应用聚合酶链反应进一步探讨原发性肝癌与HBV,HCV感染的关系

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）检测原发性肝癌（ＰＨＣ）及肝硬化（ＬＣ）患者血中ＨＢＶ－ＤＮＡ及ＨＣＶ－ＲＮＡ，同时检测血中乙肝５项标志及抗－ＨＣＶ。结果５６例ＰＨＣ中，ＨＢＶ５项标志阳性者４３例（７６．７８％），ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者４２例（７５．００％），两种方法联合应用阳性率为４９例（８７．５％）；其中３４例检测ＨＣＡ－ＲＮＡ阳性者８例（２３．５３％）。６２例ＬＣ中，ＨＢＶ５项标志阳性者３５例（５６．４５％），ＨＢＶ－ＤＮＡ阳性者３８例（６１．２９％），二者联合应用阳性数为４５例（７２．５８％），其中３４例检测ＨＣＶ－ＲＮＡ阳性数为９例（２３．６８％）。ＰＨＣ组ＨＢＶ感染率显著高于ＬＣ组（Ｐ＜０．０５），ＨＣＶ感染率两组差异无显著性（Ｐ＜０．０５）。并对ＨＢＶ、ＨＣＶ感染与ＬＣ、ＰＨＣ的发生发展作进一步讨论。     

原发性肝癌中 HBV X、S、Pre-S、C 基因片段整合与 ras、myc 癌基因表达的关系

用地高辛标记的ＨＢＶ基因组探针检测了６６例肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）中ＨＢＶ的存在状态，从中筛选出３２例仅有ＨＢＶＤＮＡ整合的ＨＣＣ作为研究对象，进一步检测了ＨＢＶＸ基因、Ｓ基因、Ｐｒｅ－Ｓ、Ｃ基因ＤＮＡ片段的整合情况，并探讨了ＨＢＶ４种基因亚片段整合与ｒａｓ、ｍｙｃ癌基因表达的关系。结果显示，ＨＢＶＸ、Ｓ、Ｐｒｅ－Ｓ和Ｃ基因片段的整合率分别为８７．５％（２８／３２）、６２．５％（２０／３２）、６２．５％（２０／３２）和２５．０％（８／３２）。ｐ２１ｒａｓ、ｐ６２ｍｙｃ在ＨＣＣ中的表达率分别为５０．０％（２０／４０）、８１．２％（２６／３２）。通过对ＨＣＣ中４种ＨＢＶ基因片段整合与ｐ２１ｒａｓ、ｐ６２ｍｙｃ表达之间关系的研究，显示ｐ６２ｍｙｃ的表达与ＨＢＶＸ、Ｐｒｅ－Ｓ基因整合关系密切，ｐ２１ｒａｓ的表达则主要与ＨＢＶＸ基因整合有关（Ｐ＜０．０５）。提示ＨＢＶＸ、Ｐｒｅ－ＳＤＮＡ片段在宿主细胞染色体上的整合可能直接或通过其蛋白启动ｍｙｃ和（或）ｒａｓ癌基因的表达。     

肝细胞癌和其它慢性肝病HCV HBV感染比较分析

对１２８例有病理诊断依据的肝细胞场（ＨＣＣ）、４７例慢迁肝（ＣＰＨ）、１０５例慢活肝（ＣＡＨ）、４６例肝硬化（ＬＣ）．采用嵌套式ＰＣＲ技术检测其血标本中的丙型肝炎病毒（ＨＣｖ）ＲＮＡ和乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）ＤＩＩＡ，对这两种病毒的血清学标志也进行了研究。结果：在ＨＣＣ组。ＨＣＶＲＮＡ１４．１％阳性，ＨＢＶＤＮＡ７ｉ．３％阳性。ＣＰＨ，ＣＡＨ，ＬＣ和ＨＣＣ的ＨＢＶ感染率均在９０％左右，而ＨＣＶ感染率则分别为８．５％、９．５％、１７．４％和１９．５％，显示ＨＣＶ感染率随肝病严重程度的增加而有增加的趋势；晚期肝病组的ＨＣＶ感染率（１９．０％）显著高于慢性肝炎组（９．２％，Ｐ＜０．０５）。提示ＨＣＶ感染后经过慢性肝炎、肝硬化发展为ＨＣＣ可能是一个逐渐演进的病理过程。ＨＣＶ，ＨＢＶ重叠感染率。ＨＣＣ组高于ＣＰＨ，ＣＡＨ，而与ＬＣ相近，显示ＨＣＶ重叠感染在原有ＨＢＶ感染的基础上促进病变向着迁延化、慢性化，进而向着肝硬化、ＨＣＣ方向发展。     

