α-硫辛酸对高糖诱导下乳鼠心肌细胞作用

目的 探讨α-硫辛酸对高糖诱导的乳鼠心肌细胞肥大保护作用及其机制.方法 取出生1～3d乳鼠心尖部心肌细胞原代培养,用低糖培养基培养48 h后分为对照组、高糖组(25.5 mmol/L)、α-硫辛酸组(高糖+50、100、200、300 mg/L)、蛋白激酶C(PKC)抑制剂组(高糖+PKC抑制剂50 nmol/L)、核转录因子-κB(NF-κB)抑制剂组(高糖+ NF-κB抑制剂5 mmol/L);细胞培养48 h,检测细胞表面积以及蛋白含量,Wesrtern blot法检测PKC-α、NF-κB、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、立早基因c-fos蛋白表达.结果 与对照组比较,高糖组乳鼠心肌细胞肥大、细胞表面积增大、蛋白含量增多,心肌细胞内PKC-α(0.89±0.03)、NF-κB(0.88±0.14)、c-fos(0.62±0.14)、TNF-α(0.85±0.05)蛋白表达均升高(P＜0.05);α-硫辛酸能够减轻乳鼠心肌细胞肥大,使心肌细胞表面积减小、蛋白含量减少(P＜0.05),与高糖组比较,α-硫辛酸300 mg/L组细胞内PKC-α(0.44±0.07)、NF-κB(0.24±0.03)、TNF-α(0.39 ±0.05)、c-fos(0.15 ±0.06)蛋白表达均下降(P＜0.05).结论 α-硫辛酸可抑制高糖诱导的乳鼠心肌细胞肥大,其机制可能与抑制PKC/NF-κB/TNF-α/c-fos的信号转导通路有关.     

葡萄糖酸铬对体外高糖培养乳鼠心肌细胞保护作用

目的:探讨葡萄糖酸铬对体外高糖培养乳鼠心肌细胞的保护作用及其机制。方法:Wistar乳鼠原代细胞随机分为空白对照组、高糖组及葡萄糖酸铬高、低剂量组。用荧光显微镜测定各组细胞凋亡情况。结果:经葡萄糖酸铬干预后,心肌细胞存活率明显增高,凋亡细胞明显减少,bcl-2表达增加,caspase-3表达减少。结论:葡萄糖酸铬抑制体外高糖培养的心肌细胞凋亡,增高细胞存活率,其机制可能与抑制caspase-3、激活bcl-2表达有关。     

姜黄素对STS诱导大鼠海马神经元损伤影响

目的 探讨姜黄素对星形孢菌素(STS)诱导的大鼠海马神经元损伤的保护作用.方法 运用乳鼠海马神经元原代培养细胞,采用STS诱导建立神经细胞损伤模型,实验设4组,对照组、模型组、姜黄素组(20 μmol/L)和姜黄素预处理组(姜黄素和STS分别为20 μmol/L),镜下观察神经细胞形态学变化;噻唑蓝(MTT)法测定细胞活性,乳酸脱氢酶(LDH)释放率检测细胞毒性,免疫荧光染色法检测活性氧(ROS)水平;western blot检测细胞中active caspase-3、p-AKT蛋白表达.结果 与模型组比较,姜黄素预处理组神经细胞损伤程度明显减轻;姜黄素预处理组细胞活性(0.877±0.016)较模型组(0.625±0.007)升高(t=3.47,P＜0.01),LDH释放量(0.383±0.025)低于模型组(0.582 ±0.051)(t=3.25,P＜0.01);模型组ROS阳性细胞数多于姜黄素预处理组;姜黄素预处理组active caspase-3表达量(0.951±0.089)低于模型组(1.370±0.131)(t=3.64,P＜0.01),p-AKT表达量(1.107±0.025)高于模型组(0.611 ±0.002)(t=5.85,P＜0.01).结论 姜黄素通过抑制细胞ROS释放、下调active caspase-3和上调p-AKT蛋白表达发挥对STS所致大鼠海马神经元损伤的保护作用.     

