白念珠菌ERG11基因突变与氟康唑耐药性的关系

探讨白念珠菌氟康唑作用的靶酶编码基因 (ERG11)突变与耐药性的关系。分离抽提分别对氟康唑敏感和耐药的白念珠菌基因组 DNA,根据 ERG11编码序列设计一对上下游引物 ,对靶酶活性中心血色素结合区和疏水端螺旋区的基因表达序列进行 PCR扩增 ,经 DNA测序比较敏感和耐药菌株的碱基差异。结果 :6株氟康唑耐药白念珠菌此段序列有 5个位点发生突变 ,其中 5株第 1344 bp位点 G→A的突变致所编码的第 44 8个氨基酸由甘氨酸 (G)变为谷氨酸 (E)。结论 :ERG11基因突变致所编码的氨基酸改变与氟康唑耐药有关。     

白念珠菌ERG11基因突变及高表达对耐药的影响

目的 探讨白念珠菌ERG11基因突变、高表达及二者的相互作用在氟康唑耐药中的作用.方法 采用PCR法扩增实验菌株的ERG11基因,并进行测序及生物信息学分析,筛查突变位点;抽提实验菌株总RNA,并逆转录合成cDNA,采用实时荧光定量PCR（FQ-RT-PCR）法检测ERG11基因的表达水平.结果 24株临床菌株中,共检测出ERG 11基因存在24个同义突变位点和5个错义突变位点,其中,E174A、T123I、V234F为新发位点;白念珠菌ERG11基因在耐药组中的表达量高于敏感组,差异具有统计学意义未发生错义突变的白念珠菌耐药株ERG11基因的表达量高于发生错义突变的,差异具有统计学意义.结论 白念珠菌ERG 11基因的5个错义突变A114V、E174A、T123I、Y132H、V234F可能与氟康唑耐药形成有关;ERG11基因的高表达可能与氟康唑耐药有关;ERG11基因的错义突变可能对该基因的高表达存在抑制作用.     

急性白血病多药耐药性检测的临床应用

目的 探讨急性白血病（急白）患者多药耐药基因（ＭＤＲ１）表达的临床意义放应用。方法 对３５例初治急白患者采用Ｓ－Ｐ免疫组化染以法检测ＭＤＲ１表达产物,地部分患者进行动态观察并配合药敏测定,了解急白患者化疗前后耐药情况的变化。结果 本组３５例ＭＤＲ,表达阳性者１４例（４０％）,其中急性淋巴细胞白血病（急淋）９便,急性晨淋巴细胞白血病（急非淋）５例,两者无显著差异,１４例ＭＤＲ１表达阳性者,达完全缓解     

基因芯片技术检测大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌中ESBLs和AmpC酶基因

目的检测大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌产生的ESBLs和AmpC酶的基因。方法在对ESBLs和AmpC酶表型检测的基础上,利用基因芯片和PCR技术研究大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌产生ESBLs和AmpC酶的基因,并对部分ESBLs和AmpC酶的基因扩增产物进行序列分析。结果大肠埃希菌和产酸克雷伯菌以单产ESBLs为主,肺炎克雷伯菌则以同时产生ESBLs和AmpC酶为主。大肠埃希菌产生的ESBLs(除TEM型外)主要是CTX-M-9组型,占63.5%。肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌产生的ESBLs分别以SHV型和CTX-M-3组型为主,分别占70.4%和89.8%。肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌的AmpC酶均为DHA-1型酶的基因,大肠埃希菌的AmpC酶主要编码CMY-2型AmpC酶。结论基因芯片技术可同时检测多种耐药基因,是ESBLs和AmpC酶基因检测的新途径。     

