水通道蛋白5在干燥综合征发病机制中的作用研究进展

干燥综合征(Sjgren''s syndrome, SS)是以口干、眼干为主要临床表现的一种病因不明的自身免疫性疾病。水通道蛋白5(aquaporin5, AQP5)是一种能特异性跨膜转运水的蛋白,能显著增加细胞膜水通透性,参与水的分泌、吸收及细胞内外水的平衡。近年来有研究表明AQP5在干燥综合征患者唾液腺细胞中异常的亚细胞分布可能参与了疾病的发生。而恢复干燥综合征患者腺体内AQP5的正常亚细胞分布、上调AQP5成为治疗SS的可能手段。     

颌下腺MRI在干燥综合征诊断中的价值

目的：探讨颌下腺磁共振成像（magnetic resonance imaging,MRI）在干燥综合征（Sj?gren’s syndrome,SS）诊断中的价值。方法：回顾性分析2014年11月—2017年11月因口干于南京医科大学第一附属医院就诊的116例患者的临床及影像学资料。根据2002年美国欧洲合作联盟分类（诊断）标准,分为SS组（76例）和非SS组（40例）。受试者均行颌下腺和腮腺MRI检查,以单侧颌下腺和腮腺为单位,观察受试者腺体脂肪沉积和体积改变情况。结果：SS组患者颌下腺和腮腺MRI均表现为双侧腺体弥漫分布的脂肪信号。SS组颌下腺和腮腺脂肪信号分级随病程延长逐渐升高（r=0.44,P < 0.001;r=0.41,P < 0.001）。颌下腺脂肪信号分级诊断SS的灵敏度、特异度和准确性均优于腮腺（76.32% vs.73.03%、97.50% vs. 95.00%、83.62% vs. 80.60%）。SS组颌下腺体积小于非SS组（P < 0.001）,而两组腮腺体积差异无统计学意义（P=0.28）。SS组颌下腺体积随脂肪信号分级增高逐步减小（r=-0.53,P < 0.001）,而SS组腮腺体积与脂肪信号分级无相关性（P=0.73）。结论：颌下腺MRI可辅助诊断SS,且诊断价值优于腮腺。     

腺病毒介导AQP1基因治疗涎腺干燥综合征的实验研究

目的为了观察SS涎腺局部AQP1基因转移的治疗效果.方法建立小鼠SS动物模型,分别予以AQP1基因重组腺病毒、空病毒载体对照和生理盐水对照.观察各组小鼠饮水量、唾液流率的改变,Western blot分析各组小鼠颌下腺中AQP1表达量的变化.结果在SS小鼠颌下腺腺体破坏、腺泡萎缩变性、腺体分泌功能受到破坏的情况下,通过将AQP1基因腺病毒重组体转染到小鼠颌下腺可以有效提高唾液分泌,从而改善口干症状降低饮水量. 结论空载体对照组与SS组在饮水量、唾液流率等方面无显著性差异说明腺病毒空载体转染对SS小鼠的唾液分泌无显著影响,说明AQP1基因腺病毒重组体对小鼠涎腺干燥综合征的治疗作用是通过其携带的AQP1基因发挥作用的.     

