-抗HRP双特异单克隆抗体的二次杂交瘤株E_4和E_7。     

抗HBV逆转录酶杂交瘤细胞系的建立及其单克隆抗体鉴定

目的 建立抗乙型肝炎病毒逆转录酶单克隆抗体杂交瘤并研究杂交瘤细胞及抗体特性。方法 用经原核表达的乙型肝炎病毒逆转录酶蛋白（HBV-RT）免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合,经筛选和克隆化制备杂交瘤细胞系,然后用ELISA法筛选出阳性克隆,最后用免疫组化ABC方法研究杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体特性。结果 2株能持续、稳定分泌抗体的杂交瘤细胞系,其杂交瘤细胞经过100d连续培养,单克隆抗体分泌稳定,特异性强、腹水抗体效价免疫组化ABC法1：1000。免疫组化检测显示其相应抗原在肝炎及肝硬变组织中呈高表达（73%）,正常肝组织中未见阳性反应;其抗原主要分布于细胞质内。结论 此2株抗乙型肝炎病毒逆转录酶杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体具有特异亲合性,它们的成功制备为研究HBV感染的早期诊断及乙肝患的治疗奠定了基础。     

抗人胰腺癌单克隆抗体杂交瘤的建立

用小鼠骨髓瘤细胞系SP 2/0与新鲜癌组织匀浆免疫的Balb/C小鼠脾细胞融合制备抗人胰腺癌单克隆抗体。经间接荧光抗体法和免疫组织化学法筛选及有限稀释法克隆化后,获得一株产生与正常人体组织不反应,与人胰腺癌反应率高的抗人胰腺癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株。     

提高腹水瘤单克隆抗体产率的方法

以小鼠致敏的脾细胞与骨髓瘤细胞融合而获得的杂交瘤细胞株,在组织相容的小鼠体内可迅速生长而形成腹水瘤,并可分泌特异性单克隆抗体(McAb)。一只荷瘤小鼠可产生10～20mgMcAb,其代价仅相当于从培养上清液中分离等量单克隆抗体的一小部份。这类杂交瘤大多数来源于BALB/c系小鼠的骨髓瘤细胞及脾细胞。作者报道用BALB/c系小鼠与一种远交系小鼠杂交,繁育出体形大而价格便宜的杂交一代(F_1),用以产生腹水瘤,并制备特异性单克隆抗体。用60日龄雄性BALB/c系小鼠与同龄的封闭群SW/HPB系雌性鼠同居10天。该BALB/c系雄鼠可再与另外的SW/HPB系雄鼠交配。幼鼠21日龄断奶。定期测定BALB/c系和(BALB/c×SW/HPB)F_1小鼠的体重增长。对两种性别的F_1小鼠所产生的腹     

抗人脑胶质瘤单克隆抗体SZ-39特异性及其识别抗原的初步鉴定

本文以人脑恶性胶质瘤细胞系SHG-44为抗原免疫BALB/C小鼠,通过杂交瘤技术获得了一株稳定地分泌抗胶质瘤细胞单克隆抗体的杂交瘤细胞株SZ-39。经ELISA、间接免疫荧光法和ABC免疫组化法分别检测了SZ-39与各种肿瘤和正常细胞、脑瘤和正常人体组织