端粒酶启动子调控p53基因表达对T24细胞的影响

目的 探讨端粒酶催化亚基（hTERT）启动子调控p53基因在膀胱肿瘤细胞T24中表达对细胞的影响。方法 将成功构建的phTERT-p53载体，瞬时转染膀胱肿瘤T24细胞；应用流式细胞仪观察细胞凋亡率变化，透射电镜下观察细胞凋亡形态学改变。结果 hTERT启动子调控p53基因表达使细胞凋亡率明显升高[24、48h凋亡率：实验组15．42％、36．57％；转染绿色荧光蛋白基因（GFP）组5．16％、8．19％；阴性对照组4．49％、7．18％]，电镜下观察到典型凋亡改变。凋亡指数达25％。结论 hTERT启动子能够激活phTERT-p53载体表达p53，使肿瘤细胞凋亡增加。     

RNA干扰技术对大肠癌细胞人端粒酶逆转录酶基因的抑制作用

目的 观察RNA干扰对大肠癌细胞中人端粒酶逆转录酶基因(hTERT gene)的抑制效应.方法 大肠癌细胞株HT-29分为Control组、N-hTERT组、Lipofectamine组和sihTERT组;将靶向于hTERT基因的小干扰RNA,转染大肠癌细胞;分别检测大肠癌细胞转染前后的端粒酶活性,hTERTmRNA和蛋白水平,细胞生长增殖和凋亡情况.结果 sihTERT转染大肠癌细胞效率为60%;sihTERT组的端粒酶活性值、hTERT mRNA表达、hTERT蛋白表达、细胞凋亡率分别为0.73±0.14、0.47±0.08、0.37±0.07、49.5%,sihTERT组与其他三组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论 靶向于hTERT的siRNA能特异性沉默大肠癌细胞hTERT基因,下调hTERT基因mRNA及蛋白表达水平,降低端粒酶活性,抑制癌细胞生长增殖从而促进大肠癌细胞凋亡.     

端粒酶逆转录酶基因启动子调控FADD表达载体诱导人结肠细胞凋亡的研究

目的 构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因启动子调控Fas相关死亡结构域蛋白(FADD)肿瘤细胞特异性表达载体,观察其对人结肠癌细胞凋亡的作用.方法 利用hTERT基因核心启动子和FADD基因片段,构建hTERT基因启动子调控FADD 的肿瘤细胞特异性表达载体.用脂质体转染法,将其分别转染人结肠癌细胞和正常细胞,观察人结肠癌细胞和正常细胞的端粒酶活性、细胞周期及凋亡.结果 hTERT基因核心启动子调控FADD 表达载体,在所检测的肿瘤细胞中具有明显的转录活性;而在正常细胞中则无明显的转录活性.Colon320细胞、LoVo细胞、SW480细胞与WI-38细胞凋亡率在不同转染时间比较,差异有统计学意义(P均<0.01).WI-38转染pLNCX-hTERT-FADD与pLNCX-hTERT-GFP在24、48、72、96、120h凋亡率比较,差异均无统计学意义(P均>0.05).结论 hTRET基因核心启动子具有肿瘤特异性,构建hTERT基因核心启动子调控FADD 表达载体可能是一种新的肿瘤治疗途径.     

hTERT启动子驱动TRAIL基因表达载体对结肠癌HT-29细胞的抑制作用研究

目的构建人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子调控的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)基因表达载体,探讨其对结肠癌细胞HT-29增殖的抑制作用。方法构建重组质粒pshuttle-TRAIL和pshuttle-hTERT-TRAIL,通过脂质体转染结肠癌HT-29细胞,采用MTT法检测重组质粒对细胞增殖的影响及流式细胞术检测细胞凋亡的变化。结果 pshuttle-TRAIL和pshuttle-hTERT-TRAIL组细胞增殖率低于空白对照组和空质粒转染组;流式细胞术检测转染后细胞凋亡率升高,并且pshuttlehTERT-TRAIL凋亡率高于pshuttle-TRAIL组。结论 hTERT启动子调控的TRAIL可明显抑制结肠癌细胞增殖以及诱导细胞凋亡,可能是结肠癌靶向治疗的新途径。     

U6/H1双启动子siRNA表达框架构建及其对肿瘤细胞端粒酶活性的干扰作用

目的：构建针对端粒酶hTERT基因的U6/H1双启动子siRNA表达框架（SEC）,并观察其转录产物对HeLa细胞端粒酶活性的干扰作用。 方法：利用融合PCR技术,针对人端粒酶hTERT基因开放阅读区构建3条U6/H1双启动子SEC以及针对其3''端非翻译区构建1条U6/H1双启动子SEC,对各SEC鉴定后,分别转染人宫颈癌HeLa细胞,用端粒重复序列扩增法（TRAP）检测HeLa细胞的端粒酶活性。 结果：4种针对端粒酶hTERT基因的U6/H1双启动子SEC均成功构建,转染HeLa细胞后,对端粒酶活性的抑制率分别为36.8%、57.39%、80.47%、70.31%。 结论：针对端粒酶hTERT基因的U6/H1双启动子SEC的成功构建,为开展肿瘤端粒酶基因干扰的实验研究提供了新的有效手段。     

