免疫印迹法与间接免疫荧光法在副肿瘤性天疱疮自身抗体检测中的应用

目的 探讨免疫印迹法(immunoblot, IB)与间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence, IIF)在副肿瘤性天疱疮(paraneoplastic pemphigus, PNP)自身抗体检测中的应用。方法 收集2007年7月—2017年10月上海交通大学医学院附属瑞金医院收治的11例PNP患者的血清和4例健康体检者血清。分别应用以鼠膀胱和猴食道为底物的IIF对患者血清进行检测;同时环切包皮分离表皮后提取表皮抗原成分,进行IB分析。结果 以鼠膀胱为底物的IIF检测中,11例PNP患者血清中有6例呈阳性表达;以猴食道为底物的IIF检测中,11例结果均为阴性。IB检测中,7例检出IgG抗体,均与相对分子质量为190 000 Da的蛋白多肽结合,其中5例同时与相对分子质量为210 000 Da的蛋白多肽结合。两种方法合用共检出8例阳性。对照组未检出PNP相关的特异性抗体。结论 以鼠膀胱为底物的IIF检测可作为PNP的过筛试验,而利用环切包皮分离表皮行IB检测可作为前者的补充。     

抗精子抗体的间接免疫荧光测定

本文探索了间接免疫荧光技术检测抗精子抗体的有关问题。输精管结扎术后抗精子抗体的测定,应选择附睾精子作抗原,其最适保存条件是将精子悬液置于-20℃,或用乙醇固定后保存于4℃冰箱中,乙醇固定不仅可增强精子抗原性的显示,而且对其抗原性具有保护作用。本方法所用的附睾精子抗原不须进行其他处理;用精子抗原免疫异种动物,抗精子抗体产生早,效价高,而免疫同种动物则抗原性极弱;抗精子抗体的特异性免疫荧光类型以顶体特异性荧光染色为主,根据不同稀释倍数的待测血清所显示的荧光强度,可判断血清抗精子抗体的效价。     

盐裂皮肤免疫荧光技术诊断大疱性类天疱疮的研究

目的:探讨盐裂皮肤直接免疫荧光技术(DIF)和间接免疫荧光技术(IIF)诊断大疱性类天疱疮(BP)的敏感性。方法:取13例BP患者皮损周围皮肤做盐裂皮肤DIF检测,取其血清做盐裂皮肤IIF检测。结果:盐裂皮肤DIF检测BP阳性率为92.3%(12/13),盐裂皮肤IIF检测BP阳性率为76.9%(10/13),两种方法诊断BP的阳性率比较差异无统计学意义(P0.05)。两种方法显示免疫复合物沉积的部位基本一致,位于基底膜带的表皮侧。结论:盐裂皮肤DIF检测和IIF检测均可对BP进行诊断,盐裂皮肤IIF检测可对鉴别诊断起到补充作用。     

牛舌粘膜间接免疫荧光法与免疫印迹法检测天疱疮抗体的比较

目的 比较以牛舌粘膜作为底物,间接免疫荧光法与免疫印迹法检测天疱疮抗体的灵敏度和价值。方法 以牛舌粘膜作为底物中心,分别应用间接免疫荧光法和免疫印迹技术检测１６例天疱疮患者血清中ＩｇＧ型自身抗体。结果 间接免疫荧光法１４例（８７．５％）阳性,免疫印迹法１１例（６８．８％）阳性,两法合成总阳性１５例（９３．８％）,结论 间接免疫荧光法适合于常规辅助诊断天疱疮,而免疫印迹法可以作为前者的补充。     

