整合素连接激酶与人肾小管间质损伤的关系研究（摘要）

目的研究整合素连接激酶（integrin-1inked kinase,ILK）与人肾小管间质损伤的关系.方法采用非生物素免疫组化法和计算机图像分析系统对30例入选疾病组和5例正常对照组的ILK和α-SMA的表达水平进行检测,并结合临床资料及肾脏病理进行统计学分析。     

原发性肾小球肾炎患者肾小管间质中整合素连接激酶的表达及意义

目的:检测不同间质纤维化程度的原发性肾小球肾炎患者肾组织中整合素连接激酶(ILK)的表达,观察ILK与肾间质纤维化程度之间的关系,探讨ILK在肾间质纤维化中可能的作用.方法:选取原发性肾小球肾炎患者肾活检标本88例,根据肾间质纤维化程度分为四组,采用免疫组化方法,检测各组标本ILK的表达,并将ILK的表达与间质纤维化程度和患者血尿β2微球蛋白水平进行相关分析.结果:ILK主要表达于病变肾小管上皮细胞,并且随间质病变的加重,表达量增加,范围增大.肾小管间质中ILK表达量与肾间质纤维化病变程度和患者血尿β2微球蛋白均呈正相关关系.结论:ILK可能参与了肾间质纤维化的形成.     

整合素连接激酶与肝细胞生长因子在肾间质纤维化过程中的作用

目的:研究肾间质纤维化过程中整合素连接激酶(ILK)、转化生长因子β1(TGF-β1)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、肝细胞生长因子(HGF)之间的相互作用。方法:构建肾间质纤维化动物模型,随机分为假手术组、模型组、干预组和对照组,分别于术后3 d、7 d、14 d处死各组大鼠,用免疫组化方法检测ILK、α-SMA、TGF-β1的表达。结果:它们在正常组织的表达量极少;随间质损害程度的加重,模型组的表达量呈增加趋势,但在干预组中,它们的表达量与对照组比变化不大,差异无统计学意义(P>0.05),与模型组比呈递减趋势,差异有统计学意义(P<0.001)。结论:ILK可能参与肾间质纤维化的形成,而HGF可能延缓肾间质纤维化进程。     

整合素连接激酶在梗阻性肾病肾小管上皮细胞转分化中的作用及尿激酶对其表达调节的研究

目的 研究整合素连接激酶(ILK)在单侧输尿管梗阻(UUO)小鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用及尿激酶对其的影响.方法 将雄性CD-1小鼠随机分为假手术对照组(Sham,n=20)、UUO组(UUO,n=28)和尿激酶治疗组(uPA,n=28),分别于术后1、3、7和14 d处死小鼠.Masson染色观察肾间质纤维化.免疫荧光和Western印迹检测小鼠肾组织ILK的分布及表达.免疫组化检测肾组织上皮细胞钙粘蛋白(E-cadherin)的表达.RT-PCR检测ILK、E-cadherin和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA表达.结果 与Sham组相比,UUO组术后1dILKmRNA及蛋白表达均增高,7d达到高峰:E-cadherin mRNA及蛋白表达明显减少,α-SMA mRNA表达显著上调.与UUO组同时间点相比,uPA治疗组ILK、α-SMA表达均被显著抑制(P<0.05);E-cadherin表达则增高(P<0.05).结论 ILK通过介导肾小管上皮细胞转分化而参与肾间质纤维化的发生发展.uPA能减轻肾小管间质纤维化,这可能与其抑制肾小管细胞ILK表达有关.     

整合素连接激酶和α-平滑肌肌动蛋白的表达与肾间质纤维化关系的研究

目的 探讨整合素连接激酶(ILK)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)与肾间质纤维化(RIF)的关系.方法 选取原发性肾小球肾炎患者肾活检标本88例,根据光镜下肾小管间质的病变程度分组.采用免疫组化方法检测各组标本ILK、α-SMA的表达,并将ILK、α-SMA的表达与肾间质纤维化程度进行相关性分析.结果 ILK主要表达于病变肾小管上皮细胞,并且随肾间质病变的加重表达量增加,范围增大.肾小管间质中ILK表达量与RIF病变程度呈正相关;α-SMA表达主要见于纤维化间质,其表达与RIF程度呈正相关.结论 随着肾小管间质病变程度的加重,ILK、α-SMA的表达逐渐增加,ILK可能参与了RIF的进程.     