内源性端粒酶抑制基因在大肠癌中的表达及临床研究

目的分析内源性端粒酶抑制基因PinX1与端粒酶、端粒相关蛋白在大肠癌中的表达 ,探讨PinX1在大肠癌演进过程中的作用及临床意义。方法应用半定量逆转录 聚合酶链反应(SQRT PCR)检测 6 6例大肠癌组织中内源性端粒酶抑制基因PinX1、端粒酶逆转录酶hTERT和端粒结合蛋白TRF1的mRNA表达水平。结果PinX1表达与大肠癌组织分化、临床分期和淋巴转移之间有显著相关性 (F分化 =11 4 0 ;F分期 =4 2 2 ;t=- 2 81,P≤ 0 0 5 ) ,与hTERT表达呈负相关 (r= - 0 5 5 3,P <0 0 1) ,与TRF1的表达无显著相关。PinX1高表达 (B =- 8 0 2 ,P <0 0 5 )和 (或 )不伴淋巴结转移 (B =- 1 6 9,P <0 0 5 )的患者预后较好。结论PinX1的下调可能与大肠癌形成、转移过程中端粒酶激活及维持机制有关 ,但对TRF1的调节还有赖于其他因素。检测PinX1的表达水平对评价大肠癌恶性程度、转移潜能和预后评估均有重要的临床价值。     

RNA干扰沉默hTERT基因对大肠癌SW480细胞生物学特性的影响

目的 观察人端粒酶催化亚单位(hTERT)基因对SW480细胞生物学特性的影响.方法 将重组质粒pGPU6/GFP/Neo-hTERT-shRNA (hTERT-shRNA)用脂质体转染法导人大肠癌细胞株SW480,实验分4组,每组设3个复孔,分别于转染后24、48、72 h,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测hTERT mRNA的表达,免疫细胞化学法检测hTERT蛋白表达,PCR-TRAP-ELISA法检测端粒酶活性,流式细胞仪检测细胞周期分布,终端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法和透射电镜观察细胞凋亡变化及共聚焦显微镜观察线粒体膜电位(MMP)的改变.结果 转染后48 h hTERT-shRNA组hTERT mRNA相对表达量为0.32±0.03,hTERT蛋白表达的平均灰度值为209.60±17.10,端粒酶A450 ～ A630值为2.242±0.284,较其他对照组均明显降低(P＜0.05,P＜0.01);G0/G1期细胞为(49.37±1.63)％,增殖指数为(50.60±1.57)％,凋亡指数为22.2％,较其他对照组均明显增高(P ＜0.05,P＜0.01);凋亡细胞体积明显缩小,表面突起和微绒毛减少,甚至消失,线粒体Rhodamine 123平均荧光强度为719.99±17.08,MMP水平显著下降(P＜0.01).结论 RNA干扰(RNAi)沉默hTERT基因能有效抑抑制SW480肿瘤细胞生长,并降低端粒酶活性,诱导肿瘤细胞凋亡.     

人端粒酶逆转录酶-双自杀基因对肝癌的靶向杀伤作用

目前联合基因治疗最常用的是有单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-TK)和大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶(CD).同时,肿瘤的基因治疗要求导人的自杀基因表达严格限制于靶细胞(肿瘤细胞),而对正常细胞的生长无影响,因此寻找肿瘤细胞的靶点成为哌待解决的现实问题[1].端粒酶是维持端粒长度的一种逆转录酶,对细胞增殖、衰老及永生化和癌变起重要作用[2].在端粒酶的二三个亚单位中端粒酶逆转录酶(hTERT)是其活性的关键限速步骤,因而hTERT启动子将成为基因靶向表达的理想开关[2].已有研究证实CD、TK自杀基因治疗肿瘤已取得了初步成效[4,5],但是两者联合应用,尤其是在hTERT启动子特异调控下靶向抗肝癌,研究尚少.本研究旨在观察评价hTERT启动子驱动下的联合自杀基因体系对肝癌细胞靶向高效表达.     