润燥活血法对干燥综合征小鼠血清及颌下腺M3R表达的影响

目的 通过观察干燥综合征(sjogren syndrome,SS)小鼠血清及颌下腺毒蕈碱样乙酰胆碱3型(M3R)的表达,探讨润燥活血法对其的影响及作用机理。方法 选用BALB/c小鼠47只,随机分为正常对照组（正常组,n=10）和造模组（n=37）。取5只BALB/c小鼠处死取颌下腺制备抗原进行造模。造模组采用背部皮内5个部位多点注射抗原的方法进行免疫,建立SS模型。在造模后第5周随机选取2只造模小鼠处死,通过病理形态学观察判定造模成功。造模成功后随机分为模型组（n=10）、中药组（n=10）和HCQ组（n=10）。分别灌胃给药：中药组按11.4g/kg/d剂量灌胃中药解毒通络生津汤,模型组灌胃等量生理盐水,HCQ组小鼠按0.06g/kg/d剂量灌胃HCQ混悬液（HCQ与生理盐水混合液）,均每日1次,正常组正常饲养。同时测定小鼠唾液量、饮水量。连续用药30天后处死,取各组小鼠颌下腺、脾及血清。采用苏木素-伊红（HE）染色评价颌下腺淋巴细胞浸润情况,采用ELISA法测定标本血清M3R水平,免疫组化法检测颌下腺M3R表达水平。结果 与正常组比较,模型组血清、颌下腺M3R表达增加,颌下腺淋巴细胞浸润明显[（12.23±10.10,2.23±0.11,2.42±0.22）比（2.72±1.21,1.21±0.11,0.18±0.05）,P＜0.05、P＜0.01、P＜0.01];与模型组比较,中药组、HCQ组血清、颌下腺M3R表达减少,颌下腺淋巴细胞浸润减轻[（3.30±6.25,1.62±0.40,1.21±0.33）,（3.17±0.87,1.53±0.06,1.08±0.09）比（12.23±10.10,2.23±0.11,2.42±0.22）,均P＜0.05];中药组和HCQ组之间比较无差异[（3.30±6.25,1.62±0.40,1.21±0.33）比（3.17±0.87,1.53±0.06,1.08±0.09）,均P＞0.05]。与治疗前比较,中药组小鼠唾液量增加[（25.53±4.27mg）比（22.17±1.50mg）,P＜0.05]。结论 润燥活血法可能通过下调M3R表达,从而抑制颌下腺淋巴细胞浸润,改善腺体分泌能力,阻止SS进展。     

新风胶囊对干燥综合征大鼠水通道蛋白1和5表达的影响

目的观察水通道蛋白1(aquaporin 1,AQP1)和水通道蛋白5(aquaporin 5,AQP5)在干燥综合征(Sjogrens syndrome,SS)大鼠颌下腺的表达水平及新风胶囊(Xinfeng Capsules,XFC)对其影响。方法将50只SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组和硫酸羟氯喹(hydroxychloroquine sulfate,HCQ)、白芍总皂苷(to-tal glucosides of peony,TGP)、XFC治疗组,每组10只,除正常对照组外,向每只大鼠两后足跖部注射与弗氏完全佐剂(Freunds complete adjuvant,CFA)充分乳化后的颌下腺蛋白混合抗原0.2ml诱发SS大鼠模型,常规光镜下观察大鼠颌下腺的病理变化,免疫组织化学法检测各组大鼠颌下腺AQP1、AQP5的表达,并观察各组大鼠体质量的变化。结果①与正常对照组相比,模型对照组SS大鼠体质量及AQP1、AQP5显著降低(P0.05);②与模型对照组比较,HCQ组、TGP组、XFC组SS大鼠体质量及AQP1、AQP5显著升高(P0.05);③与HCQ组、TGP组相比,XFC组SS大鼠体质量明显升高(P0.05),AQP1、AQP5变化无统计学差异(P0.05)。结论 XFC可能是通过上调AQP1、AQP5的表达,调节SS大鼠的细胞免疫环境,增加SS大鼠体质量。     

干燥综合征患者颌下腺核素动态显像功能参数的研究

目的采用放射性核素动态显像技术定量研究干燥综合征患者颌下腺的功能.方法根据颌下腺动态影像,建立颌下腺时间-放射性曲线,并计算有关功能参数.结果干燥综合征患者颌下腺的 UR,MA, MS 和 SV(1.52±0.81,28.38±8.71,47.61±11.49和20.44±13.28)明显低于正常对照组(3.46±0.71,59.76±10.23,68.93±8.52和41.36±10.65),P 均<0.001;干燥综合征患者颌下腺的 Tmin(5.89±2.71)明显大于正常对照组(2.29±1.40),P <0.01;干燥综合征患者颌下腺的 Tmax(25.12±10.23)与正常对照组(22.85±6.41)比较,差异无显著性(P >0.05).结论放射性核素动态显像定量分析颌下腺的 UR,MA,MS,SV 和 Tmin 对干燥综合征颌下腺损害的诊断有较高临床价值.     

