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1.
目的研究上皮性卵巢癌转移相关nm23-H2基因功能及其调控网络,为最终揭示卵巢癌侵袭转移分子机制和晚期卵巢癌基因治疗提供理论依据。方法将nm23-H2重组质粒pCDNA3/nm23-H2转染人卵巢癌细胞系SKOV3.ip1,经G418抗性筛选及RT-PCR鉴定得到稳定转染阳性克隆H2-18,设计体外黏附实验及人工基底膜侵袭实验比较转染前后细胞黏附侵袭特性的改变。应用2 747点人类肿瘤相关Oligo芯片检测转染前后细胞基因表达的改变,寻找与nm23-H2相关下游调控肿瘤相关基因,并探讨其调节网络。结果用重组质粒pCDNA3/nm23-H2转染SKOV3.ip1细胞。转染前后细胞在体外的增殖能力没有显著变化,转染后细胞的黏附与侵袭基底膜能力明显降低。经人类肿瘤相关Oligo芯片检测转染前后细胞发现55个二倍差异表达基因,在上调基因中以转录调节、信号转导、分化发育及细胞凋亡类基因为多;下调基因中以信号传导及黏附运动功能类基因为主。结论nm23-H2基因具有抑制卵巢癌侵袭转移的作用,并且这一作用的实现是通过对一系列下游肿瘤相关基因的调控来完成的。基因芯片技术结合普通分子生物学技术是后基因组时代肿瘤相关基因功能研究及探索基因调控网络的有效手段。 相似文献
2.
目的:探讨卵巢癌转移的相关机制,检测有不同侵袭力卵巢癌细胞的miR-NA差异表达谱。方法:应用包含924条成熟miRNA探针的哺乳动物miRNA芯片V3.0杂交检测具有不同侵袭力的人卵巢乳头状腺癌SKOV3.ip1细胞与其母系SKOV3细胞miRNA表达谱的差异,并与cDNA芯片基因检测结果进行比对分析。结果:miRNA芯片检测到39个2倍以上差异表达miRNA,对比SKOV3细胞,SKOV3.ip1细胞中有11个miRNA表达上调和28个miRNA表达下调,其中包括了hsa-miR-200a/b、-10b、-34a、-224、-148a等已知与侵袭转移相关的重要miRNA。比对cDNA芯片检测结果,提供了IG-FBP1、VEGFB、NME1等重要侵袭相关基因可能调控miRNA的机制。结论:卵巢癌侵袭转移过程中,多个miRNA参与其中,担当重要的调控作用。miRNA有望成为卵巢癌转移的标记物和治疗的靶点。 相似文献
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应用功能分类基因芯片筛选卵巢癌淋巴结定向高转移细胞系中差异性表达基因 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:在裸鼠体内建立以人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞系SKOV3具有淋巴结定向高转移亚克隆第二代SKOV3-pm2、第三代SKOV3-pm3细胞系,应用基因芯片技术比较这3种具有不同淋巴结定向转移能力的细胞亚系中基因表达谱的差异,寻找卵巢癌侵袭转移相关基因.方法:采用Trizol一步法抽提SKOV3、SKOV3-pm2、SKOV3-pm3 3种细胞总RNA;取等量RNA逆转录合成cDNA用Ampolabeling-LPR(linear polymerase reaction,线性聚合酶反应)法标记的cDNA链做探针,混合后与功能分类基因芯片[Oligo Tumor Metastasis Microarray Catalog No.OHS-028(人)]杂交,计算机分析后比较3种细胞中差异性表达基因,并应用RT-PCR技术对其中3个表达差异明显的基因进行验证.结果:共筛选出表达差异性基因60个,其中表达上调基因47个(ratio>3),有21个基因在SKOV3-pm2、SKOV3-pin3中共同表达上调;表达下调基因13个(ratio<0.5),有1个基因在SKOV3-pm2、SKOV3-pm3细胞中共同表达下调.结论:基因表达芯片检测与肿瘤淋巴体外转移模型相结合,为肿瘤转移研究提供了新方法、新思路. 相似文献
