免疫电化学生物传感器的研制及其在炭疽芽孢检测中的应用

免疫电化学生物传感器是诸多生物传感器中的一种,它利用抗原与抗体反应的高亲和力和特异性结合的特点,以抗原或抗体作为敏感材料,并用电化学检测系统作为换能器,从而实现对致病微生物等的检测.目前,国内外关于生物传感器研究的报道很多,但真正商品化传感器有限.我们采用免疫电化学的方法进行微生物检测器的研制.其基本原理为:首先,在固相载体上固定化抗体,然后通过夹心法结合待检测抗原及酶标抗体;由标记酶催化相应的化学反应,反应产物在电化学电极上再发生氧化还原反应,从而形成可以检测的电流信号.我们对两种固相载体的抗体固定化进行了研究,一种是表面带有羧基或胺基的微孔尼龙膜,通过碳二亚胺活化或戊二醛法共价偶联抗体.     

一种基于表面等离子体共振技术的生物小分子检测方法

目的在以表面等离子体共振生物传感器为核心的便携式生物分子在线分析系统的基础上,建立一种小分子检测方法,满足航天员体液在线检测需求。方法建立小分子物质2,4-二硝基苯肼(DNPH)的检测模型。用DNP—BSA制备生物分子膜;采用抑制检测法,得到检测区间及标准曲线;对检测的可重复性和特异性进行了实验。结果1)DNPH检测的线性范围为7．8ng／ml～2μg／ml,其检测下限为2．5ng／ml;2)生物分子膜的制备及传感器的再生方法能满足多样品测定的需求。结论本方法灵敏、快速、简捷地实现了小分子物质检测,且重复性好、可信度高,在航天医学检测中具有广泛的应用前景。     

基于CRISPR均相电化学生物传感器检测SARS-CoV-2和HIV-1方法的建立

目的 建立基于CRISPR-Cas13a系统的均相电化学生物传感器并用于病原微生物的核酸检测。方法通过逆转录-重组酶介导链替换核酸扩增技术（RT-RAA）对目标核酸进行扩增,经过体外转录后,激活Cas13a蛋白高效切割单链RNA的活性并对标记有亚甲基蓝（MB）的报告RNA进行剪切,构建CRISPR均相电化学生物传感器;通过遴选报告RNA上寡核苷酸的长度优化该传感器;利用该传感器检测新型冠状病毒（SARS-CoV-2）RNA和Ⅰ型人类免疫缺陷病毒（HIV-1）RNA,并对其检测性能进行评价。结果 建立了一种基于CRISPR-Cas13a系统和RT-RAA等温扩增技术的均相电化学生物传感器,利该方法使用相对应的扩增引物和CRISPR RNA(crRNA)后能稳定检测出低至102拷贝/μl的SARS-CoV-2 RNA和HIV-1 RNA,并与其他多种病原体未发生交叉反应。结论该基于CRISPR-Cas13a系统的均相电化学生物传感器具有制备简单、灵敏度高、特异性好和通用性强等优点,为病原微生物的现场快速检测提供了新的可行方案。     

应用DNA四面体探针电化学生物传感器检测埃博拉病毒核酸

目的：建立一种基于电化学生物传感器的快速检测埃博拉病毒核酸的方法。方法利用一步热变性法自组装成带有固定探针的DNA四面体后,通过Au-S键固定至金电极表面制备成新型核酸探针。与合成的埃博拉病毒核酸序列特异性结合后引入Bio-ssDNA检测序列,通过生物素和链霉亲和素的特异性结合作用引入avidin-HRP放大信号,利用计时电流法进行检测。结果该传感器可特异性识别和定量检测人工合成的埃博拉病毒的核酸序列,通过实验条件优化,测定核酸的浓度范围在1．0×10－9～5．0×10－6 mol／L呈良好的线性关系,检测下限为5．2×10－10 mol／L。结论所构建的DNA四面体探针修饰的电化学生物传感器实现了对埃博拉病毒核酸的灵敏、特异检测。     

栀子苷的定向分离提取方法建立

目的:建立栀子苷的定向分离模式,提取栀子药材中的栀子苷。方法:依托以Lipid A为靶点的抗LPS药物筛选平台,应用大孔吸附树脂、膜分离和HPLC等技术对栀子水提液进行针对Lipid A的逐级分离纯化。结果:从栀子水提液中分离出活性化合物栀子苷,其与Lipid A的特异性结合值为112 arc seconds。结论:本研究所建立的栀子苷的定向分离模式,目的性强、效率高,可用于天然药物中抗LPS活性物质的富集与分离纯化。     