原发性肝癌中HBV X,S,Pre—S,C基因片段整合与ras,myc癌基因 …

用地高辛标记的ＨＢＶ基因组探针检测了６６例肝细胞性肝癌（ＨＣＣ）中ＨＢＶ的存在状态，从中筛选出３２例仅有ＨＢＶ ＤＮＡ整合的ＨＣＣ作为研究对象，进一步检测了ＨＢＶ Ｘ基因、Ｓ基因、Ｐｒｅ－Ｓ、Ｃ基因ＤＮＡ片段的整合情况，并探讨了ＨＢＶ４种基因亚片段整合与ｒａｓ、ｍｙｃ癌基因表达的关系。结果显示，ＨＢＶ Ｘ、Ｓ、Ｐｒｅ－Ｓ和Ｃ基因片段的整合率分别为８７．５％（２８／３２）、６２．５％（２０／３２）、     

乙型肝炎病毒基因多重PCR的临床观测

为探讨多重多聚酶链反应（ＰＣＲ）在慢性乙型肝炎检测中的应用价值，选用ＨＢＶＤＮＡ的Ｓ区、Ｃ区及Ｘ区的３对引物Ｓ１／Ｓ２，Ｃ１／Ｃ２和Ｘ１／Ｘ２，同时扩增ＤＮＡ。结果发现，３个基因区的表达情况不同。７７例慢性乙型肝炎、肝硬化、肝癌患者ＨＢＶＤＮＡ的检出率分别是Ｓ区６１０％，Ｃ区４５５％，Ｘ区３９０％；且三区联合检出率为７５３％，与单独Ｃ区检出有明显差异（Ｐ＜００５）。提示多重ＰＣＲ能对ＨＢＶＤＮＡ同一模板的各基因区同时扩增，从而可以得到Ｃ区以外的其它保守基因区特异性的扩增片段，提高了对乙型肝炎病毒患者ＨＢＶＤＮＡ的检出率。     

原发性肝癌与乙型,丙型肝炎病毒感染的关系

用酶联免疫分析法（ＥＬＩＳＡ）对我院外科手术及病理检查证实的１５７例原发性肝癌（ＰＨＣ）进行乙型肝炎病毒血清感染标志（ＨＢＶＭ）及抗－ＨＣＶ检测，发现我国１３０例患者ＨＢＶＭ的阳性率为８８．５％，抗－ＨＣＶ阳性率１０．８％。２７例毕裔印尼（印尼）患者的ＨＢＶＭ及抗－ＨＣＶ阳性率分别为５９．３％及４８．１％，提示我国ＰＨＣ与ＨＢＶ感染关系密切，ＨＣＶ感染不是最主要原因。     

人肝癌组织中黄曲霉毒素和肝炎病毒基因检测分析

以肝细胞场（ＨＣＣ）患者手术切除标本为研究材料，采用高效液相色谱荧光法检测组织中的黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１），嵌套式多聚酶链反应技术检测组织中的ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ。在６９．２％（１８／２６例）的ＨＣＣ患者中检出了３．６５－８９．０６ｎｇ不等的ＡＦＢ１／ｇ肝组织；ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ检出率分别为９０．５％（５７／６３例）和１２．７％（８／６３例）。其中，ＡＦＢ１和ＨＢＶＤＮＡ重叠检出率为６１．５％（１６／２６例），ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ重叠检出率为７．９％（５／６３例），４例ＨＣＣ患者重叠检出了ＡＦＢ１、ＨＢＶＤＮＡ和ＨＣＶＲＮＡ；同步检测对照组５例，无１例出现这种情况。结果表明，上述３种因素均与人类肝癌密切相关，并且可能存在协同致癌效应。     