RNA干扰survivin联合X线放射对大肠癌SW480细胞的影响

目的探讨RNA干扰技术和X线放射处理对大肠癌细胞survivin基因表达的影响。方法合成靶向人survivin基因的siRNA,转染大肠癌细胞SW480,联合或不联合放射治疗。检测转染前后及放射前后细胞survivinmRNA的表达;细胞抑制率及凋亡率,细胞周期分布,细胞survivin蛋白的表达。结果转染survivinsiRNA后的SW480细胞survivin mRNA及蛋白的表达明显低于对照组;SW480细胞转染survivinsiRNA 48 h后G2/M期细胞达(20.90±2.62)%,survivinsiRNA联合放射处理组细胞生长抑制率达59.8%,FCM显示survivinsiRNA联用放射处理组细胞凋亡率达(35.72±1.07)%。结论靶向survivin的siRNA能有效抑制大肠癌细胞SW480 survivin基因的表达,引起大肠癌细胞SW480 G2/M周期阻滞,抑制大肠癌细胞SW480的生长并能诱导其凋亡,并对大肠癌细胞SW480具有放射增敏作用。     

阿霉素协同TRAIL真核表达载体诱导前列腺癌细胞凋亡的研究

目的探讨阿霉素与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）真核表达载体诱导前列腺癌细胞凋亡的协同作用.方法 RT-PCR方法克隆人TRAIL全长基因,并插入真核表达载体pLXIN多克隆位点,经酶切和测序鉴定.将pLXIN-TRAIL质粒转染PC3-M细胞,RT-PCR方法检测外源性TRAIL表达率,TUNEL染色和流式细胞术比较单独表达TRAIL和联合应用阿霉素对PC3-M细胞凋亡率的影响,Western blot法检测经阿霉素诱导前后PC-3M细胞死亡受体-5（DR5）的表达变化.结果成功构建pLXIN-TRAIL真核表达载体,外源性TRAIL表达可以诱导PC-3M细胞凋亡,阿霉素能够增强TRAIL的凋亡诱导效应,6μg pLXIN-TRAIL质粒DNA组,加入1 mg/L阿霉素前后平均凋亡率分别为11.8%和20.7%,同时可提高PC-3M细胞DR5的表达. 结论 TRAIL真核表达载体介导的细胞凋亡是治疗前列腺癌的新途径,阿霉素可以通过提高DR5表达而增强PC-3M细胞对TRAIL诱导的凋亡敏感性.     

人工关节表面涂层研究现状

生物固定型人工关节假体表面涂层的研究成为目前人工关节领域研究的热点。随着组织工程学、材料学的发展,在人工关节表面用材、涂层类型及其处理方式等方面都有很多成果出现,本文就以上几个方面加以综述。     

护士医院安全文化认知的调查研究

目的 了解护士对医疗护理安全文化的认知情况,为针对性地对护士进行医院安全文化教育提供依据.方法 采用经修改后的医疗安全问卷(内容包括与安全有关的病房组织文化、医院组织文化和差错事故报告系统)对233名护士进行调查.结果 护士对医疗安全知识认知总分为170.58±9.63,对病房组织文化、医院组织文化、医疗差错事故报告系统的认知评分分别为78.82±6.26、43.96±5.10、57.39±5.33.不同职称、科室护士对医疗差错事故报告系统的认知水平比较,差异有统计学意义(均P＜0.05);不同科室、学历、年龄、工龄、职称的护士对病房组织文化认知水平比较,差异无统计学意义(均P＞0.05).不同特征(学历、科室除外)护士对医院组织文化的认知水平比较,差异有统计学意义(均P＜0.05).结论 护士对安全文化认知度低,需要加强护士医疗安全的相关意识,构建积极的医院安全文化.     

附睾相关的抗生育研究及进展

虽然至今尚没有一种直接作用于附睾并可供临床试验用的男性避孕药 ,但对附睾功能和精子在附睾成熟的研究表明 ,附睾极有可能成为男性抗生育最理想的靶器官。相关的动物试验包括直接作用于附睾精子如磺胺水杨嗪类、影响能量代谢与精子活动的氯化甘油和氯化糖苷类化合物、影响附睾环境如雷公藤单体和铜粉等。对附睾特异蛋白研究 ,可望发现免疫学途径的靶抗原 ,用于制备避孕疫苗。近年国内外对附睾特异表达基因的研究取得某些进展 ,如SC342、bin1基因的克隆和功能研究 ,有助于临床附睾炎和不育症的诊治 ,同时有望成为干扰附睾精子成熟达到避孕目的的新靶点。     

声热处理灭酶试验

研究了声热处理钝化毛豆过氧化物酶.实验条件为:温度60～90℃、超声波频率25kHz、功率800 W.以在不同温度(60～100℃)下热处理过氧化物酶的活性作为对照,研究超声波协同热力灭酶的机理.响应面分析结果表明:在25 kHZ、800 W的超声波、83℃下处理1.52 min,过氧化物酶钝化效果最佳.目前的研究有助于声热作用作为新加工工艺逐渐取代传统热加工处理.