整合素连接激酶在糖尿病肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的:观察整合素连接激酶(ILK)在糖尿病大鼠肾小管上皮细胞中的表达,探讨其与肾小管上皮细胞转分化(EMT)的关系.方法:雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(n=10)、糖尿病模型组(n=10)与糖尿病氯沙坦干预组(n=10)[氯沙坦20 mg/(kg·d)];分别于第8周、第16周每组各处死5只大鼠.留取左肾行HE和Masson染色,阅片并计算肾小管间质损伤指数、肾间质胶原面积;免疫组织化学法检测肾小管上皮细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)与ILK的表达.结果:与正常对照组比较,糖尿病组大鼠肾小管间质损伤指数、肾间质胶原面积明显增加(P＜0.01),肾小管上皮细胞α-SMA,Vimentin和ILK阳性表达面积明显增加(P＜0.01),ILK与α-SMA呈正相关(rs=0.621,P＜0.05);氯沙坦组大鼠肾小管间质损伤指数、肾间质胶原面积较糖尿病组明显减弱,其肾小管上皮细胞的ILK,α-SMA与Vimentin表达均较糖尿病组明显减弱(P＜0.01).结论:糖尿病大鼠肾小管上皮细胞存在ILK高表达与EMT,二者之间可能有着重要联系;氯沙坦可下调肾小管上皮细胞ILK表达,阻抑EMT.     

整合素连接激酶和肾间质纤维化

整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)是1996年Hannigan以β1整合素胞浆结构域为诱饵,运用酵母双杂交筛选系统在哺乳动物上皮细胞和肿瘤细胞的溶解物中发现的一种丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶.随后的协同免疫印染技术也证实了ILK能和β3整合素亚单位的胞浆尾部相互作用[1].ILK是一个多功能蛋白,参与多种信号传导通路,在调节细胞周期、细胞黏附、基质积聚、肿瘤发生、胚胎发育等过程中起重要作用.近年来,在对动物及细胞的研究中发现,ILK参与了TGFβ1诱导肾小管EMT的4个关键步骤,在肾间质纤维化的发生、发展中起了十分重要的作用.     

整合素连接激酶在结肠癌中的表达情况

目的:探讨整合素连接激酶(ILK)在结肠癌的发生发展中的作用。方法:采用免疫组织化学方法对84例结肠肿瘤中ILK的表达进行检测。结果:ILK在正常结肠黏膜阴性表达;在结肠腺瘤中75%表达;结肠原位癌中83.3%;在浸润性结肠癌中100%表达。ILK在结肠浸润性癌与原位癌表达差异有统计学意义,在不同分级、分期、浸润深度、淋巴结转移比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:ILK在结肠肿瘤的进展、侵袭、转移上都有着重要的意义,可以作为结肠癌的预后指标。     

整合素连接激酶在梗阻性肾病合并肾小管酸中毒中的表达

目的：观察整合素连接激酶（ILK）在梗阻性肾病合并肾小管酸中毒中的表达,探讨肾小管酸中毒在致肾间质纤维化中的作用。方法实验大鼠75只,其中假手术组大鼠25只,单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠50只。UUO大鼠于术后第7天分为肾小管酸中毒大鼠（UUO1组,n＝31）和非肾小管酸中毒大鼠（UUO2组,n＝19）,同时做肾功能与组织学检测,于手术后7、14、21、28 d时分批处死大鼠,免疫组织化学与 Western blot法测定肾组织中 ILK的表达。结果与 UUO2组比较,UUO1组光镜下炎症细胞浸润和间质纤维化程度更严重;假手术组仅有少量的 ILK蛋白表达,几乎无纤粘连（FN）蛋白的沉积,UUO2组 ILK蛋白表达及 FN蛋白的沉积增多,而 UUO1组较 UUO2组增多。结论在梗阻性肾病中,肾小管酸中毒可上调 ILK蛋白的表达与FN的沉积,加速肾小管间质纤维化。     