原发性肝癌结肠癌缺失基因杂合缺失研究

目的：了解结肠癌缺失基因（ＤＣＣ基因）在原发性肝癌发生发展中作用，方法：采用多聚酶链延伸反应－限制性片生长度多态性分析（ＰＣＲ－ＲＦＬＰ）方法对３０例外科手术切除原肝癌标本ＤＣＣ基因杂合缺失（ＬＯＨ）进行分析，结果：２８例信息个体中检出ＬＯＨ７例，占２５．０％，ＤＣＣ基因ＬＯＨ与临床病理参数和ＨＢＶ感染无显著相关，结论：ＤＣＣ基因ＬＯＨ可能参与了原发肝癌的发生发展。     

乙型肝炎患者血清抗：HCV临床意义探讨

应用第二代抗─ＨＣＶ酶免疫试验检测了１９４例各型乙型肝炎患者血清丙型肝炎病毒抗体（抗─ＨＣＶ），结果抗─ＨＣＶ阳性率为２３．２％，其中，重型肝炎（ＳＨ）者为４４．４％、原发性肝癌（ＰＨＣ）者为３７．５％、肝硬化（ＣＩＲ）者为３６．６％、慢活肝（ＣＡＨ）者为２６．１％、慢迁肝（ＣＰＨ）者为１６．７％、急性肝炎（ＡＨ）者为７．１％、无症状ＨＢｓＡｇ携带者（ＡＳＣ）的为６．７％，提示肝病越严重，其抗─ＨＣＶ的阳性率就越高。还发现重叠感染ＨＣＶ的乙型肝炎患者之ＨＢＶ复制率较低。     

乙肝病毒标志物在肝癌高发区不同人群中的分布

采用ＥＬＩＳＡ方法，对本地区原发性肝癌（ＰＨＣ）９７例、慢性肝病１２３例、非肝病病人６４例及体检健康者７８例，作ＨＢＶ－Ｍ检测，以了解乙肝病毒标志物在肝癌高发区不同人群中的分布。结果显示，其总流行率在上述４组中分别为９０．７２％、８０．４８％、４２．１８％和３９．０６％；ＰＨＣ与慢性肝病的ＨＢＶ标志物感染率无显著性差别（Ｐ＞０．０５），但较其他２组的显著增高（Ｐ＜０．０１）．提示ＰＨＣ与ＨＢＶ关系极为密切，两者存在病因关系。     

丙型肝炎病毒感染与原发性肝癌的关系——不同人群血清HCV RNA的调查

本文以聚合酶链反应(PCR)对重庆地区各种慢性肝病(CLD,n=182)和献血员(n=35)血清HCV RNA的存在状况进行了初步调查。结果发现:①HCV RNA在原发性肝癌(PHC)、肝硬化(LC)、慢性肝炎(CH)及献血员中的检出率分别为36.6％(34/93)、31.7％(20/63)、15.4％(4/26)和2.9％(1/35);②多数HCV RNA阳性CLD(41/58)与HBsAg或HBV DNA双阳性,单纯HCV RNA阳性见于15.1％(14/93)PHC、3.2％(2/63)LC和3.8％(1/26)CH。此资料提示约20％PHC可能与HCV-HBV双重感染有关,约15％PHC可能与单独HCV感染有关。     

原发性肝癌病理类型与乙肝病毒感染模式和血清AFP含量的相关性研究

目的 探讨原发性肝癌病理类型与乙肝病毒感染模式和血清AFP含量的相关性.方法 回顾性分析2003年1月-2013年12月广东省省内的三家医院的肝胆外科收治的原发性肝癌肝切除术患者的临床资料.按照病理类型将肝癌患者分为肝细胞癌组、胆管癌组、其他类型肝癌组3种病理类型并与乙肝病毒感染模式和血清AFP含量进行相关性分析.结果 原发性肝癌患者病理类型与患者的性别、年龄无明显的相关性(X2=1.034,P=0.596;X2=1.360,P=0.507);但不同病理类型的原发性肝癌患者血清AFP含量具有明显差异,且肝细胞癌患者血清AFP含量明显高于其他病理类型的肝癌患者,并且差异有统计学意义(X2=99.65,P =0.000);原发性肝癌的病理类型与乙肝病毒感染模式具有显著的相关性,且小三阳(HBsAg+HBcAb+HBeAb阳性)与肝细胞癌高度关联,大三阳(HBsAg+HBeAg+HBcAb阳性)与肝细胞癌也有一定的关联,HBsAb阳性和胆管癌也具有一定的关联性(P=0.000).结论 原发性肝癌的组织病理类型与乙肝病毒感染模式及血清AFP含量存在明显的相关性,医疗工作者及患者应重视血清AFP水平的检测以及乙肝病毒感染防治,特别是对于小三阳和大三阳患者.     

