抗A型和抗B型血型单克隆抗体的制备及其在血型鉴定中的初步应用

本试验用A型和B型人红细胞混合悬液免疫BALB/c小鼠,取免疫脾细胞与同系鼠Sp2/0骨髓瘤细胞融合,建立了5株分泌盐水凝集抗体的杂交瘤细胞株。3次克隆化后,细胞株稳定分泌McAb已6个月。经A、B、O各型红细胞鉴定及阻断试验、吸收释放试验结果证明:H_2、H_5、B_7株是特异性抗A型抗原的,D_5株是特异性抗B型抗原的。本试验制备的McAb亲合力高于人抗血清,用保护剂稀释后稳定性良好。用McAb和人抗血清对献血员血液标本692份,脐带血58份做血型鉴定所得结果完全一致。     

抗血型M、N及抗血型糖蛋白A/B单克隆抗体的制备及其特性鉴定

目的:制备抗血型M、N及抗血型糖蛋白A/B(GPA/GPB)的单克隆抗体(mAb),并进行特性鉴定。方法:用人“O”型血红细胞作为免疫源,免疫BALB/c小鼠。采用淋巴细胞杂交瘤技术制备mAb,用谱红细胞筛选阳性克隆;采用直接、间接血凝试验检测杂交瘤细胞培养上清及腹水中mAb的效价。分别用快速定性试纸和酶处理红细胞检测mAb的Ig亚类及抗原表位。用Western blot鉴定抗GPA/GPB mAb的特异性。结果:获得4株分泌抗M、1株抗N及3株抗GPA/GPB mAb的杂交瘤细胞株。杂交瘤细胞培养上清mAb的效价介于1×2-4~1×2-8之间,腹水mAb的效价在1×2-7~1×2-12之间。除1株mAb 1C1C9C4为IgM外,其他7株mAb均为IgG。通过杂交瘤细胞培养上清与谱红细胞的反应格局,结合mAb抗原表位的检测,确定4株和1株mAb可分别特异性结合于GPA的M、N抗原表位;另3株mAb 6D7C9、7C9H4和7C9G11与“O”型血红细胞膜的Western blot结果显示,均可结合GPA、GPB蛋白。结论:成功地建立了4株分泌抗M、1株分泌抗N及3株分泌抗GPA/GPB mAb的杂交瘤细胞株,可用于MNSs血型系统的研究及鉴定,并为制备双功能抗体用于病毒、肿瘤疾病的诊断和治疗打下了坚实的基础。     

抗血型糖蛋白A非凝集型单克隆抗体的制备和鉴定

抗红细胞非凝集型抗体是建立“全血免疫分析系统”的必要条件。为此，我们采用小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０和纯化人红细胞膜血型糖蛋白Ａ（ＧＰＡ）免疫的Ｂａｌｂ／ｃ小鼠的脾细胞融合，获得了一株分泌抗ＧＰＡ非凝集型单克隆抗体的杂交瘤细胞系－３Ｃ５。３Ｃ５分泌的ＭｃＡｂ为ＩｇＧ１亚类，ｋａｐｐａ型轻链，能够识别和结合红细胞膜的血型糖蛋白Ａ和血型糖蛋白Ｂ（ＧＰＢ），说明其识别的是ＧＰＡ和ＧＰＢ分子所共有的抗原决定族     

抗CMG2单克隆抗体的制备及其初步应用

目的制备鼠抗人毛细血管形态发生基因2(CMG2)单克隆抗体,并将其初步应用于胃癌组织和细胞系中CMG2表达的检测。方法重组表达CMG2胞外区肽段,免疫Balb/c小鼠,常规制备杂交瘤细胞,通过间接ELISA方法筛选目标克隆,制备小鼠腹水并经蛋白A亲和纯化获得相应抗体。间接ELISA法鉴定抗体的亚类类型及亲和力;抗原竞争性抑制实验鉴定抗体的特异性。用候选抗体建立流式细胞术、免疫荧光、免疫印迹及免疫组织化学方法,初步应用于胃癌组织和细胞系中CMG2表达的检测。结果共获得3株针对CMG2胞外区的杂交瘤细胞株,其中以8F3单克隆抗体的亲和力和特异性最好,亚型为Ig G1。8F3单抗能用于胃癌细胞株CMG2表达的流式细胞术和免疫荧光检测以及胃癌组织的免疫组织化学检测。结论成功制备出高效价高特异性的鼠抗人CMG2单克隆抗体,为CMG2的基础和临床应用研究提供了有用工具。     

