大段仿生活性人工骨修复犬长骨缺损的实验研究

[目的]观察大段活性人工骨对大动物骨缺损的修复效果,了解材料的降解性。[方法]以快速成形技术制备犬用PLLA.cTCP大段人工骨载体材料,按3 mg/块材料的标准复合rhBMP-2制备犬用大段活性人工骨。以犬桡骨2.0 cm骨缺损为实验模型,将大段活性人工骨(实验组)和单纯载体材料(对照组)植入骨缺损,通过影像学、组织学、生物力学检查评价骨缺损的修复效果,通过图像分析仪分析材料的降解情况。[结果]影像学检查表明,实验组术后12周骨痂与断端完全连接,术后24周骨痂塑形良好。对照组术后24周无骨痂生长,缺损未修复。组织学检查证明,实验组术后12周骨痂外层形成板层骨,中央形成小梁骨及骨髓组织,材料部分吸收;术后24周,骨痂板层骨致密,小梁骨减少,骨髓组织增多,材料进一步降解。对照组术后12周纤维组织将材料包裹并长入其中,材料部分降解;术后24周材料被纤维组织分割包裹,材料进一步降解。术后12周实验组和对照组的降解率分别为43.2%和35.7%,术后24周58.4%和45.4%。生物力学检测证明,术后24周实验组桡骨的抗弯强度超过正常骨的强度。[结论]PLLA.cTCP大段活性人工骨对大动物骨缺损有良好的修复效果,材料的降解性还需要改善。     

冷冻同种异体皮质骨复合重组人骨形态发生蛋白-2修复兔大段负重骨缺损

我们将深低温冷冻同种异体皮质骨与重组人骨形态发生蛋白 2 (rhBMP 2 )、Ⅰ型可吸收胶原海绵 (ACS)复合 ,植入兔股骨大段缺损处 ,探讨其修复功能。一、材料与方法1.试剂与异体骨 :rhBMP 2 (北京军事医学科学院 ) ;Ⅰ型可吸收胶原海绵(ACS ,北京益而康生物有限公司 ) ;-80℃深低温冰箱保存同种异体皮质管状骨(自制 )。2 .动物分组 :健康新西兰大白兔 40只 ,体重 2 .5～ 3 .0kg ,雌雄不分。随机分成 5组 ,每组 8只兔。A组 :植入异体骨 +rhBMP 2 +ACS ;B组 :植入异体骨+rhBMP 2 ;C组 :植入异体骨 +ACS ;D组 :单纯植入异体骨 ;E组 …     

异体DBM复合rhBMP-2修复兔桡骨缺损的实验研究

目的探讨异体脱钙骨基质（demineralized bonematrix，DBM）复合重组人骨形态发生蛋白2（reconstruction humn bonemorphology protein-2，rhBMP-2）修复节段性骨缺损的能力。方法48只新西兰大白兔采用桡骨15mm节段性骨缺损模型，随机分为3组，A组植入异体DBM与rhBMP-2复合材料，B组植入异体DBM，C组为空白对照组。术后4周、8周、12周、16周．进行放射学和组织学检查。结果A组：术后4周宿主结缔组织长入植骨材料内的骨小梁间，并有岛状新生软骨、骨组织形成；术后8周，新生软骨及骨形成并融合成片；术后12周，新骨改建成熟，但仍能见到植骨材料；术后16周，管状骨结构形成，髓腔再通。B组：术后4周，植骨材料周围有软骨形成；术后8周，大量软骨形成；术后12周，大片状骨形成；术后16周，有髓腔形成。C组：各时问点仅见有纤维结缔组织，只在两端有新骨形成。X片示A组成骨量大，新骨改建、成熟迅速，术后16周全部达骨性愈合。B组成骨量少，仅2例达骨性愈合。C组未见骨性愈合。结论异体DBM复合rhBMP-2材料通过骨诱导和骨传导两种方式修复骨缺损，是一种较理想、具有高效成骨活性的植骨材料。     

