DAC对卵巢癌细胞株增殖及其MAGE、BAGE、GAGE基因表达的影响

目的探讨5-杂氮脱氧胞嘧啶（DAC）对卵巢癌细胞株SKOV3、A2780、COC1增殖及其肿瘤特异性抗原MAGE、BAGE、GAGE基因表达的影响。方法将对数生长期的卵巢癌细胞株与DAC共同培养,观察细胞生长指数,利用流式细胞术检测细胞周期,RT-PCR技术检测卵巢癌细胞株在DAC作用前后MAGE、BAGE、GAGE基因的表达。结果DAC能使大多数巢癌细胞株阻滞在G0期,并使其MAGE、BAGE、GAGE基因表达增加。结论DAC能抑制卵巢癌细胞株的增殖,提高其肿瘤特异性抗原基因的表达。     

肿瘤特异性肿瘤/睾丸抗原在肝癌组织中的表达

目的 研究7种主要肿瘤/睾丸(CT)抗原MAGE-1、MAGE-3、MAGE-4、MAGE-10、NY-ESO-1、SSX-2、SCP-1在原发性肝细胞癌(HCC)患者癌组织中的表达、编码基因的变异状况及与临床指标的关系。 方法 收集30例肝癌患者的癌和癌旁组织,采用特异性引物逆转录聚合酶链反应检测7种CT抗原的表达,并对PCR产物进行测序分析。结果 在30例HCC患者中,MAGE-1、MAGE-3、MAGE-4、MAGE-10、NY-ESO-1、SSX-2、SCP-1在癌组织中的表达率分别为66.7％、70.0％、20.0％、36.7％、40.0％、33.3％和33.3％,而癌旁没有表达。癌组织中至少表达1种、2种和3种CT抗原的阳性率分别为90.0％、70.0％和53.5％。我国肝癌表达的7种CT抗原编码基因与国外报道的相比,同源性非常高。MAGE-10和SCP-1的表达与甲胎蛋白的水平相关,MAGE-3和SSX-2表达与平均年龄相关。 结论 7种CT抗原在HCC患者癌组织中均有表达,阳性率为20.0％-70.0％,其编码基因序列高度保守。一些CT抗原的表达与临床指标存在相关性。     

肿瘤拒绝抗原1在肝硬化和肝癌组织中的表达及其与肝癌临床病理学特征的关系

目的 探讨肿瘤拒绝抗原1(TRA1)在肝细胞癌(HCC)和肝硬化组织中的表达水平及其与HCC临床病理学特征的关系.方法 采用RT-PCR法、Western blot和免疫组织化学法分别检测了HCC和肝硬化组织中TRA1 mRNA和蛋白的表达水平,并与HCC临床病理学特征进行相关分析.RT-PCR和Western blot结果采用单因素方差分析;免疫组织化学结果分析采用Fisher's确切概率法;相关性分析采用Spearman等级相关.结果 经对RT-PCR结果分析,HCC和肝硬化组织中TRA1 mRNA表达水平高于正常肝组织水平(F值分别为20.821和12.311,P值均＜0.05).Western blot检测结果显示,HCC和肝硬化组织中TRA1蛋白表达水平也高于正常肝组织(F值分别为21.231和20.125,P值均＜0.05).经免疫组织化学分析,TRA1蛋白在正常对照组、肝硬化组和HCC组的表达逐渐增强,阳性表达率分别为57.14%、78.95%和93.75%.其表达水平与HCC分化程度呈负相关(r=-0.4655,P＜0.01);与HCC患者TNM分期呈正相关(r=0.5157,P＜0.01).结论 TRA1在肝硬化和HCC中的过表达可能与肝癌的发生和发展有关,并有可能成为一个潜在的HCC早期诊断标志物;TRA1的检测有助于判断HCC的分化程度,与HBV的感染有一定关系,同时可作为判断预后的指标.     

肝细胞癌相关肿瘤抗原基因的筛选与分析

目的 筛选和分析肝细胞癌相关的肿瘤抗原。方法 用肝细胞癌组织构建cDNA表达文库，通过重组cDNA表达文库血清学分析法，用自体患者和异体患者的血清对文库进行筛选。将所得阳性噬菌体克隆体内剪切获得其pBK-CMV噬菌粒。通过限制性核酸内切酶鉴定插入cDNA片段，并作测序和生物信息学分析。同时将阳性克隆中的LIMS1插入片段进行原核表达。结果 自体血清筛选得到14种基因，异体筛选获得11种基因，两组中均筛选到kinectin，共有24种肝细胞癌相关的肿瘤抗原基因。其中有8种基因目前还不清楚其功能，其余16种基因根据确定的或者推断的功能可以分成8组。LIMS1原核重组蛋白表达成功。结论 本研究为肝细胞癌的免疫治疗提供了候选基因，并为理解肝细胞癌发生和发展的机制提供了线索。     