DEHP与BaP联合诱导Chang liver细胞线粒体介导细胞凋亡作用

目的 研究邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)与苯并(a)芘(BaP)联合染毒对Chang liver细胞的毒性.方法 DEHP(62.5、125、250、500和1000 μmol/L)与BaP(64 μmol/L)单独或联合染毒Chang liver细胞24h,检测细胞活力、细胞内活性氧(ROS)含量、线粒体膜电位(MMP)、细胞凋亡率和Bcl-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)以及半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)蛋白表达量.结果 联合染毒各组细胞存活率均低于DEHP单独染毒组(t =6.22、4.64、6.64、5.84、7.29,P＜0.01),但胞内ROS水平均升高(t=4.57、2.23、2.39、2.22、2.16,P ＜0.05或P＜0.01);≥250μmol/L DEHP与BaP联合染毒组的MMP分别为(80.12±6.41)％、(69.92±5.56)％和(53.76±1.88)％,均低于BaP单独染毒组的(165.93±5.09)％(t=10.92、12.51、14.62,P＜0.01);细胞凋亡率分别为(7.73±1.91)％、(11.00±3.04)％和(14.20±3.96)％,均高于BaP单独染毒组的(1.55±0.21)％(t=3.96、6.06、8.11,P＜0.01);此外,活化caspase-3的高表达和升高的Bax/Bcl-2比值也被检出.结论 较高浓度DEHP与BaP联合染毒Chang liver细胞促发ROS水平升高和线粒体膜电位降低,并导致了细胞凋亡;Bax、Bcl-2和活化caspase-3参与了此调控过程.     

紫杉醇通过mTOR信号通路影响乳腺癌细胞的增殖迁移

目的 探讨紫杉醇通过雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路影响乳腺癌MCF-7细胞的增殖迁移.方法 实验分为4组,分别为对照组,紫杉醇低剂量组(0.25 μmol/L),紫杉醇中剂量组(0.5 μmol/L),紫杉醇高剂量组(1μmol/L).MTT法检测各组MCF-7细胞活力;流式细胞术检测各组MCF-7细胞周期变化;Transwell迁移实验检测各组MCF-7细胞迁移能力;Western blot检测各组mTOR信号通路相关蛋白表达水平.结果 与对照组比较,紫杉醇低、中、高剂量组能显著抑制MCF-7细胞活力(P＜0.05),且在48 h抑制程度最高(P＜0.05),紫杉醇低、中、高剂量组都能使穿过滤膜进入下腔的乳腺癌MCF-7细胞数目显著减少[(98 ±9.78) vs (86.21 ±6.58)、(53.41 ±3.16)及(42.00 ±4.69),P＜0.05];紫杉醇低、中、高剂量组能使G1期的细胞明显增多[(52.14±6.13)％vs (67.93±8.16)％、(72.32±3.67)％及(78.53±6.28)％,P＜0.01],使G2期的细胞明显减少[(13.68±0.85)％vs(8.57±1.03)％、(5.30±0.89)％及(3.46±0.78)％,P＜0.01];紫杉醇低、中、高剂量组中4E结合蛋白1(4EBP1)及mTOR磷酸化水平下降,细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达量也降低(P＜0.01).结论 紫杉醇抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖迁移,与mTOR信号通路有关.     

肿瘤坏死因子α增强肾小球系膜细胞胞内钙释放参与肝肾综合征发病机制

目的 研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)对肾小球系膜细胞(GMCs)胞内钙离子浓度([Ca2+]i)及细胞收缩的影响,证明TNF-α通过1,4,5-三磷酸肌醇受体(IP3Rs)增强GMCs对缩血管物质的易感性是肝肾综合征的重要机制.方法 应用大鼠GMCs株,测量时均选无钙缓冲液及内皮素(ET)刺激.分正常对照ET刺激组(0h组)、TNF-α处理4 hET刺激组(4h组)、TNF-α处理24 hET刺激组(24 h组);另设上述3组于ET前10 min加入IP3Rs阻断剂2-氨基乙氧基联苯硼酸盐(2-APB).应用Fluo-3/AM标记及激光共聚焦显微镜,观察TNF-α预处理后GMCs对ET刺激后[Ca2+]i的变化及2-APB阻断后的变化.同时测量各组GMCs收缩前后表面积的变化以明确收缩幅度.结果 ET刺激可使GMCs在短时间内[Ca2+]i迅速、显著增加,TNF-α4 h、24 h组[Ca2+]i上升幅度尤为明显[4 h:(648.08±267.11) nmol/L;24 h:(879.30±260.29) nmol/L;0 h:(619.93±258.94) nmol/L,F=5.486,4 h vs0 h:P＜0.05;24 h vs0 h:P＜0.05;24 h vs4 h:P＞0.05].2-APB阻断后3组细胞对ET刺激均失去反应,[Ca2+]i无上升.ET刺激可使各组细胞面积缩小;TNF-α 4 h、24 h组上述效应更加明显[4h:(2198 ±340) μm2;24 h:(2260±553)μm2;0 h:(2436 ±474)μm2,F =4.001,4h vs 0 h:P＜0.05;24 h vs0 h:P＜0.05;24 h vs4 h:P＞0.05).结论 TNF-α可增加ET刺激引起的[Ca2+]i上升进而引起细胞收缩,并证明是通过IP3Rs通路产生效应的,这可能是肝肾综合征时肾脏对缩血管物质产生高敏性进而引起肾小球滤过率下降的重要机制.     

