粉防己碱对人乳腺癌细胞 MDA - MB -435S的作用

目的：探讨粉防己碱（Tet）对雌激素受体（ER）阴性人乳腺癌 MDA - MB -435S 细胞的作用。方法 MTT 方法检测 Tet 对 MDA - MB -435S 细胞体外生长的影响。用碘化丙啶单染流式细胞术测定法检测 Tet 对 MDA - MB -435S 细胞周期的影响。结果 Tet 对 MDA - MB -435S 细胞生长的抑制作用随着 Tet 浓度的增加、时间的延长而增大,Tet 剂量与时间之间存在交互作用（P ﹤0.01）。Tet 作用于 MDA - MB -435S 细胞24 h 后,G0/ G1期细胞比例均显著增多,随 Tet 浓度增加,G0/ G1期细胞比例增多;S 期、G2 M 期细胞比例均明显降低,并且随 Tet 浓度增加,S 期、G2 M 期细胞比例降低。结论 Tet 对雌激素受体阴性乳腺癌细胞系 MDA - MB -435S 增殖有明显抑制作用,且存在浓度和时间依赖性。Tet 阻滞 MDA - MB -435S 细胞于 G0/ G1期,降低 S 期比例,抑制 DNA 合成是其抑制乳腺癌细胞生长的机制之一。     

抑癌基因LKB1在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的 通过检测新发现的抑癌基因LKB1在乳腺癌中表达情况,探讨其与乳腺癌变的关系及其预后意义。方法 用Western印迹法比较不同乳腺癌细胞株LKB1基因的表达情况,构建LKB1基因表达质粒,转染至该基因低表达的细胞株,研究细胞生长数度及凋亡相关蛋白表达的改变;以Western印迹法检测LKB1基因在121例乳腺癌手术标本中的表达,结合临床病理资料分析该基因在乳腺癌中的临床意义。结果 MDA-MB-435细胞中未能检测到LKB1基因的表达,转染LKB1基因表达质粒后,MDA-MB-435细胞的生长受到明显抑制;细胞周期分析,G1期细胞的比例18．3％增至40．9％;细胞中细胞周期相关因子细胞周期蛋白D1、细胞周期蛋白E的含量下降,而其抑制因子p21的含量升高;单因素分析表明LKB1低表达与高复发率(P=0．002)及总生存率差(P=0．008)显著相关。结论 在LKB1基因缺表达的乳腺癌细胞株MDA-MB-435细胞中,转入并表达该基因能明显抑制其乳腺癌细胞的生长;其作用与p21介导的G1期阻滞有关;LKB1基因低表达与乳腺癌预后差显著相关。     

类胡萝卜素和维甲酸对不同雌激素状态乳腺癌细胞增殖的影响

目的：通过体外细胞研究,观察类胡萝卜素和维甲酸对人乳腺癌细胞的作用。方法：用噻唑蓝（MTT）法观察维甲酸和类胡萝卜素对体外培养的雌激素受体阳性（ER＋）乳腺癌细胞MCF－7和雌激素受体阴性（ER－）乳腺癌细胞MDA－MB－435S的抑制作用。结果：发现维甲酸和类胡萝卜素对乳腺癌细胞的增殖抑制表现出剂量、时间和结构效应以及细胞的特异性。其中β-胡萝卜素对ER＋和ER－乳腺癌细胞均有很强的抑制作用,而维甲酸和其他4种类胡萝卜素（玉米黄素、虾青素、角黄素、玉米黄素双棕榈酸酯）对ER＋乳腺癌细胞的抑制作用强于ER－乳腺癌细胞。结论：β－胡萝卜素对乳腺癌细胞的抑制机制不同于维甲酸和其他4种类胡萝卜素,也不需转化为维甲酸而起作用。     

