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1.
目的 评价BioArchive自动液氮储存系统脐带血造血干细胞的保存效果。方法 通过分析脐带血造血干细胞在BioArchive自动液氮储存系统中保存半年复苏后脐血有核细胞总数、CD34 细胞数量和造血祖细胞集落形成单位(CFU GM)的回收率,评价自动液氮储存系统保存效果。结果 85份新生儿脐带血复苏后有核细胞仍获得较高的产率,达到(8.97±4 .12 )×10 8,CFU GM计数达(90 .5 8±84 .5 0 ) /2×10 5,CD34 细胞数达到(7.2 8±3.5 7)×10 6。比较脐带血有核细胞冻存前后各组数据,经统计学分析,差异无显著性。结论 BioArchive自动液氮储存系统储存脐血造血干细胞的效果较为理想,适合于各种脐血库和细胞库的应用。  相似文献   

2.
为了解在特定降温和复温过程中于BioArchive自动液氮储存系统保存的胎盘脐血 (PCB)的冷冻生物学特征 ,采用Procount方法流式细胞术测定CD34+ 细胞含量 ,细胞集落形成单位 (CFU)检测CD34+ 细胞的增殖能力 ,台盼蓝拒染法和白细胞分类测定有核细胞活存率和白细胞分类变化。结果显示 ,冻存复温后PCB有核细胞平均活存率为 (73.3± 12 .5 ) % ;PCBCD34+ 细胞的含量在冻存前为 (0 .3± 0 .2 1) % ,冻存复温后为 (0 .4 5± 0 .36 ) %。冻存复温后PCBCFU GM / G/ GEMM形成能力为冻存前的 (97.9± 39.9) %。比较大、小冷冻袋冻存复温后PCB细胞活存率和CFU GM/ G/ GEMM的形成能力无显著差异。另外 ,冻存复温后PCB的白细胞分类明显改变 ,粒细胞百分比明显降低 ,淋巴细胞和单核细胞百分比明显升高。结论 :在本研究中所采用的降温与复温程序不适于保存粒细胞 ,但是能够很好地保存淋巴细胞和单核细胞 ,尤其是CD34+ 的幼稚造血细胞。  相似文献   

3.
目的探讨辽宁省脐血库公共库脐带血入库影响因素,检查入库脐血质量。方法根据公共库入库的工作流程,统计2009年1月~2011年10月自愿捐献公共库脐带血的采集、入库、废弃例数及各种废弃原因所占的比例,分析入库影响因素;在已正式入库的脐血中随机抽取100例,对其分离制备情况及冷冻复温情况进行质量检查;并将结果与国内其他脐血库报道进行对比。结果采集9 182份脐血中入库3 272份(35.6%)、废弃5 910份(64.4%);影响入库的最主要因素为脐血有核细胞数和采集量不足,此外还有产妇及分娩状况不合格、运输超时、病原学检测和病原菌培养阳性等因素。分离制备后TNC回收率为(84.3±7.4)%,Hb残留率为(33.8±15.9)%;复温后中小型细胞比例增高、大型细胞比例降低,且TNC、细胞活性、CD34+绝对值、集落生成能力均比冷冻前有所降低,但以TNC和细胞活性的差异较为显著。采集合格率低于国内其他脐血库报道;分离、冷冻水平库间比较基本相当。结论制定严格的入库标准、建立标准操作规程对于脐带血库具有重要意义;在脐带血筛选面临的问题以及控制脐血质量的方法等方面,还有待进一步的探索和研究。  相似文献   

4.
本研究旨在探讨不同冻存时间的脐血干细胞复苏后的回收率,并分析冷冻复苏的细胞对患者植入速度的影响。20份经-196℃液氮低温保存1-10年的脐血干细胞标本,比较冻存前(脐血库提供资料)和复苏后的细胞活率、总有核细胞数(TNC)、CD34+细胞和粒-巨噬细胞集落形成单位(CFU-GM)的数量,并分析复苏后的细胞回收对移植受者植入速度的影响。结果表明,不同冻存时间对复苏后干细胞的回收率没有影响。经冻存复苏后,细胞活存率为(92.75±2.55)%,TNC、CD34+细胞数和CFU-GM的回收率分别为89.9%、84.8%和84.3%,与冻存前相比明显减少(P=0.000),但细胞数量的下降对移植患者中性粒细胞和血小板的植入时间均无影响。冻存后TNC和CD34+细胞数量与冻存前数量有很大的相关性(r=0.954;r=0.931,P=0.000),而CFU-GM的相关性弱(r=0.285,P=0.223)。结论:冻存和复温过程会-定程度上损伤脐血干细胞,导致细胞丢失,但不会影响移植的效果。  相似文献   