依维莫司单独与联合唑类药物对耐药念珠菌体外敏感研究

目的探讨依维莫司单独及联合伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑和氟康唑对耐药念珠菌及耳念珠菌的体外作用。方法于 2022年 3—6月,采用美国临床实验室标准研究所 M27-A3微量稀释法和微量肉汤稀释棋盘技术研究依维莫司联合伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑及氟康唑对耐药念珠菌及耳念珠菌的体外治疗作用。通过测定最低抑菌浓度( MIC)和部分抑菌浓度指数来确定协同效应。结果依维莫司单药治疗 22株耐药念珠菌及 10株耳念珠菌的 MIC为 0.250~4.000 mg/L、1.000 mg/L,伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑、氟康唑单独使用对 22株耐药念珠菌 MIC范围分别为 0.125~4.000 mg/L、<0.125~2.000 mg/L、0.063~2.000 mg/L、1.000~64.000 mg/L,伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑单独使用对 10株耳念珠菌 MIC范围分别为 0.500~2.000 mg/L、0.125~8.000 mg/L、0.125~1.000 mg/L。当依维莫司与伊曲康唑、伏立康唑、泊沙康唑、氟康唑联合使用时,对耐药念珠菌的协同作用分别是 9株( 40.90%)、 4株( 18.18%)、 8株( 36.36%)、 9株( 40.90%)。当依维莫司联合唑类作用于耳念珠菌,未发现任何拮抗作用。结论依维莫司单独使用对耐药念珠菌及耳念珠菌菌株具有明显抗真菌作用,同时依维莫司联合唑类作用于耐药念珠菌时,表现出良好的协同作用,且没有拮抗作用,其进一步提升其抗耐药念珠及耳念珠菌的作用。     

食管组织中代谢酶相关基因的异常表达与食管癌的发病关系研究

目的研究与环境致癌物活化、解毒有关的相和相代谢酶的mRNA水平与食管癌发病的关系。方法收集93例淮安地区食管癌新发病例的食管癌组织及远端癌旁组织,应用SYBRGreen实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测CYP2E1、GSTP1、MTHFR和NQO1等基因的mRNA水平;应用t检验和logistic回归分析评价基因的表达水平与食管癌的关系。结果CYP2E1和MTHFR的mRNA水平在癌组织和配对癌旁组织之间有显著差异;条件logistic逐步回归分析结果显示CYP2E1、MTHFR表达水平异常与食管癌发病风险升高有关联[OR值(95%CI)分别为1.890(1.439~2.481)和1.362(1.107~1.677)]。结论CYP2E1和MTHFR的表达水平改变与食管癌发病风险密切相关,在食管癌的高危人群筛查和早期诊断中具有重要意义。     

P170在贲门腺癌组织中的表达及临床意义的探讨

目的探讨P170蛋白在贲门腺癌组织中的表达及临床意义。方法用流式细胞术检测55例贲门腺癌患者癌组织和距离肿瘤5cm以上癌旁正常组织P170。结果55例贲门腺癌组织P170阳性表达率为50.9%,癌旁正常组织未见P170表达,两者差异有统计学意义。结论P170是贲门腺癌化疗时产生耐药现象的分子基础。     

PTEN在脑胶质瘤表达的定性研究

目的 探讨抑癌基因PTEN在脑胶质瘤的表达情况及其临床意义。方法 应用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）方法,检测45例胶质瘤组织与23例正常脑组织PTEN基因外显子1-9、1-8、5-9、5-8 mRNA失表达情况。结果 在45例肿瘤组织中,PTENmRNA平均失表达率为55.6％（25／45）。正常脑组织无1例失表达。胶质瘤组织和正常脑组织中PTENmRNA失表达水平存在明显差别（P〈0.05）。胶质瘤中PTENmRNA失表达水平与患者年龄、性别无关,但随着恶性程度分级增高其失表达水平明显升高（P＜0.05）。结论 PTENmRNA表达水平的异常在胶质瘤的发生和发展过程中起着重要作用。     

鲍氏不动杆菌耐药基因的定位研究

目的分析鲍氏不动杆菌的质粒谱和耐药谱,找出它们的耐药基因位点。方法K-B法检测35株鲍氏不动杆菌对21种抗生素的药敏情况,采用经典的碱裂解法和SDS裂解法抽提质粒,高温高浓度SDS双重处理交替培养法和SDS法消除质粒。结果35株鲍氏不动杆菌对常用的抗生素大多耐药,它们具有5种质粒谱,其中大多数为型。质粒消除后仅有7株菌对若干种抗生素敏感性得到恢复,其余无变化。结论本地区的鲍氏不动杆菌的耐药基因大多不在质粒上。     