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与ezrin基因表达相关的微小RNA的筛选及在卵巢上皮性癌浸润转移中的作用 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 筛选卵巢上皮性癌(卵巢癌)细胞中与ezrin基因表达相关的微小RNA(miRNA),并分析其在卵巢癌浸润转移中的作用.方法 (1)实时逆转录(RT)PCR技术和蛋白印迹法分别检测两对具有不同侵袭转移能力的卵巢癌细胞系SKOV3和SKOV3ip细胞、HO-8910和HO-8910PM细胞中ezrin mRNA和蛋白的表达差异,选取其中ezrin mRNA和蛋白表达差异相对较大的1对细胞系(即SKOV3和SKOV3ip细胞)用于以下实验.(2)用miRNA芯片筛选SKOV3和SKOV3ip细胞中差异表达miRNA,然后用生物信息学工具[三大数据库,即TARGETSCAN(http://www.targetscan.org)、MICROCOSM(http://www.ebi.ac.uk/enright-srv/microcosm/htdocs/targets/v5/)和PICTAR(http://www.pictar.mdc-berlin.de)数据库]预测并比对miRNA芯片的筛选结果,筛选出与ezrin基因表达相关的miRNA,并采用实时RT-PCR技术验证.将筛选出来的miRNA转染SKOV3ip细胞,用蛋白印迹法和实时RT-PCR技术检测其对SKOV3ip细胞中ezrin mRNA和蛋白表达的调控作用,以未做任何处理者为空白对照.结果 (1)SKOV3ip细胞中ezrin mRNA的表达水平是SKOV3细胞的(81.74±5.34)倍,HO-8910PM细胞中ezrin mRNA的表达水平是HO-8910细胞的(2.61±0.14)倍,两者分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01);蛋白印迹法检测显示,SKOV3ip细胞中ezrin蛋白的表达强度明显高于SKOV3细胞,HO-8910PM细胞中ezrin蛋白的表达强度明显高于HO-8910细胞.选取其中ezrin mRNA和蛋白表达差异相对较大的1对细胞系,即SKOV3和SKOV3ip细胞用于以下实验.(2)将miRNA芯片筛选结果与生物信息学工具预测结果对比分析,筛选出两个可能调控ezrin基因表达的特异miRNA,即miR-183和miR-22;实时RT-PCR技术检测显示,miR-183和miR-22在SKOV3和SKOV3ip细胞中的表达差异,与miRNA芯片筛选结果一致,SKOV3细胞中miR-183和miR-22的表达水平分别是SKOV3ip细胞的(5.84±0.66)和(6.67±0.67)倍,两者分别比较,差异均有统计学意义(P<0.01).miRNA转染SKOV3ip细胞后,其ezrin mRNA的表达水平是空白对照的(1.03±0.10)倍,两者比较,差异无统计学意义(P>0.05);而ezrin蛋白的表达强度则明显低于空白对照.结论 侵袭力强的卵巢癌细胞中ezrin mRNA和蛋白均高表达,与ezrin基因表达相关的miRNA--miR-183和miR-22的过度表达均能有效调节侵袭转移相关基因ezrin蛋白的表达水平,它们可能具有ezrin基因介导的抑制卵巢癌细胞浸润转移的潜在功能. 相似文献
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β_1-整合素与纤维粘连蛋白联合促进卵巢癌细胞侵袭转移 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:探讨β1-整合素及纤维粘连蛋白对卵巢癌细胞粘附侵袭能力的影响和作用机制。方法:流式细胞仪间接免疫荧光染色检测人卵巢癌SKOV3-S1细胞β1-整合素表达。用人工基底膜粘附实验和体外侵袭实验观察经β1-整合素抗体处理的SKOV3-S1细胞粘附侵袭能力的变化。逆转录PCR检测β1-整合素处理及与纤维粘连蛋白结合后SKOV3-S1细胞基质金属蛋白酶基因表达的变化,同时用酶谱法分析细胞上清MMPs活性变化。结果:SKOV3细胞高侵袭克隆SKOV3-S1均表达β1-整合素,β1-整合素抗体对其粘附及侵袭人工基底膜能力的抑制率分别为69·8%和65·7%。纤维粘连蛋白能诱导癌细胞MMP2基因表达并分泌蛋白酶,β1-整合素抗体能减弱这种诱导作用。结论:β1-整合素与纤粘维连蛋白结合能诱导卵巢癌细胞粘附并表达MMP2基因,分泌蛋白酶降解ECM,从而促进肿瘤侵袭转移。 相似文献
