华支睾吸虫亚显微结构的研究 Ⅴ 精细胞的分化

目的:研究华支睾吸虫精子的形成。方法：以囊地感染家兔,剖检获取成虫,切取睾丸段做超薄切片,电镜观察。结果：精原细胞分布在睾丸被膜下,睾丸深部分布着不同分化阶段的精母细胞、精细胞和精子,精母细胞行不完全分裂,从而存在细胞质间桥,将32个精母细胞联接在一起,进行同步发育。结论：华支睾吸虫精子的分化分为两个连续的阶段,一、由精原细胞依次向初级精母细胞、次级精母细胞和精细胞分化;二、由精细胞分化、变形,形成精子,本文报告为前一阶段。     

华支睾吸虫减数分裂的观察

本文研究了华支睾吸虫的减数分裂,报道了同源染色体的配对、交换与分离及其细线期、偶线期、粗线期、双线期,终变期的形态学特点,以及华支睾吸虫的单倍体、二倍体、多倍体、精原细胞、精细胞和精子的观察结果。     

华支睾吸虫亚显微结构的研究Ⅵ.精子的形成

华支睾吸虫精子的分化可以分为两部分,一是精细胞的发生,二是精子的形成,本文报道的为第二部分。精子的形成首先由精细胞核向细胞的游离端移动,然后出现细胞突起,在突起内可见中心粒和基体,此为分化区,继之胞质突起延伸形成中央突起,并在其两侧出现两个侧突起。细胞核变长,染色质浓缩,核纵断面呈丝状或版层状,核及线粒体分别移入分化区及中央突起内,随之中央突起与两侧突起融合,形成精子的杆状体,分化区的柱状体形成精子头部。最后精子自领状结构的水平与精细胞的胞质间桥分离,释放入睾丸腔内至此精子完全形成     

华支睾吸虫亚显微结构的研究VI.精子的形成

华支睾吸虫精子的分化可以分为两部分，一是精细胞的发生，二是精子的形成，本文报道的为第二部分。精子的形成首先由精细胞核向细胞的游离端移动，然后出现细胞突起，在突起内可见中心粒和基体，此为分化区，继之胞质突起延伸形成中央突起，并在其两侧出现两个侧突起。细胞核变长，染色质浓缩，核纵断面呈丝状或版层状，核及线粒体分别移入分化区及中央突起内，随之中央突起与两侧突起融合，形成精子的杆状体，分化区的柱状体形成精     

抗华支睾吸虫单克隆抗体的制备和鉴定

目的：建立分泌抗华支睾吸虫成虫的单克隆抗体杂交瘤细胞株并进行鉴定。方法：用华支睾吸虫成虫可溶性抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合，筛选分泌高滴度单克隆抗体的杂交瘤细胞株，测定单抗免疫球蛋白亚类和单抗效价，检测单抗与日本血吸虫虫卵抗原、卫氏并殖吸虫成虫抗原和猪囊尾蚴抗原的交叉反应，用ＩＦＡＴ进行单抗识别的抗原定位。结果：获得５株分泌高滴度抗华支睾吸虫成虫单抗的杂交瘤细胞株，其分泌的抗体与日本血吸虫、卫氏并殖吸虫和猪囊尾蚴抗原均不发生交叉反应；５株单抗均属ＩｇＭ；单抗所识别的抗原定位于华支睾吸虫肠管壁。结论：制备的抗华支睾吸虫成虫的杂交瘤细胞株能分泌高滴度和高特异性的单抗。     