复制缺陷重组腺病毒有效转染兔心包组织的实验研究

目的观察腺病毒载体转染兔心包组织的有效性和外源性基因表达的时相性。方法用第五代腺病毒粘粒(Adv5-CAG)为对照组或含β-半乳糖苷酶基因的第五代腺病毒质粒(Adv5-CAG／LacZ)为实验组转染兔心包组织,转染后第3、7、14、28d取被转染组织行β-半乳糖苷酶(X-gal)染色及β-半乳糖苷酶活性检测。结果X-gal染色显示实验组转染后第3、7、14、28d注射部位心包组织均见蓝染,尤以第7d最明显,而对照组心包组织均无蓝染;β-半乳糖苷酶活性检查示实验组转染后第3d心包组织中即有β-半乳糖苷酶表达,7、14d达高峰,28d表达量明显减少。结论重组腺病毒载体可有效地转染兔心包组织,外源性基因在兔心包组织中能够表达并能维持1个月左右。     

Differential distribution of functional cannabinoid CB1 receptors in the mouse gastroenteric tract

Recently, the gastrointestinal pharmacology of cannabinoid CB(1) receptors has been extensively explored. We employed western blotting and immunohistochemistry techniques to study the distribution of the cannabinoid CB(1) receptor protein in the mouse gastroenteric tract. The cannabinoid CB(1) receptor peptide was detected by western blotting only in its glycosylated form (63 kDa) with a significant differential distribution. The highest levels of expression were detected in the stomach and in the colon, while the pyloric valve was devoid of any cannabinoid CB(1) receptor protein. The immunohistochemical study showed intense cannabinoid CB(1) receptor immunoreactivity in ganglia subadjacent to the gastric epithelium and in the smooth muscle layers of both the small and large intestine. Only the small intestine showed (-)-3-[2-hydroxyl-4-(1,1-dimethylheptyl)-phenyl]-4-(3-hydroxylpropyl) cyclohexan-1-ol) ([3H]CP 55,940) specific binding (27%). These receptors mediated pharmacologically significant effects since the cannabinoid CB(1) receptor agonist R(-)-7-hydroxy-delta-6-tetra-hydrocannabinol-dimethylheptyl (HU 210) dose dependently inhibited gastrointestinal transit up to 70%, while the cannabinoid CB(1) receptor antagonist N-piperidino-5-(4-chlorophenyl)-1-(2,4-dichlorophenyl)-4-methylpyrazole-3-carboxamide (SR 141716A) increased gastrointestinal transit. Moreover, the dose of 0.3 microg/kg of HU 210, devoid per se of any activity on mouse intestinal propulsion, blocked the increased gastroenteric transit induced by the cannabinoid CB(1) antagonist SR 141716A.     

多药耐药相关蛋白基因表达与食管及贲门癌的关系

目的 探讨食管癌及贲门癌组织中多药耐药相关蛋白(MRP)基因的表达与其病理特征的关系。方法 应用逆转录酶-多聚酶链反应(RT-PCR)方法,检测了83例食管癌和贲门癌组织及28例患者45枚淋巴结中MRP基因的表达,并与相应癌旁组织进行对照分析。结果 35例食管癌和48例贲门癌组织中MRP阳性率(31.4％和16.7％)与其对应癌旁组织阳性率(5.7％和2％)比较具有显著性差异(P<0.01)。26枚转移淋巴结中,MRP阳性6例(23.1％);19枚非转移淋巴结组织未见MRP。在食管癌和贲门癌侵犯深肌层或纤维层及TNM Ⅲ,Ⅳ期的MRP阳性率(26.6％和28.8％)高于肿瘤侵犯浅肌层以下和TNM Ⅰ,Ⅱ期(10.5％和12.9％),均分布于低分化肿瘤中。对48例术后1～2年的患者随访发现,MRP阳性的肿瘤复发、转移的发生率高于MRP阴性者(P<0.05)。结论 食管、贲门癌组织中MRP基因表达增高,与转移淋巴结组织的MRP基因表达具有一致性,MRP的阳性表达除表现肿瘤的多药耐药外,还提示肿瘤预后不良。     

Analysis of gene expression changes of drug metabolizing enzymes in the livers of F344 rats following oral treatment with kava extract