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目的:检测mi R-199a在上皮性卵巢癌组织中的表达水平以及在卵巢癌中参与的功能,初步探讨mi R-199a在卵巢癌发生、发展中的作用和机制。方法:通过实时定量逆转录聚合酶链反应(q RT-PCR)检测上皮性卵巢癌20例、良性上皮性卵巢肿瘤组织15例以及正常卵巢上皮细胞IOSE和1组具有不同侵袭能力的卵巢癌细胞株中mi R-199a的表达;构建mi R-199a的逆转录病毒质粒p MSCVpuro-mi R-199a并筛选稳定过表达mi R-199a的SKOV3细胞株;分别用CCK8和Transwell小室法检测过表达mi R-199a的SKOV3细胞在增殖、侵袭及迁移方面的改变。结果:mi R-199a在卵巢癌组的表达低于良性卵巢肿瘤组(P=0.001),mi R-199a在卵巢癌细胞中的表达低于正常卵巢上皮细胞IOSE(P<0.05),且在SKOV3中表达最低(P<0.01);与转染空载质粒SKOV3细胞相比,稳定转染p MSCVpuro-mi R-199a质粒的SKOV3细胞增殖、侵袭和迁移力均降低(P<0.000 1)。结论:mi R-199a在卵巢癌组织中表达降低,并在卵巢癌细胞增殖、侵袭及迁移过程中起抑癌基因的作用。 相似文献
7.
目的探讨卵巢癌组织及细胞株细胞间粘附分子1(ICAM1)的表达及其意义,探讨ICAM1对卵巢癌细胞粘附侵袭能力的影响。方法分别用免疫组化方法及流式细胞术检测卵巢上皮性肿瘤组织及卵巢癌细胞ICAM1表达,通过MTT法细胞粘附实验和Boyden小室法体外侵袭实验检测ICAM1在卵巢癌细胞粘附侵袭过程中的作用。结果上皮性卵巢癌组织ICAM1阳性表达率71.8%(28/39)明显高于良性肿瘤组织40%(8/20)。SKOV3细胞高侵袭克隆SKOV3S1ICAM1荧光强度高于低侵袭细胞克隆SKOV3-S21。ICAM1抗体对SKOV3S1细胞粘附及侵袭人工基底膜能力的抑制率分别为41.9%和55.0%。结论ICAM1在上皮性卵巢癌侵袭转移过程中起重要作用。 相似文献
8.
目的:分析人卵巢癌SKOV3/TPT多药耐药的分子机制,寻找可能参与拓扑替康(TPT)耐药机制的新基因。方法:采用大剂量间歇诱导法,对SKOV3细胞株用TPT反复冲击诱导培养,获得稳定的SKOV3/TPT;利用Affymetrix U133A基因表达谱芯片,比较SKOV3及SKOV3/TPT细胞的基因表达;从中选择高表达的MRP3基因进行RT-PCR验证。再将MRP3反义及正义寡核苷酸片段分别用脂质体转染进耐药细胞,用MTT法、流式细胞仪及半定量RT-PCR检测体外转染后细胞内TPT的荧光强度、耐药指数及MRP3 mRNA表达的改变。结果:基因芯片检测发现,有7个差异表达基因可能参与了SKOV3/TPT细胞的耐药,其中4个基因被上调,3个基因被下调,MRP3为上调最明显的基因。MRP3反义寡核苷酸转染SKOV3/TPT细胞后,可明显降低细胞内TPT的浓度及耐药指数(P<0.05),细胞内MRP3 mRNA的表达较未转染细胞下降了60.16%(P<0.05)。结论:SKOV3/TPT细胞耐药表型的形成涉及多个基因表达的改变。MRP3的高表达导致细胞内药物浓度降低,可能是卵巢癌细胞对TPT耐药的主要原因。 相似文献
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目的:探讨IL-2基因转导能否改变卵巢癌细胞对化疗药物的敏感性。方法:用MTT法测定导入人IL-2基因的卵巢癌细胞对化学治疗药物顺铂、阿霉素、泰素及足叶乙甙治疗的敏感性及IC_50,以导入新霉素基因的卵巢癌细胞系及野生型卵巢癌细胞系为对照。结果:IL-2基因转移使SKOV3细胞对上述化疗药物治疗的敏感性有所提高,但仅对VP-16治疗敏感性的提高差异有显著性(P<0.05)。结论:IL-2基因导入SKOV3细胞没有降低其对实验药物治疗的敏感性。 相似文献
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RNA干扰技术抑制卵巢癌细胞系SKOV3.ip1细胞内Her-2/neu基因表达的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨卵巢癌细胞株SKOV3.ip1细胞转染表达短发卡状RNA(shRNA)的质粒后,SKOV3.ip1细胞中Her-2/neu基因表达的变化,和对SKOV3.ip1细胞凋亡的影响。方法 将针对Her-2/neu基因的shRNA表达载体转染SKOV3.ip1细胞,从mRNA水平、蛋白表达水平和细胞凋亡的变化三个方面评价shRNA表达载体对Her-2/neu基因表达的抑制作用。结果shRNA表达载体可以有效的抑制SKOV3.ip1细胞Her-2/neu基因的表达,使Her-2/neu基因的mRNA和蛋白表达量明显下降,细胞凋亡增多。结论靶向Her-2/neu的shRNA表达载体可以有效抑制Her-2/neu基因的表达。 相似文献
