顶头孢霉生物合成头孢菌素C中限速步骤的识别

头孢菌素C(CPC)系顶头孢霉产生的一种天然β-内酰胺抗生素.目前工业上生产的CPC是作为进一步生产注射用头孢菌素的前体,后者在治疗由产生青霉素酶的细菌所引起的人体感染上更为有效.自发现CPC以来,由于工艺和菌株的改良,产量显著提高.当今工业生产上使用的高产菌株主要通过多次反复诱变筛选获得.然而,采用这些传统方法所得菌株,在没有扩大筛选的情况下已难以进一步改良.因此继续采用这些方法,效率低,在经济上已没有多大吸引力.     

优化培养基提高头孢菌素C产量

本文阐述了通过改变头孢菌素C发酵培养基中糖的组分,在不改变总糖含量的标准下,增加培养基中的葡萄糖含量,减少豆油含量的方法。加速菌体生长速度,达到缩短生产周期和提高产量的目的。经摇瓶试验得到优化培养基配方,然后在生产中验证。最终得到了预期结果,生产周期缩短了24小时,实现了单位时间内产量的提高。     

头孢菌素C酰基转移酶在顶头孢霉中的表达

以假单胞菌的头孢菌素C(CPC)酰基转移酶为基础,根据顶头孢霉密码子偏爱性及RNA二级结构预测分析,设计并合成了全长2349 bp的CPC酰基转移酶基因ecs,并将其在大肠杆菌中表达.结果证明,表达蛋白能将CPC转化为7-ACA.将ecs表达质粒转化CPC产生菌顶头他霉,通过PCR、Southern blotting以及Western blotting等方法验证,表明ecs基因已成功整合到顶头孢霉染色体上并得到表达,重组菌的发酵也显示部分CPC直接转化成了7-ACA.     

搅拌对顶头孢霉丝形态和头孢菌素C生物合成的影响

搅拌能充分混合物料，增强氧的传递，但搅拌强度过强会影响工业生产菌的菌丝形态和产物生成。在头孢菌素C的发酵生产过程中，菌丝形态与产素的关系密切，通过采用显微图像定量分析技术，计算菌丝总长度和菌丝平均生长单位，表明过高的搅拌速度会打断菌丝，造成机械损伤．明显降低产率。更换80m^3生产罐搅拌桨之后，降低了剪切作用，大罐的发酵效价提高了33．3％，达到22926．8μg／ml。     

发酵期间顶头孢霉细胞脂肪酸成分的变化与头孢菌素C产量的关系

顶头孢霉的头孢霉素C(CPC)生物合成受到葡萄糖之类碳源的阻遏。受阻遏的关键靶位是催化青霉素N(PenN)扩环转化为脱乙酰氧头孢菌素C(DAOC)的酶——扩环酶。因此,在以葡萄糖作碳源的CPC发酵中,PenN积累增多,CPC产量减少。为了迥避葡萄糖的负调节,在工业生产上往往使用油酸甲酯,豆油或米糠油代替葡萄糖作为生物合成CPC的碳源,以提高CPC产量。     

发酵过程中条件特性对头孢菌素C生物合成的影响

头孢菌素 C(简称头 C)是获得许多半合成药物制剂的重要物质,这就决定了研究强化其生物合成过程条件的迫切性。目前,关于头 C 生物合成的工艺资料报     

用重组DNA提高顶头孢霉的头孢菌素C产量

头孢菌素 C(CPC),系天然产生的β-内酰胺抗生素,可制造更为有效的头孢菌素类药物。顶头孢霉 ATCC 11550系 G.Brotzu 在萨迪尼亚沿海附近污水排出口处的海水中发现的一种无性丝状真菌,经诱变、筛选及选育后获得的许多菌株已在世界各地制药公司生产 CPC 达25年以上。     

植物油对顶头孢霉在发酵过程中菌体形态变化与头孢菌素C产量的影响

植物油加入到培养基后,促进了高度膨胀的菌丝体断片形成节孢子,同时增加了头孢菌素C的产量。     

两株顶头孢霉生理生化特性的研究

通过对两株头孢菌素C产生菌顶头孢霉生理生化特性的研究,对发酵过程中各个参数的变化规律与头孢菌素产量之间的关系有了一定的认识,并根据不同菌种的代谢特性配置了一套与其相适应的控制条件,从而达到提高头孢菌素产量的目的。     