AQP-4蛋白和AQP-4mRNA在新生鼠缺氧缺血脑组织的表达变化

目的探讨新生鼠缺氧缺血损伤脑组织水通道蛋白4的蛋白和mRNA（aquaporin-4,AQP-4）表达的变化及意义。方法健康7d龄SD大鼠共80只,分为对照组和缺氧缺血性脑损伤模型组（HIBD组）。每组动物8只。HIBD组经右侧颈总动脉结扎后,吸入8%O21h,建立HIBD模型。对照组仅行假手术,不予颈总动脉结扎和缺氧。HIBD组于HIBD模型制成后0、6、24、48h和72h分别处死动物（各时间点动物8只）,对照组与HIBD组相对应时间点分别处死动物,对两组动物进行脑组织病理学观察,Western Blot免疫印迹法检测脑组织AQP-4蛋白的表达和RealtimePCR检测脑组织AQP-4mRNA的表达。结果 HIBD组在HIBD后6、24、48h和72h脑组织病理学出现脑水肿及软化、梗死等改变,并随缺氧缺血后时间延长病理学改变加重。与对照组比较,HIBD组脑组织AQP-4蛋白和AQP-4mRNA表达从HIBD后6h即开始下降,48h内下降至最低,72h出现恢复,但仍低于对照组（P〈0.05）。结论 AQP-4可能参与脑内渗透平衡的重建,AQP-4表达下降可能与HIBD脑组织脑水肿及病理学变化的发生发展有关。     

AQP-2在慢性心力衰竭小鼠肾脏中的表达及意义

目的研究水通道蛋白-2（Aquaporin，AQP-2）在实验性慢性心力衰竭（Chronic heart failure，CHF）早期（冠脉结扎2周）和晚期（冠脉结扎12周）小鼠肾脏组织中的表达及意义。方法以左冠状动脉结扎建立小鼠CHF模型。先镜下观察冠脉结扎心衰小鼠肾组织病理改变；用免疫组织化学法检测心衰小鼠肾组织AQP-2蛋白表达；用逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）法检测心衰小鼠肾脏组织AQP-2mRNA表达。结果冠脉结扎2周后，肾小管可见水肿改变，结扎12周后，肾小管有明显空泡形成；结扎12周后肾组织AQP-2基因和蛋白表达显著高于结扎2周组和假手术组，其中结扎2周组较假手术组也有显著增高。结论CHF小鼠肾组织存在AQP-2基因和蛋白表达增加，且随着心力衰竭加重表达增强。     

两种单肺通气方式对大鼠肺AQP-5表达影响的对比研究

目的研究两种单肺通气（OLV）方式下大鼠肺组织水通道蛋白-5（AQP-5）表达的变化。方法建立两种OLV大鼠模型：夹闭左侧肺门OLV组（A组）,过深插管OLV组（B组）。按不同通气时间分亚组A1、A2、A3和B1、B2、B3。设双对照组：双肺通气组（C组）,同样分亚组C1、C2、C3;空白对照（D组）。免疫印记法检测肺AQP-5的表达。结果 A、B、C组AQP-5的表达均较D组减少（P〈0.05）;各亚组左右两侧肺AQP-5的表达差异无统计学意义（P〉0.05）;A、B、C组组内各亚组比较差异均有统计学意义（P〈0.05）;A1、B1、C1组间比较差异均无统计学意义（P〉0.05）;A2、B2、C2组间比较,A2比B2和C2均有减少（P〈0.05）,B2与C2差异无统计学意义（P〉0.05）;A3、B3、C3组间比较,A3和B3均较C3组减少（P〈0.05）,A3比B3减少（P〈0.05）。结论机械通气可致大鼠AQP-5表达下调,与时间相关,夹闭法OLV和插管过深法OLV对AQP-5表达的影响超过双肺通气,前者更明显。     

原发性干燥综合征合并肌炎患者临床特征分析

分析原发性干燥综合征（pSS）合并肌炎患者的临床特点,并与原发性多发性肌炎（PM）患者比较。结果示202例pSS患者中有4例（2．0％）在诊断pSS后5—20年出现肌炎表现,其中2例无明显肌痛和肌无力症状;肌酸肌酶（CK）最高值为（480—2702）IU／L,中位数为789．5IU／L,抗Jo-抗体均阴性;糖皮质激素治疗1周后CK下降13．9％～71．5％,中位数为48．9％;随访8个月至5年,无一例肌炎病情反复。与15例PM患者资料比较分析,两组在肌痛发生率、CK最高值、激素治疗后CK下降率、抗Jo-1抗体阳性率等方面差异有统计学意义。提示pSS患者合并肌炎较为少见,多在干燥综合征多年之后出现,肌痛和肌无力表现较轻,使用激素效果较好。     

