布地奈德对哮喘小鼠气道重塑及JAK1/STAT6表达的影响

目的 研究布地奈德（BUD）对支气管哮喘小鼠气道重塑及对JAK1、信号转导子和转录激活子6（STAT6）表达的调控作用。方法 将30只雌性BALB／c小鼠随机分为对照组、哮喘组和BUD组。以鸡卵蛋白为过敏原致敏和激发动物,建立慢性哮喘气道重塑模型。对照组动物采用生理盐水致敏和激发动物,BUD组在每次用过敏原激发前2h鼻腔滴人BUD（1mg／kg）。用BUXCO小鼠肺功能仪测定动物气道反应性,对肺组织切片行过碘酸雪夫（PAS）和Masson染色,就支气管周围炎细胞浸润及杯状细胞增殖进行评分,测定肺组织羟脯氨酸含量。应用免疫组化、免疫印迹及RT-PCR方法分别检测JAK1、STAT6、α-SMA的蛋白及α-SMA mRNA表达的变化。结果 哮喘组动物气道反应性明显高于对照组,logPC100分别为0．624±0．78和1．884±0．34,P〈0．01。BUD组小鼠气道反应性低于哮喘组（10gPC100为1．794±0．18,P〈0．01）。与哮喘组相比,BUD组气道上皮增生得到改善,上皮下胶原沉积减少,α-SMA蛋白和mRNA表达也较哮喘组低。BUD组黏液指数计分为（1．354±0．26）分,肺羟脯氨酸含量为（2844-16）μg／100mg,BALF中IL-4和IL-13含量为（7．34±0．6）ng／L、（10．64±0．9）ng／L,与哮喘组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。STAT6主要表达于气道上皮,分布于细胞胞质、胞核。与对照组相比,哮喘组和BUD组的STAT6分布未见明显变化。免疫印迹检测显示哮喘组的JAK1和STAT6蛋白表达均强于对照组,BUD则能明显下调这两种信号蛋白的表达。相关分析表明,JAK1和STAT6含量与气道PAS分数、α-SMA蛋白表达及肺组织羟脯氨酸含量分别呈正相关,也与BALF中IL4和IL-13水平呈正相关（均P〈0．05）。结论BUD抑制哮喘气道重塑。BUD可能通过下调JAK1和STAT6的表达,从而抑制了依赖于JAK1／STAT6通路的气道重塑。     

黄芩苷通过抑制JAK2/STAT3信号通路减轻脂多糖诱导的心肌细胞凋亡

目的 探讨黄芩苷对脂多糖（LPS）诱导的大鼠心肌细胞凋亡及Janus激酶2（JAK2）/信号转导和转录启动因子3（STAT3）信号通路的调控作用。方法 体外培养大鼠心肌H9C2细胞,分为对照组（不做干预）、LPS组（1 μg/mL LPS）和LPS+5、10、20、40 μmol/L黄芩苷组（1 μg/mL LPS+5、10、20、40 μmol/L黄芩苷）;酶联免疫吸附试验（ELISA）和活细胞计数试剂盒-8（CCK-8）法测定炎症因子［白细胞介素（IL）-6、IL-1β和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）］表达水平和细胞活力,筛选出最适浓度黄芩苷后,再次分组：对照组、LPS组、LPS+10 μmol/L黄芩苷组、LPS+AG490组、LPS+10 μmol/L黄芩苷+AG490组和LPS+10 μmol/L黄芩苷+colivelin组。用5-乙炔基-2′脱氧尿嘧啶核苷、Hoechst33258染色法、实时荧光定量PCR、蛋白免疫印迹法分别检测细胞增殖、凋亡、mRNA［细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）］表达及相关蛋白表达水平。结果 与对照组相比,LPS组细胞炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α表达水平显著升高,24和48 h细胞活力显著降低（P＜0.05）;与LPS组相比,LPS+10、20和40μmol/L黄芩苷组炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α显著降低（P＜0.05）,干预24 h LPS+10 μmol/L黄芩苷组细胞活力显著升高（P＜0.05）,选择干预24 h的LPS+10 μmol/L黄芩苷组进一步实验。与对照组相比,LPS组细胞增殖率、Cyclin D1 mRNA及蛋白表达水平显著降低（P＜0.05）,细胞凋亡率、Caspase-3 mRNA及蛋白表达、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达显著升高（P＜0.05）;与LPS组相比,LPS+10 μmol/L黄芩苷组和LPS+AG490组显著逆转了上述指标的变化（P＜0.05）;与LPS+10 μmol/L黄芩苷组相比,加入JAK2/STAT3通路抑制剂后,上述指标变化更为显著（P＜0.05）,LPS+10 μmol/L黄芩苷+colivelin组则与LPS+10 μmol/L黄芩苷+AG490组结果相反（P＜0.05）。结论 黄芩苷可抑制LPS诱导的大鼠心肌H9C2细胞的凋亡及炎症,其作用机制可能与抑制JAK2/STAT3通路的信号转导相关     