广州珠三角地区家猫自然感染华支睾吸虫的调查及豚鼠模型的构建北大核心CSCD

目的了解广州珠三角地区家猫自然感染华支睾吸虫状况,观察豚鼠感染华支睾吸虫后肝组织病理变化。方法解剖当地家猫,取肝脏,检查华支睾吸虫感染情况,阳性肝脏收集成虫,并取肝组织制作切片;采集阳性鱼,分离华支睾吸虫囊蚴,经口感染豚鼠,60个囊蚴/只,60d后解剖豚鼠,检查肝脏,收集成虫,取病变肝组织制作切片,作病理检查。实验设未感染对照组。结果当地猫华支睾吸虫自然感染率为41.47%(214/516);感染豚鼠华支睾吸虫成虫回收率50.83%(305/600)。与对照组比较,实验组豚鼠肝脏肿大,边缘呈球状隆起,部分肝叶表面可见水泡状凸起病变,水泡内液清亮;病变组织横切面可见胆管管壁增厚,管腔内有华支睾吸虫成虫寄生;镜下可见华支睾吸虫虫卵切面,周围大量炎症细胞浸润,胆管管壁增厚,管周纤维组织增生伴胆管扩张,肝小叶结构破坏。结论广州珠三角地区家猫华支睾吸虫感染率较高。豚鼠是华支睾吸虫合适的终末宿主,且肝脏病变明显。     

广州珠三角地区家猫自然感染华支睾吸虫的调查及豚鼠模型的构建

目的了解广州珠三角地区家猫自然感染华支睾吸虫状况,观察豚鼠感染华支睾吸虫后肝组织病理变化。方法解剖当地家猫,取肝脏,检查华支睾吸虫感染情况,阳性肝脏收集成虫,并取肝组织制作切片;采集阳性鱼,分离华支睾吸虫囊蚴,经口感染豚鼠,60个囊蚴／只,60d后解剖豚鼠,检查肝脏,收集成虫,取病变肝组织制作切片,作病理检查。实验设未感染对照组。结果当地猫华支睾吸虫自然感染率为41．47％（214／516）;感染豚鼠华支睾吸虫成虫网收率50．83％（305／600）。与对照组比较,实验组豚鼠肝脏肿大,边缘呈球状隆起,部分肝叶表面可见水泡状凸起病变,水泡内液清亮;病变组织横切面可见胆管管壁增厚,管腔内有华支睾吸虫成虫寄生;镜下可见华支睾吸虫虫卯切面,周围大量炎症细胞浸润,胆管管壁增厚,管周纤维组织增生伴胆管扩张,肝小叶结构破坏。结论广州珠三角地区家猫华支睾吸虫感染率较高。豚鼠是华支睾吸虫合适的终末宿主,且肝脏病变明显。     

小鼠精原细胞体外培养分化精子细胞的研究

由于精子发生障碍所致的少精子症和无精子症为男性不育症的主要原因。20世纪90年代以前，供精是少精子症尤其是无精子症患者最有效的治疗方法。之后随着单精子卵细胞浆内注射(ICSI)技术的应用和发展为男性不育的治疗开辟了新的途径。然而对于那些睾丸内也无法找到成熟精子的非阻塞性无精子症患者，ICSI也无法解决。如果能将精原细胞或精母细胞在体外培养成熟，获得接近成熟阶段的精子细胞甚至精子，将不失为一种有效的解决方法。2003年4月至2004年5月，我们将小鼠精原细胞与支持细胞在体外共同进行培养，观察其分化生成精子细胞的情况，探讨生殖细胞减数分裂机制，建立精子发生的动物模型，为人类体外培养诱导精原细胞分化成精子细胞提供依据。     

免疫金电转移印斑技术检测华支睾吸虫病人血清抗体

我们应用电转移印斑结合免疫金技术,进行了华支睾吸虫病人血清中抗体的研究,以寻找一个敏感、特异的华支睾吸虫病免疫诊断方法。一、材料和方法 (一)抗原的制备自人工感染华支睾吸虫囊蚴的猫肝中取华支睾吸虫成虫100条,以生理盐水洗涤数次.超声粉碎100w,10min,4℃冰箱冷浸72h,5000r/min离心15min,取上清液。 (二)实验血清1.华支睾吸虫病人血清:采自山东金乡县及宁阳县,经粪便检查,华支睾吸虫虫卵阳性     