多黏菌素B拮抗内毒素活性的实验研究

目的 探讨多黏菌素B（PMB）拮抗内毒素（LPS）生物学活性的机制。方法 观察PMB（1mg／kg）对LPS（20mg／kg）攻击的脓毒症模型小鼠的保护作用；应用生物传感器技术检测PMB与LPS和活性中心类脂A（lipid A）的亲和力，动态浊度法鲎试验观察PMB对LPS（2ng／ml）的中和能力，酶联免疫吸附分析（ELISA）法检测PMB对LPS（100ng／ml）刺激的小鼠腹腔巨噬细胞（PMФ）释放肿瘤坏死因子α-（TNF-α）及白细胞介素6（IL-6）的抑制作用，逆转录一聚合酶链反应（RT-PCR）技术检测PMB对LPS（100ng／m）刺激的小鼠PMФ的Toll样受体4（TLR4）、TNF-α和IL-6mRNA表达的影响。结果 PMB处理小鼠3d存活率为65％，显著高于LPS组的15％（P〈0．01）；PMB与LPS和Lipid A具有高亲和力，其与二者的解离常数分别为18、9nmol／L和11．1nmol／L，对LPS具有显著的中和作用，并在蛋白和核酸水平均显著抑制LPS诱导PMФ的TNF-α、IL-6和TLR4的释放和表达。结论 PMB可能通过抑制巨噬细胞活化实现对脓毒症小鼠的保护作用，其机制可能与PMB与Lipid A结合后中和LPS的活性有关。     

生物传感器及其在军事医学中的应用

生物传感器技术在军事医学领域中具有广阔的应用前景。它具有专一、灵敏、响应快等特点 ,可用于许多混浊或粘性的生物产品和代谢中间物的测定 ,包括抗生素、维生素、氨基酸、生长因子 ,以及异生物 ,如杀虫剂、洗涤剂及合成的有机化合物等测定 ,特别是在化生战剂的侦检方面具有独特的优势。1　生物传感器工作原理生物传感器是利用生物的因子或生物学原理来检测或计量化合物的装置。它通常利用纯化的酶、免疫系统、组织、细胞器或完整细胞作为催化剂 ,这些催化剂通常被固定化 ,并与物化仪器相结合使用。物化仪器可监测被分析物质在固定的催化…     

可用于TNT检测的新的生物传感元件topAp4的发现

目的：在大肠杆菌基因组中筛选可用于TNT检测的基因传感元件。方法利用随机酶切方法不完全酶切大肠杆菌K-12 MG1655基因组,构建基因组启动子文库,通过多轮筛选法获得可感应TNT的文库元件。通过数据库分析,并在灵敏度、特异性、起效时间各方面对新的传感元件在TNT诱导下的启动活性进行考察,进一步确证了文库元件中发挥作用的功能序列。结果和结论成功构建了大肠杆菌K-12 MG1655基因组启动子文库,并从中筛选得到了一个可感应TNT的文库元件,经过进一步分析确证了其发挥功能的序列topAp4,并在灵敏度、特异性、起效时间上都表现出较好的启动活性。上述研究工作发现了topAp4对TNT的感应作用,并验证了其具有较好的启动活性,为TNT检测生物传感器的构建打下了良好的基础。     

肝癌特异性结合肽的筛选及鉴定

目的探讨利用噬菌体随机肽库筛选肝癌细胞特异性结合多肽或肝癌细胞优势结合多肽的可行性。方法①利用噬菌体随机十二肽库，对人肝癌细胞系HepG2和人正常肝细胞系L02进行4轮差异筛选、富集，获得与肝癌细胞亲和的噬菌体克隆。②用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定其与肝癌细胞、正常肝细胞的亲和力，进一步筛选出高度亲和肝癌细胞的特异性阳性噬菌体克隆。比较其与其他肿瘤细胞的亲和力。③提取阳性噬菌体DNA并进行DNA序列测定，获得与肝癌细胞亲和的多肽序列。④用免疫荧光共聚焦成像进一步确定展示阳性多肽序列的噬菌体与肝癌细胞的结合部位。⑤根据筛选的多肽序列合成十六肽WH16，利用竞争抑制实验鉴定其与肝癌细胞的结合。结果筛选及ELISA结果示得到与肝癌细胞特异性结合并内化入肝癌细胞的噬菌体克隆，测序结果示56．67％的被检噬菌体展示相同的多肽序列FLLEPHLMDTSM，推测FLEP是肝癌细胞特异性结合肽的基序。免疫荧光共聚焦成像进一步确定展示序列FLLEPHLMDTSM的噬菌体与肝癌细胞特异性结合并内化入细胞内。竞争抑制实验示WH16能有效抑制展示序列FLLEPHLMDTSM的噬菌体克隆与肝癌细胞的结合。结论利用噬菌体随机肽库获得能与肝癌细胞特异性结合的多肽序列FLLEPHLMDTSM，据此合成的十六肽WH16与肝癌细胞有亲和力。     