大鼠脑缺血再灌注损伤后磷酸化JAK2、STAT3蛋白表达及细胞凋亡

目的 观察磷酸化JAK2、磷酸化STAT3蛋白在局灶性脑缺血再灌注损伤后的表达及细胞凋亡的变化.方法 采用大脑中动脉线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型,应用免疫组织化学及Western blotting检测大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后磷酸化JAK2、磷酸化STAT3蛋白表达水平的变化.利用原位缺口末端标记法研究神经细胞凋亡的变化.结果 与假手术组大鼠相比,脑缺血再灌注损伤后磷酸化JAK2、磷酸化STAT3蛋白表达明显增强,以缺血周边区表达最明显,再灌注24 h达高峰,之后开始下降,再灌注168h仍有少量表达.缺血再灌注损伤后凋亡细胞也显著增多,再灌注24h达高峰,凋亡细胞的变化与磷酸化JAK2、磷酸化STAT3蛋白表达变化一致.结论 脑缺血再灌注损伤后引发JAK2、STAT3的活化及超量表达可能与神经细胞生存和凋亡有关,JAK2/STAT3信号通路可能参与了脑缺血再灌注损伤与修复的病理生理过程.     

白芍总苷对糖尿病大鼠肾组织JAK/STAT信号通路的调节作用

目的 探讨白芍总苷(TGP)对糖尿病大鼠肾组织JAK/STAT信号通路的调节作用.方法 采用链脲佐菌素(STZ)诱导大鼠糖尿病模型.随机分对照组、模型组与TGP给药组[50、100和200 mg/(kg·d)],8周后应用Western杂交方法检测肾组织磷酸化JAK2(p-JAK2),磷酸化STAT3(P-STAT3)与1α(Ⅳ)型胶原表达,免疫组化方法检测肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)表达.结果 TGP给药呈剂量依赖性降低糖尿病大鼠24h尿白蛋白排泄率.Western杂交显示模型组肾组织p-IAK2、P-STAT3与1 α(Ⅳ)型胶原蛋白蛋白表达显著高于对照组(P<0.01),TGP给药[50、100与200 mg/(kg·d)18周可使肾组织p-JAK2蛋白表达下降22-3%、50.5%与43.2%,p-STAT3蛋白表达下降20.9%、61.1%与42.3%,1 α(Ⅳ)型胶原蛋白表达分别下降47.9%、60.4%与72.9%.模型组肾组织TGF-β 1蛋白表达明显高于对照组,TGP给药组肾组织TGF-β1蛋白表达明显低于模型组(P<0.05,0.01).结论 TGP可明显改善糖尿病大鼠早期肾损害,其机制可能部分与抑制肾组织的JAK/STAT信号通路激活有关.     