整合素连接激酶与肾脏疾病

整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK)是一种新发现的进化保守的黏附蛋白,属于一种丝氨酸/苏氨酸(Ser/Thr)蛋白激酶,可以同整合素β1、β2、β3亚基胞浆区域及细胞骨架相关蛋白,包括PINCH、Parvins等结合,并发生相互作用,在调节基质积聚、细胞黏附、凋亡、迁移、生长、肿瘤形成等过程中起重要作用,与肾间质纤维化(renal interstitial fibrosis,RIF)和蛋白尿的发生相关.现就ILK及其与肾脏疾病关系综述如下.     

实验性肾间质纤维化大鼠肾小管上皮细胞凋亡的观察

目的观察单侧输尿管结扎（UUO）大鼠肾小管上皮细胞凋亡。方法采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记（TUNEL）法检测肾小管细胞凋亡,结果应用图像分析系统进行半定量分析。结果与假手术组相比,模型组检测到较多的凋亡细胞（P〈0.01）。随着时间延长,肾小管凋亡细胞逐渐增多,有显著差异（P〈0.01）。结论肾小管上皮细胞凋亡参与了肾间质纤维化的发生发展。     

血小板反应蛋白1及血管内皮生长因子在肾间质纤维化中的表达及意义

目的 探讨肾脏组织中血小板反应蛋白1(thrombospondin-1,TSP-1)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)在肾间质纤维化发生、发展中的表达及意义.方法 选择不同类型肾脏疾病患者53例,按肾间质病理损伤程度对肾组织标本进行分组:正常对照组5例、轻度损伤组18例、中度损伤组19例、重度损伤组11例.用免疫组织化学技术和计算机真彩色图像分析系统半定量检测肾间质的TSP-1、VEGF、CD34、TGF-β1、α-SMA和Ⅳ型胶原表达情况.结果 在正常对照组,TSP-1无阳性表达;TGF-β1在肾小管上皮细胞浆偶见表达;α-SMA仅在血管壁表达;肾间质Ⅳ型胶原在肾小管基底膜、动脉管壁呈线状表达.而VEGF在肾小管上皮细胞及足突细胞浆均可见表达,CD34在肾小管周围毛细血管内皮细胞表达.随着病变程度加重, TSP-1、TGF-β1、α-SMA和Ⅳ型胶原其表达量及面积显著增加(P＜0.01),与肾间质病理损害程度呈显著正相关(r=0.86,0.674,0.779,0.784).而VEGF及CD34表达量及面积则显著递减(P＜0.01),与肾间质病理损害程度呈显著负相关(r=-0.715,-0.672).结论 随着肾间质病理损伤程度加重,TSP-1在肾小管上皮细胞、肾间质区表达增强,与肾间质损害程度呈显著正相关;VEGF在肾小管上皮细胞、足细胞表达减弱,与肾间质损害程度呈显著负相关.提示TSP-1与VEGF对肾小管周围毛细血管作用失衡,使肾小管周围毛细胞血管减少,加重肾组织缺氧,导致慢性肾间质纤维化发生、发展.     

IGF-Ⅰ对人肾小管上皮细胞转分化相关基因表达的影响

目的:探讨胰岛素样生长因子-Ⅰ(IGF-Ⅰ)在人肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法:将体外培养的人肾小管上皮细胞(HK2)分为对照组和IGF-Ⅰ组:培养液中加入IGF-Ⅰ,终浓度分别为25、50、100、200ng/ml。倒置显微镜观察细胞形态变化。用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术测定HK2细胞E-钙黏蛋白、角蛋白、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白和纤连蛋白(FN)mRNA水平的变化。结果:IGF-Ⅰ刺激使HK2细胞形态由椭圆变为梭形。不同浓度的IGF-Ⅰ作用于HK2细胞48h后E-钙黏蛋白和角蛋白mRNA的表达显著下降(P<0.05),α-SMA、波形蛋白和FNmRNA水平显著升高(P<0.01),且呈剂量依赖性。结论:IGF-Ⅰ在体外能刺激人肾小管上皮细胞向肌成纤维细胞(MyoF)转分化,并促进其合成细胞外基质(ECM)。     