生物可降解活性材料修复兔桡骨缺损的实验研究

目的 探讨用可降解多孔块状聚己内酯（PCL）作为骨形态发生蛋白（BMP）的载体,修复骨缺损的可行性。方法 采用兔桡骨骨缺损模型,用上述具有生物活性复合材料修复骨缺损,同时对照单纯PCL及同种异体脱钙骨,经不同的时间的X线片、X线计量学、组织形态学及电镜观察,了解PCL／BMP复合物的成骨作用。结果 PCL／BMP组不同时间新骨形成的量均优于单纯PCL组,其骨缺损修复的方式和速度与同种异体脱钙骨较相似。电镜观察表明,PCL的降解过程与单纯PCL组相比较,PCL／BMP组的降解速度较快,更符合骨缺损愈合的需要。结论 PCL是BMP的良好载体,有修复骨缺损的临床应用可行性。     

骨形态发生蛋白复合HA/TCP修复去势大鼠骨缺损的研究

目的研究羟基磷灰石/磷酸三钙（hydroxyapatite/tricalcium phosphate,HA/TCP）双相生物陶瓷与重组人骨形态发生蛋白-2（recombinant human bone morphogentic protein-2,rhBMP-2）的复合材料对骨质疏松骨缺损的修复作用。方法选用30只8个月龄雌性SD大鼠,随机分为两组。实验组（20只）行双侧卵巢摘除术,对照组（10只）行假手术。术后12周确定实验组骨质疏松模型建立成功,两组大鼠双侧股骨外侧髁上造成直径3 mm骨缺损。同时实验组随机植骨分为两组：单纯HA/TCP组和rhBMP-2/HA-TCP复合材料组;对照组全部植入rhBMP-2/HA-TCP复合材料。植骨术后4、8和12周取双侧股骨标本,进行组织学、X射线、骨密度及生物力学检测。结果实验HA/TCP组4周时材料周围存在密度减低区,缺损部位新生骨量明显低于实验复合材料组,12周时新生骨板界面可见类骨质,材料吸收较快;实验复合材料组12周时材料大部分降解转化为新骨,可见成熟的骨小梁和骨髓组织,有编织骨形成。与单纯HA/TCP组相比,4、8周时实验复合材料组缺损部位X射线、骨密度以及生物力学值明显提高（P〈0.05）,与对照复合材料组比较差异无显著性（P〉0.05）。结论HA/TCP双相生物陶瓷是rhBMP-2较理想的载体材料,复合后具有良好的骨诱导作用,能够明显促进骨质疏松骨缺损的修复。     

组织工程骨修复兔颅骨缺损中骨形态发生蛋白的表达

目的 探讨组织工程骨修复骨缺损,内源性骨形态发生蛋白（BMP）在组织工程骨再生过程中的分布及作用,方法 将自体成骨样细胞即刻种植在胶原包埋的聚羟基乙酸（PGA）基质材料上, 然后将该复合体或单纯基质材料移植到兔颅骨的一侧全层骨缺损区,作为实验侧Ⅰ或实验侧Ⅱ。对凤对照,不作任何植入。18只新西兰兔分别于术后3、8及14天处死,标本行组织学及BMP免疫组织化学检查,切片上,确定骨缺损区中央,距骨断端2mm、5mm为A、B、C三区,利用真彩色计算机图像分析系统在各区间测量BMP值。结果 术后3天,实验侧Ⅰ基质间存在BMP阳性细胞,8天时,实验侧Ⅰ新骨形成明显优于实验侧Ⅱ及对照侧。14天时,实验侧Ⅰ可见骨小梁形成,对照侧为纤维组织修复。BMP定量分析中,实验侧（Ⅰ、Ⅱ）三区的BMP值高于对照侧,但实验侧的浓度梯度差值小于对照侧。结论 即刻种植于PGA基质材料上的成骨样细胞在体内可合成和分泌BMP,利用组织工程技术将内源性BMP局限于骨缺损区,提高内源性BMP浓度并改善其分布,可能是组织工程骨诱导骨再生机制之一。     

BMP/PCC人工骨修复长骨大段缺损的实验研究

目的 研究理想的、能较快修复大段骨缺损的人工骨材料。方法 将骨形态发生蛋白（BMP）和多孔复合陶瓷（PCC）结合研制成BMP/PCC人工骨，并将BMP/PCC和PCC人工骨进行兔桡骨大段骨缺损修复的对比研究。术后2、4、8和12周时取材，分别作大体、组织形态学、新骨形成定量分析及生物力学测试。结果 BMP/PCC人工骨内新骨形成量明显多于PCC人工骨。术后12周时，BMP/PCC侧植入部位的抗折强度明显高于PCC侧。结论 BMP/PCC人工骨能更快促进长骨大段骨缺损的修复，是一种较理想的人工骨材料。     