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目的筛选卵巢上皮性癌(卵巢癌)淋巴道定向高转移恶性肿瘤细胞亚群,并对其生物学特性进行鉴定。方法将卵巢癌细胞株SKOV3细胞接种于裸鼠爪垫皮下,待植入细胞在裸鼠体内成瘤并发生转移时,取其淋巴结转移灶中癌细胞再次接种于裸鼠爪垫皮下传代,每代均取出淋巴结转移灶中癌细胞进行培养,通过单细胞分离(克隆)培养或局部淋巴结转移灶筛选的方法建立连续传代细胞系,重复传3代后,通过裸鼠接种实验观察各代裸鼠的淋巴结转移率。利用细胞生长曲线、HE染色、染色体分析、流式细胞分析、裸鼠接种、免疫组化等方法鉴定各代细胞的生物学特性。结果所建立的连续传代1~3代的细胞系,分别命名为SKOV3-PM1、SKOV3-PM2和SKOV3-PM3细胞,癌细胞在裸鼠体内传3代后,裸鼠的淋巴结转移率为100%(10/10),原代SKOV3细胞的淋巴结转移率为10%(1/10),两者比较,差异有统计学意义(P〈0.05);SKOV3-PM3细胞形成的淋巴结转移灶的数目(26/10)较SKOV3细胞多(1/10,P〈0.01);且转移灶多位于淋巴结。细胞染色体分析显示,SKOV3细胞染色体数目大多数分布在83~89条,SKOV3-PM3细胞染色体数目大多数分布在91~105条。SKOV3与SKOV3-PM3细胞染色体数目比较,差异有统计学意义(P〈0.05);转移灶中上皮膜抗原(EMA)表达呈阳性,证实转移细胞株保持着卵巢癌细胞的生物学特性;SKOV3-PM3细胞倍增时间为22.7h,SKOV3细胞为49.6h,两者比较,差异有统计学意义(P〈0.05)。流式细胞分析显示,SKOV3-PMl、SKOV3-PM2、SKOV3-PM3细胞的淋巴结转移灶中癌细胞的DNA合成期和分裂期细胞的比例分别为24.2%、29,4%和36.7%,明显高于SKOV3细胞的21.5%(P〈0.05)。结论本研究成功建立了卵巢癌淋巴道定向高转移细胞系,为研究卵巢癌的淋巴结浸润转移的发病机制提供了良好的实验材料。 相似文献
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肿瘤转移抑制基因kai1对卵巢癌细胞增殖及侵袭能力的影响 总被引:6,自引:0,他引:6
目的 :探讨肿瘤转移抑制基因kai1对卵巢癌细胞增殖及侵袭能力的影响。方法 :脂质体介导kai1cDNA转染高转移性人卵巢癌细胞系HO 891 0PM ,免疫细胞化学S P法检测转染前后细胞内kai1蛋白的表达。用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)比色法、平板克隆形成实验观察kai1基因对细胞增殖能力的影响 ,经细胞粘附实验、体外侵袭力实验比较转染前后细胞侵袭能力的变化。结果 :转染kai1cDNA后HO 891 0PM细胞内可检测到kai1蛋白的稳定表达 ,细胞增殖能力较前无明显变化 ,侵袭能力明显下降。结论 :外源性肿瘤转移抑制基因kai1可通过脂质体有效转染高转移性人卵巢癌细胞系HO 891 0PM ,降低其侵袭能力 ,有望成为卵巢癌基因治疗的新的候选基因 相似文献
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Identification of genes associated with ovarian cancer metastasis using microarray expression analysis 总被引:1,自引:0,他引:1
J.M. LANCASTER H.K. DRESSMAN†‡ J.P. CLARKE§ R.A. SAYER M.A. MARTINO J.M. CRAGUN A.H. HENRIOTT J. GRAY¶ R. SUTPHEN A. ELAHI R.S. WHITAKER M. WEST# J.R. MARKS J.R. NEVINS†‡ & A. BERCHUCK 《International journal of gynecological cancer》2006,16(5):1733-1745