5.
目的 分析可能影响脐带血造血功能的供者特征.方法 对广州脐带血库1998年6月至2008年12月保存的4 358份脐带血的供者特征(包括母亲年龄、分娩方式、妊娠期、婴儿体重、婴儿性别)和脐带血采集量及造血功能的指标(包括总有核细胞数、CD34+细胞、干细胞集落等)进行相关性分析.结果 婴儿体重、分娩方式及婴儿性别是影响脐带血采集量、总有核细胞数、CD34+细胞数、CFUs及CFU-GM的主要因素.随着婴儿体重的增加,脐带血采集量、总有核细胞数、CD34+细胞数、CFUs、CFU-GM均呈上升趋势(P=0.000).阴道分娩时脐带血的采集量虽然低于刮宫产(P=0.000),但总有核细胞数、CD34+细胞数、CFUs,CFU-GM均高于剖宫产(P=0.000).女婴脐带血中总有核细胞数含量高于男婴(P=0.000),但脐带血采集量(P=0.000)、CD34+细胞数(P=0.002)均低于男婴.随着妊娠期的延长,脐带血中总有核细胞数增加(P=0.000),但CD34+细胞数减少(P=0.001).结论 某些脐带血供者特征对脐带血造血功能指标有积极影响.  相似文献   

6.
背景:已有报道证实群体反应性抗体在实体器官移植受者排斥反应中起着重要作用,并且与植入物功能衰竭呈正相关。目的:实验拟观察反复输血地中海贫血患儿血清中特异性群体反应性抗体对脐血造血干/祖细胞增殖、分化能力的影响。设计、时间及地点:体外细胞学实验,于2006-01/2007-08在中山大学附属第二医院医学研究中心完成。材料:5份健康足月产妇脐带血,每份80~100mL。反复输血地中海贫血患儿的群体反应性抗体血清样本。5份健康儿童AB分型血清样本。6份阳性抗凝静脉血样本10mL。方法:采用聚蔗糖-泛影葡胺梯度离心法分离脐带血单个核细胞。将1×105脐血单个核细胞与分别与健康儿童AB血清50μL、0,50,100μL不同浓度群体反应性抗体血清混合后,再将上述细胞混合物与兔补体共同孵育进行半固体集落培养。主要观察指标:倒置显微镜下观察并计数共培养第7,14天总集落数和各种集落数。结果:脐血造血干/祖细胞受群体反应性抗体血清作用后,其半固体集落培养的总集落数以及各种集落数均有不同程度的下降,其中总集落数和粒单系集落形成单位的下降数,经统计学处理差异具有显著性意义(P<0.01);群体反应性抗体血清量与总集落、粒单系集落形成单位、粒红单核巨核系集落形成单位、红系爆式集落形成单位、巨核系爆式集落形成单位、巨核系集落形成单位之间的肯德尔相关分析呈负相关,经统计学处理差异有显著性意义(P<0.05)。结论:特异性群体反应性抗体对脐血造血干/祖细胞的增殖、分化能力具有抑制作用,并且抑制作用与群体反应性抗体剂量相关:群体反应性抗体剂量越大,抑制作用越强。  相似文献   

7.
低温对人脐血淋巴细胞免疫活性的影响   总被引:2,自引:1,他引:2  
本实验通过超低温冷冻的方法来研究冻存对脐血淋巴细胞功能的影响,同时观察了脐血与成人外周血淋巴细胞免疫活性的差异。 材料与方法 标本采集 脐带血20份,分别取自正常分娩的足月儿脐带血。成人外周血17份,分别取自正常成人静脉血。 单个核细胞悬液的制备 脐血和外周血分别用淋巴细胞分层液分出单个核细胞,取少量合20%人AB型血清的RPMI 1640培养液,配制出5ml细胞浓度为1×10~6/ml的细胞悬液,放置操作台内作为新鲜待测标本,余量送低温冻存。  相似文献   