珊瑚复合人工骨骨诱导活性的实验研究

目的弥补单纯珊瑚无骨诱导活性、骨修复能力弱等缺陷,为临床提供理想的骨移植替代材料。方法将珊瑚与胶原和重组人骨形成蛋白２（ｒｈＢＭＰ２）复合,制备珊瑚／胶原／ｒｈＢＭＰ２复合人工骨,将其植入大鼠背部肌肉陷窝,以珊瑚／胶原和珊瑚／ｒｈＢＭＰ２复合人工骨植入作对照;取材后通过组织学方法和图像分析评价其骨诱导活性。结果珊瑚／胶原／ｒｈＢＭＰ２植入后１周,在局部诱导出软骨细胞分化和软骨基质形成;植入后４周,形成含骨髓的板层骨;诱导成骨的量有明显的ｒｈＢＭＰ２剂量依赖性（Ｐ＜０．０１）;而珊瑚／胶原和珊瑚／ｒｈＢＭＰ２植入区均无骨或软骨形成。结论珊瑚／胶原／ｒｈＢＭＰ２复合人工骨具有良好的异位诱导成骨活性,是一种较理想的骨移植替代材料。     

BMP复合仿生人工骨填塞犬股骨假体周围髓腔骨缺损的实验研究

目的评估仿生人工骨（PLGA／TCP）材料作为BMP缓释系统载体材料修复犬假体涂层多孔钛周围骨缺损的可行性。方法给予8只犬进行右侧股骨头置换术，并充分扩髓，周围填充BMP复合的PLGA／TCP骨移植材料，应用X线拍片、组织和荧光观察、EDX及SEM检测、骨密度定量分析等方法，观察负重情况下该材料的实际效果。结果术后X线显示，未有出现透亮带、无假体下沉，未见骨质吸收；20周时骨与假体之间紧密接触，多孔钛内骨组织明显长入，以编织骨为主。植入的活性人工骨已经完全降解，骨小梁结构成熟；假体植入肢体与非手术肢体骨密度之比，显示在术后1个月假体植入侧的骨密度值有所降低，而后逐渐升高。结论多孔钛涂层有助于假体内骨与假体的固定，BMP复合PLGA／TCP作为新的骨移植材料应用于关节外科，有广泛的潜力和价值。     

携载rhBMP-2微球的新型可注射自凝固复合人工骨的制备及特性研究

[目的]制备一种具有良好降解性和成骨活性、可注射的自凝固新型骨修复材料。[方法]制备携载rhBMP-2的聚乳酸与聚乙醇酸共聚物（PLGA）微球，并将其与rhBMP-2／磷酸钙骨水泥（CPC）复合，制备出rhBMP-2／PLGA微球／CPC复合人工骨。探讨了材料的特性，包括形貌、固化时间、抗压强度及反映材料体外降解速度的指标一体外降解液Ca、P浓度变化，测定复合材料rhBMP乏的释药速度及体外诱导MSCs细胞成骨分化的能力。[结果]与单纯CPC-rhBMP-2相比，复合材料的固化时间少量增加，抗压强度下降明显。体外降解速度及体外释药明显提高，释放的rhBMP-2具有骨诱导活性。[结论]rhBMP-2／PLGA微球／磷酸钙骨水泥新型复合人工骨是具有良好应用前景的骨修复材料。     

人重组骨形态发生蛋白-2修复全层关节软骨缺损的实验研究

目的 :研究人重组骨形态发生蛋白 2 (rhBMP 2 )对全层关节软骨缺损的修复 ,观察修复效果。方法 :家犬 8只 (16膝 ) ,每个膝内外髁均做全层软骨缺损 ,内外髁共 3 2个缺损。随机分为 4组 ,每组 2只。每只犬一侧关节行胶原海绵吸附rh BMP填充内外髁缺损 ,另一侧以单纯胶原海绵填充作对照 ,不处理组为空白对照。术后 2、4、 8、 12周取材作大体、光镜、透射电镜观察。结果 :rh BMP组为类软骨细胞修复 ,而单纯胶原海绵组和空白组均为纤维性修复。结论 :rhBMP 2有效地促进关节软骨缺损的修复 ,可以作为临床上治疗关节软骨缺损的方法     