A,B血型单克隆抗体临床应用的研究

为了探索人血型分型试剂工业化生产的可能性，应用人Ａ、Ｂ血型单克隆抗体，进行了抗体特性及临床血型分型的研究。经血凝特性试验，测得Ｄ２８６－Ｅ１２单克隆抗体仅以Ａ血型特异，６－１－Ｇ１１单克隆抗体仅对Ｂ血型特异。由盐水试管法测得它们的血凝滴度均为１：５１２。以血库常规人抗Ａ、抗Ｂ血清为标准对照，采用盐水试管法，对３７０４例血液样品进行了临床血型分型试验。结果显示，Ａ、Ｂ血型单克隆抗体分型试剂与标准人血     

A、B血型单克隆抗体临床应用的研究

为了探索人血型分型试剂工业化生产的可能性，应用人Ａ、Ｂ血型单克隆抗体，进行了抗体特性及临床血型分型的研究。经血凝特性试验，测得Ｄ２８６－Ｅ１２单克隆抗体仅对Ａ血型特异，６－１－Ｇ１１单克隆抗体仅对Ｂ血型特异。由盐水试管法测得它们的血凝滴度均为１：５１２。以血库常规人抗Ａ、抗Ｂ血清为标准对照，采用盐水试管法，对３７０４例血液样品进行了临床血型分型试验。结果显示，Ａ、Ｂ血型单克隆抗体分型试剂与标准人血清１００％相符。证明：Ｄ２８６－Ｅ１２和６－１－Ｇ１１两株杂交瘤分泌的Ａ、Ｂ血型单克隆抗体可作为非常优越的血型分型试剂。具有工业化生产血型单克隆抗体的潜力。     

抗人B因子单克隆抗体的制备及其特性的初步研究

本文以人B因子免疫BALB/c小鼠的脾细胞与SP2/O骨髓瘤细胞融合,获得六株(A_2、B_2、B_7、C_9、F_9、F_(10))分泌抗人B因子单克隆抗体(单抗)的杂交瘤细胞系。用ELISA检测细胞培养上清和小鼠腹水的特异性抗体效价,分别为10~(-2)—10~(-3)和10~(-4)—10~(-5)。抗原阻断试验结果,说明这些单抗是B因子特异的。经取代试验和ACH_(50)抑制试验,提示B因子具有耐热和不耐热二组抗原决定基。A_2和B_2针对不耐热抗原决定基,能抑制补体旁路途径活化;B_7和C_9针对耐热抗原决定基,不影响补体旁路途径活化;F_9和F_(10)则既能与耐热决定基发生反应,也具有抑制补体旁路活化的功能。用固相抗原竞争抑制试验,分析B因子的抗原表位,发现6株单抗可识别4个抗原决定基。这些单抗对B因子结构与功能的研究,B因子在补体旁路活化过程中与有关补体成分之间的相互关系的研究,都是很有意义的。     

抗肌红蛋白单克隆抗体的制备与鉴定及其初步应用

目的 制备和鉴定抗肌红蛋白(Mb)单克隆抗体,为人肌红蛋白检测试剂的研制奠定基础.方法 用人肌红蛋白抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术进行细胞融合,用ELISA方法筛选,有限稀释法进行克隆化培养阳性杂交瘤细胞株.ELISA法测定小鼠腹水滴度,CLIA法对抗体进行配对实验与特异性鉴定.结果 筛选培养出9株分泌抗肌红蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,腹水滴度为1∶5×104 ～ 1∶2×105.通过配对实验,有5株抗体6种组合可以成功配对.这5株抗体的亲和常数为6.46×108 ～ 3.68×109 L/mol.用5株抗体所建立的6种化学免疫分析方法与人Hb交叉反应率为7.434×103％ ～2.904×10-2％,与人ALB交叉反应率为4.980×10-7％ ～3.830×10-5％.用Mb17B6与Mb21E8两株抗体建立的CLIA标准曲线的线性系数为0.997,灵敏度为6.02ng/mL.结论 成功制备了可以应用于免疫分析的抗肌红蛋白单克隆抗体.     