唾液腺核素动态成像在干燥综合征诊断中的应用

目的：观察唾液腺核素动态成像在干燥综合征中的成像特点,探讨其在干燥综合征诊断中的价值。方法：对干燥综合征患者组和正常对照组行唾液腺核素扫描动态成像检测。首先对患者组腮腺和颌下腺成像阳性率进行比较。其次比较患者组和对照组分别在腮腺、颌下腺核素摄取速率和排泄速率的差异。结果：①干燥综合征患者组中腮腺和颌下腺核素扫描动态成像的阳性率无统计学差异（P〉0.05）;②患者组腮腺和颌下腺的核素摄取速率和排泄速率均显著高于正常对照组。结论：唾液腺核素扫描动态成像为干燥综合征临床诊断提供了有力的手段。     

原发性干燥综合征合并恶性淋巴瘤的临床特征

目的 观察和了解原发性干燥综合征(pSS)患者发生恶性淋巴瘤(ML)的特点,探讨危险因素.方法 1980年1月至2010年8月在北京协和医院住院的pSS合并ML的患者(pSS/ML)共17例,进行回顾性分析;同期未合并ML的pSS患者(pSS/nML)共4485例,随机抽取163例进行比较.结果 (1)17例pSS/ML患者中女14例,男3例;平均年龄(53±13)岁,自发病至确诊pSS(8±9)年,自pSS确诊至ML确诊平均间隔(4±4)年.男女比例、发病年龄、病程与pSS/nML组的差异无统计学意义(P＞0.05);(2)pSS/ML与pSS/nML临床表现和实验室检查差异有统计学意义(P＜0.05)的有:淋巴结肿大、腮腺肿大和白细胞降低;(3)17例pSS/ML患者,15例为非霍奇金淋巴瘤(NHL)(其中B细胞来源14例),1例为霍奇金淋巴瘤(HL),1例为T细胞来源淋巴肉瘤.结论 pSS患者随着病程延长,有腮腺肿大、淋巴结肿大、白细胞降低等表现的更容易合并ML,且以NHL为主,预后较差.     

SSA表位在原发性干燥综合征患者唾液腺中的表达

目的 探讨60 000相对分子质量SSA表位差异性表达与原发性干燥综合征(pSS)患者唾液腺(MSG)受累的相关性.方法 利用噬菌体抗体展示技术筛选并可溶性表达针对3个SSA抗原表位(P1:480-494,P2:310-323和P3:230-241)特异性单克隆单链抗体(ScFv McAb),免疫组化法(IH)检测不同表位在pSS患者MSG的表达情况,并判断表达程度与MSG炎症是否存在相关性.结果 pSS MSG活检标本P1～P3表位的均有表达,以腺管、泌管上皮细胞胞质和胞膜着色为主.P1表位表达强度高于P2和P3表位(x2=12.94,P＜0.01),且仅P1表位表达强度与MSG的炎性浸润程度呈正相关关系(t=2.27,P＜0.05).结论 SSA抗原表位在MSG组织异位表达于上皮细胞的细胞膜,从而可能打破免疫耐受,诱导机体产生致病性抗体.P1表位在MSG膜高表达,而且仅P1与MSG炎症存在正相关关系,提示P1表位可能是引发pSS自身免疫应答的关键表位.     

大鼠下颌下腺内ncNOS及NT-3的表达

目的对大鼠下颌下腺内神经型一氧化氮合酶(ncNOS)及神经营养因子(NT-3)进行定性和定位研究.方法取10只SD大鼠下颌下腺,进行HE染色和免疫组织化学染色.结果大鼠下颌下腺颗粒曲管、纹状管及小叶间导管上皮细胞呈ncNOS及NT-3免疫反应阳性,而腺泡细胞则为阴性.结论大鼠下颌下腺导管上皮中有ncNOS及NT-3的表达,提示下颌下腺具有复杂的分泌功能.     