JAK/STAT通路在脂多糖诱导肝细胞HMGB1释放中的作用

目的:探讨Janus激酶/信号转导和转录激活子(JAK/STAT)信号通路在内毒素脂多糖诱导肝细胞高迁移率族蛋白B1(HMGB1)释放中的作用?方法:观察100 μg/L 脂多糖诱导后,大鼠肝细胞BRL-3A细胞HMGB1 mRNA表达水平和细胞培养上清液中HMGB1含量的变化,及不同浓度的JAK/STAT通路抑制剂tyrphostin AG 490?氟达拉滨的影响?结果:脂多糖诱导BRL-3A细胞24 h后HMGB1 mRNA表达水平和培养上清液中HMGB1含量明显升高(P < 0.01),25 μmol/L tyrphostin AG 490和50 μmol/L氟达拉滨对以上2个指标显示一定程度的抑制作用(P < 0.05)?结论:内毒素脂多糖可诱导肝细胞HMGB1的表达和释放,其机制可能与细胞JAK/STAT信号通路有关?     

HMGB1及JAK2/STAT3通路在急性胰腺炎大鼠肾组织中的表达及罗格列酮的调节机制研究

目的:研究高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和JAK2/STAT3在急性胰腺炎模型大鼠肾组织表达及PPAR-γ激动剂罗格列酮的调节机制。方法:72只SD大鼠随机分为三组:假手术组(SO)、模型组(SAP)和罗格列酮组(ROSI),每组各24只。SAP组及ROSI组采用L-精氨酸法成功制备SAP模型,ROSI组制模后30min静脉注射罗格列酮6mg/kg,SO组腹腔及静脉分别注射等量生理盐水。各组注射后再分为6、12、24h三组(n=8)。观察肾脏病理变化,肾组织JAK2、STAT3、HMGB1蛋白表达,血清TNF-α、IL-1β、IL-6、BUN、Cr浓度作为检测指标。结果:与SAP组比较,ROSI组大鼠肾小管细胞病理损害较轻,肾组织内JAK2、STAT3、HMGB1蛋白明显下降(P<0.05),外周血IL-1β、IL-6、TNF-α和BUN、Cr含量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:罗格列酮能减轻急性胰腺炎大鼠肾小管及间质损伤,同时抑制HMGB1蛋白和JAK2/STAT3的表达,降低外周血促炎细胞因子水平,保护肾功能。     

鱼藤酮通过调控JAK/STAT3通路对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的影响

目的：探究鱼藤酮通过调控酪氨酸激酶/信号转导和转录活化因子3(JAK/STAT3)通路对口腔鳞状细胞癌细胞增殖、凋亡的影响。方法：将口腔鳞状细胞癌SCC25细胞分为对照组、低浓度鱼藤酮组(5μmol/L)、中浓度鱼藤酮组(10μmol/L)、高浓度鱼藤酮组(20μmol/L)、JAK2抑制剂AG490组(40μmol/L AG490)。MTT法检测各组SCC25细胞活力;克隆形成实验检测SCC25细胞增殖情况;流式细胞术检测SCC25细胞凋亡情况;Western blotting检测SCC25细胞中增殖、凋亡及通路相关蛋白表达情况。结果：与对照组比较,低浓度鱼藤酮组、中浓度鱼藤酮组、高浓度鱼藤酮组SCC25细胞存活率、克隆细胞数、c-Myc、CyclinD1、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3表达水平呈剂量依赖性显著降低,而凋亡率、caspase-3、Bax表达水平呈剂量依赖性显著增加(P<0.05～P<0.01),AG490组SCC25细胞存活率、克隆细胞数、c-Myc、CyclinD1、p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3表达水平显著降低,...     

苦参碱对妊娠高血压大鼠内皮损伤和JAK2/STAT3/SOSC1信号通路的影响

目的 探讨苦参碱对妊娠高血压(PIH)大鼠内皮损伤及酪氨酸蛋白激酶2/信号转导子和转录激活子3/细胞因子信号转录抑制因子1(JAK2/STAT3/SOSC1)信号通路的影响。方法 将60只孕鼠随机分成正常对照组、模型对照组、低剂量苦参碱组、高剂量苦参碱组、硫酸镁组,每组12只。正常对照组之外的各组孕鼠在妊娠第12天通过灌胃50 mg/kg亚硝基左旋精氨酸甲酯构建PIH大鼠模型。在妊娠第16天,低、高剂量苦参碱组分别灌胃50、100 mg/kg苦参碱,硫酸镁组灌胃100 mg/kg硫酸镁,正常对照组和模型对照组则灌胃等体积的生理盐水。分别使用大鼠无创血压计和考马斯亮蓝法检测各组孕鼠妊娠第16天(给药前)、第17天、第21天的尾动脉血压及24 h尿蛋白含量;酶联免疫分析试剂盒检测血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6、IL-10、内皮素(ET)、血栓素B2(TXB2)、一氧化氮(NO)、6酮前列腺素F1α(6-keto-PGF1α)水平;蛋白免疫印迹法检测大鼠胎盘组织中JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、SOS...     