Distribution and significance of HBV DNA and HBAg in human primary hepatocellular carcinoma and liver cirrhosis

ＤｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎａｎｄｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆＨＢＶＤＮＡａｎｄＨＢＡｇｉｎｈｕｍａｎｐｒｉｍａｒｙｈｅｐａｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｃａｒｃｉｎｏｍａａｎｄｌｉｖｅｒｃｉｒｒｈｏｓｉｓＨａｎＨｕｉｘｉａ（韩慧霞），ＷａｎｇＷｅｎｌｉａｎｇ（王...     

原发性肝癌患者乙型及丙型肝炎病毒感染的检测

目的　调查原发性肝癌患者乙型及丙型肝炎病毒感染情况。　方法　采用免疫组织化学 SP法检测15 7例原发性肝癌患者乙型肝炎病毒 (HBV)及丙型肝炎病毒 (HCV)感染情况 ,每例患者均有血清学检测资料 ,另取 30例良性肝病组织作对照 ,所有数据用卡方检验。　结果　 15 7例原发性肝癌患者中 HBV感染阳性率为31.8% (5 0 / 15 7) ,HCV感染阳性率为 5 1.0 % (80 / 15 7) ,其中 10 7例原发性肝细胞癌 HBV、HCV感染阳性率分别为39.3% (42 / 10 7) ,4 5 .8% (49/ 10 7) ,5 0例胆管细胞癌 HBV、 HCV感染阳性率分别为 16 .0 % (8/ 5 0 ) ,6 2 .0 %(31/ 5 0 ) ,原发性肝细胞癌、胆管细胞癌 HBV、HCV重叠感染率分别为 2 7.1% (2 9/ 10 7) ,14 .0 % (7/ 5 0 ) ,良性肝病组HBV、HCV感染阳性率分别为 16 .7% (5 / 30 ) ,30 .0 % (9/ 30 )。原发性肝细胞癌 HBV感染、胆管细胞癌 HCV感染率高于良性肝病组 ,差异均有显著性 (P<0 .0 5 )。原发性肝细胞癌 HBV、HCV血清学检测阳性率分别为 87.8%(94 / 10 7) ,13.1% (14 / 10 7) ,胆管细胞癌 HBV、HCV血清学检测阳性率分别为 6 8.0 % (34/ 5 0 ) ,16 .0 % (8/ 5 0 )。　结论　原发性肝癌与 HBV、HCV的感染有密切关系     

乙型肝炎病毒相关性肝癌与p53基因变化的关系

目的：探讨与ＨＢＶ感染相关的肝癌其ｐ５３基因变化及意义，方法：收集１６例西安地区的肝癌及其旁肝组织，应用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交检测了组织中ＨＢＶＤＮＡ的状态，免疫组化确定ＨＢＶ的ＨＢｓＡｇ，ＨＢｘＡｇ和肿瘤抑制基因Ｐ５３蛋白的分布，采用ＰＣＲ扩增后直接ＤＮＡ序列分析，检测了ｐ５３基因第５～８外显子的基因序列。结果：１６例中１３例ＨＢＶＤＮＡＳｏｕｔｈｅｒｎ杂交阳性，１０例癌组织和１３例癌旁组织ＨＢｘ     