The association of kava product use with liver-related risks has prompted regulatory action in many countries. We studied the changes in gene expression of drug metabolizing enzymes in the livers of Fischer 344 male rats administered kava extract by gavage for 14 weeks. Analysis of 22,226 genes revealed that there were 14, 41, 110, 386, and 916 genes significantly changed in the 0.125, 0.25, 0.5, 1.0, and 2.0 g/kg treatment groups, respectively. There were 16 drug metabolizing genes altered in all three high-dose treatment groups, among which seven genes belong to cytochrome P450 isozymes. While gene expression of Cyp1a1, 1a2, 2c6, 3a1, and 3a3 increased; Cyp 2c23 and 2c40 decreased, all in a dose-dependent manner. Real-time PCR analyses of several genes verified these results. Our results indicate that kava extract can significantly modulate drug metabolizing enzymes, particularly the CYP isozymes, which could cause herb–drug interactions and may potentially lead to hepatotoxicity.     

RANTES基因多态与2型糖尿病肾病的临床研究

目的探讨RANTES基因启动子G-403A多态与2型糖尿病肾病之间的关系。方法用聚合酶链反应限制性片段长度多态性技术（PCR-RFLP）检测252例RANTES基因启动子G-403A多态的基因型,其中2型糖尿病患者170例（糖尿病非肾病组76例,糖尿病肾病组94例）;正常对照组82例,并对各组间的等位基因频率与基因型频率进行比较。结果糖尿病肾病组的AA基因型频率（24．5％）明显高于正常对照组（14．6％）。糖尿病肾病组的A等位基因频率（52．1％）明显高于正常对照组（40．3％）,差异具有统计学意义（P〈0．05）。结论RANTESG-403A多态与糖尿病肾病的发生有相关性。     

Development of Vaccinia reporter viruses for rapid, high content analysis of viral function at all stages of gene expression

Vaccinia virus is the prototypical orthopoxvirus of Poxviridae, a family of viruses that includes the human pathogens Variola (smallpox) and Monkeypox. Core viral functions are conserved among orthopoxviruses, and consequently Vaccinia is routinely used to study poxvirus biology and screen for novel antiviral compounds. Here we describe the development of a series of fluorescent protein-based reporter Vaccinia viruses that provide unprecedented resolution for tracking viral function. The reporter viruses are divided into two sets: (1) single reporter viruses that utilize temporally regulated early, intermediate, or late viral promoters; and (2) multi-reporter viruses that utilize multiple temporally regulated promoters. Promoter and reporter combinations were chosen that yielded high signal-to-background for stage-specific viral outputs. We provide examples for how these viruses can be used in the rapid and accurate monitoring of Vaccinia function and drug action.     

地塞米松诱导人肺腺癌A549细胞对紫杉醇耐药性及Bcl-xL基因表达的影响

目的观察紫杉醇（PTX）干预不同浓度地塞米松（DEX）预处理人肺腺癌A549细胞后的耐药情况和Bcl-xL基因及蛋白表达变化,探讨DEX诱导A549细胞对PTX产生耐药的分子机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝比色法（MTT法）测定不同浓度PTX作用于A549细胞后的细胞存活率,筛选出PTX的半数抑制浓度（IC50）;用不同浓度DEX预处理A549细胞后,再给予不同浓度PTX作用于A549细胞,用MTT法测定细胞存活率,逆转录-聚合酶链反应和蛋白质印迹法检测细胞中Bcl-xL基因和蛋白的表达。结果不同浓度DEX预处理A549细胞后能诱导其对PTX产生耐药,细胞存活率随DEX浓度的增加而增高,Bcl-xL基因和蛋白表达水平随DEX浓度的增加而增高。结论 DEX能诱导A549细胞对PTX产生耐药,其机制可能与DEX诱导A549细胞抗凋亡Bcl-xL基因表达增加有关。     

RFLP技术检测和鉴定血液中念珠菌的研究

目的早期、快速检测和鉴定血液中常见念珠菌。方法对制备的白色念珠菌、热带念珠菌和克柔念珠菌感染的血液模拟标本采用常规血培养法和限制性片段长度多态性分析(RFLP)法进行检测和鉴定,最后进行结果分析。结果RFLP技术的检出率明显高于常规培养法。结论该技术具有快速、敏感、不需放射性同位素等优点,而且准确性极高,有着较好的临床应用前景。此技术应用于临床将为血液病、肿瘤和免疫抑制患者的诊断和救治工作起到积极的作用。