8.
目的:建立和开发一种新型的从冻存脐带血中分离培养内皮祖细胞(EPC)的方法,探讨其生物学特性,提高冻存脐带血分离获得EPC的成功率。方法:自液氮罐中收集公共库中2000年至2001年保存的12例冻存脐带血,37℃水浴锅中快速复苏后,磷酸缓冲盐溶液(PBS缓冲液)洗涤,获得总有核细胞(TNCs),将TNCs接种至培养皿中诱导扩增EPC。使用流式细胞术和免疫荧光方法鉴定EPC并确定纯度。采用下列方法体外鉴定内皮祖细胞的功能:荧光显微镜观察细胞特异性摄取Dil-Ac-LDL和FITC-UEA-I的功能、在基质胶中形成毛细管样结构的情况,ELISA法检测释放VEGF因子的功能。结果:培养3周后,出现1-5个鹅卵石铺路石样内皮祖细胞集落。体外培养第1-3代EPC,其表面CD31、CD34、CD144和VEGFR (CD309)标记阳性率分别为(92. 91±5. 20)%、(30. 0±23. 27)%、(88. 55±3. 83)%和(67. 21±12. 12)%。EPC细胞具有特异性内吞Dil-Ac-LDL和FITCUEA-I、形成毛细管结构,释放低浓度VEGF因子等功能。结论:采用本方法从冻存脐带血中分离EPC的稳定性与重复性高,从冻存的脐带血中分离EPC的成功率可提高至85%。该方法为临床应用丰富的内皮祖细胞奠定了基础。  相似文献   

9.
目的探讨脐血有核细胞的分离、冻存方法,减少脐血的贮存空间。方法脐血采集按美国脐血库标准操作规程(SOP)168份脐血采用6%羟乙基淀粉(HES)、三联袋两次离心分离法将脐血分离成WBC层、RBC层和血浆层.脐血终搬为18~22ml。结果分离前后有核细胞计数、各系祖细胞数、CD34^+细胞获得率分别为92.4%、96.5%、89.7%、80.2%、90.4%。结论证实HES分离脐血未造成有核细胞及各系祖细胞的明显损失。脐血可用简单的方法减少体积,节省液氮消耗量,降低了贮存空间,是一种用以建立脐血库的尝试。  相似文献   

10.
目的 探讨液氮冻存时间对脐血造血干细胞质量和临床移植效果的影响.方法 对上海脐血库已经应用于临床移植的605份脐血进行研究,脐血平均冻存时间为820(88~ 2651)d,测定脐血复苏之后的有核细胞、CD34+细胞数量、细胞回收率、细胞活力,粒-单核细胞集落形成单位(CFU-GM),结合脐血冻存时间、临床移植效果进行统计分析.结果 复苏后细胞回收率、细胞活力与冻存时间无显著相关性,CFU-GM平均(109.6~ 105.7)个/1×105,随冻存时间延长逐渐降低(P=0.011).临床移植患者的造血重建时间、植入失败率、急性移植物抗宿主病、总体生存率与脐血冻存时间长短无显著相关性.结论 深低温冻存时间长短对脐血复苏后细胞回收率、细胞活力、临床移植效果无显著影响,冻存时间较长的脐血复苏后CFU-GM在正常标准范围内略有下降,保存3~7年的脐血仍能维持正常细胞活性和功能、达到良好的临床移植效果.  相似文献   