抗华支睾吸虫代谢抗原单克隆抗体的制备及鉴定研究

目的建立分泌抗华支睾吸虫代谢抗原的单克隆抗体杂交瘤细胞株。方法用华支睾吸虫成虫代谢抗原免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0融合，筛选分泌高滴度单克隆抗体的杂交瘤细胞株，测定单抗免疫球蛋白亚类和单抗效价，检测单抗与日本血吸虫全虫可溶性抗原、卫氏并殖吸虫成虫抗原和猪囊尾蚴抗原的交叉反应。结果获得3株分泌高滴度抗华支睾吸虫代谢抗原的杂交瘤细胞株，其分泌的抗体与日本血吸虫、卫氏并殖吸虫和猪囊尾蚴抗原均不发生交叉反应，3株单抗均属IgG。结论制备的抗华支睾吸虫代谢抗原的杂交瘤细胞株能分泌高滴度和高特异性的单抗，为制备免疫诊断试剂盒奠定了基础。     

重组酶介导的等温核酸扩增技术检测淡水鱼华支睾吸虫囊蚴的初步应用

目的 评价重组酶介导的核酸等温扩增技术(recombinase-aided amplification,RAA)用于淡水鱼肉样本中华支睾吸虫囊蚴检测效果，为后续该方法标准化及现场应用提供科学依据。方法 2022年6—9月在江苏省泰州市姜堰区、兴化市、泰兴市华支睾吸虫感染阳性人群所在行政村河道内采集野生淡水鱼样本。取6份不含华支睾吸虫囊蚴的鱼肉组织(每份5 g)，分别加入0、1、2、4、8、16个华支睾吸虫嚢蚴，提取鱼肉组织基因组DNA后采用荧光RAA法进行检测，评价该方法检测灵敏度；分别以华支睾吸虫、东方次睾吸虫、钩棘单睾吸虫、台湾棘带吸虫嚢蚴基因组DNA为模板，采用荧光RAA法检测，评价其交叉反应；分别采用荧光RAA法和压片法检测现场采集的淡水鱼样本，比较两种方法检测华支睾吸虫效果。结果 含1、2、4、8、16个华支睾吸虫囊蚴的鱼肉组织样本均出现阳性扩增，荧光RAA法可在20 min内对5 g鱼肉组织中含1个华支睾吸虫囊蚴的样本实现阳性扩增；以东方次睾吸虫、钩棘单睾吸虫、台湾棘带吸虫嚢蚴基因组DNA为模板进行RAA检测，结果均为阴性。对采集的1 735条淡水鱼分别采用荧光RAA法和压...     

南宁市市售猫华支睾吸虫感染调查

目的　了解南宁市猫华支睾吸虫感染情况，为华支睾吸虫保虫宿主防控提供依据。方法　从南宁市猫屠宰点购买猫肝，解剖胆囊和肝脏，查找华支睾吸虫并计数；对收集到的不同形态和大小的华支睾吸虫进行形态学观察和ITS2基因扩增和测序，通过BLAST比对分析确定虫体种类。结果　从南宁市2个猫屠宰摊面共收集了105个猫肝脏，其中有68个发现有华支睾吸虫感染，感染率为64.76%。单个肝脏虫体数量最多达980条，虫体数量中位数为72条/个肝脏。从检出的虫体中分离到3种不同大小和形态的吸虫，经形态学和ITS2基因扩增、测序、比对分析鉴定，均为华支睾吸虫。结论 　南宁市市售猫华支睾吸虫感染率较高，应该加强相关防控措施。     