lncRNA Zeb1-AS1调控JAK2/STAT3信号通路影响骨关节炎软骨细胞的增殖和凋亡

目的：探讨长链非编码RNA(lncRNA)E盒结合锌指蛋白1反义1(Zeb1-AS1)对骨关节炎软骨细胞的增殖和凋亡的影响,并探讨其机制是否与调控蛋白酪氨酸激酶2/信号转导和转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路有关。方法：将骨关节炎软骨细胞分为si-NC组、si-Zeb1-AS1组、si-Zeb1-AS1+JAK2/STAT3信号通路抑制剂(AG490)组。运用细胞计数试剂盒、流式细胞术检测细胞活力和凋亡率。Western blotting分析B细胞淋巴瘤(Bcl-2)、Bcl相关X蛋白(Bax)、p-JAK2和p-STAT3表达水平。结果：与si-NC组比较,si-Zeb1-AS1组骨关节炎软骨细胞增殖(48、72 h)、Bcl-2、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达明显升高(P<0.01),凋亡率、Bax蛋白表达明显降低(P<0.01)。与si-Zeb1-AS1组比较,si-Zeb1-AS1+AG490组骨关节炎软骨细胞增殖(48、72 h)、Bcl-2、p-JAK2和p-STAT3蛋白表达明显降低(P<0.01),凋亡率、Bax蛋白表达明显升高(P&...     

丹参联合川芎嗪对肺纤维化大鼠肺组织JAK1、STAT1、ICAM-1表达的影响

目的:观察丹参联合川芎嗪腹腔注射对博来霉素(bleomycin,BLM)致肺纤维化大鼠肺组织蛋白酪氨酸激酶1(JAK1)、信号转导与转录活化因子1(STAT1)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)表达的影响。方法:将90只成年雄性SD大鼠随机分为以下6组:生理盐水(NS)组、BLM组、地塞米松(DM)组、小剂量中药(A)组、中剂量中药(B)组、大剂量中药(C)组,每组大鼠各15只。BLM组、DM组、A组、B组、C组气管内灌注BLM复制大鼠肺纤维化模型,NS组气管内灌注等体积的NS,造模成功24h后各组大鼠给予药物腹腔注射。NS组和BLM组每日给予腹腔注射NS,DM组每日给予腹腔注射DM,A组、B组及C组每日给予不同剂量丹参和川芎嗪复合制剂腹腔注射,分别于造模后第7天,第14天和第28天处死每组大鼠各5只,肺组织多聚甲醛固定后行HE染色和Masson染色观察肺泡炎及肺纤维化程度;免疫组织化学法测定肺组织中JAK1、STAT1、ICAM-1的表达;血清用于肝肾功能的检测以评价药物安全性。结果:①大鼠血清肝肾功能检测结果显示各组两两比较差异无统计学意义(P>0.05)。②NS组大鼠各时间点肺组织未发现肺泡间隔水肿、炎性细胞浸润及纤维化的形成。BLM组大鼠第7天时肺泡腔内可见大量炎性细胞浸润,第14天时炎性细胞减少,肺泡间隔内成纤维细胞显著增多,肺泡结构破坏,第28天时肺纤维化程度进一步加重,形成广泛纤维化。与BLM组比较,DM组大鼠各时间点肺泡炎及纤维化程度减轻(P<0.05)。A组大鼠肺泡炎和肺纤维化程度与BLM组类似。B组、C组第14天肺泡炎及肺纤维化程度明显低于BLM组(P<0.05)。B组、C组第28天肺纤维化程度明显低于BLM组(P<0.05)。③与NS组比较,BLM组、DM组、A组、B组、C组肺组织中JAK1、STAT1、ICAM-1的表达水平明显升高(P<0.05)。④与BLM组比较,DM组及B组、C组肺组织中JAK1、STAT1、ICAM-1的表达水平明显降低(P<0.05)。⑤肺组织JAK1、STAT1、ICAM-1的表达与肺泡炎及肺纤维化评分呈正相关。结论:丹参联合川芎嗪腹腔注射能减轻BLM致肺纤维化大鼠肺泡炎和肺纤维化程度,其机制可能与抑制肺组织JAK1、STAT1、ICAM-1的表达有关。     