间接免疫荧光法检验抗ds-DNA抗体方法

ＡＮＡ泛指抗各种核成分抗体 ,无器官和种属特异性 ,血清滴度≥ 1∶80可作为诊断ＳＬＥ标准之一。而ＡＮＡ中的抗ｄｓ-ＤＮＡ抗体具有特征性 ,是诊断ＳＬＥ、监测其活动和判断预后的重要指标。本文报告我室的检测方法如下。1　实验材料① 0 .0 1ｍｏｌ/ＬｐＨ 7.2～ 7.4磷酸盐缓冲液 (ＰＢＳ) ;②0 .1ｍｏｌ/Ｌ磷酸盐缓冲甘油 ;③小白鼠 (昆明种ＫＭ ) ;④ 0 .1Ｎ盐酸 ;⑤ＧＡＨ -ＩｇＧ -ＦＩＴＣ应用液用ＰＢＳ 1∶5 0 0稀释 ;⑥荧光显微镜。2　抗原片制备①取小白鼠直接断颈放血杀死 ,取出肝脏 ,去胆囊。用ＰＢＳ冲去肝表面的血等杂物 ,…     

用间接免疫荧光法检测大鼠的抗泰泽氏菌抗体

用大鼠来源的泰泽氏菌芽孢RJ株经口服感染3周龄Wistar系大鼠,获得该菌抗原和抗血清,建立了检测泰泽氏病的免疫荧光法,并证实该法具有特异性。用该法检测不同饲养环境中的大鼠,结果:饲养在隔离器内的SPF级大鼠的抗体阳性率为0(0/28),饲养在开放系统内的普通级大鼠的抗体阳性率为40.9％(36/88),而饲养在同一开放系统内的普通级小鼠的阳性率仅为3％。这种差异是否反映了不同种类动物来源的菌株具有不同的抗原性,尚待进一步研究。     

用Hela细胞检测Bip抗体间接免疫荧光法的建立

目的 建立抗免疫球蛋白结合蛋白(Bip)抗体检测的间接免疫荧光法(IIF),为探讨其在类风湿关节炎(RA)中的意义做出方法 学准备.方法 以Hela细胞为抗原基质固定于载片上,加入待测稀释血清温育,待抗原抗体特异结合后加入荧光素标记的抗人IgG与待测Bip抗体结合,最后置荧光显微镜下观察Hela细胞胞浆有无特异荧光出现.结果 RA患者血清检测中可见到Hela细胞胞浆中出现特异性荧光,而健康献血员血清检测中未发现Hela细胞胞浆中的特异性荧光,实验所见荧光模式与文献报道相符.结论 以Hela细胞为抗原基质的间接免疫荧光法能够对血清中Bip抗体进行检测.     

寻常型天疱疮虱一级亲属循环天疱疮抗体的检测分析

目的 探讨与寻常型天疱疮（ｐｅｍｐｈｉｇｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ,ＰＶ）患者可能共享易感基因的亲属中ＰＶ抗体的存在情况。方法 对１２例ＰＶ患者的３０名一级亲属及１０名正常对照者同时应用免疫印迹及间接免疫荧光（ｉｎｄｉｒｅｃｔ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ,ＩＩＦ）方法,检测其外周血中循环ＰＶ抗体。结果 在３０名亲属中有１９名（６３％）同时用两种方法检出了ＰＶ抗体,抗体滴度〉１：１６,仅有９名     

4种自身抗体对间接免疫荧光法检测抗中性粒细胞胞质抗体的影响

目的:观察抗核抗体、抗线粒体抗体、抗高尔基体抗体和抗核糖体P蛋白抗体对间接免疫荧光(IIF)法检测抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)结果的影响. 方法:用IIF法检测4种自身抗体阳性血清可能出现的ANCA荧光图谱;用ELISA法确认上述4种血清的靶抗原. 结果:用乙醇固定的中性粒细胞检测ANCA受自身抗体的影响较大,甲醛固定的中性粒细胞受到的影响较小,同时应用猴肝切片可将这4种自身抗体与ANCA区别. 结论:联合应用猴肝切片与乙醇和甲醛固定的中性粒细胞抗原片,有助于准确判断ANCA结果.     