多孔载因子CPC促进骨缺损愈合的实验研究

[目的]探讨磷酸钙骨水泥复合rhBMP-2/明胶微球复合材料在治疗骨缺损时的降解、成骨性能。[方法]制备携载rhBMP-2的明胶微球(GMs),与磷酸钙骨水泥(CPC)复合,制备出rhBMP-2/GMs/CPC复合人工骨。取30只新西兰大白兔,在前臂桡骨中段制造人工骨缺损,随机分成3组,分别植入rhBMP-2/GMs/CPC/复合物(A组)、GMs/CPC(B组)、rhBMP-2/CPC(C组),术后6、12周分别进行X线检测、骨密度测定,术后12周处死动物,分别行生物力学测定,脱钙切片、HE染色,不脱钙切片进行荧光显微镜下观察双标间距,计算平均矿化率。[结果]与GMs/CPC、rhBMP-2/CPC组比较,复合材料植入后不同时间点的材料降解及成骨均高于对照组。12周A组标本生物力学实验测定结果表明指标接近正常,与B、C组比较有统计学差异。骨密度12周、新骨矿化率提示有统计学差异。[结论]rhBMP-2/GMs/CPC微球系统复合材料在体内易降解,具有良好成骨活性,是良好的骨修复材料。     

探讨在复合肌肉骨膜瓣联合移植修复长段骨缺损中BMP-2的表达

目的:研究骨形态发生蛋白(BMP-2)在肌肉瓣加骨松质颗粒及骨髓(复合肌肉骨膜瓣)联合移植修复长段骨缺损中的表达.方法:实验采用新西兰大白兔24只,左右桡骨制成20mm的骨缺损模型,左侧桡骨骨缺损处用自体髂骨骨松质制成颗粒状和肱桡肌及股骨内骨髓混合后联合移植作为实验组,右侧做成骨缺损作为对照组,不做任何处理,任其自然生长.术后3d和1、2、4、6、8周后处死动物取材,进行HE及BMP-2多克隆抗体的免疫组化染色和BMP的cDNA探针原位杂交并在光镜下观察.结果:(1)实验组和对照组在术后3d时,均有炎症反应,未见BMP-2的表达,在以后几周时间内BMP-2的表达强度均强于对照侧.结论:在本实验中可以得出:(1)BMP-2是骨缺损修复过程中的一种重要生长因子,(2)本术式明显能缩短骨缺损修复的时间,为在临床中的应用提供理论依据.     

携载rhBMP-2微球的新型复合人工骨的释药及成骨活性研究

目的 制备一种具有良好降解性和成骨活性，可注射的自凝固新型骨修复材料。方法制备携载rhBMP-2的聚乳酸与聚乙醇酸共聚物（PLGA）微球，并将其与rhBMP-2／磷酸钙骨水泥（CPC）复合。制备出rhBMP-2／PLGA微球／CPC复合人工骨。测定了复合材料释药速度，将复合材料及rhBMP-2-CPC分别植入兔双侧股骨髁骨缺损区域，通过X线、组织学观察比较不同时期材料的降解及成骨情况。结果 复合材料各时间点的体外释药量均大于单纯rhBMP-2／CPC组．与单纯rhBMP-2／CPC材料相比较，复合材料植入体内后不同时间点材料的降解和新骨生成均高于单纯rhBMP-2／CPC植入组。结论 rhBMP-2／PLGA微球的掺入可明显加快rhBMP-2的释放。提高材料的降解速度和成骨活性。     

隔膜引导下血管内皮生长因子复合煅烧骨对骨缺损修复作用的实验研究

[目的]研究隔膜引导下VEGF复合煅烧骨（TBC）修复骨缺损的作用，探讨其临床应用前景。[方法]新西兰大白兔80只，建立桡骨干中段10mm骨缺损模型。A组植入e—PTFE膜包绕的VEGF复合TBC，B组植入VEGF复合的TBC，C组植入e-PTFE膜包绕的TBC，D组单纯植入TBC。术后第2、4、6、8和12周行X线、组织学观察，测定骨密度并分析其成骨量。[结果]D组的骨缺损修复效果最差，B、C组中等，A组最佳。A组在各时段上其骨密度测量的结果优于B、C、D组，差异性显著（P〈0．01）。[结论]e—PTFE膜包绕的VEGF复合TBC能够更好地修复骨缺损，是一种较为理想的骨组织工程材料，具有良好的临床应用前景。     