高糖、胰岛素诱导胰岛素抵抗大鼠心肌细胞模型的建立

目的 建立胰岛素抵抗大鼠心肌细胞模型.方法 原代培养2～3 dSD大鼠心肌细胞,分为对照组、葡萄糖(G)组、胰岛素(Ins)组、葡萄糖+胰岛素(G+Ins)组.在干预24 h和48 h后评价其胰岛素敏感性.结果 干预48 h后Ins组心肌细胞3H-D-葡萄糖掺入率(12.46±1.11)较对照组(14.06±0.43)显著下降,其差异有统计学意义(P＜0.01);G+Ins组心肌细胞3H-D-葡萄糖掺入率(10.61±1.14)较对照组显著下降,差异有统计学意义(P＜0.01).干预48 h后,Ins组(0.35±0.04)、G+Ins组(0.38±0.04)心肌细胞脂联素mRNA较对照组(0.77±0.08)均显著下降,差异有统计学意义(P ＜0.05,P＜0.01).对照组、G组、Ins组、G+Ins组3H-D-葡萄糖掺入率与心肌细胞脂联素mRNA表达量均呈显著正相关(r=0.92、0.82、0.89、0.86,P＜0.05).结论 应用高胰岛素诱导法、高葡萄糖+高胰岛素共同诱导法均可建立胰岛素抵抗心肌细胞模型;胰岛素抵抗下调心肌细胞脂联素表达水平;胰岛素抵抗心肌细胞脂联素表达水平与胰岛素抵抗呈正相关.     

全氟辛烷磺酸盐通过线粒体途径诱导N9细胞凋亡

目的 以小胶质细胞株(N9)作为靶细胞,观察全氟辛烷磺酸盐(PFOS)通过线粒体途径诱发N9细胞凋亡效应.方法 设定5、10、50、100、200 μmol/L PFOS染毒组及对照组.PFOS染毒24h后流式细胞术分析凋亡细胞率,罗丹明123检测线粒体膜电位,荧光定量PCR检测染毒24h后凋亡相关基因p53、Bax、Bcl-2、caspase-3和caspase-9表达.结果 与对照组(2.24％)比较,50、100、200 μmol/L PFOS组细胞凋亡率(分别为20.81％、33.26％、48.72％)均增加(P＜0.05);PFOS染毒降低了线粒体膜电位,200 μmol/L组细胞出现明显核周小斑点状荧光;此外,随剂量增加,PFOS染毒组p53、Bax、caspase-3和caspase-9基因表达水平呈上升趋势,Bcl-2表达水平呈下降趋势,但未见浓度依赖性.结论 PFOS暴露可破坏神经小胶质细胞自稳态,破坏线粒体,影响凋亡相关基因表达,诱导神经细胞凋亡.     

铁皮石斛对高糖环境下人脐静脉内皮细胞线粒体膜电位的影响

目的研究铁皮石斛多糖对体外高糖环境下人脐静脉内皮细胞线粒体膜电位的影响及其作用机制。方法将常规培养的人脐静脉内皮细胞分为DMEM/低糖培养基组(对照组)、DMEM/高糖培养基组(33.3 mmol/L)(高糖组)、3个不同浓度铁皮石斛多糖高糖组(100、200、400μg/ml)共5组,培养48 h后MTT法检测细胞活力,流式细胞仪检测线粒体膜电位。结果 33.3 mmol/L高糖环境下人脐静脉内皮细胞生长受抑,细胞线粒体膜电位降低,铁皮石斛多糖能剂量依赖性地有效拮抗上述改变,且有统计学意义(P0.05)。结论铁皮石斛多糖可能通过升高高糖环境下的人脐静脉内皮细胞线粒体膜电位,增加高细胞活力,而对其具有较好的保护作用。     