间接免疫荧光法检测抗核抗体的临床应用

抗核抗体(ANA)是自身免疫病检测的主要项目之一,主要存在于IgG中。临床上用免疫光法检测抗核抗体报道很多,文献提示它是一个很敏感的试验,尤其是系统性红斑狼疮(SLE)阳性率最高。为了观察该方法在热带地区一海南岛的敏感性及临床应用价值,现报道97例阳性患者的临床疾     

抗核抗体间接免疫荧光法检测试剂的比对分析

目的 通过AESKU试剂和欧蒙试剂对164例抗核抗体核型结果的比对分析,评价AESKU试剂间接免疫荧光法抗核抗体检测试剂的性能.方法 从2015年1~12月广东省中医院门诊及住院患者中选取164例样本,分为AID患者组(n=115)和健康对照组(n=49),同时采用AESKU试剂与欧蒙试剂对抗核抗体核型进行双盲、平行检测,不一致结果采用第三方试剂复核.计算两种试剂的阳性符合率、阴性符合率、总符合率、Kappa系数,并进行Kappa一致性检验和配对χ2检验.结果 AESKU试剂与欧蒙试剂的总体阳性符合率为94.78%,阴性符合率为93.88%,总符合率为94.51%;Kappa=0.871,P<0.05,两种试剂的检测结果高度一致,差异无统计学意义(P>0.05).结论 AESKU试剂与欧蒙试剂具有等效性和很高的符合率,操作简便快速、结果清晰易读,适合临床广泛应用.     

直接免疫荧光检查对天疱疮的诊断价值

本文报道10例天疱疮患者的直接免疫荧光检查结果。10例的荧光均发生在表皮棘细胞膜之间,全层弥漫,呈蜂窝状。红斑型及落叶型的荧光以表皮浅层最为明显。疱腔内脱落的棘层松解细胞也显示同样的荧光。免疫球蛋白的类型,10例都有lgG,与文献报道者相符。有1例落叶性天疱疮除lgG之外,尚有lgM的存在,其意义尚不明瞭。有3例寻常性天疱疮出现C_3的沉积,推测可能是组织损伤的继发性结果。结果表明,直接免疫荧光检查对大疱性疾病的诊断是很有价值的,特别是单纯累及粘膜的大疱性疾病,更有帮助。     

间接免疫荧光检测技术检测沙门菌的实验研究

目的为加强食品安全管理,快速检测食源性致病菌,对间接免疫荧光检测法检测沙门菌的敏感性进行探讨。方法制备沙门菌抗原片和食品样品抗原片,用沙门菌A-F多价诊断血清作为一抗,异硫氰酸荧光素(FITC)标记羊抗兔IgG作为二抗。结果与国标法比较,沙门菌间接免疫荧光法具有快速、简便等优点,且两种检验方法的阳性检出率未出现统计学差异(P=0.250)。结论沙门菌间接免疫荧光检测法可以用于食品安全快速检测。     

间接免疫荧光法与ELISA检测抗核抗体、抗双链DNA抗体的比对分析

目的 探讨间接免疫荧光法(IIFA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗核抗体(ANA)和抗双链DNA(ds-DNA)抗体的异同.方法 抽取确诊或疑为自身免疫性疾病患者血清125例,同时采用IIFA法和ELISA法检测 ANA 82例,抗ds-DNA抗体检测57例,其中14例同时检测ANA和抗ds-DNA抗体.对两种方法 检测结果 不符者采用免疫印迹法复查抗可溶性核抗原(ENA).结果 82例 ANA阳性率IIFA法与ELISA法分别为87.8%和73.17%,差别有统计学意义(P<0.01);57例血清中抗ds-DNA抗体检测阳性率IIFA法与ELISA法分别为77.19%和71.93%,差别无统计学意义(P>0.05).采用不同cutoff值时两种方法 符合率比较,ANA、抗ds-DNA抗体检测结果 差别均有统计学意义(P<0.01).两法对一些稀有核型ANA检测符合率较低,而抗ds-DNA抗体的符合率在不同核型上没有差异.ANA检测以1:100为cutoff滴度,抗ds-DNA抗体以弱阳性为cutoff值时,两种方法 可获得较高的符合率,但在检测滴度1:100 ANA、弱阳性抗ds-DNA抗体时两种方法 存在明显的不一致.结论 IIFA法检测总ANA、抗ds-DNA抗体的敏感性均高于ELISA法, IIFA法作为ANA的筛查方法 ,阳性标本再进行ELISA法检测,可在获得荧光核型信息同时观察抗体滴度的变化情况,并且更快捷经济.两种或多种不同方法 学原理的实验互相佐证,有助于减少实验误差.     