肝癌治疗的新靶位 MAGE抗原：肝细胞癌的治疗靶位

癌症免疫疗法中有挑战性的目标是寻找免疫系统针对恶性细胞选择性的细胞破坏机制。这种靶向作用需要特异性，由肿瘤细胞所表达和效应杀伤淋巴细胞所识别的蛋白质序列来决定，具有非常好的专一性和选择性。肿瘤抗原被定义为一种抗原生物分子(大多数通常是蛋白质)，它选择性地在恶性细胞上被表达，通过抗原呈递途径提呈，能被杀伤T细胞所识别。根据表达模式的不同，     

肝细胞癌相关抗原特异性T淋巴细胞的研究进展

肝细胞癌(HCC)是世界范围的一个主要卫生问题,其发病率逐年上升,且早期诊断率较低,晚期HCC的生存率低,因此HCC的诊断和治疗引起了广泛关注,其中肿瘤特异性淋巴细胞免疫在其中发挥了重要作用。阐述了甲胎蛋白、磷脂酰肌醇蛋白多糖3、NY-ESO-1、SSX-2、黑色素抗原基因A、端粒酶反转录酶和肝癌相关抗原-519/靶蛋白xklp-2等HCC相关抗原特异性T淋巴细胞免疫特征,并从调节性T淋巴细胞、髓源性抑制细胞、抗原的递呈和处理、抑制性受体和CD4+T淋巴细胞方面分析了影响抗原特异性T淋巴细胞免疫的可能机制。通过研究HCC相关抗原特异性T淋巴细胞的免疫反应,从而对HCC的免疫治疗提供新的方向和治疗靶点。     

鳞状细胞癌抗原与原发性肝癌相关性研究进展

<正>原发性肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一[1]。目前HCC的临床诊断主要依赖于影像学证据、血清学指标及肝组织的病理学和细胞学检查。其中影像学方法无法准确判断占位的良、恶性,而肝脏穿刺病理学检查是有创检查,一般医院尚难开展,甲胎蛋白(α-fetoprotein,AFP)是目前常用的HCC标记物,但其敏感性及特异性均不高。近年来,鳞状细胞癌抗原(squa-     

肝癌发生过程中的差异基因表达

目的:应用寡核苷酸芯片研究正常肝脏、慢性乙型肝炎、肝硬化及肝癌的基因表达谱,筛选肝癌相关基因.方法:分别对正常肝组织及肝炎、肝硬化和肝癌组织进行总RNA抽提并纯化,反转录得到cDNA,生物素标记cRNA探针,分别与含有19378个已知基因的寡核苷酸芯片进行杂交,Gene Scanner 3000激光系统扫描,GenePix Pro3.0分析软件读取处理杂交信号.结果:在慢性乙型肝炎、肝硬化及肝癌组织中,筛选出共同差异表达基因81个,其中持续上调表达基因53个,持续下调表达基因数28个.结论:寡核苷酸基因表达谱芯片能够快速筛选出肝癌相关基因,有多种基因共同参与肝癌发生的整个过程.     

癌-睾丸抗原GAGE基因mRNA在肝细胞癌的表达及临床意义

GAGE基因是Van den Eynde等应用细胞毒性T淋巴细胞（CTL）筛选法，从一黑色素瘤细胞株cDNA文库中筛选出的肿瘤抗原基因，它能在多种来源不同的肿瘤组织表达，而在正常组织的表达仅限于睾丸组织，因此属于癌-睾丸抗原（CT抗原）。本研究中采用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测肝细胞癌（HCC）组织及相应癌旁组织中GAGE基因mRNA4的表达情况，     

原发性肝细胞癌乙型肝炎病毒X抗原表达的分析

我们前已报道了抗ＨＢＶＸ抗原（ＨＢｘＡｇ）三种不同肽段的抗体检出肝癌细胞中ＨＢｘＡｇ的存在，我们用ＰＣＲ技术扩增肝癌组织中，ｘ基因，用重组ＨＢｘＡｇ及其抗体中的抗ＨＢｘ和ＨＢｘＡｇ并用免疫组织化学的方法分析肝组织中ＨＢｘＡｇ的表达及其分布，我们发现ＨＢｘＡｇ在肝癌肝组织中阳性率高达９２．６％，而且分布广泛，主要表达在细胞浆，但细胞核内亦有见到，癌旁组织检出率也很高，而在小胆管上皮细胞内亦见有ＨＢｘ     