利用棒状链霉菌和顶头孢霉固态发酵生产头孢菌素

引言按照 Cannel 与 Moo-Young 所下定义,固态发酵(SSF)系指微生物生长在无自由液体的固体物料上。在 SSF 过程中,供微生物生长所需水分以吸附态或结合于固体基质内的形式存在。对 SSF 中自由液体的精确定义是不易确定的。虽然 SSF 的最低水分含量大约是12%(低于所有微生物活动中止时的水平),但 SSF 的上限是随吸水率而不是随水分含量而变化的。例如,槭树皮吸水率约40%,稻草约75%时,游离水就很明显。由于底物的低水含量和 a_w 值,故固态发酵系统可为多数丝状真菌和少数细菌,例如以菌丝形式生     

甲硫氨酸在头孢菌素C生物合成中的作用

甲硫氨酸明显刺激顶头孢产生头孢菌素Ｃ。曾经提出许多假设来解释这种现象，所积累的证据有力地证明甲硫氨酸是通过诱导生物合成途径的酶如：δ－（Ｌ－α－氨基己二酰）－Ｌ－半胱氨酰－Ｄ－缬氨酸合成酶、异青霉素Ｎ合成酶和脱乙酰氧头孢菌素Ｃ合成酶而产生刺激作用。由于发现在含甲硫氨酸培养基中培养物编码以上各种酶的基因的转录明显增强。进一步证实了该机制，发酵中甲硫氨酸的另一作用是它的硫原子会并入头孢菌素了，此外它还     

头孢菌素C锌盐化学裂解制备7—氨基头孢霉烷酸

头孢菌素是一类广谱抗菌药物。头孢菌素C(Cephalosporin C)化学裂解制备7—氨基头孢霉烷酸(7—Amino—Cephalosporanic acid,7—ACA)是生产这类药物的关键的一步。我们主要考察了用亚胺衍生物法裂解头     

采用接种体混合物培养顶头孢霉M25提高头孢C的产量

采用不同菌龄的接种混合物培养顶头孢霉M25，可提高头孢C的产量。早期与后期的接种体的比例为3：7时，得到CPC浓度的最大值(2．17g／L)。     

顶头孢霉的蛋氨酸类似物抗性变株合成头孢菌素C

顶头孢霉(Cephalosporium acremoniumCW19的分生孢子经紫外光照射后(死亡率90%),在含有5μg/ml DL-硒代蛋氨酸的最低培养基上分离。原株的生长受到抑制,而抗性变株可长成菌落。在所获得的抗性变     

微波诱变头孢菌素C产生顶头孢霉菌的研究

本实验以头孢菌素C高产菌L32为出发菌株,通过微波诱变,得到变株L32-104,初复筛证明其发酵单位提高20%,且遗传性状非常稳定。该菌株在中试以及大生产中均获成功。实验表明微波诱变法操作简便、安全可靠、方法可行。     

剪切作用对头孢菌素C发酵的影响

要发酵放大通常采用几何尺寸比例放大,而忽视剪切力作用。剪切力作用对头孢菌素C的发酵水平影响较大。通过试验我们总结出对于种子罐和处于生长期的菌丝体搅拌叶末端线速度不易超过7m/s,对于生长期呈节孢子状态的菌体以7．5m/s的末端线速度为宜。以此为依据,在进行生产规模扩大上取得了较好效果。     

豆油对头孢菌素C发酵影响的初步研究

本文主要考察了基础培养基添加豆油以及不同发酵时间流加豆油对头孢菌素C发酵特性的影响.实验结果表明在72h,84h,96h三个时间添加点中,以72h添加豆油为最佳:72h的豆油添加中以0.8%的添加量效果最好,其脂肪酶活比对照平均高出14.8%,放瓶效价提高6.6%.为以后进行的发酵罐实验提供了有参考价值的数据.     

农杆菌转化法高效构建顶头孢霉sorA和sorB双缺失菌株提高头孢菌素C产量

目的 获得顶头孢霉sorA和sorB双缺失菌株，以阻断sorbicillinoids的合成，并研究其与头孢菌素C(CPC)产量的关系。方法 通过根癌农杆菌转化法，依据同源双交换的原理，同时敲除合成sorbicillinoids骨架结构的两个聚酮合酶基因sorA和sorB，并通过摇瓶发酵实验检测缺失菌和野生菌的产量。结果 筛选并验证了6株A. chrysogenum-?pks菌株，遗传稳定，转化效率约为20%。通过发酵实验测定发现，缺失菌株产CPC能力比野生菌提高了70%。结论 农杆菌转化法是一个高效的顶头孢霉遗传操作系统，并且顶头孢霉中sorbicillinoids的缺失可以提高CPC产量。     

头孢菌素C酰化酶的分离

头孢菌素C酸化酶(CCA)可催化头孢菌素C侧链酰胺键的水解,生成β-内酰胺母核7-氨基头孢烷酸(7-ACA)和侧链α-氨基己二酸.利用CCA生产7-ACA只需一步反应过程.这种酶的工业应用将能取代目前使用的多步化学或酶促水解方法.