血浆凝血酶敏感蛋白-1在肾间质纤维化中的表达

目的：观察不同时间点血浆凝血酶敏感蛋白-1（TSP-1）在蛋白超负荷肾病大鼠中的表达,分析其与肾小管间质纤维化的关系。方法：45只雄性SD大鼠右肾切除后,随机分成牛血清蛋白（BSA）组和对照组,BSA组大鼠予以腹腔注射牛血清白蛋白,对照组注射生理盐水。分别在第1,5,9周末,检测血常规及生化指标,各时相尿蛋白定量;肾组织行光镜、免疫荧光及电镜检查。采用免疫印迹法检测血浆TSP-1蛋白表达。分析血浆TSP-1表达与肾小管间质病理损害积分之间的相关性。结果：BSA组大鼠24 h尿蛋白定量和肾功能均较对照组有明显差异;肾小管间质病理积分和肾小球硬化指数明显增高;IgG荧光强度明显高于对照组;与对照组比较,BSA组大鼠血浆TSP-1蛋白均明显增高。BSA组血浆TSP-1的蛋白表达水平与肾小管间质病理积分呈正相关（r=0.836,P<0.01）。结论：血浆TSP-1与肾间质纤维化呈正相关,血浆TSP-1可能是临床判断肾间质纤维化程度的重要指标。     

The Effect of Connective Tissue Growth Factor on Human Renal Tubular Epithelial Cell Transdifferentiation

Summary To investigate the role of connective tissue growth factor (CTGF) in transdifferentiation of human renal tubular epithelial cell (HKC),in vitro cultured HKC cells were divided into 3 groups: negtive control, low dose CTGF-treated group (rh CTGF, 2.5 ng/ml) and high dose CTGF-treated (rhCTGF, 5. 0 ng/ml). Then the expression of α-smooth muscle actin (α-SMA) were assessed by indirect immuno-fluorescence, and the percentage of α-SMA positive cells were assessed by flow cytometry. RT-PCR were also performed to examine the mRNA level of α-SMA. Upon the stimulation of different concentrations of rhCTGF, the expression of α-SMA were markedly stronger than that in negative controls. The percentages of α-SMA positive cells were significantly higher in the stimulated groups than that of negative controls (38.9%, 65.5% vs 2.4%,P<0.01). α-SMA mRNA levels were also up-regulated by the stimulation of rhCTGF (P<0.01). These results suggest that CTGF can promote the transdifferentiation of human renal tubular epithelial cells towards myofibroblast (Myo-F). ZHANG Chun, male, born in 1977, M. D., Ph. D. This work was supported by a grant from the Science & Technology Foundation of Hubei Province (No. 2003AA301C14).     

结缔组织生长因子对人肾小管上皮细胞株生物学特性的影响

目的:观察重组人结缔组织生长因子(rhCTGF)对人肾小管上皮细胞株(HK-2)的作用.方法:将体外培养的人肾小管上皮细胞分为三组:对照组、rhCTGF 5.0 ng/ml, rhCTGF 10.0 ng/ml.应用MTT法检测CTGF对HK-2增殖的影响;倒置显微镜观察细胞形态学的变化;间接酶标免疫组织化学方法检测E-钙粘蛋白(E-Cadherin),α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;流式细胞术检测α-SMA阳性的HK-2细胞百分数.结果:在一定的浓度范围内,CTGF能促进HK-2细胞的增殖, CTGF促使HK-2细胞由椭圆形转变为梭形状,可下调E-Cadherin,上调α-SMA, 流式细胞测得三组细胞阳性百分率依次为1.54%,10.24%,25.8%(P＜0.05).结论:CTGF在体外促进HK-2转分化的同时促进HK-2的生长.     