荜茇明碱对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响

目的：探讨荜茇明碱（PL）对人乳腺癌MDA‐MB‐231细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法体外培养人乳腺癌MDA‐MB‐231细胞;采用活细胞计数试剂盒（CCK‐8）法检测不同浓度的PL对MDA‐MB‐231细胞增殖的影响;流式细胞术检测PL对细胞凋亡的影响;蛋白免疫印迹（Westernblot）法检测PL对MDA‐MB‐231细胞Bcl‐2和Bax蛋白表达水平的影响。结果PL抑制MDA‐MB‐231细胞增殖,并呈现出浓度、时间依赖性。PL诱导MDA‐MB‐231细胞凋亡,而乙酰‐L‐半胱氨酸则抑制了PL诱导的细胞凋亡。Westernblot结果提示随着PL浓度的增加,Bax的表达逐渐增加,而Bcl‐2的表达逐渐减少。结论PL对人乳腺癌MDA‐MB‐231细胞有明显的生长抑制和诱导凋亡作用,其机制可能与Bcl‐2蛋白表达的减少和Bax蛋白表达增加有关。     

三羟异黄酮对人乳腺癌细胞株MDA-MB-435S细胞周期的影响

目的：观察三羟异黄酮(genistein，Gen)对体外培养的人乳腺癌细胞株MDA—MB—435S细胞存活率、细胞周期和凋亡的影响。方法：用噻唑蓝(MIT)法观察Gen对MDA—MB-435S细胞生长的影响；流式细胞仪观察Gen处理人乳腺癌细胞后细胞周期改变的剂量效应和时间效应关系；吖啶橙／溴乙锭染色法(acridine orange/ethidium bromide staining)在荧光显微镜下观察Gen对MDA—MB—435S细胞的凋亡作用。结果：随剂量增大和作用时间延长，Gen对MDA—MB—435S细胞增殖的抑制作用逐渐增强。同时可以阻滞细胞周期于G2—M期，而且随剂量的增大，作用时间的延长，阻滞作用也增强。吖啶橙染色法于荧光显微镜下可见，随Gen剂量增大，细胞凋亡也逐渐明显。结论：Gen可抑制人乳腺癌细胞的增殖，其作用机制可能包括诱导细胞凋亡和G2—M期阻滞。     

DBC2基因诱导乳腺癌细胞周期G1期阻滞的机制

目的 研究肿瘤抑癌基因DBC2(deletion in breast cancer 2)抑制乳腺癌MDA-MB-435S细胞增殖的可能机制.方法 野生型DBC2基因的真核表达载体pEBG-DBC2瞬时转染MDA-MB-435S细胞72 h,RT-PCR方法证实DBC2基因的过表达;流式细胞术检测DBC2的瞬时过表达对MDA-MB-435S细胞周期的影响,Western blot检测DBC2的过表达对细胞周期蛋白Cyclin D1表达的作用.结果 DBC2基因在MDA-MB-435S细胞中瞬时转染72 h后,其mR-NA表达水平即可成倍增加,同时DBC2基因的过表达可诱导该乳腺癌细胞周期的G1期阻滞,并随着时间的延长出现细胞凋亡.结论 DBC2基因体外抑制乳腺癌细胞生长的功能,可能通过抑制Cyclin D1的表达并使细胞停滞于G1期,以及诱导细胞凋亡等机制实现.     

乙酰肝素酶反义寡核苷酸对人乳腺癌细胞株MDA435侵袭力的抑制作用

目的：探讨乙酰肝素酶（HPSE）反义寡脱氧核苷酸对人乳腺癌细胞株MDA435侵袭力的抑制作用。方法：设计合成互补于HPSE mRNA起始密码区的硫代反义寡脱氧核苷酸AS－ODN及相应的无义对照寡脱氧核苷酸NS－ODN,以阳离子脂质体Lipofectin包埋后转染MDA435细胞,以逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）检测转染后HPSE mRNA表达的变化,以Western印迹检测HPSE蛋白表达的变化,以定量Matrigel侵袭实验检测MDA435细胞侵袭力的变化。结果：与正常对照组、脂质体对照组和NS－ODN相应浓度组相比,AS－ODN各浓度组对HPSE mRNA和蛋白的表达及细胞侵袭力均有明显抑制作用（P＜0．01）,其抑制效应在不同浓度组间差别显著P＜0．01）。AS－ODN在终浓度为0．1μmol/L,0.2μmol/L和0．4μmol/L时对MDA435细胞的侵袭力抑制率分别为34．0％、57．8％和79．7％。结论：HPSE反义寡脱氧核苷酸通过下调HPSE mRNA在蛋白的表达可显著抑制人乳腺癌细胞株MDA435的侵袭力,并呈剂量依赖性。     