应用α-胞衬蛋白鼻黏膜免疫治疗干燥综合征的实验研究

目的 探讨α-胞衬蛋白鼻黏膜给药对干燥综合征自发鼠模型NOD小鼠SS病变的抑制作用及其机制.方法 以NOD小鼠作为干燥综合征自发鼠模型,8只1组,自4周龄开始分别鼻吸入法给予α-胞衬蛋白1 μg和1O μg,隔天给药1次,对照组分别给予磷酸盐缓冲液(PBS)10 μl及谷胱甘肽转移酶(GST)10 μg,观察小鼠饮水量的改变.测定血清中的抗α-胞衬蛋白及M3受体蛋白多肽(M3RP)抗体,抗干燥综合征抗原(SS)A抗体、SSB抗体、类风湿因子(RF)及抗核抗体(ANA)等自身抗体.酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定白细胞介素(IL)-10和干扰素-γ,流式细胞仪检测脾细胞FoxP3+ T细胞的表达,应用HE染色和免疫组化方法 分别检测小鼠颌下腺、腮腺的病理学改变及α-胞衬蛋白的表达.结果 (1)鼻吸入α-胞衬蛋白可以抑制NOD小鼠自身抗体的产生.α-胞衬蛋白鼻黏膜免疫组的α-胞衬蛋白抗体和M3RP抗体滴度较对照组减低.差异有统计学意义(P＜0.05).至小鼠17周龄,对照组分别有5只鼠出现ANA阳性,而1 μg组和10 μg组分别有2只和3只鼠ANA阳性.(2)鼻吸入α-胞衬蛋白可使NOD小鼠血清IFN-γ水平降低.α-胞衬蛋白1 μg组、10 μg组、PBS组及GST组小鼠血清干扰素-γ水平,分别为(42±16)、(37±15)、(87±18)及(72±11)pg/ml,α-胞衬蛋白给药组明显低于对照组(P＜0.05),而IL-10在各组间差异无统计学意义.(3)鼻吸入α-胞衬蛋白可上调NOD小鼠Foxp3+ T细胞的数量:1 μg、10 μg、PBS及GST组小鼠脾细胞的表达Foxp3+的CD4+ CD25+ T细胞占CD4+CD25+ T细胞的比例分别为(4.0±1.7)%、(4.3±1.0)%、(2.2±0.6)%、(2.3±0.7)%,α-胞衬蛋白治疗组较对照组明显提高(均P＜0.05).(4)鼻吸入α-胞衬蛋白可以抑制NOD小鼠腺体淋巴细胞浸润和α-胞衬蛋白的表达.α-胞衬蛋白给药组淋巴细胞浸润较对照组少,且应用α-胞衬蛋白多抗免疫组化的方法检测,α-胞衬蛋白给药组的α-胞衬蛋白表达明显减少.(5)鼻吸入α-胞衬蛋白可以降低NOD小鼠的饮水量.α-胞衬蛋白1 μg、10 μg、PBS及GST组的小鼠于16周龄时饮水量分别为(39.2±2.1)、(40.4±2.5)、(49.3±3.1)及(51.6±2.8)ml,与对照组相比,α-胞衬蛋白免疫诱导后可减少患鼠的饮水量(P＜0.05).结论α-胞衬蛋白是SS的致病性抗原,利用该蛋白鼻黏膜免疫可以上调调节性T细胞的数量,抑制SS动物自身抗体的产生及腺体中淋巴细胞浸润.     

Anatomy of arteries and veins of submandibular glands

Background Transplanting a vascularized autologous submandibular gland (SMG) is considered an effective method to treat severe keratoconjunctivitis sicca. But the operation may fail due to the anatomic variances in the blood vessels of SMG. The present study aimed to investigate the submandibular glands at the microanatomy level.Methods The microanatomy of blood vessels including arteries and veins of submandibular gland was investigated using 30 adult corpses and 60 submandibular glands were anatomized under a surgical microscope. The lengths and diameters of the arterial and venous glandular branches were measured using sliding caliper.Results The submandibular gland was mainly supplied by the facial artery and submental artery, partly by the lingual artery and external jugular artery. The venous drainage of the submandibualr gland occurred through the anterior facial vein, the venae comitantes of facial artery, the vein close to the Whaston’s duct (the hilum vein), and seldom drained to external jugular vein and other veins.Conclusions The anatomy of SMG is a complicated structure. Determining the main blood vessels of the submandibular gland is very important to achieve a successful vascularized autologous SMG transplant.     