HER2的表达及其分子影像的研究进展

人表皮生长因子受体2（HER2）是一种具有酪氨酸激酶活性的跨膜受体，同时也是一种高表达于各种癌细胞的生物标志物。高表达HER2的肿瘤往往预后不良。HER2分子影像主要是利用放射性核素、磁性材料、发光物质等标记配体能与HER2特异性结合的特性，对患者体内HER2高表达病灶进行显像，从而协助HER2阳性疾病的诊断，筛选出抗HER2治疗有效的患者，并可用于疗效评估，是近年来肿瘤精准医疗研究的热点之一。     

海马头部浅沟消失对海马硬化诊断价值的探讨

目的　探讨海马头部浅沟消失对海马硬化的诊断价值。方法　对 18例经组织学检查证实的海马硬化患者的MRI检查资料和 18例年龄相匹配的对照组进行回顾性分析 ,观察海马头部浅沟的显示情况、海马头部大小和信号改变。结果　 18例海马硬化患者中 ,16例硬化侧海马头部浅沟消失 ,1例硬化侧海马头部浅沟明显变浅 ,几乎消失 ,1例硬化侧海马头部浅沟存在。硬化侧海马头部均有萎缩 ,并在T2 WI和液体衰减恢复 (FLAIR)成像呈高信号。海马头部浅沟消失对海马硬化诊断的敏感性为 88.9% ,特异性为 10 0 %。结论　海马头部浅沟消失是诊断海马硬化的一个可靠征象 ,结合患侧海马有萎缩性改变和T2 加权成像信号增高 ,可肯定诊断海马硬化。     

湿润烧伤膏治疗婴儿湿疹的临床疗效观察

目的观察、探讨湿润烧伤膏(MEBO)治疗婴儿湿疹的临床疗效。方法将84例婴儿湿疹患儿随机分为治疗组(44例)和对照组(40例),治疗组外涂湿润烧伤膏治疗,对照组外涂湿疹膏治疗,连续治疗1周后,观察两组疗效。结果治疗组有效率为97.73%,对照组有效率为82.50%;两组疗效经秩和检验,差异具有统计学意义(P0.05);随访1个月,治疗组未见复发,对照组有2例患儿复发。结论湿润烧伤膏治疗婴儿湿疹疗效好,无毒副作用,安全可靠。     

Study of age of fusion of hyoid bone

The present study was conducted to determine the age of fusion of greater cornua with the body of hyoid bone. Age of fusion of hyoid bone can help in determining the age of an individual, especially of unknown dead bodies where only skeletal remains are available. A victim of compression of neck will more likely have fracture of hyoid bone if his hyoid bone is fused. Indian authors have reported that the fusion of hyoid bone occurs after 40 years of age. Studies done by foreign workers observed that hyoid bone fused at an earlier age (30-40 years). A total of 170 excised hyoid bones from dead bodies belonging to the age group of 20-65 years were studied. Fusion occurred earlier in females as compared to males by about 5 years. The mean age of unilateral and bilateral fusion in males was 38.25 and 53.16 years, respectively. The mean age of unilateral and bilateral fusion in females was 38.00 and 48.50 years, respectively. All the hyoid bones were fused after the age of 60 years. No significant differences were found between the fusion on right and left side.     

延迟性脾破裂误漏诊原因分析

目的探讨延迟性脾破裂误漏诊原因和预防措施.方法回顾性分析总结12例延迟性脾破裂中的诊断和误漏诊的经验与教训.结果本组延迟性脾破裂的误漏诊5例(41.66%).对多发伤与脾破裂并存可能认识不足,外伤史轻微或伤员隐瞒外伤史,缺乏腹痛-缓解-突然再腹痛的典型病史,缺乏“对冲性脾破裂”力学分析和整体化诊断思路等为其误漏诊的主要原因.结论详细的外伤史和全面系统检查,重视腹以外多发伤掩盖腹内脏器伤及延迟性脾破裂可能.确立外伤-腹内脏器伤-脾破裂整体化诊断思路.不间断地辅以B超检查脾形态学变化和腹内有无积液,腹腔穿刺确定有无血腹、X线胸腹部检查观察左侧胸肋角和膈肌运动情况、必要时CT检查以尽早发现脾包膜下血肿,降低延迟性脾破裂误漏诊率.     

Analysis of the results of the international comparison of activity measurements of a solution of Fe

The results of an international comparison of activity measurements of a solution of ⁵⁵Fe organized by the BIPM in 2005 are reported and analysed. This exercise, which follows the procedures of the CIPM mutual recognition arrangement to update older comparisons, is a renewal of the comparison organized by the BIPM that took place in 1978. A EUROMET comparison was organized in 1996 specifically to compare activity measurements of a ⁵⁵Fe solution by means of liquid-scintillation techniques. Results of these three comparisons are presented and discussed in this paper.