Autotaxin mRNA在人肝细胞癌中的表达

目的了解自分泌运动因子Ａｕｔｏｔａｘｉｎ（ＡＴＸ）ｍＲＮＡ在肝癌中的表达及其与肝癌临床病理特征之间的关系。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应（ＲＴＰＣＲ）研究５例正常肝组织、３２例肝癌组织中ＡｕｔｏｔａｘｉｎｍＲＮＡ的表达，以βａｃｔｉｎ为内参照。结果５例正常肝组织及３２例肝癌中均有ＡｕｔｏｔａｘｉｎｍＲＮＡ表达；但Ａｕｔｏｔａｘｉｎ基因表达值（ｘ±ｓ）癌组织显著高于正常肝组织（６８．２３％±１５．３１％对３１．９７±８．０５％，Ｐ＜０．００１）。高表达ＡＴＸ肝癌与癌细胞肝内转移、门静脉癌栓形成、肿瘤的分化程度有关，而与年龄、性别、病因、肿瘤大小等无关。结论Ａｕｔｏｔａｘｉｎ基因过度表达与肝细胞癌的进展、转移有关。     

抑癌基因PTEN在原发性肝癌中的表达及意义

目的 研究抑癌基因PTEN在原发性肝癌发生过程中的作用及意义。方法 应用免疫组织化学和northern杂交分析60例原发性肝癌及对应癌旁组织中PTEN mRNA及PTEN蛋白表达情况,结合患者的临床病理资料分析PTEN在原发性肝肝癌中的意义。结果 PTEN蛋白明确定位于肝细胞胞浆内。60例HCC的癌组织中,PTEN蛋白阳性率为48.3％(29/60),明显低于癌旁肝组织的阳性率(100％)。PTEN蛋白在肝癌组织内的表达阳性率与肝癌的病理学分级、有无癌栓有关,PTEN蛋白在肝癌组织的Ⅰ～Ⅱ级、Ⅲ级、Ⅳ级的阳性率分别为84.0％、23.8％、21.4％,无癌栓形成组PTEN蛋白表达的阳性率为55.56%,有癌栓形成组PTEN蛋白表达的阳性率为26.7％。Northern杂交显示,PIEN基因在肝癌细胞内存在四个转录子,其大小分别为5.5、4.4、2.4、1.8 kb。患者肝癌组织内PTEN mRNA的表达水平明显低于对应的癌旁肝组织。PTEN 5.5 kb和4.4 kb的转录子表达水平的降低与血清中AFP水平、有无癌栓、有无卫星灶及病理学分级有关;2.4 kb的转录子表达水平降低与患者有无癌栓、有无卫星灶有关;1.8 kb转录子表达水平的降低与临床病理学指标无关。结论 PTEN在肝癌的发生过程中可能起重要作用,其表达水平有可能作为反映肝癌进展和预后的病理学指标。     

脆性组氨酸三联体基因异常转录与肝癌关系的研究

目的：研究脆性组氨酸三联体(FHIT)基因异常转录与肝细胞癌(HCC)的相关性。方法：利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和单链构象多态性(SSCP)技术检测24对肝癌及癌旁组织、4例正常肝组织中FHIT的转录和突变情况。结果：11例肝癌组织(46％)标本、2例(8％)癌旁正常组织检测到异常转录本，正常肝组织无异常转录。结论：FHIT基因异常转录可能是导致肝细胞癌形成的一个重要因素。     