血管内皮细胞生长因子165及骨形态发生蛋白2促进兔骨缺损部位再血管化的研究

目的为大段骨缺损修复过程的血管再生探索一条可行的途径。方法成年大耳白兔30只,随机分为五组。右前肢为实验肢体,缺损长度约15 mm。第1～4组都采用胶原膜引导,结合纳米羟基磷灰石／聚酰胺骨水泥,不同的是在第1组中,复合血管内皮生长因子165(VEGF165)及骨形态发生蛋白2(BMP2)质粒;第2组复合VEGF165质粒;第3组复合BMP2质粒;第4组不复合任何质粒;第5组仅制作动物模型而不做任何处理,作为空白对照组。结果术后2周,核素断层摄影(ECT)结果显示第1组骨缺损修复后的局部血流量高于第2、3、4组(P<0．05);术后4周,X线片示第1组骨缺损处的骨痂明显增多;SEM显示在正常骨与工程骨交界处可见新生的骨小梁结构以及成骨细胞的附着;ECT结果照示第1组骨缺损的局部血流量高于第2、3、4组(P<0．01);第2组骨缺损的局部血流量高于第3、4组(P<0．01);术后8周,SEM显示第1组工程骨表面成骨细胞的附着多于其它各组, ECT结果显示与术后4周相同。结论在骨缺损的局部,联合应用表达VEGF165和BMP2质粒可以促进骨缺损局部的血液供应;附着质粒DNA的纳米羟基磷灰石／聚酰胺及引导性胶原膜在大段骨缺损局部的联合应用有助于新骨的形成。     

骨形成蛋白-脱钙骨基质颗粒-骨水泥复合材料修复狗股骨微波灭活骨缺损后的长期观察

目的 :探讨骨形成蛋白 (BMP) 脱钙骨基质颗粒 (DBM ) -骨水泥 (BC)复合材料修复狗股骨微波灭活骨缺损后的生物学过程和归宿。方法 :对BMP DBM BC复合材料进行综合评价和植入动物体内进行了初步观察后 ,进一步对实验动物进行X射线照相、99Tcm MDP骨显像、大体标本观察、组织学观察、土霉素荧光标记和印度墨汁灌注染色观察。结果 :X射线照相 :术后随时间延长复合材料与宿主骨边界模糊程度增加。99Tcm MDP骨显像 :术后 18个月时实验侧同位素浓集仍略高于正常骨组织。大体标本 :初期可见复合材料处有充血炎性反应 ,至 9个月时炎性反应消退。组织学观察 :随时间延长 ,材料内部新生骨增多 ,“生物铆定”增强。土霉素荧光标记 :复合材料内大部分DBM所在部位呈现较强的黄色荧光。印度墨汁灌注 :复合材料内有大量的墨染血管。结论 :BMP DBM BC复合材料修复狗股骨微波灭活骨缺损后能够诱导新骨形成 ,复合材料与宿主骨最终形成“生物铆定”。     

PLGA-TCP-BMP-2人工骨结合带血供自体骨修复骨缺损

[目的]研究PLGA-TCP-BMP-2人工骨结合自体带血供自体尺骨移植修复大段骨缺损的效果.[方法]手术造成30 mm绵羊桡骨骨缺损,A组置入PLGA-TCP-BMP-2人工骨及带血运的长段尺骨,B组仅置入PLGA-TCPBMP-2人工骨,C组不置人任何材料.3组均以钢板固定骨缺损区.术后24周拍摄X线片并处死动物,进行组织学观察评价.[结果]X线检查示A组桡骨缺损处完全成骨修复,皮质骨与髓腔的轮廓清晰;B组亦能完全修复,但新生骨密度及髓腔轮廓清晰度均不如A组;C组无有效骨痂形成.组织学检查示A、B组骨痂外层形成为板层骨,C组缺损区可见大量纤维组织填充.[结论]PLGA-TCP-BMP-2人工骨结合自体带血供长段尺骨移植能够很好的修复绵羊桡骨30 mm的骨缺损.