青蒿琥酯联合热疗诱导肺腺癌A549细胞凋亡作用

目的 探讨青蒿琥酯联合热疗诱导肺腺癌A549细胞凋亡的线粒体途径作用机制.方法 150μmol/L青蒿琥酯、青蒿琥酯联合热疗(43℃,1 h)作用A549细胞24 h,流式细胞技术检测细胞周期和凋亡率情况.荧光显微镜观察线粒体膜电位变化.免疫组化、western blot检测细胞色素c、Bcl-2和caspase-3表达,CaspACE<'TM>检测试剂盒检测活性caspase-3表达.结果 青蒿琥酯、青蒿琥酯联合热疗作用A549细胞24 h后,G0/G1期细胞数增多,S期和G2/M期细胞数减少(P<0.01);凋亡率分别是16.77%和28.90%(P<0.01).线粒体膜电位下降率分别为18.05%,50.98%(P<0.01).细胞色素c蛋白、caspase-3表达增加而Bcl-2蛋白表达减少(P<0.01).活性caspase-3蛋白水平增加A值分别为0.2641±0.0027,0.3613±0.0019,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01).结论 青蒿琥酯、青蒿琥酯联合热疗可诱导肺腺癌A549细胞凋亡,激活线粒体途径可能是诱导凋亡重要作用机制.     

内脏脂肪素在冠心病患者中的发病学意义

目的探讨冠心病（CHD）患者血浆内脏脂肪素（visfatin）的变化及其临床意义。方法人选患者400例,冠心病组310例,其中ACS组217例,稳定型心绞痛（SAP）组93例,对照组90例。检测患者血浆内脏脂肪素浓度。并经选择性冠状动脉造影检查,明确冠状动脉病变情况。CHD组中85例患者接受64层螺旋CT冠状动脉成像检查,对冠状动脉内的主要斑块进行评价。结果冠心病组visfatin、LDL、BMI、血糖水平[（128．18-1-13．86）ng／ml,（3．63±1．48）mmol／L,（26．184-1．82）ks／ITI。,（7．25±2．03）mmol／L]明显高于对照组[（75．964-10．27）ng／ml,（2．64±0．53）mmol／L,（23．51±0．89）kg／m。,（5．11±1．53）mmol／L,P〈0．05],ACS组visfatin水平[（145．57±19．95）ng／m1]明显高于SAP组[（110．79±7．78）ns／ml,P〈0．05]。随冠状动脉病变类型复杂程度和冠状动脉病变程度的加重,visfatin浓度逐渐升高（P〈0．05）;CHD患者的软斑块组、纤维斑块组较钙化斑块组血浆内脏脂肪素浓度明显升高,其差异有统计学意义（P〈0．05）;HDL—C与冠脉病变Gensini评分呈负相关（r=-0．055,P〈0．05）,LDL—C、GLu、visfatin与冠脉病变Gensini评分呈正相关（r=0．464,0．279,0．531,P〈0．05）。结论冠心病患者血浆visfatin水平增高,其影响脂质代谢,可能是促进动脉粥样硬化发生、发展的重要炎症因子,结合64层螺旋CT检查,对判断冠脉病变情况及斑块稳定性具有一定的价值。     

神经生长因子诱导肝星状细胞凋亡及其相关机制的研究

目的观察神经生长因子（nerve growthfactor,NGF）对大鼠肝星状细胞（hepatic stellatecell,HSC）凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法体外培养大鼠肝星状细胞株HSC—T6,将HSC—T6与100ng／mlNGF孵育24h后,流式细胞术检测细胞凋亡;细胞免疫化学法检测HSC中凋亡相关基因P^53、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的情况;免疫荧光法检测NGF、神经生长因子低亲和力受体p75NTR表达的情况。结果NGF作用HSC后凋亡率较对照组明显增高[（22．364±9．51）％VS（5．88±1．36）％,P〈0．05]。凋亡相关蛋白P^53、Caspase-3的阳性细胞百分率与对照组比较明显增高[（78．41±4．00）％、（39．26±1．57）％VS（34．96±3．84）％、（9．27±1．01）％,P〈0．05],而Bcl-2表达实验组阳性细胞百分率较对照组降低[（18．12±1．38）％vs（91．53±2．98）％,P〈0．05]。NGF作用HSC后NGF表达增多（6．53±1．40vs1．77±0．17,P〈0．05）,而p75NTR表达无明显变化（3．52±0．36VS4．24±0．38,P〉0．05）。结论NGF可能通过使凋亡相关基因p、Caspase-3表达上调、Bcl-2表达下调,而诱导HSC凋亡。NGF作用HSC后可作为始动因子和效应因子增加NGF的表达,而对p75NTR表达无影响。     