姜黄素对大鼠慢性萎缩性胃炎的药效学研究

目的:观察姜黄素对大鼠慢性萎缩性胃炎的治疗作用;初步探讨姜黄素作用大鼠慢性萎缩性胃炎的机制.方法:将大鼠随机分为6组:姜黄素高浓度组、中浓度组、低浓度组、维酶素组、模型组和正常对照组,正常对照组只用生理盐水灌胃,其余各组先用50℃脱氧胆酸钠连续灌胃6个月建立大鼠慢性萎缩性胃炎(CAG)模型,用对应的药物治疗6周,模型组除外.然后检测胃粘膜血流量,检测各组胃粘膜组织的病理变化,并检测SOD活性.结果:用姜黄素高剂量组和中剂量组治疗后的胃粘膜组织接近正常;与模型组比,姜黄素各组胃粘膜血流量和SOD活性均明显升高(P＜0.05;P＜0.01),并呈现一定的剂量依赖关系.结论:姜黄素对大鼠CAG具有较好的疗效,并存在一定的剂量依赖关系,其作用机制可能与增加胃粘膜血流量和抗氧化有关.     

SOCS3调控JAK/STAT3通路对PD-1/PD-L1抑制剂所致小鼠心脏毒性的影响

目的 探讨细胞因子信号转导抑制因子3（SOCS3）通过调控酪氨酸激酶/转录激活因子3（JAK/STAT3）通路影响巨噬细胞M1型极化的作用机制,及其对程序性死亡受体1/程序性死亡配体1（PD-1/PD-L1）抑制剂所致小鼠心脏毒性的影响。方法 将RAW 264.7细胞分为对照组、LPS组、pc-NC组、pc-SOCS3组、si-NC组、si-SOCS3组及抑制剂组,细胞转染相应质粒并使用100 ng/mL LPS干预;50只SPF级6周龄BALB/c小鼠分为正常组、模型组、NC组、SOCS3组及抑制剂组,每组10只,除正常组外,其余各组小鼠通过腹腔注射PD-1/PD-L1抑制剂BMS-1 10 mg/kg建立PD-1/PD-L1抑制剂诱导的小鼠心脏毒性模型,并通过尾静脉注射相应质粒或腹腔注射相应药物。HE染色观察小鼠心脏组织病理;ELISA法检测细胞上清和小鼠血清IL-10、TNF-α和IL-1β水平;Western blot检测细胞SOCS3、CD86、CD80以及JAK/STAT3信号通路相关蛋白表达。结果 细胞过表达SOCS3会促进巨噬细胞细胞炎症因子水平和M1型极化,并抑制JAK/STAT3通路相关蛋白表达;细胞SOCS3低表达后,细胞炎症因子水平降低,并抑制巨噬细胞M1型极化,激活JAK/STAT3通路（P＜0.05）;BMS-1干预后小鼠心脏组织损伤严重,心脏指数、血清炎症水平及CD86、CD80蛋白表达明显升高,JAK/STAT3通路相关蛋白表达明显降低（P＜0.05）;过表达SOCS3组小鼠心脏损伤减轻,心脏指数、血清炎症因子及心脏CD86、CD80蛋白表达明显降低,JAK/STAT3通路相关蛋白表达明显升高（P＜0.05）;JAK/STAT3通路抑制剂AG490逆转了低表达SOCS3对PD-1/PD-L1抑制剂诱导小鼠心脏损伤减轻作用和M1型巨噬细胞极化作用。结论 低表达SOCS3可通过激活JAK/STAT3通路抑制巨噬细胞M1型极化并减轻PD-1/PD-L1抑制剂所致小鼠心脏毒性     