TUNEL法检测ER(-)乳癌细胞凋亡和Ki-67表达的研究

目的：探讨雌激素受体阴性乳癌细胞中Ki-67与细胞凋亡之间的关系。方法：通过1．25（OH）2D3诱发雌激素受体阴性乳癌细胞株MDA－MB－435s凋亡,采用MTT法检测细胞增殖情况,TUNEL法检测细胞凋亡指数,免疫组化法检测Ki-67阳性表达指数,进行相关性分析。结果：在10^-8mmol/L 1.25(OH)2D3诱发MDA－MB－435s凋亡过程中,肿瘤细胞 凋亡指数与Ki-67阳性表达指数呈负相关。结论：对凋亡指数及Ki-67阳性表达指数的综合分析,可全面反映细胞凋亡和增殖的平衡状态,对于判断肿瘤细胞的增生具有参考价值。     

透明质酸结合蛋白对肿瘤细胞表达 cyclin E及p27kip1的影响

目的：研究透明质酸结合蛋白（HABP）对人乳腺癌、前列腺癌细胞和牛血管内皮细胞cyclinE及p27^kip1表达的影响。方法：将人脑透明质酸结合蛋白（hbHABP）全长cDNA转染到人乳腺癌细胞（MDA435）和前列腺癌细胞（TSU）中，研究细胞周期蛋白cyclinE及细胞周期蛋白依赖性激酶抑制物p27^kip1表达的变化。再将这些转基因细胞的培养上清液（CM）加入牛主动脉血管内皮细胞（ABAE）的培养上清液中，观察CM对ABAE的p27^kip1表达的影响。结果：MDA435和TSU细胞转染hbHABP基因后，cyclinE的表达水平均明显低于对照组细胞，而p27^kip1的表达水平均升高。ABAE细胞受CM作用后，p27^kip1的表达水平也高于对照组细胞。结论：hbHABP可能具有下调肿瘤细胞周期蛋白cyclinE和上调细胞周期蛋白依赖性激酶 抑制物p27^kip1的作用，从而抑制肿瘤细胞的生长；同时，hbHABP促进血管内皮细胞p27^kip1的表达，可以抑制肿瘤新生血管的形成。     

miR －200c 对三阴乳腺癌细胞株 MDA －MB －231放疗敏感性的影响

目的：探讨miR－200c对三阴乳腺癌细胞株MDA－MB－231放疗敏感性的影响及潜在的机制。方法将细胞株分成3组,未处理组是指未感染任何慢病毒的原始细胞,miR－NC组是指感染阴性对照慢病毒的细胞,miR－200c组是指利用包装有has－miR－200c的慢病毒感染MDA－MB－231细胞,并建立稳定过表达miR－200c的细胞株模型。 qRT－PCR和Western blot检测间充质－上皮转化（ MET）的标记分子及共济失调毛细血管扩张突变基因蛋白（ ATM）分子的表达;克隆形成实验检测转化后细胞的放射敏感性。结果过表达miR－200c的MDA－MB－231细胞发生间充质样形态向上皮样形态的转变,伴随着MET相关基因的显著改变（ P＜0.05）;转化后细胞的放射敏感性增加;转化后细胞的ATM总蛋白及磷酸化蛋白水平显著减少。结论 miR－200c过表达诱导乳腺癌细胞发生间充质－上皮转化,增加细胞的放疗敏感性,这种作用可能与细胞内ATM表达的下调有关。     