11.
雒猛  王忠  高峰  王凯  赵清刚 《检验医学与临床》2021,18(10):1410-1412,1416
目的 探讨脐带血造血干细胞经液氮冻存20年后的质量情况.方法 对山东省脐带血造血干细胞库于2000年冰存的合格的脐带血200例出库进行检测,检测其母血、脐带血的乙肝表面抗原(HBsAg)、丙肝病毒抗体(抗-HCV)、梅毒螺旋体抗体(抗-T P)、人类免疫缺陷病毒抗体(抗-HIV)和巨细胞病毒(CM V)-IgM抗体;检测脐血的有核细胞数(TNC)、细胞活性、粒-单核细胞集落形成单位(CFU-GM)、CD34+细胞数量,以及血培养(细菌/真菌)检测,检测指标与冻存前指标进行比对,同时分析复苏后的检测指标是否符合现有的质量标准.结果 母血、脐带血的HBsAg、抗-HCV、抗-TP、抗-HIV和CMV-IgM抗体与入库时结果完全一致,均无反应性;脐带血的细菌/真菌培养无菌生长;冻存前T NC、细胞活性、CFU-GM、CD34+细胞数量分别为(11.2±4.8)×108、(99.5±1.3)%、(1.9±0.8)×106和(3.1±2.3)×106;冻存后的TNC、细胞活性、CFU-GM、CD34+细胞数量分别为(10.1±4.0)×108、(75.4±2.4)%、(1.4±0.6)×106和(2.4±2.1)×106,冻存后与冻存前比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论 脐带血造血干细胞经过液氮冻存20年后,TNC、细胞活性、CFU-GM、CD34+细胞数量均有所下降,但是脐带血的多项指标仍然符合质量标准,细胞仍具有很强的增殖活性,能够满足临床需要.  相似文献   

12.
氨磷汀对化疗中造血干/祖细胞的保护作用   总被引:2,自引:0,他引:2  
为了评估氨磷汀 (amifostine ,AMF)在保护正常造血干 /祖细胞免受化疗药物依托泊甙 (etoposide ,VP 16)损伤方面的作用 ,将脐血单个核细胞 (CBMNC)、新鲜和冻存的外周血造血干细胞 (PBSC)和HL 60细胞 ,分别分为AMF VP 16组、VP 16组、AMF组和空白对照组 ,用台盼蓝拒染法检测细胞活性 ,CFU GM集落培养计数 ,流式细胞术 (FCM)测定细胞的凋亡率。结果显示 :在CBMNC、新鲜和冻存的PBSC样本中 ,AMF VP 16组的存活率和集落形成能力较VP 16组显著提高 (P <0 .0 5 ) ;在CBMNC样本中 ,3种浓度的AMF组的集落形成能力与对照组的差异无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ;在HL 60细胞的样本中 ,AMF VP 16组与VP 16组凋亡率的差异无统计学意义 (P >0 .0 5 )。结论 :AMF能保护正常造血干 /祖细胞免受化疗药物VP 16的损伤 ,并且不影响VP 16对HL 60细胞的杀伤效果 ,但是AMF不能直接促进脐血造血干 /祖细胞的生长和分化。  相似文献   

13.
本研究探讨非血缘供者脐带血移植(unrelated cord blood transplantation,UCBT)中复温后供者细胞输入剂量对植入和造血重建的预测作用。回顾性分析1999年8月至2010年4月间接受单份UCBT的97例儿童恶性及非恶性疾病患者的临床资料,比较冷冻前和复温后检测的总有核细胞(total nucleated cells,TNC)、CD34+细胞及粒-巨噬细胞集落形成单位(colony-forming unit-granulocyte-macrophage,CFU-GM)的输入剂量对受者的植入及造血重建速度的影响,供者脐带血均来自广州脐血库。结果表明,冷冻前TNC(/kg)(mean±SD:7.65×107±4.26×107;median:6.34×107)、CD34+细胞(/kg)(mean±SD:4.64×105±4.47×105;median:3.03×105)及CFU-GM(/kg)(mean±SD:0.79×105±1.09×105;median:0.57×105)与其对应的复温后TNC(/kg)(mean±SD:6.98×107±4.12×107;median:6.00×...  相似文献   