芪参复康胶囊、氟西汀对首发抑郁症患者事件相关电位的影响

目的评价芪参复康胶囊、氟西汀对首发抑郁症患者认知功能的影响。方法将本院63例首发抑郁症患者按随机数字表法分2组,中药组（31例）给予芪参复康胶囊0．2-0．6g口服,3次／d,西药组（32例）给予用氟西汀胶囊（江苏常州制药有限公司生产）20-40（20±5）mg／d,每日晨口服,可酌情短期合用小剂量苯二氮卓类药,不合用其他抗抑郁药。两组患者于治疗前、治疗后6周进行17项HAMD评定及行P300检查,32名健康志愿者（对照组）行P300检查。分析两组患者治疗前后对认知功能的影响。结果（1）两组治疗前HAMD评分比较差异无统计学意义[（29．1±5．1）分vs（29．0±4．5）分,P〉0．05],治疗后中药组HAMD评分低于西药组[（10．1±3．2）分vs（12．3±3．4）分,P〈0．05],HAMD减分率显著高于西药组[（65．6±2．1）％vs（57．9±3．2）％,P〈0．05]。（2）两组治疗前Cz点潜伏期及波幅与对照组比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。两组治疗后较治疗前的P2、N2、P3的潜伏期均显著缩短[P2（152．8±54．1）ms vs（208．9±57．6）ms,（174．5±63．2）ms vs（207．3±55．8）ms;N2（208．7±57．9）ms vs（273．4±62．0）ms,（239．2±59．2）ms vs（275．6±60．8）ms;P3（319．1±60．2）ms vs（396．3±66．3）n18,（315．6±61．1）ms vs（394．7±55．6）ms,P均〈0．05],波幅均显著升高[P2（7．8±1．7）μV vs（3．3±1．2）μV,（7．0±1．4）μV vs（3．4±1．4）μV;N2（3．6±1．4）μV vs（1．0±0．7）μV,（2．4±1,3）μV vs（1．2±1．0）μV;P3（9．6±2．2）μV vs（4．5±1．0）μV,（7．5±2．2）μV vs（4．6±1．2）μV,P均〈0．05];治疗后,与中药组相比,西药组P2、N2的潜伏期延迟（P〈0．05）,P3的潜伏期与中药组相近（P〉0．05）,N2、P3的波幅偏砥（P〈0．05）,P2的波幅值与中药组相近（P〉0．05）。（3）与对照组相比,治疗前中药组、西药组P2、N2、P3的潜伏期均显著延迟,波幅都显著降低（P〈0．05）;治疗后中药组P2、N2、P3的潜伏期值及P2、N2、P3的波幅值与对照组相近（P〉0．05）。西药组P2、N2的潜伏期显著延迟（P〈0．05）,P3的潜伏期值与对照组相近（P〉0．05）,P2、N2、P3的波幅显著偏低（P〈0．05）。结论芪参复康胶囊芪、氟西汀治疗可改善首发抑郁症认知功能,而芪参复康胶囊提高患者信息加工的前期准备效率优于西药氟西汀。     

Ⅰ号冻存液改善小鼠肝细胞冻存质量研究 FREE

目的对自行配制组方的Ⅰ号冻存液冻存小鼠肝细胞进行研究,探索一种效果较好的冻存液以改善冻存肝细胞质量。方法以体重20～30 g的昆明小鼠为肝细胞供体,用改良的胶原酶灌注法分离肝细胞。将分离好的肝细胞分别以Ⅰ号冻存液（实验组）和标准冻存液（对照组）进行逐级降温缓慢冻存,置液氮中。于0.5、1、1.5、2个月快速复苏肝细胞,观察并测定细胞活率、功能和形态学。结果冻存小鼠肝细胞2个月后复苏检测,实验组的肝细胞活率台盼蓝（TB）染色为（80.18±2.44）%,对照组肝细胞活率TB染色为（49.71±3.51）%,两组差异有显著性（t=23.64,P＜0.05）;血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天门冬氨酸转氨酶（AST）和乳酸脱氢酶(LDH)漏出率的值,实验组分别为（14.03±2.21）U/L、（15.14±3.03）U/L、（15.11±2.10）U/L,而对照组分别为（24.28±1.96）U/L、（25.44±2.06）U/L、（26.22±3.23）U/L,两两比较,差异均有显著性（t分别为8.84、8.58、8.32,均P＜0.05）;合成清蛋白的值,实验组为（3.24±0.18）g/L,对照组为（2.56±0.33）g/L,两组差异有显著性（t=9.25,P＜0.05）。同一组各个复苏时段,实验组与对照组的肝细胞活率,肝细胞ALT、AST、LDH的漏出率,合成清蛋白的能力之间无差别（均P＞0.05）。结论在本研究中,冻存小鼠肝细胞2个月,Ⅰ号冻存液较常规冻存液能有效减轻小鼠肝细胞的损伤,发挥良好保护作用。小鼠肝细胞在Ⅰ号冻存液的保护下,置液氮中保存2个月,不影响肝细胞活性。     