The radionuclide solution was provided by the NPL, which also distributed the samples to the participants. The activity of the ampoules was measured by 16 laboratories using 12 methods producing 25 results. Some general considerations on uncertainty assessments pertaining to the different techniques used are drawn. The outcome of four different estimators is compared from which the presence of at least one outlier can be confirmed. Further measurements should be made to try to reduce the discrepancy between the results. To date the outcome of the present comparison does not show an improvement to that of the 1996 comparison.     

The value of information of duration of pregnancy in establishment of paternity

Summary In order to get an idea of the value of the information on the duration of pregnancy in establishment of paternity, 511 records from 17 lower courts in Sweden were studied.It was found that when a blood group investigation has been performed, only a small number of cases remain where the paternity claim should be rejected by a court of law for the reason that the period of pregnancy has been extremely long or short.It was shown that only very extreme probability values (percentages) should give reason for rejection of paternity claims if a larger risk of error is to be avoided. The risk is somewhat smaller with long pregnancies than with short ones.The results of this study emphasize the difficulties involved in probability assessment in paternity suits.This report was presented at the Seventh International Medical-Legal Seminar, Stockholm 1971.     

消妇炎胶囊辅料的合理性实验研究

目的确定消妇炎胶囊的辅料及用量。方法以浸膏粉的吸湿率和流动性为考察指标,对加入淀粉、糊精及微晶纤维素3种不同辅料后制得的颗粒进行考察,优选出最佳辅料后,再对最佳辅料的不同用量进行考察。结果加入辅料后,颗粒的抗吸湿能力和流动性都明显改善,其中加入淀粉后,分别在6、12、24、48、60 h测得的吸湿率为2.01%、4.03%、5.98%、6.66%、7.31%,休止角为34.61°,均小于糊精与微晶纤维素,表明加入淀粉颗粒质量最好;每80 g浸膏粉中分别加入30、45、60 g淀粉,综合判定45 g较好。结论每80 g浸膏粉加入淀粉45 g为辅料用量参数,制得颗粒的抗吸湿能力和流动性均好,可节约成本。     

超声对观察椎动脉椎骨段走行的诊断意义

目的探讨超声对观察椎动脉椎骨段走行的诊断价值。方法对162例患者(走行异常者经血管造影或MR I等其他检查证实)的双侧椎动脉走行的二维和彩色血流信号等声像图信息进行回顾性分析,对椎动脉椎骨段走行异常作出诊断及分型。结果(1)超声通过二维或彩色多普勒的血流信号可显示椎骨段椎动脉有无、穿入位置和走行形态。(2)超声根据椎骨段椎动脉的有无、穿入位置和在椎骨段中的走行形态可将椎动脉椎骨段走行异常分为缺如0.6%(2/324),走行变异2.7%(9/324),走行弯曲5.5%(18/324)三大类。结论超声能清晰显示椎动脉椎骨段的有无、穿入位置及走行形态,能对椎动脉椎骨段的走行异常作出分型诊断,在形态学上为临床明确椎动脉的病因提供帮助。     

武警某院急诊科抗菌药物处方分析

 目的 了解武警某院急诊科抗菌药物的使用情况。方法 提取急诊科2015年下半年的处方,遴选出使用抗菌药物(除去眼膏、外用膏药及中成药)的处方。对抗菌药物处方进行分类统计及分析, 包括使用抗菌药物的种类及比例、使用居前6位的抗菌药物、抗菌药物的联合使用情况等。结果 在2015年下半年急诊处方中有抗菌药物处方3872张,占处方总数的22.3%。使用抗菌药物构成比中,喹诺酮类药物使用频率最高,占42.9%。使用居第一位的药物是左氧氟沙星,占39.8%。单联处方77.86%,二联处方22.14%,无三联处方。结论 2015年下半年我院急诊科抗菌药物使用符合卫生部抗菌药物使用规定,但有些方面还需要进一步改进。     

多发性肋骨骨折两种处置方式的比较

目的 探讨多发性肋骨骨折治疗的有效方法.方法 按纳入及排除标准筛选34例常规外固定病例（常规组）及31例行肋骨内固定术病例（内固定组）,比较两组的住院时间、疼痛持续时间、呼吸情况,以及肺部感染发生率.结果 两组患者一般资料及合并肺挫伤和胸水情况比较差异无统计学意义;内固定组住院时间、疼痛持续时间、呼吸频率恢复时间、SaO2恢复时间和肺部感染与常规组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.常规组肺部感染发生率为26.5％（9/34）,内固定组肺部感染发生率为3.2％ （1/31）,两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 肋骨内固定术优于常规外固定法.