Expression and analysis of McAbs antigen against human hepatocellular carcinoma

AIM: To analyze the cause of tumor antigen heterogeneity and solve the problem of targeting diagnosis and therapy.METHODS: Using flow cytometry, the expression of McAbs antigen against human hepatocellular carcinoma (HAb18, E₅, F₁₁ and HAb27) was investigated. Analyses of the antigen sites were made quantitatively on the human hepatoma cell lines (SMMC-7721; QGY-7701; BEL-7402; HHCC and 9204). In particular, expression of human hepatoma, its association with antigen HAg18, and its relation s with cell cycle in four human hepatoma cell lines using the methods of indirect immunofluorescence and dual-parameter DNA dyeing were studied.RESULTS: The corresponding antigen of McAbs HAb18, HAb27, E₅ were expressed on the five hepatoma cell lines and F₁ was expressed only on the 7721 and 7701 hepatoma cell lines, but their mean fluorescence intensity showed different values on each cell line. HAb18 and HAb27 showed a relatively high level of expression, while E₅ and F₁₁ showed a lower level of expression. The value of AI (additivity index) was 136% for HAb18 and E₅, 108% for HAb18 and HAb27, and 118.6% for E₅ and H27As AI < 30% shows that both antibodies sites are the same, AI > 40% shows that both anti bodies sites are different, so the HAb18, HAb27 or E₅ McAbs were combined in pairs, showing that their antigen sites were different. Furthermore, HAg18 antigen was expressed very highly and the positive rate of HAg18 was 100% in all the four human hepatoma cell lines. The was a mean intensity fluorescence was 8.237 ± 1.168 for SMMC-7721; 5.627 ± 1.678 for QGY-7701; 4.378 ± 1.525 for BEL-7402 is 4.378 ± 1.525 and 7.38 ± 1.919 for HHCC. However, in the normal human liver cell (QZG), HAg18 antigen showed low expression (0.534 ± 0.018) and its positive rate was only 9%. The relationship between human hepatoma associated antigen HAb18 and the cell cycle was expressed at the lowest level in G₀-G₁ stages, a higher level in S stage and the highest level in G₂-M stage.CONCLUSION: Analysis of the anti-hepatoma McAbs corresponding to antigen may provide the basis for targeted diagnosis and therapy. The expression heterogeneity of human hepatoma-associated antigen HAg18 is related to the stage of cell cycle in the same cell lines, but not related to the stage of cell cycle in different cell lines.     

MAGE-4基因在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

目的通过研究MAGE-4基因在肝细胞肝癌组织中的表达,并与患者临床资料进行分析,探讨 MAGE-4基因与肝细胞肝癌(HCC)患者临床指标及转移与复发的关系,为MAGE-4基因编码蛋白用于HCC患者免疫治疗提供依据. 方法用RT-PCR的方法对31例HCC患者癌组织及相应癌旁组织MAGE-4基因表达进行测定,对全部RT-PCR扩增产物中目的基因片段进行DNA测序以证实其为 MAGE-4基因,患者均测定并统计AFP、AFU、抗HCV、HBsAg、AFP mRNA、肿瘤直径等临床指标. 结果 31例HCC患者肝癌组织中MAGE-4基因表达的阳性率38.7% (12/31)明显高于癌旁组织中MAGE-4基因表达的阳性率0% (0/31),P＜0.01.HCC患者肝癌组织中MAGE-4基因表达的阳性率与患者AFP、AFU、抗HCV、HBV标志物、AFP mRNA、肿瘤直径等临床指标均无关,P＞0.05. 结论 MAGE-4基因在HCC患者肝癌组织中特异高表达,可能作为HCC患者免疫治疗攻击的靶点,HCC患者肝癌组织中 MAGE-4基因表达的阳性率与HCC患者肿瘤标志物、转移、复发均无关.     

人肝癌中p16和CDK4基因的遗传变异及其与HBV感染之间的关系

目的探讨抑癌基因ｐ１６和癌基因ＣＤＫ４的遗传变异在人肝癌发生发展中的作用及其相互关系以及与ＨＢＶ感染之间的关系。方法取手术切除的肝癌标本,用Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交法对ｐ１６和ＣＤＫ４基因以及ＨＢＶ的状态进行检测,同时切片行病理检查。结果３６例肝癌中４例有ｐ１６纯合性缺失,３例半合子丢失,总丢失率为１９．４％,其中约１／３的ｐ１６丢失发生在肿瘤小于５ｃｍ的肝癌;在有ＨＢＶ－ＤＮＡ整合和无整合的病例中,ｐ１６的丢失率差异无显著性。３７例肝癌中５例（１３．２％）发生ＣＤＫ４扩增,与ｐ１６的丢失无重叠;ＣＤＫ４的扩增全部发生在有ＨＢＶ整合的肝癌中。结论ｐ１６的丢失在部分肝癌的发生发展中起着一定的作用,但与ＨＢＶ－ＤＮＡ的整合无关;ＣＤＫ４的扩增可能与ＨＢＶ－ＤＮＡ的整合以及肝癌的进展有关。     

肝细胞癌多基因表达异常的初步研究

在我国,HBV感染是导致HCC的主要原因,其发生涉及到多基因表达的改变,单基因研究很难代表HCC基因变化的全貌,借助于DNA芯片这一高通量基因表达谱分析手段,有可能揭示HCC多基因表达异常的变化状况,探讨其相互关系及作用机制。我们应用含有18993个已知基因的Affymetrix U133plus 2．0芯片研究HCC患者及正常人肝组织基因表达情况，初步分析差异基因表达及其在HCC中的可能作用。[第一段]