HTK液与含血停搏液对瓣膜置换术中心肌保护的研究

目的比较HTK液和含血停搏液在风湿性心脏病患者瓣膜置换术中的心肌保护效果。方法42例风湿性心脏病联合瓣膜病的患者分为对照组（应用4：1冷含血停搏液）和实验组（应用HTK液）。测定麻醉诱导前、术后6、12、24h的心排量（CO）和心脏指数（CI）,并比较两组患者主动脉阻断时间、主动脉开放到心脏复跳时间、辅助循环时间、心脏自动复跳率、心律失常、起搏器应用、多巴胺平均最大剂量、呼吸机支持时间等临床指标。结果实验组患者术后12h和24h监测点心排量和心指数均高于对照组[12h：（4．82±0．18）IMminvs（3．50±0．32）L／min,（3．80±0．48）I／（min·m^2）vs（2．79±0．39）I／（min·m^2）;24h：（4．97±0．45）L／minV8（3．81±0．19）L／min,（4．22±0．17）L／（min·m^2）vs（2．91±0．21）L／（min·m^2）,P〈0．05];主动脉阻断时间、主动脉开放到心脏复跳时间、辅助循环时间,多巴胺最大剂量、呼吸机支持时间均低于对照组[（53．6±24．3）min vs（68．9±26．1）min;（1．8±1．3）min vs（2．3±1．2）min;（33±11）min vs（42±13）min;（10．2±2．1）μg／（kg·min）vs（15．7±3．8）μg／（kg·min）;（14．6±4．8）hV8（20．7±5．1）h,P〈0．05],心脏自动复跳率高于对照组（90％ vs 67％,P〈0．05）,术后出现心律失常、低心排和使用临时心脏起搏器的患者数在实验组中明显减少。结论HTK心脏停搏液对风湿性心脏病患者瓣膜置换术中心肌的保护作用优于1：4含血停搏液。     

热休克蛋白70抑制大鼠脓毒症血清诱导的心肌细胞凋亡及其信号转导通路的研究

目的初步探讨热休克蛋白70（heat shock protein 70,HSP70）抑制脓毒症血清所致心肌细胞凋亡及其机制。方法将原代培养心肌细胞分组：正常对照组、正常大鼠血清组、脓毒症血清组、转空载体对照组和转HSP70基因组,转HSP70基因组以重组质粒pcDNA3．1-HSP70转染后36h后验证基因和蛋白表达;各组以相应血清混合培养2h;分别行Hoechst33258染色后计数以及DNA“梯状”条带检测心肌细胞凋亡,再应用Western—blot分析HSP70过表达对Caspase-3,8,9活化和Bid裂解的影响情况。结果处理后12、24、36h凋亡率,转HSP70基因组心肌细胞为（12．48±2．39）％、（23．96±3．12）％、（25．40±3．96）％,明显低于脓毒症血清组[（28．66±2．24）％、（55．76±5．69）％、（46．89±8．74）％,t=5．851、5．932、6．027,P〈0．01],亦明显低于转空载体组[（34．25±3．42）％、（50．71±6．38）％、（47．62±5．74）％,t=5．876、5．903、6．122,P〈0．01],但明显高于正常对照组和正常血清组（3．13％-6．75％,t=6．324、6．578、6．137、5．987、6．032、6．871,P〈0．01）;在Caspase-3、8、9活化表达中,P11、P20和P10条带比值,转HSP70基因组分别为（12．5276±2．1247、9．3481±4．5423、16．1349±6．0641）,低于脓毒症血清组（27．13244-2．1564、25．5643±4．3018、36．5647±6．7135,t=5．856、5．902、5．891,P〈0．01）,低于转空载体组（28．0314±2．0367、25．6413±4．1356、34．5648±5．9473,t=3．861、3．933、4．281,P〈0．05）,高于正常对照组（8．0324±1．5234、5．1246±1．3274、2．0314±0．6423,￡=3．286、3．867、4．031,P〈0．05）和正常血清组（8．5649±1．2136、6．0324±1．0214、3．2146±0．1325,t=5．898、5．969、6．879,P〈0．01）;tBid条带比值,转HSPT0基因组（12．0316±2．3641）低于脓毒症血清组（27．0536±5．3214,t=3．274,P〈0．05）和转空载体组（27．1034±3．6741,t=3．301,P〈0．05）,但高于正常对照组（6．0347±2．1304,t=5．924,P〈0．01）和正常血清组（7．3121±1．3021,t=5．871,P〈0．01）。结论HSPT0通过干预死亡受体通路和线粒体通路而抑制脓毒症血清所致的细胞凋亡。     