14.
背景:近年来的研究表明,除已知的人骨髓、外周血和脐带血中存在造血干/祖细胞外,人胎盘组织中也有造血干/祖细胞存在.目前为止,还缺乏对人胎盘组织造血干/祖细胞的增殖分化特性及人胎盘组织淋巴细胞亚群组成和免疫原性等的深入研究.目的:探究人胎盘组织是否含有比脐带血更丰富的造血干/祖细胞,并对其造血祖细胞系增殖分化能力进行检测,同时对人胎盘组织淋巴细胞亚群组成及表型特征进行分析.设计、时间及地点:开放性实验,于2004-01/2006-12在贵州省细胞工程重点实验室完成.材料:经产妇知情同意,无菌采集遵义医学院附属医院产科健康足月分娩新生儿胎盘和脐带血共12份.淋巴细胞亚群检测试剂盒,CD34绝对计数试剂盒(Becton Dickinson公司):CD34磁珠分选试剂盒,FITC标记的CD38单克隆抗体,抗FITC磁珠和MS/LS免疫磁式细胞分选柱(Miltenyi Biotec).方法:脐带血与RPMI-1640培养基(含体积分数为0.1的胎牛血清)按1:1的比例混合,采用Ficoll-Histopaque分离液离心30min,吸取界面层细胞,PBS洗涤一次,获得脐带血单个核细胞.采用机械法加0.25g/L胶原酶消化制备胎盘组织单个细胞悬液,之后同脐带血单个核细胞分离步骤分离胎盘单个核细胞.流式细胞仪检测胎盘单个核细胞中CD34 CD38-, CD34 CD38 造血干/祖细胞(HSPCs)和淋巴细胞亚群的组成比例.免疫磁珠分选法分选人胎盘CD34 CD38-,CD34 D38 造血干/祖细胞,并分别进行粒细胞-单核细胞集落生成单位、红细胞爆裂型集落生成单位、混合集落生成单位系集落形成培养,以评价其造血祖细胞系增殖分化能力.实验全程用脐带血作平行比较分析.主要观察指标:胎盘和脐带血CD34 造血干/祖细胞组成百分率、祖细胞系集落形成能力、淋巴细胞亚群表型及组成特点.结果:[1]胎盘CD34 造血干/祖细胞百分率是脐带血的8.8倍,差异有显著性意义(P<0.01).[2]胎盘中的淋巴细胞总数、T细胞(CD3 CD2 )、B细胞(CD19 )、Th(CD3 CD4 )细胞及Th/Ts比值均明显低于脐带血,而CD8 CD28-T抑制细胞则明显高于脐带血,差异有显著性意义(P<0.01).[3]胎盘CD34 CD38 造血干/祖细胞亚群培养形成的粒细胞-单核细胞集落生成单位、红细胞爆裂型集落生成单位、混合集落生成单位集落数明显高于CD34 CD38-造血干/祖细胞亚群(P<0.01);胎盘与脐带血造血干/祖细胞中相同表型细胞亚群形成的各系集落数比较,差异无显著性意义(P0.05).结论:人胎盘组织富含CD34 造血干/祖细胞,其CD34 CD38 、CD34 CD38-两个造血干/祖细胞亚群均具有增殖分化为粒细胞-单核细胞集落生成单位、红细胞爆裂型集落生成单位、混合集落生成单位的能力,并且人胎盘组织具有淋巴细胞亚群低比例和抑制性T细胞高比例的特点,使其有望成为造血干/祖细胞移植的新来源.  相似文献   

15.
脐血长期冷冻保存及其冷冻损伤可恢复性的研究   总被引:2,自引:0,他引:2  
作者应用二步法造血细胞冷冻技术,对脐血造血细胞在液氮中的长期保存的效果作了研究。结果表明:脐血造血细胞在低温保存时有一部分细胞会受到冷冻损伤而失去增殖能力,但是这种损伤并不与保存时间成正比。同时,我们还对脐血造血细胞冷冻损伤可恢复性作了研究。实验表明:在细胞悬液复温后即加入重组人粒-巨噬系集落刺激因子(rhGM-CSF)预孵育3小时后,可明显提高冻存人脐血造血细胞集落产率,这说明部分造血细胞在一定条件下可恢复其增殖能力,对应用冻存脐血作骨髓造血重建有一定意义。  相似文献   