采用间接免疫荧光法监测流行性出血热疫苗接种3年后的人群抗体水平

目的：研究接种疫苗３年后人群抗体水平及间接免疫荧光抗体检测方法在流行性出血热免疫抗体检测中的应用。方法：采用间接免疫荧光法测定特异性ＩｇＧ抗体,并对２６６例血清样本进行分析。结果：全程接种与未加得抗体阳性率分别为７０．６３％,５９．７９％,并拍摄到抗原抗体免疫荧光结合物。结论：全程接种疫苗３年后人群抗体保持较高水平,加强接种后免疫效果更佳。     

用间接免疫荧光法和PCR技术重新评价抗CMV－抗体检测的临床意义

为了正确评价临床常用的检测抗巨细胞病毒（ＣＭＶ）抗体的临床意义，用间接免疫荧光法（ＩＦＡ）和聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）检测了５０例急性黄疸型甲型肝炎患儿血白细胞中ＣＭＶ早期抗原（ＥＡ）和晚期抗原（ＬＡ）、血白细胞及尿沉渣ＣＭＶ－ＤＮＡ，阳性率分别为５８％、２２％、６８％、６２％。同期检测抗ＣＭＶ－ＩｇＧ、抗ＣＭＶ－ＩｇＭ，并观察ＩｇＧ急性期／恢复期是否升高４倍以上（ＩｇＧ↑↑），阳性率分别为８６％、３４％及４６％。仅检测１次ＩｇＧ，１４％的患者会漏诊；动态监测ＩｇＧ，４３．９％的活动性ＣＭＶ感染者会漏判；仅检测１次ＩｇＭ，５８．５％的活动性ＣＭＶ感染者会漏判。７９％的ＩｇＧ阳性患者为活动性感染（ＥＡ、ＬＡ、ＩｇＧ↑↑或ＩｇＭ任何１项阳性）；原发性及继发性活动性ＣＭＶ感染者的ＩｇＧ↑↑、ＥＡ、ＩｇＭ阳性率分别为１００％、４２．９％、２８．６％和４７．０％、７６．５％、４４．１％，表明原发感染诊断主要依靠ＩｇＧ↑↑，而继发活动感染则需多种指标。同期检测了２２名健康ＣＭＶ感染儿童的上述指标，与之无显著差异。     

天疱疮皮损组织免疫荧光观察

本文对15例天疱疮病人皮损组织进行了免疫荧光检查。结果表明:天疱疮病人不仅皮损及邻近正常表皮细胞间有荧光标记物沉积,而且发现汗腺及汗管细胞间也有同样现象。且见到病人血清中存在抗汗腺及汗管细胞间抗体。还发现落叶型和寻常型天疱疮荧光标记物在表皮沉积密度的分布存在差异。讨论分析了发生的可能原因。     

酶联免疫吸附法和间接免疫荧光法检测大疱性类天疱疮抗体的比较

目的 比较酶联免疫吸附法(ELISA)和间接免疫荧光法(IIF)检测大疱性类天疱疮(BP)的临床应用价值.方法 选择89例BP患者(BP组)和同期排除BP的89例对照人群(对照组),采用间接免疫荧光法(IIF)检测抗表皮基底膜抗体,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗BP180和BP230抗体,比较两种检测指标的敏感...     

间接免疫荧光法及蛋白质印迹法对肺癌患者体内自身抗体的分析

目的：了解肺癌患者血清自身抗体阳性率、细胞内定位及荧光图形特点,探索自身抗体作为肿瘤樗物的可能性。方法：应用间接免疫荧光法（ｉｎｄｉｒｅｃｔ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｓｅｅｎｅｅ,ＩＩＦ）检测７７份肺癌以及１４０份不同年龄段正常人血清中自身抗体。提取人喉癌上皮细胞（Ｈｅｐ－２）蛋白抗原,采用蛋白质印迹法对８１份肺癌患者及５２份正常人血清进行分析。结果：肺癌组和对照组的自身抗体阳性率有显著差别,两