脂氧素A4抑制结缔组织生长因子诱导的肾小管上皮细胞表达整合素连接激酶

目的:结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)可诱导人肾小管上皮细胞HK-2表达整合素连接激酶(integrin-linked kinase,ILK),本研究观察脂氧素A4(lipoxinA4,LXA4)是否调节CTGF对合成ILK的作用,并探讨其作用机制。方法:对体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2细胞株),用不同浓度的LXA4预刺激,再加入CTGF共同孵育;或单用CTGF刺激HK-2细胞。应用RT-PCR和Westernblot方法测定ILKmRNA和蛋白表达,应用Westernblot法测定分裂原激活的蛋白激酶(p42/44mitogen-activated protein kinase,p42/44MAPK)(也称为ERK1/2)、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphoinositide 3-kinase,PI3-K)。结果:CTGF刺激使HK-2细胞ILKmRNA表达和蛋白合成增加,磷酸化ERK1/2、磷酸化PI3-K的表达增加。LXA4呈剂量依赖性地抑制CTGF所致的上述变化。结论:LXA4可抑制CTGF引起的HK-2细胞表达ILK,其机制依赖于抑制...     

蛋白酪氨酸激酶活性在人肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的探讨蛋白酪氨酸激酶(PTKs)活性在人肾小管上皮细胞 (HKC)转分化中的作用.方法将传代的HKC细胞分为:(1)无血清对照组(C);(2)酸性成纤维细胞生长因子(aFGF)组(A);(3)genistein组(G),加入80ng/ml重组人aFGF条件下,分别加入不同浓度的genistein;培养72h.应用免疫组化检测HKC细胞表达α-SMA(α-smoothmuscleactin,α-SMA)的变化;对转分化过程中PTKs的活性用流式细胞仪加以分析.结果 aFGF(A)组加入80ng/ml aFGF后a-平滑肌动蛋白(a-SMA)表达增强,细胞a-SMA阳性率(60.60±2.70)%较对照组(C)(3.35±1.45)%有非常显著性差异(P<0.01).当G4,5组介入genistein浓度48、96μg/ml时,细胞α-SMA阳性率为(3.90±2.09)%,(3.98±1.75)%,较aFGF组(A)明显降低(P<0.01).PTKs的活性随加入aFGF的浓度增加而增高,当aFGF的浓度为20、40、80ng/ml时,分别比对照组(C)PTKs的活性增加16%、17%、24.6%,当介入genistein剂量为6、12、24、48μg/ml时,分别比aFGF组(A)PTKs的活性下降45.6%、53.5%、66%、81.9%,干预因素作用下HKC细胞PTKs活性与genistein剂量呈负相关(r=-0.987,P<0.05).结论 HKC转分化的机制可能与PTKs活性失控有关,genistein在防治肾间质纤维化中具有很好的应用前途.     

脂氧素A4拮抗CTGF所致的人肾小管上皮细胞转分化

目的:探讨脂氧素A4(LXA4)对结缔组织生长因子(CTGF)诱导的肾小管上皮细胞HK2转分化的影响.方法:在体外培养的人肾小管上皮细胞(HK2细胞)中,加入CTGF和LXA4刺激48 h后,用倒置显微镜观察细胞形态学变化,应用RT-PCR、Western blot方法测定上皮细胞E钙黏蛋白和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA与蛋白的表达.结果:CTGF刺激使HK2细胞形态由椭圆形转为梭形,下调E钙黏蛋白mRNA与蛋白表达,上调α-SMA的mRNA与蛋白表达.LXAc能够抑制CTGF所致的上述变化,E钙黏蛋白mRNA与蛋白的相对表达值分别为0.270±0.082和0.827±0.177,分别高于CTGF刺激组的0.067±0.015(P<0.05)和0.257±0.221(P<0.05);α-SMA的mRNA与蛋白表达的相对表达值分别为0.070±0.046和0.023±0.023,分别低于CTGF刺激组的0.653±0.256(P<0.05)和0.167±0.050(P<0.05).结论:外源性CTGF能导致HK2细胞转分化为肌成纤维细胞.LXA4可抑制CTGF对HK2细胞的转分化,这为治疗肾间质纤维化提供了一条新途径.