老年2型糖尿病合并骨质疏松症患者发病韵相关因素分析

目的探讨老年2型糖尿病合并骨质疏松症患者发病的相关危险因素。方法对本院106例老年2型糖尿病合并骨质疏松症患者的年龄、体重指数（BMI）、糖尿病病程与其骨密度（BMD）进行相关因素分析。结果老年2型糖尿病合并骨质疏松症患者中,80岁组的腰椎[（0．756±0．099）g／cm^2]、股骨颈[（0．658±0．111）g／cm^2]及Wards三角[（0．525±0．064）g／cm^2]BMD值较60岁组[（0．883±0．112）g／cm^2、（0．781±0．130）g／cm^2、（0．6274±0．118）g／cm^2]明显下降（P〈0．05）。低体重组（BMI≤20kg／m^2）的腰椎[（0．738±O．114）g／cm^2）]、股骨颈[（0．664±O．112）g／cm^2）]BMD值较正常体重组[（0．816±0．138）g／cm^2、（0．727±0．134）g／cm^2]明显下降（P〈0．05）。糖尿病病程〉10年组的腰椎[（0．743±O．122）g／cm^2]、股骨颈[（0．719±0．147）g／cm^2]BMD值较病程〈5年组[（0．886±0．132）g／cm^2、（0．792±0．122）g／cm^2]明显下降（P〈0．05）。骨密度与年龄、糖尿病病程呈负相关（P〈0．05）,与体重指数呈正相关（P〈0．05）。结论老年2型糖尿病合并骨质疏松症患者发病与高龄、低体重指数、糖尿病病程长的危险因素密切相关。     

乙醇诱导人脐静脉内皮细胞损伤及ADMA/NOS/NO信号机制

目的探讨乙醇诱导人脐静脉内皮细胞损伤效应及ADMA/NOS/NO信号机制。方法用不同浓度的乙醇与人脐静脉内皮细胞共培养,观察细胞形态和活性,通过检测细胞上清液丙二醛（MDA）、非对称性二甲基精氨酸（AD-MA）、一氧化氮（NO）的含量和一氧化氮合酶（NOS）的活性等指标,观察乙醇对人脐静脉内皮细胞损伤的量-效关系（乙醇处理细胞24 h）和时-效关系（终浓度为100 mmol/L的乙醇分别于处理0、3、6、12、24、48 h后观察检测指标）。实验分为正常对照组（加入与处理组等体积的D-Hank’s液,乙醇浓度为0 mmol/L）、乙醇处理组（终浓度分别为25、50、100、200mmol/L的乙醇）、乙醇＆VitC组（乙醇终浓度为100 mmol/L,VitC终浓度为100 mg/L）和阳性对照组（终浓度为500μmol/L的过氧化氢）。结果50-200 mmol/L乙醇能显著改变细胞形态、降低细胞活性（OD值：0.91±0.10-0.58±0.04,细胞生长抑制率：0.00±0.00-35.57±3.13,P〈0.01）;能显著性诱导内皮细胞MDA升高（258.72±7.36-524.07±8.25,P〈0.01）。50-200 mmol/L的乙醇还能显著性诱导：内皮型一氧化氮合酶（eNOS）活性下降（6.27±0.10-0.47±0.23,P〈0.05）及总NOS活性下降（10.69±0.54-3.77±0.32,P〈0.05）;NO含量降低（191.61±7.96-88.38±5.07,P〈0.05）。而且上述生物学效应均具有显著的时间依赖性,各处理组间两两比较也具有显著性（P〈0.05或P〈0.01）。100 mmol/L乙醇处理时细胞诱导型一氧化氮合酶（iNOS）活性及ADMA含量最高,且分别在处理后24 h到达最高峰。VitC均能扭转上述生物学效应,且具有显著性（P〈0.01）。结论50-200 mmol/L的乙醇能显著诱导人脐静脉内皮细胞损伤;ADMA在乙醇诱导人脐静脉内皮细胞损伤中有着重要作用。     