周期性机械牵张对人支气管上皮细胞(16HBE)STAT3的影响

目的 探讨周期性机械牵张力对人支气管上皮细胞(16HBE)信号转导子与转录激活子3(STAT3)表达的作用效应.方法 利用周期性机械牵张加力装置对16HBE细胞进行不同作用力、不同作用时间刺激,采用RT-PCR检测STAT3 mRNA的表达,Western blot测定STAT3蛋白的表达及磷酸化水平变化.结果 不同机械牵张力刺激16HBE细胞30 min时,3 kPa作用力对STAT3酪氨酸705残基(Tyr705)磷酸化程度最高.在3 kPa的周期性机械牵张刺激下,STAT3的酪氨酸残基的活化具有时间依赖性,在30 min时与对照相比差异有统计学意义(P＜0.05);1 h时磷酸化程度最高(P＜0.01);机械牵张力不影响丝氨酸727(Ser727)残基的磷酸化、STAT3蛋白表达量以及STAT3基因转录水平.结论 STAT3通过Tyr 705磷酸化修饰参与支气管上皮细胞对周期性机械牵张刺激的应答,在支气管上皮细胞对机械信号的应答和转导中起着重要作用.     

JAK2/STAT3信号通路对胃癌血管生成的影响

目的探讨酪氨酸激酶2/信号转导和转录激活因子3（JAK2/STAT3）信号通路对胃癌血管生成的影响。方法选择胃癌根治术病人30例,收集胃癌组织、癌旁组织以及正常组织,体外检测JAK2/STAT3信号通路对细胞自噬以及细胞活力的影响,以及自噬蛋白对胃癌细胞分泌血管生成因子的影响。结果胃癌组织中pJAK2、pSTAT3表达水平高于癌旁组织及正常组织;加入JAK2/STAT3信号通路阻滞剂后,胃癌细胞自噬能力、细胞活力明显减弱（P < 0.01）;过表达自噬蛋白Beclin-1后胃癌细胞分泌血管内皮生长因子（VEGF）和血小板衍化生长因子（PDGF）水平明显高于抑制组（P < 0.01）;而过表达自噬蛋白LC3后,VEGF、PDGF水平与抑制组差异无统计学意义（P>0.05）。结论JAK2/STAT3信号通路通过调控细胞自噬影响胃癌微血管生成能力,可能是通过激活Beclin-1提高VEGF、PDGF的表达水平。     

布地奈德吸入对支气管哮喘大鼠支气管Eos和STAT6表达的调控作用

目的 研究布地奈德(BUD)对支气管哮喘大鼠支气管Eos和STAT6表达的调控作用.方法 30只清洁级幼年健康雄性Wistar大鼠经造模后,随机分为对照组、哮喘组和BUD组.实验结束后对支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织匀浆进行细胞总数、嗜酸性粒细胞(EOS)计数和分类计数;应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验法测定血清中IL-4的含量;采用免疫组化法检测STAT6蛋白表达的变化.结果 (1)哮喘组BALF中细胞总数、EOS绝对值和EOS占细胞总数的百分比(EOS%)均显著高于对照组(P<0.01),BUD组BALF中上述各项指标较哮喘组均显著降低P<0.01);(2)BALF中IL-4的浓度哮喘组显著高于对照组(P<0.01),BUD组较哮喘组显著降低(P<0.01),而 IL-4的浓度哮喘组显著低于对照组(P<0.01),BUD组较哮喘组显著升高(P<0.01);(3)哮喘组支气管上皮细胞STAT6蛋白阳性表达较对照组明显增强(均为P<0.01),BUD组较哮喘组明显减弱(均为P<0.01).结论 哮喘大鼠支气管STAT6较强表达,上皮细胞是其主要表达细胞;BUD有抑制气道炎症的作用,下调STAT6及其基因表达,使IL-4合成减少可能为其重要作用机制.