三氧化二砷对裸鼠人乳腺癌移植瘤的作用及机制

目的探讨三氧化二砷（As2O3）对乳腺癌移植瘤的作用及其机制。方法建立BALB／C—nu／nu裸鼠ER阴性MDA—MB-435s人乳腺癌移植瘤模型,分别以不同浓度的As2O3、顺铂和生理盐水（NS）腹腔内注射,观察移植瘤的瘤重及抑瘤率。并用免疫组化检测乳腺癌石蜡标本中PTEN和Caspase-7的表达。结果As2O3高剂量组、As2O3低剂量组、顺铂组均能明显抑制裸鼠皮下肿瘤的生长,抑瘤率分别为48．68％、32．80％、66．67％。用药后移植瘤组织中PTEN和Caspase-7蛋白阳性细胞数显著增多（P〈0．05）。结论As2O3能明显抑制乳腺癌移植瘤的生长,其作用机制可能是通过上调PTEN和Caspase-7的表达,促进细胞的凋亡来抑制人乳腺癌细胞的生长。     

Cyclin E Expression and Chemotherapeutic Sensitivity in Breast Cancer Cells

The effects of the cyclin E expression levels on chemotherapeutic sensitivity of breast cancer cell line were explored. After the cyclin E expression was knockdown in MDA-MB-435 by RNA interference, FACS analysis and SA-p-gal staining were used to evaluate the response sensitivity of breast cancer cells to DNA damage drugs (adriamycin, etc.). Adriamycin could induce G1 arrest in cyclin E knockdown MDA-MB-435 breast cell line and increase the percentage of cell senescence in cyclin E knockdown MDA-MB-435 cells. It was suggested that cyclin E knockdown could increase the chemotherapeutic sensitivity of breast cancer cells to DNA damage drugs.     

三氧化二砷对人乳腺癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的探讨三氧化二砷对人雌激素受体阴性乳腺癌细胞系MDA—MB-435s在裸鼠体内生长的影响及其作用机制。方法建立乳腺癌细胞系MDA—MB-435s的裸鼠体内移植瘤模型,将24只荷瘤裸鼠随机分成4组,即生理盐水（Ns）组、顺铂（DDP）组、低剂量三氧化二砷组（1．5mg／kg）、高剂量三氧化二砷组（3．0mg／kg）。比较各组的抑瘤作用及应用免疫组化技术分别检测PCNA、Caspase-3在各组之间表达情况。结果用药后不同剂量三氧化二砷组和顺铂组均能显著抑制人乳腺癌移植瘤在裸鼠体内的生长,移植瘤的大小和重量显著低于生理盐水组（P〈0．05）。免疫组化结果表明：生理盐水组移植瘤组织中PCNA蛋白大量表达,Caspase-3蛋白少量表达。经不同剂量三氧化二砷或顺铂处理后PCNA蛋白的表达下降,而Caspase3蛋白的表达上调,与生理盐水比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论三氧化二砷可以通过抑制PCNA的增殖及增加Caspase-3的凋亡作用来抑制肿瘤生长,且呈剂量依赖性。     

尿激酶型纤溶系统在乳腺癌细胞侵袭中的作用

目的研究尿激酶型纤溶系统组分uPA、uPAR、tPA及PAI-1在人乳腺癌细胞侵袭中的作用。方法以3株具有不同侵袭转移能力的乳腺癌细胞株作为研究对象,应用RT?PCR方法比较纤溶组分在此3株细胞中的表达,牛奶板法检测细胞培养上清中的纤溶活性,用Boyden小室模型测定细胞侵袭能力。结果发现MDA-MB-231细胞表达较高水平的uPA、uPAR、PAI-1和中等水平的tPA,无血清培养上清中总纤溶活性和uPA纤溶活性最高;MDA-MB-435细胞表达较低水平的uPA和较高水平的tPA,但未测出uPAR和PAI-1的表达,无血清培养上清中总纤溶活性较高,主要是tPA活性;MCF-7细胞表达较低水平的uPAR和较高水平的PAI-1,但未测出uPA和tPA的表达,无血清培养上清中几乎没有纤溶活性。与纤溶活性相一致的是,Boyden小室模型实验结果发现MDA-MB-231在3株细胞中体外侵袭能力最强,MDA-MB-435次之,MCF-7则几乎无体外侵袭能力。经抗uPA和抗uPAR抗体预处理MDA-MB-231细胞,分别使侵袭能力下降83.1%和43.9%(P<0.05)。结论uPA和uPAR的活性与乳腺癌细胞的侵袭转移能力密切相关     