雷公藤内酯醇诱导PC3细胞凋亡的机制研究

目的观察雷公藤内酯醇（triptolide,TPL）对去势后抵抗性前列腺癌（Castration—Resistant Prostate Cancer,CRPC）PC3细胞的生长增殖抑制作用,对其诱导凋亡相关基因进行分析。方法MTY比色法观察TPL对PC3细胞的生长增殖抑制作用;Annexin—V／PI标记分析细胞凋亡;RT-PCR方法检测0、6、12、24h BCL-2、BAX、PIG3、P21、FAS、CASPASE3等与凋亡相关基因表达变化。结果什L抑制PC3细胞生长呈时间和剂量依赖性,24h和48h半数抑制浓度分别为18．3ng／ml和13．5ng／ml,与24h组相比,48h组低浓度（5ng／ml,t=1．47,P〉0．05）和高浓度（160ng／ml,t=0．91,P〉0．05）差异无统计学意义。而10ng／ml（t=3．26,P〈0．05）、20ng／ml（t=4．21,P〈0．05）、40．g／ml（t=4．09,P〈0．05）、80ng／ml（t=2．91,P〈0．05）差异有统计学意义。Annexin-v／PI检测经18．3ng／ml,I’PL处理后的PC3细胞凋亡随着作用时间的延长而增多,相对于对照组,6、12、24h组Anexin—V阳性／PI阴性表达率分别为（5．42±2．21）％（t=3．52,P〈0．05）、（13．51±3．37）％（t=6．53,P〈0．01）、（29．3±4．53）％（t=8．74,P〈0．01）差异有统计学意义,并且各组间差异有统计学意义（P〈0．05）;RT—PCR显示经18．3ng／ml TPL处理后,BAX、HG3表达递增,P21、BCL-2表达递降,FAS、CASPASE3表达无明显改变。结论TPL可以抑制PC3生长增殖并诱导细胞凋亡,而在凋亡的过程中,BAX、BCL-2、PIG3、P21等基因的改变可能扮演着重要的角色。     

莱菔硫烷对人小细胞肺癌NCI—H446细胞增殖、侵袭以及MMP-9活性的影响

目的探讨莱菔硫烷（sulforaphane,SFN）对人小细胞肺癌NCI—H446细胞增殖、侵袭以及基质金属蛋白酶-9（matrixmetalloproteinase-9,MMP-9）活性的影响。方法体外培养NCI—H446细胞,用0、25、50、100txmol／LSFN处理24～72h后,MTT法检测细胞的增殖情况;小室侵袭实验分析细胞的侵袭力改变,明胶酶谱实验检测MMP-9的酶活性变化。结果经25、50、100Ixmol／LSFN处理24～72h后,NCI．H446生长均能受到不同程度抑制。其中72h后,25、50、100μmol／LSFN组NCI．H446细胞的抑制率分别为（11．1±2．26）％,（25．2±3．24）％和（44．6±4．2）％,与溶剂对照组相比差异具有统计学意义（t=10．685,8．417,5．264,P〈0．05）。25、50、100μmol／LSFN作用NCI—H446细胞24h后,NCI—H446细胞穿膜数分别为（48．6±1．84）％,（35．4±2．22）％和（27．8±1．36）％,与溶剂对照组[（68．4±2．21）％]相比差异具有统计学意义（t=6．341,5．562,4．925,P〈0．05）。明胶酶谱实验显示,25、50、100ixmol／LSFN处理后,MMP-9活性的灰度值分别为764±18．4,685±14．74和638±21．54,与对照组相比（822±12．53）,差异有统计学意义（t=4．971,7．582,11．235,P〈0．05）。结论SFN对肺癌NCI—H446细胞生长、侵袭力及MMP-9的活性具有抑制作用。