16.
脐血干细胞库的建立及其临床应用   总被引:16,自引:0,他引:16  
目的建立无关供者脐血干细胞库,用于治疗骨髓衰竭、恶性及非恶性血液病、某些遗传病、重型免疫缺陷等疾病的干细胞移植.方法采集足月顺产或剖宫产的新生儿脐血,以羟乙基淀粉分离红细胞,DMSO/LMD冷冻保存.每份脐血常规检测细胞活率、有核细胞计数、祖细胞体外培养、CD34+细胞检测、HLA配型及病原学检测等.结果共采集2318份脐血,合格1240份,合格率为53.5%,合格脐血采集的平均体积(98.3±27.0)ml,分离后脐血有核细胞为(1.2±0.5)×109,回收率为(88.90±9.65)%.脐血细胞存活率为(97.00±2.61)%.CFU-GM数为(5.18±14.35)×105,BFU-E数为(10.35±11.55)×105,CFU-Mix数为(1.03±1.47)×105.脐血分离后CD34+细胞百分率为(0.5±0.32)%,细菌培养阳性4例,4例脐血CMV-IgM阳性.在广州脐血库的172例脐血移植登记患者中,HLA匹配4个位点以上的占91.12%.至2000年5月共提供9份应用于无关供者脐血移植,其中6例植入,植入成功率66.7%.结论脐血库的建立可使脐血能够较好地应用于造血干细胞移植治疗,建立脐血库有良好的应用前景.  相似文献   

17.
目的 研究中药墓头回对脐血基质细胞促粒-单系和红系造血祖细胞集落形成的影响.方法 收集12例脐血单个核细胞(MNC),加入不同浓度的墓头回水提物共培养14天,基质细胞层形成后,消化,计数;收集基质细胞最多浓度的上清液(MTH-PSCS),以不同比例与MNC共同加入集落培养基中共培养14天,计数粒-单系和红系造血祖细胞集落数.结果 0.01μg/ml的墓头回与MNC共孵育14天后,基质细胞的数量(14±2.8)×105/ml明显多于对照组(9±2.2)×105/ml.0.01 μg/ml的MTH-PSCS以0、5、10、20比例作用后,脐血粒-单系造血祖细胞集落数分别为17±6、121±24、268±27、114±31、68±11,10%的MTH-PSCS作用最为明显;脐血红系造血祖细胞集落数分别为38±12、72±23、81±9、159±45、90±32,其中以20%的MTH-PSCS作用最为明显.结论 中药墓头回可诱导脐血基质细胞的生长,可以促进粒-单系和红系造血祖细胞集落的形成.  相似文献   

18.
本研究目的是建立脐血造血干细胞库的标准工作程序。采用自然沉降法加离心法制备脐血的造血干细胞 ,经CD34 细胞计数、集落培养、微生物检测、传染病指标检测、HLA分型后 ,将造血干细胞贮存在液氮中保存。结果表明 :贮存脐带血造血干细胞有核细胞数平均值为 (10 .94± 2 .74 )× 10 8,回收率为 (79.82± 17.76 ) % ,CD34 细胞数平均值为 (5 1.6 2± 30 .5 3)× 10 5。 8份脐带血造血干细胞冰冻 2年后复苏 ,其有核细胞、CD34 细胞、CFU GM回收率分别为 (91.4± 6 .0 ) %、(84 .6± 2 0 .0 ) %、(85 .8± 14 .9) %。结论 :本方法和程序能有效地保存脐带血造血干细胞。  相似文献   

19.
目的 探讨特发性血小板减少性紫癜 (ITP)患者的骨髓巨核祖细胞体外培养集落形成能力及临床意义。方法 用碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶桥联酶标技术 (APAAP)检测ITP患者的外周血T淋巴细胞亚群的表达 ;采用胶原半固体培养法 ,对 33例ITP及 12例正常人行骨髓巨核祖细胞培养。结果 ITP组巨核祖细胞集落数与对照组差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;ITP中骨髓巨核细胞 (MK)增高组 (2 3/33)的CFU、BFU及总集落数与对照组比较 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ,而MK不增高组 (10 /33)CFU、总集落数显著低于对照组 (P <0 .0 5 ) ;CD4 /CD8 比值减低组较对照组CFU MK及总集落数明显减低。结论 ITP患者巨核祖细胞培养集落数可正常或减少 ,可能与免疫异常有关。巨核祖细胞体外培养对ITP患者治疗方案的选择具有一定的指导意义  相似文献   

20.
脐血又称胎盘血或脐带血,是胎儿出生时脐带内和胎盘近胎儿一侧血管内的血液。脐血具有以下特点:①来源广泛,采集方便,不会给供者造成任何损伤。②脐血中的干/祖细胞较成人骨髓中的干/祖细胞更原始,有更强的增殖分化能力。  相似文献   

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