三羟异黄酮对人乳腺癌细胞株MCF-7细胞增殖和细胞周期的影响

目的:研究三羟异黄酮(genistein,Gen)对乳腺癌细胞株MCF鄄7细胞增殖和细胞周期的影响。方法:采用MTT比色法观察Gen对MCF鄄7细胞增殖的影响,流式细胞仪分析细胞周期分布,Westernblot分别检测周期素B(cyclinB)、周期素E(cyclinE)蛋白表达情况。结果:Gen(≥10μmol/L)对MCF鄄7细胞生长有显著抑制作用,细胞生长阻滞于G2/M期,cyclinB蛋白表达增加,且呈剂量-效应关系;但对cyclinE蛋白表达无影响。结论:Gen抑制MCF鄄7细胞增殖、诱导G2/M期阻滞与其导致cyclinB蛋白积累有关,与cyclinE蛋白表达无明显关系。     

The effect of anastrozole on mRNA expression of oestrogen related gene in MCF-7 breast cancer cells

Objective： To look for additional markers of molecular biology response to anastrozole, a new aromatase inhibitor, on the growth and mRNA expression level of MCF-7 cell. Methods： We investigated the effect of anastrzole on growth and gene expression in the human breast cancer cell line MCF-7 and compared with the most widely used antiestrogen tamoxifen. We chose 4 genes to examine regulation of gene expression of estrogen regulated genes ： PR A, PR B, ErbB-2 and cyclin D1. Results： Compared with the tamoxifen, a statistically significant growth inhibition was observed with anastrozole. The PR A, PR B and cyclin D1 mRNA level in anastrozole treated cells was sigificantly below the level in tamoxifen treated cells （P〈0. 05）. They had agonistic effect on ErbB gene （P〉0. 05）. Conclusion： The third generation of aromatase inhibitors anastrozole exert more inhibit function in some expression of estrogen regulated genes than tomoxifen in MCF-7 cell line.     

透明质酸结合蛋白诱发肿瘤细胞凋亡的实验研究

目的探讨人脑透明质酸结合蛋白(hbHABP)对人肿瘤细胞凋亡的影响。方法将hbHABP全长cDNA转染到人乳腺癌细胞(MDA435)和前列腺癌细胞(TSU)中,采用Western blot检测细胞caspase-3、CD95表达的变化,并采用酶联免疫吸附试验试剂盒测定细胞裂解液中Bcl-2、Cip／WAFI的含量。再将转hbHABP基因的MDA435细胞种植到鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)上,使MDA435肿瘤细胞在体内环境中生长成瘤,取肿瘤块作病理切片,采用caspase-3抗体作免疫组织化学染色。结果MDA435和TSU细胞转染hbHABP基因后,caspase-3和CD95表达均增高;MDA435-hbHABP细胞裂解液中Bcl-2含量下降,TSU-hbHABP的Bcl-2无明显变化。TSU-hbHABP细胞Cipl／wAFl的含量升高,MDA435-hbHABP无变化。免疫组织化学结果显示,MDA435-hbHABP肿瘤组织内caspase-3表达均增高。结论hbHABP可能诱导肿瘤细胞凋亡,从而抑制肿瘤生长。     

新型黑麦酮酸D衍生物D69抗乳腺癌活性研究

目的研究一种来源于海洋微生物次级代谢产物的新型黑麦酮酸D衍生物D69对人乳腺癌的体内外抑制活性,并初步探讨其分子机理。方法通过镜下观察以及MTT比色法检测D69的细胞毒作用,构建人乳腺癌裸鼠移植瘤模型研究D69体内抗肿瘤活性。结果 D69对人乳腺癌细胞系MDA-MB-435和ZR-75-30的生长具有显著的抑制作用,且呈剂量依赖性增强。其对MDA-MB-435和ZR-75-30细胞半数抑制浓度（IC50）分别为0.031μmol/L和0.036μmol/L,而对人永生化乳腺上皮细胞HMEC的抑制作用较低,IC50为0.686μmol/L。人乳腺癌裸鼠移植瘤模型验证D69能显著抑制在体肿瘤的生长。结论 D69可能是一种潜在的乳腺癌化疗药物的先导化合物。