不同地域株华支睾吸虫基因差异的研究

目的探讨湖北、广东、辽宁和韩国4地华支睾吸虫的基因差异,为华支睾吸虫种下分型提供依据。方法取湖北、广东两地的华支睾吸虫,提取基因组DNA,PCR特异性扩增18S rDNA V4区并测序;登陆GenBank,检索中国辽宁(AF217100)和韩国(AF408144)的华支睾吸虫18S rDNA的登录序列,应用系统发生学分析法对所有序列进行排列比较,分析4地华支睾吸虫的基因差异,并构建系统发生树,分析其亲缘关系。结果获得的湖北和广东两地华支睾吸虫18S rDNA V4区的碱基数分别为392 bp和440 bp。通过对18S rDNA V4区基因序列的比较与进化树的构建,证实4个地域株华支睾吸虫的18S rDNA V4区具有较高的同源性(98%~100%),彼此间遗传距离较小(0~0.013);在系统发生树中,湖北株和广东株华支睾吸虫形成一个支系,韩国株和辽宁株华支睾吸虫形成另外一个支系。结论以18S rDNA V4区为分子标记的DNA序列分析表明,湖北、广东、辽宁和韩国4地华支睾吸虫存在基因差异,但亲缘关系较近,即起源于共同的祖先。     

GFRα1蛋白在小鼠隐睾精原细胞中的表达及意义

目的探讨胶质细胞源性神经营养因子受体α（GFRα1）蛋白在小鼠隐睾精原细胞中的表达及对精原干细胞增殖的调节作用。方法取成年小鼠40只制作单侧隐睾模型，饲养2～3个月后，切取睾丸行光镜和电镜观察，并用免疫组织化学方法检测睾丸细胞GFRα1的表达，与对侧睾丸做对照。结果隐睾模型GFRα1主要表达在位于基底膜的As型精原干细胞，在Apr型细胞和Aal型细胞未见表达，与对侧相比。GFRα1表达增多．P〈0．05。结论隐皋睾丸组织中Aal→A1分化受阻，已分化的精原细胞缺失，反馈性的GFRα1表达增多．可促进精原干细胞增殖。     

我国动物华支睾吸虫的感染

华支睾吸虫寄生于人和犬猫等动物的胆囊和胆管内,造成肝胆的一系列疾病,是一种重要的人兽共患寄生虫病。据估计,全球约有3500万人感染华支睾吸虫,其中我国大约有1500万人感染。华支睾吸虫病分布于我国多个省、市、自治区,其中以广东省人群的感染率最高。华支睾吸虫的第一中间宿主为淡水螺,第二中间宿主为淡水鱼和虾,人为终末宿主,保虫宿主有猪、犬、猫、鼠等多种动物。鱼塘边建厕所和吃。鱼生”是华支睾吸虫病流行的两个重要因素。为了更有效地防制人和动物华支睾吸虫病,我们搜集了20世纪90年代以来我国华支睾吸虫感染的报道,进行整理分析。     

猫体华支睾吸虫肝切片标本制作的体会

有关猫体华支睾吸虫肝组织切片标本制作的报道较少，为了在实验教学中让学生观察华支睾吸虫之肝组织的病理变化，作者于2004年5月在华支睾吸虫病流行区江西省信丰县大塘镇购买了一条重度感染华支睾吸虫的病猫，制作猫体华支睾吸虫肝组织切片标本，现将标本制作过程和体会报道如下。     

姜片吸虫雄性生殖腺发育中染色体动态研究

用直接法制备的姜片吸虫雄性生殖腺染色体染片中,可见精原细胞分深、浅色两型。初级精母细胞由浅色精原细胞产生,需经过两次成熟分裂才能产生精子。 第一次成熟分裂分前、中、后、末四期。前期发育时间长而复杂;中期细胞可见7条单倍体染色体(n=7);其中大型中部着丝粒染色体1条,中型中部着丝粒染色体3条,小型中部着丝粒染色体2条,小型顶端着丝粒染色体1条。末期细胞分裂为两个次级精母细胞。 第二次成熟分裂由次级精母细胞产生精细胞,有核32个,呈圆形、梭形和弯梭形,由后者发育为32个精子。     