抗孕酮单克隆抗体的制备与鉴定及其初步应用

目的:获得一株特异性强,灵敏度高的抗孕酮单克隆抗体,用辣根过氧化物酶标记孕酮-11α-羟基孕酮半琥珀酸酯制成酶标记物,建立酶联免疫分析(ELISA)方法,用于检测人血清中孕酮含量。方法:用免疫原11α-OH-孕酮-BSA免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术,得到14株抗孕酮单克隆抗体;用反射免疫分析(RIA)方法测定抗孕酮单克隆抗体的亲和常数和交叉反应率。结果:获得的14株抗孕酮单克隆抗体具有较高的亲和性和较小的价差反应率;建立ELISA方法学的灵敏度为0.12 ng/ml;批内变异系数为7.5%～11.4%;批间变异系数为:8.2%～12.1%;回收率93.8%～124.7%;高值临床样品系列倍比稀释后,测定值与稀释度呈线性相关,相关系数为r=0.995 7;与全自动化学发光测定的临床样品值比对结果较好,线性方程为y=0.789 4x+0.760 0,r=0.912 6。结论:方法学鉴定结果符合免疫分析的基本要求。     

四种抗支原体单克隆抗体的制备和初步应用

为了适应生物工程技术发展和病毒疫苗广泛应用的需要,细胞培养中支原体的检测方法应力求特异,快速。为此,本实验室于1987年首先建立了口腔支原体(M·orale)杂交瘤细胞株。为使诊断试剂配套以提高阳性率,又相继建立了猪鼻支原体(M·hyor-hinis)、精氨酸支原体(M·arginini)和莱氏无胆甾原体(A·laidlawii)杂交瘤细胞株。其方法如下:将纯培养的各支原体标准菌株以高速离心法浓缩提纯,用此作为抗原免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0-Ag-Ag14小鼠骨髓瘤细胞融合。采用IFA法和碱性磷酸酶-抗碱性磷酸酶桥联酶标技术     

抗rhG-CSF单克隆抗体的制备和初步鉴定

<正> 粒细胞集落刺激因子(G-CSF)是一种造血调控因子,为鉴定、检测和纯化人G-CSF,制备了四株特异识别人G—CSF的单克隆抗体(单抗,McAb)。1 材料和方法1.1 rhG-CSF和rhG-CSF融合蛋白 均由本实验室克隆、表达和纯化。纯化后的样品经SDS—PAGE鉴定,纯度大于95％。1.2 单抗制备 以rhG-CSF融合蛋白为抗原,按常规方法制备单抗。1.3 单抗识别抗原表位鉴定试验 用15μg/ml的抗原包被检测板(50μl/孔),对杂交瘤细胞的培养上清及其系列倍比稀释液进行间接ELISA检测,找出使抗原饱含的各McAb的最大稀释度。     

抗青霉素单克隆抗体的制备及初步应用

目的:制备抗青霉素的单克隆抗体(mAb)并建立双抗体夹心ELISA检测方法,对临床上引起青霉素过敏反应的过敏原青霉噻唑蛋白进行研究。方法:将半抗原青霉素和载体蛋白偶联后免疫BALB/c小鼠,应用杂交瘤技术建立稳定分泌抗青霉素mAb的杂交瘤细胞株。常规制备腹水,用辛酸-硫酸铵法纯化,并对纯化的mAb进行特异性鉴定。通过对不同抗体组合的分析和条件的优化,建立检测过敏原的双抗体夹心ELISA方法。结果:经细胞融合、筛选及克隆化,共获得9株稳定分泌抗青霉素mAb的杂交瘤细胞株,其中5株亲和力较高。建立了双抗体夹心ELISA相对定量检测方法,该方法灵敏度达到870 U/L,平均回收率为107.81%,批内变异系数平均为6.7%,批间变异系数平均为9.3%,可用于A群链球菌制剂中青霉噻唑蛋白的检测。结论:成功地制备了抗青霉素的mAb,并建立了相对定量检测青霉噻唑蛋白的双抗体夹心ELISA法。     

抗FITC单克隆抗体的制备及初步应用

以抗原抗体反应为基础的免疫学诊断技术需要有高特异性和高敏感性。为了提高免疫检测系统的敏感性 ,生物素 亲和素系统已被广泛地应用于免疫诊断技术。但生物素 亲和素系统也存在着标记较为复杂 ,易受内源性生物素影响等不足。异硫氰酸荧光黄 (ＦＩＴＣ)是一种很稳定的荧光素 ,极易结合在蛋白分子上 ,不仅标记简单 ,标记物也十分稳定。ＦＩＴＣ作为半抗原结合到蛋白质载体上具有很强的免疫原性 ,抗ＦＩＴＣ单克隆抗体 (ｍＡｂ)与标记在的蛋白质上ＦＩＴＣ反应 ,不仅特异性高 ,而且亲和力也高于抗体与多肽抗原的结合。因此 ,ＦＩＴＣ 抗ＦＩ…     