Clinical and prognostic characteristics of 573 cases of primary Sj(o)gren's syndrome

Background Primary Sj(o)gren's syndrome (pSS) is one of the autoimmune diseases with high incidence. There were several clinical investigations in Caucasian but seldom in Chinese. The aim of this study was to compare the difference of clinical manifestations, immunological features and prognosis of pSS between Caucasian and Chinese pSS patients.Methods Five hundred and seventy-three patients who fulfilled the 2002 international classification (criteria) for pSS from Peking Union Medical College Hospital between 1985 and 2006 were screened retrospectively and compared with other populations.the onset of the disease was (39.0±13.7) years and in 169 (29.5%) patients the disease onset occurred before the age of 30 years. The average duration from disease onset to pSS diagnosis was 48 months (range, 1-552 months). It had been shortened during the recent five years. (2) Dry mouth (84.5%) and dry eyes (70.0%) were the most common symptoms,significantly lower than foreign patients (P=0.000). Two hundred and seventy-two (47.5%) patients presented with rampant caries, 160 (27.9%) with parotidomegaly. The positivity of xerostomia, xerophthalmia and salivary gland biopsy were 91.9%, 94.8% and 90.7%, respectively. (3) Systemic involvement occurred in 91.4% patients. Compared with studies done outside China, higher prevalence of fever 41.0%, myositis 4.9%, pericardial effusion 14.8%, pulmonary involvement 42.3%, renal involvement 33.5%, thyroid involvement 32.7%, pancrease involvement 5.6% (P ＜0.01) and lower prevalence of fatigue, lymphadenectasis and Raynaud's phenomenon (P ＜0.01) were seen. (4) Risk factors of death include pulmonary artery hypertension, liver damage and interstitial lung disease.Conclusions Chinese pSS differs significantly from the non-Chinese cases in terms of the age of onset, systemic involvement, autoantibodies and proportional mortality rate. Lung and liver damage were found to be the highest risk factors of the disease prognosis.     

原发干燥综合征患者外周血T细胞亚群变化的相关研究

目的:了解原发干燥综合征患者外周血T细胞亚群的变化及其临床意义。方法:用流式细胞术检测并比较原发干燥综合征(pSS)与系统性红斑狼疮(SLE)患者和对照组外周血中T淋巴细胞亚群的差异。分析T细胞亚群与血沉、血清免疫球蛋白IgG和类风湿因子等病情活动指标的关系。结果:pSS组和SLE组外周血CD4 T淋巴细胞水平和CD4 /CD8 比值较正常对照组明显减低(P<0.05),而pSS与SLE两组则无明显差异(P>0.05)。pSS组外周血CD8 T淋巴细胞水平明显高于正常对照组(P<0.05)和SLE组(P<0.05),SLE组外周血CD8 T淋巴细胞水平也高于正常对照组(P<0.05)。pSS患者外周血CD4 T淋巴细胞水平和CD4 /CD8 比值在疾病活动期下降,并与pSS的疾病活动性指标血清IgG、血沉呈负相关性(P<0.05)。CD8 细胞水平在疾病活动期明显升高,且与以上指标呈正相关性(P<0.01)。结论:pSS患者外周血T淋巴细胞亚群存在异常,与发病密切相关。pSS患者外周血CD4 T淋巴细胞、CD8 T淋巴细胞和CD4 /CD8 比值与病情活动有关。     

干燥综合征与病毒感染的关系研究进展

干燥综合征是一种以口眼干燥为特征,主要累及外分泌腺的弥漫性结缔组织病。其发病可能与病毒感染、遗传和性激素异常等多种因素有关,在这些因素的共同作用下,机体免疫异常,组织损伤。与该病关系较密切的病毒有EB病毒、丙型肝炎病毒、巨细胞病毒、反转录病毒等。病毒在干燥综合征的发病机制中可能起重要的作用。