晚期原发性肝癌患者血清PCR－HBV DNA的意义

目的：为进一步研究ＨＢＶ感染与原发性肝细胞癌的关系．方法：ＥＬＩＳＡ法检测血清中ＨＢｓＡｇ，ＨＢｅＡｇ，抗－ＨＢｅ，抗－ＨＢｃ和抗－ＨＢｓ；ＰＣＲ检测血清ＨＢＶＤＮＡ．结果：３７例晚期原发性肝癌患者血清ＨＢ－ｓＡｇ，ＨＢｅＡｇ，抗－ＨＢｅ和抗－ＨＢｃ阳性者分别为１７例（４５．９５％），４例（１０．８１％），１６例（４３．２４％）和９例（２４．３２％），而抗－ＨＢｓ全部阴性．聚合酶链式反应检测ＨＢＶＤＮＡ，１８例（４８．６９％）阳性，非常显著地高于ＨＢｅＡｇ检出率（Ｐ＜０．０１）．抗－ＨＢｅ阳性中有７例ＰＣＲ－ＨＢＶＤＮＡ阳性．ＨＢＶ总感染率８９．１９％．结论：提示原发性肝癌发生与ＨＢＶ感染有关．     

人原发性肝细胞癌地高辛素标记HBV DNA探针的原位杂交与C－myc和P_（53）癌基因表达相互关系的研究

取自肝癌高发区的４０例人原发性肝细胞癌（ＰＨＣ）标本，应用地高辛素（Ｄｉｇ）标记ＨＢＶＤＮＡ探针作原位杂交，检测ＰＨＣ和癌周肝组织内ＨＢＶＤＮＡ的表达，并用光敏生物素Ｃ－ｍｙｃ癌基因探针原位杂交和用免疫组化检测ＨＢｓＡｇ，ＨＢｃＡｇ及Ｐ５３癌基因在ＰＨＣ和癌周肝组织内的表达。Ｄｉｇ－ＨＢＶＤＮＡ探针肝内总阳性率为８０％，在ＰＨＣ内为６５％，而癌周肝组织中为７３％。ＨＢＶ－ＤＮＡ定位于肝细胞或癌细胞的胞浆和胞核内，而ＨＢＶＤＮＡ阳性颗粒在胞浆内比胞核内多。ＨＢＶＤＮＡ阳性细胞癌周比癌内更多。结果表明，ＰＨＣ病例与ＨＢＶ存在关系密切；癌内ＨＢＶＤＮＡ大都属整合型，而癌周属游离型。研讨ＰＨＣ内ＨＢＶＤＮＡ的表达与ＨＢｓＡｇ，ＨＢｃＡｇ，和Ｐ５３及Ｃ－ｍｙｃ癌基因的表达相互关系及致癌作用。     

HBV感染与原发性肝癌关系的探讨

采用配比的方法,以原发性肝癌、肝硬化、慢性乙型肝炎和非肝病病人为研究对象,检测其HBV感染6项血清学标志。结果表明,原发性肝癌、肝硬化、慢性肝炎的HBV感染总阳性率分别为98.21%,93.75%和96.43%;与对照组有显著差异;3组的感染标志组合较一致,HBsAg和抗-HBc双阳性为主;HBeAg在肝硬化和慢性肝炎中明显高于肝癌组;抗-HBe和抗-HBcIgM3组间无显著差别。提示HBV感染的慢性化与原发性肝癌病因有密切联系。     

血清乙肝病毒X基因的检测方法及意义

目的 探讨血清乙肝病毒（ＨＢＶ）Ｘ基因的检测方法及肝病患者Ｘ基因检测的意义。方法 通过ＰＣＲ扩增法探讨ＨＢＶ Ｘ基因的检测方法,对扩增产物的序列进行测序分析,并对３０例肝癌及３２例肝硬化患者血清ＨＢｓＡｇ、ＨＢｅＡｇ与Ｘ基因进行检测。结果经琼脂糖电泳与序列分析表明,扩增产物与Ｘ基因序列一致。血清学检测显示,２例肝癌与２例肝硬化患者血清中Ｘ基因检测阳性,但ＨＢｓＡｇ检测阴性。结论 应用ＰＣＲ法能在血清中扩增出完整Ｘ基因片段,为研究Ｘ基因的序列变化与肝癌发生的关系提供了一个有效途径。部分肝病患者血清ＨＢｓＡｇ阴性,但在血清中能检出Ｘ基因,提示肝组织中存在Ｘ基因整合。