抗rhEPO单克隆抗体的制备及初步应用

目的 :研制抗人促红细胞生成素的特异性单克隆抗体 (mAb) ,对其生物学特性进行初步鉴定 ,并用于转基因羊乳中重组人促红细胞生成素 (rhEPO)的提纯。方法 :以自制的rhEPO粗品免疫BALB/c小鼠 ,制备抗rhEPO的mAb。以Westernblot和间接ELISA法 ,对所获mAb进行初步鉴定。以纯化的mAb同预活化的Sepharose 4B偶联 ,制得mAb亲和层析柱 ,并用于转基因羊乳中rhEPO的提纯。结果 :获得两株可分泌特异性抗rhEPO的mAb的杂交瘤细胞株 (1E7和 2E6 )。Ig亚类 (型 )的鉴定分别为IgG1和IgG2b ,轻链均为κ型。用Westernblot证实 ,获得的mAb可特异性地识别rhEPO。用自制的免疫亲和层析柱用于转基因羊乳中rhEPO的提纯 ,具有很好的吸附作用 ,回收率达 70 %。结论 :成功地获得两株可分泌特异性抗rhEPO的mAb的杂交瘤细胞。用自制的免疫亲和层析柱提纯转基因羊奶中的rhEPO具有较高的吸附效率     

抗角蛋白单克隆抗体的研制及其在免疫组化中的初步应用

角蛋白是上皮细胞中间细丝的组成成分。上皮细胞恶变后所表达的角蛋白成分一般不发生改变。因而应用抗角蛋白抗体通过免疫组化染色不仅能鉴别上皮与非上皮细胞来源的肿瘤,而且可以应用一些特殊的抗角蛋白单克隆抗体区别鳞癌和腺癌。     

抗HIV-1 gp120单克隆抗体的制备及其初步应用

目的：制备抗HIV-1 gp120单克隆抗体（mAb），并建立一种可用于检测gp120的ELISA法。方法：采用基因工程抗原HIV-1gp120免疫BALB／c小鼠，通过B细胞杂交瘤技术制备抗HIV-1gp120的mAb。用ELISA法答定mAb的Ig亚类、效价及特异性。用饱和硫酸铵（SAS）纯化mAb，并用HRP标记后建立双mAb夹心ELISA法。结果：筛选出10株稳定分泌抗HIV-1gp120 mAb的杂交瘤细胞株，9株为IgG，其中4株的腹水效价为32X10～256X10所得mAb与HIV-1gp41、HIV-1p24及HIV一2gp36Ag均无交义反应，仅与HIV-1gp120产生特异性反应。用mAb 6H9和9H12，建立了双夹心ELISA法，检测gp120抗原的灵敏度是10μg／L。结论：获得10株特异性强、效价高的机HIV-1gp120的mAb，并建立了灵敏度良好的双mAb夹心ELISA法.     

抗生物素单克隆抗体的制备及其在核酸检测中的应用

生物素与亲和素有相当强的亲和力 (Ｋｄ10 15Ｍ ) ,已被广泛用于细胞化学、免疫组织化学、免疫测定以及核酸原位分子杂交。但是生物素 亲和素系统中 ,亲和素是一种高碱性 (ｐＨ0 5 )糖蛋白 ,易引起较强的非特异性结合。最近Ｂａｇｅｒ报道抗生物素抗体有模拟亲和素功能作用 ,并显示较好的特异性[1] 。本文报道建立二株抗生物素单克隆抗体 ,并初步用于乙型肝炎ＤＮＡ的检测。1　材料和方法1 1　材料　生物素、Ｎ 羟基琥珀酰亚胺、二环已基碳二亚胺、ＢＳＡ、ＰＥＧ、ＨＡＴ、ＤＡＢ (3,3 ｄｉａｍｉｎｏｂｅｎｚｉｄｉｎｅ )、羊抗小鼠Ｈ…     

抗A抗B血型定型试剂(单克隆抗体)国家参考品的建立

正ABO血型系统是人类第一个血型系统,也是人类血型系统中抗原免疫性最强的~([1])。至今人们已发现红细胞上有36个血型系统,300多种血型抗原。ABO血型系统是临床输血和器官移植中最重要的血型系统,对献血者和受血者ABO血型的预先确认是输血工作中最为重要的实验,错误     

抗脑膜炎球菌B群15型单克隆抗体的制备及初步应用

用杂交瘤技术制备了6株能稳定分泌抗脑膜炎球菌B群外膜蛋白单抗杂交瘤细胞株。特异性鉴定表明:其中4株单抗均只与B群15型标准菌株反应,不与其它型菌株反应,显示为15型特异性单抗。另2株单抗则可与B群其它型菌株反应,为群特异性单抗。应用所制备的15型单抗对部分B群茵株进行了型别分析,结果显示与国外标准单抗一致。