Although the transition from early- to advanced-stage ovarian cancer is a critical determinant of survival, little is known about the molecular underpinnings of ovarian metastasis. We hypothesize that microarray analysis of global gene expression patterns in primary ovarian cancer and metastatic omental implants can identify genes that underlie the metastatic process in epithelial ovarian cancer. We utilized Affymetrix U95Av2 microarrays to characterize the molecular alterations that underlie omental metastasis from 47 epithelial ovarian cancer samples collected from multiple sites in 20 patients undergoing primary surgical cytoreduction for advanced-stage (IIIC/IV) serous ovarian cancer. Fifty-six genes demonstrated differential expression between ovarian and omental samples (P < 0.01), and twenty of these 56 differentially expressed genes have previously been implicated in metastasis, cell motility, or cytoskeletal function. Ten of the 56 genes are involved in p53 gene pathways. A Bayesian statistical tree analysis was used to identify a 27-gene expression pattern that could accurately predict the site of tumor (ovary versus omentum). This predictive model was evaluated using an external data set. Nine of the 27 predictive genes have previously been shown to be involved in oncogenesis and/or metastasis, and 10/27 genes have been implicated in p53 pathways. Microarray findings were validated by real-time quantitative PCR. We conclude that gene expression patterns that distinguish omental metastasis from primary epithelial ovarian cancer can be identified and that many of the genes have functions that are biologically consistent with a role in oncogenesis, metastasis, and p53 gene networks. 相似文献
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脂质体-C-erbB_2反义寡核苷酸对人卵巢上皮癌裸鼠皮下移植瘤的作用 总被引:6,自引:0,他引:6
目的:探讨经脂质体—硫代磷酸化修饰的C-erbB2反义脱氧寡核苷酸(C-erbB2sulfide-ODNs)作用后的卵巢上皮癌细胞在裸鼠皮下的成瘤能力及形态学变化。方法:利用离体途径将C-erbB2sulfide-ODNs导入卵巢上皮癌细胞,然后接种于裸鼠皮下,观察肿瘤体积的变化,并计算抑瘤率。用透射电镜观察肿瘤形态变化。结果:经脂质体-C-erbB2sulfide-ODNs作用后的卵巢上皮癌细胞在裸鼠皮下成瘤能力降低,最大抑瘤率可达41.7%。超微结构显示实验组肿瘤细胞异染色质增多,分化增高。结论:C-erbB2癌基因的反义调控能降低卵巢上皮癌的成瘤能力,抑制肿瘤生长,在卵巢上皮癌的基因治疗中有一定作用 相似文献