带绦虫精母细胞发生的超微结构观察

目的：在超微结构水平研究带绦虫精母细胞的发生。方法：透射电镜。结果：本文对猪带绦虫，牛带绦虫，及豆状带绦虫的精母细胞的发生进行了ＴＥＭ观察，结果精母细胞的发生（ｓｐｅｒｍａｔｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓｉｓ）可分辨出两种精原细胞：Ａ型和Ｂ型，以及包绕其周围的支持细胞。Ａ型精原细胞为干细胞。Ｂ型为母细胞。Ｂ型精原细胞经４次无细胞分离的有丝分裂，形成１６个初级精母细胞，其特点为胞质中存在核糖体团。初级精母细胞经减数分裂产生３２个次级精母细胞，排列成玫瑰花团样。次级精母细胞经短暂的发育过程很快形成精细胞。结论：带绦虫精原细胞的分裂方式为无细胞分离的有丝分裂。     

华支睾吸虫ATP合酶b亚基的组织和亚细胞定位

目的 了解华支睾吸虫ATP合酶b亚基（CsATP-synt_B）的虫体组织定位,并以HeLa细胞为替代模型观察其亚细胞定位。 方法 用CsATP-synt_B重组蛋白免疫SD大鼠,取其抗血清对华支睾吸虫成虫石蜡切片进行间接免疫荧光染色,观察CsATP-synt_B蛋白在华支睾吸虫成虫组织中的分布。根据生物信息学预测的CsATP-synt_B线粒体转运序列（MTS序列）和核定位序列（NLS序列）位置,设计4组引物［CsATP-synt_B全长序列,以及3个缺失突变体（MTS-缺失线粒体转运序列、NLS-缺失核定位序列、MTS-NLS-线粒体-核定位双缺失）引物］,扩增出全长基因和3个突变体基因,构建重组质粒pEGFP-N1-CsATP-synt_B1-300、pEGFP-N1-CsATP-synt_B30-300、pEGFP-N1-CsATP-synt_B（1-238）+（257-300）及pEGFP-N1-CsATP-synt_B（30-238）+（257-300）。将这些重组质粒用阳离子脂质体转染HeLa细胞,48 h后用激光共聚焦显微镜观察CsATP-synt_B全长基因和3个突变体在HeLa细胞的表达和亚细胞定位。 结果 CsATP-synt_B蛋白在华支睾吸虫成虫中分布较为广泛,主要分布在腹吸盘、卵巢、卵黄腺和皮层。绿色荧光蛋白GFP表明CsATP-synt_B全长序列表达于线粒体或细胞核,线粒体转运序列缺失突变体表达于细胞核,核定位序列缺失突变体表达于线粒体,双缺失突变体仅表达于胞浆。 结论 CsATP-synt_B蛋白在华支睾吸虫的分布与线粒体的分布一致,主要集中在能量代谢较旺盛的组织部位。CsATP-synt_B蛋白既可进入线粒体,也可进入细胞核,理论预测的定位序列得到证实。     

华支睾吸虫的器官特异性抗原

随着群众依从性的下降,进行华支睾吸虫病的病原学诊断—粪便检查日益困难。为控制华支睾吸虫病的流行,进行人群筛查十分必要,且血清学诊断正快速地取代病原学检查。该研究的目的在于通过对华支睾吸虫的一些器官的蛋白进行分析,以获得特异性的抗原蛋白。从自然感染华支睾吸虫的淡水鱼获取的囊尾蚴,经口感染兔,8周后解剖获取成虫。解剖并收集华支睾吸虫的睾丸、储精囊、卵黄腺、子宫以及肠道液体。整个虫体或分离的器官分别搅匀并离心,上清液作为粗抗原或单一器官抗原。将100条活的华支睾吸虫在PBS中饲养并收集排泄-分泌抗原。分别对获取的…